الإزالة الجزئية الفورية لمجمعات الركام والبويضات: نهج مكرر للمراقبة السريعة للتخصيب في المختبر

يركز بحثنا على تحسين نتائج التلقيح الاصطناعي من خلال تقييم ما إذا كانت الإزالة الجزئية الفورية لكمادات البويضات الركامية تعزز الإخصاب. تؤثر كفاءة المراقبة على عرق الإخصاب وجودة الأجنة ، وتحسين الإجراءات المختبرية. نحن نهدف إلى تحسين تقنيات التلقيح الاصطناعي للحصول على نتائج سريرية أفضل.

لقد أثبتنا أنه في الإزالة الجزئية الإنسية لكمادات البويضات الركامية بشكل كبير ، يعزز كفاءة مراقبة الإخصاب في التلقيح الاصطناعي. يؤدي هذا إلى تحسين التوقيت في تقييم أحداث الإخصاب وربما تحسين جودة الأجنة ونتائج التلقيح الاصطناعي. يعزز بروتوكولنا كفاءة التلقيح الاصطناعي عن طريق تقليل اليد في الوقت المناسب وتقليل التعرض البيئي وربما تحسين جودة الأجنة.

يقدم نهجا مبسطا وفعالا مقارنة بالتقنيات التقليدية. للبدء ، ضع أطباق التقاط البويضات في الحاضنة عند 37 درجة مئوية طوال الليل. احتضان 12 مل من وسط معالجة البصيلات في 14 مليلتر ، أنابيب اختبار مستديرة القاع عند 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها.

ثم انقل الأنابيب إلى رف أنبوب الاختبار الدافئ مسبقا قبل 30 دقيقة من استرجاع البويضات. بعد ذلك ، أضف تسعة ملليلتر من وسيط معالجة البصيلات إلى أنبوب اختبار دائري القاع سعة 14 مليلتر ، واحتضانه عند 37 درجة مئوية طوال الليل. في يوم استرجاع البويضات ، انقل 4.5 مل من الوسط إلى طبق التقاط البويضة المحتضن مسبقا المغطى بملليلترين من زيت البارافين بنسبة 100٪.

ثم أضف 4.5 مل من وسط التسميد إلى طبق التقاط البويضات ، واحتضنه عند 37 درجة مئوية طوال الليل. بعد ذلك ، أضف ملليلترا واحدا من وسط التسميد إلى طبق بطول ستة سنتيمترات مغطى بزيت البارافين بنسبة 100٪. لتخفيف أطراف ماصات الباستور الزجاجية وتقريبها ، احرقها على مصباح كحول لمدة خمس ثوان تقريبا.

قم بتوصيل رأس شفط بطرف ماصات الباستير بحيث يمكن أن يلمس قاع الطبق دون خدش. اشطف الزجاج بعد الماصات في أطباق بطول 10 سنتيمترات باستخدام وسيط معالجة البصيلات. باختصار ، استخدم إبرة قياس 17 لاستعادة البويضات تحت توجيه الموجات فوق الصوتية عبر المهبل.

صب السائل الجريبي الذي تم جمعه في أنبوب اختبار القاع المستدير سعة 14 مليلتر في طبق 10 سم. ضع الطبق على منصة درجة حرارة ثابتة. راقب OCCC تحت مجهر استريو لتأكيد وجود البويضات وتقييم نضجها.

تأكد مما إذا كانت هناك بويضات في OCCC ، وقم بإجراء تقييم أولي لنضج البويضات. قم مسبقا بإعداد ماصة شفط من السيليكون باستخدام ماصة باستور مصقولة باللهب المستدير. قم بشفط OCCC مع رفع طبق الثقافة برفق في وضع التاسعة إلى الساعة 10:00 بإصبع البنصر الأيسر ، وإمالته حوالي 15 درجة إلى اليسار.

أثناء بصق OCCC المستنشق في موضع الساعة 11:00 من الطبق ، ممدود برفق أفقيا إلى اليمين. ثم لاحظ حجم الخلايا الحبيبية حول OCCC الموسع. الآن ، استخدم ماصة باستور لإزالة خلايا التسمم الحبيبي الزائدة برفق مع قطع سريع لأسفل في الموقع المناسب على OCCC الممدود.

انقل OCCC المقطوع إلى طبق تجميع يحتوي على محلول تنظيف OCCC. صب السائل الجريبي المتبقي في حاوية عينة معقمة. للبدء ، قم بتقييم تركيز الحيوانات المنوية وحركتها ومورفولوجيتها لعينة السائل المنوي التي تم جمعها تحت المجهر الضوئي.

ثم انقل حبيبات المنوية إلى أنبوب طرد مركزي جديد واغسلها مرتين في وسط الإخصاب. احتضنها عند 6٪ ثاني أكسيد الكربون و 37 درجة مئوية لحين الحاجة. بعد إزالة خلايا التسمم الحبيبي الزائدة ، أضف ستة إلى ثمانية OCCC ومليلتر واحد من وسط الإخصاب إلى طبق الإخصاب.

تلقيح OCCCs مع المنوية المشروطة في قطرة واحدة ، بعد حوالي ساعتين إلى ثلاث ساعات من الاسترجاع في طبق الإخصاب. للتخصيب على المدى القصير ، قم باحتضان OCCCs مع المنوية لمدة أربع إلى ست ساعات. بعد الحضانة ، قم بإزالة الخلايا الركامية المحيطة بالبويضات ميكانيكيا.

شفط البويضات باستخدام ماصة بقطر داخلي أصغر قليلا من البويضات لضمان الإزالة الكاملة للخلايا. لتأكيد الإخصاب ، لاحظ وجود جسمين قطبيين. تعتبر البويضات ، التي تظهر جسما قطبيا ثانيا ، مخصبة.

للتخصيب المنتظم ، قم بإزالة الخلايا الركامية باستخدام الماصات بعد 18 إلى 20 ساعة من الحضانة المشتركة لتقييم الإخصاب. استزراع البويضات المخصبة لمدة ثلاثة إلى خمسة أيام بعد استرجاع البويضات. تقييم الإخصاب بعد 20 ساعة من التلقيح لتحديد عدد النوى.

بعد ذلك ، قم بزراعة كل زيجوت على حدة في قطرة متوسطة ونقل الأجنة بعد الإخصاب إلى وسط الانقسام. انقل الأجنة الثالثة إلى وسط الخلايا الأريمية وقم بتقييمها في اليوم الخامس. أبلغ عن البيانات المستمرة كمتوسط وانحراف معياري، وعبر عن البيانات الترتيبية كنسب.

من بين 47 مريضا تلقوا التلقيح قصير المدى ، لم يلاحظ أي فروق ذات دلالة إحصائية من حيث عمر المرضى وعدد البويضات المسترجعة. كان متوسط وقت الإجراء أقصر بشكل ملحوظ في الإزالة الجزئية لمجموعة OCC ، مقارنة بالمجموعة الضابطة ، على الرغم من عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية في معدل الانقسام ومعدل الجنين الأمثل ومعدل الخلايا الأريمية الأمثل. في المرضى الذين يخضعون لأطفال الأنابيب التقليدي ، لوحظت أوجه تشابه في عمر المرضى وعدد البويضات المستردة بين المجموعتين.

على الرغم من ملاحظة متوسط وقت العملية أقصر قليلا في الإزالة الجزئية لمجموعة OCCC ، لم يكن هناك فرق يعتد به إحصائيا. مثل المجموعة السابقة ، لم يتم تحديد أي تناقضات كبيرة في معدل الانقسام ، ومعدل الجنين الأمثل ، ومعدل الخلايا الأريمية الأمثل.