الجمع بين التصوير والفيزيولوجيا الكهربية لتصور وتسجيل انتشار إزالة الاستقطاب في الفئران

يتمثل نطاق بحثنا في فهم العلاقة بين انتشار إزالة الاستقطاب وإصابات الدماغ الرضحية الخفيفة باستخدام نماذج الدماغ. أظهرت مجموعتنا وآخرون مؤخرا أن انتشار إزالة الاستقطاب يحدث في إصابات الجمجمة المغلقة الخفيفة في الفئران. تستخدم مكبرات الصوت بشكل شائع في الجسم الحي ، وستقوم بتصفية التحولات البطيئة خارج الخلية المرتبطة بانتشار إزالة الاستقطاب ، مما يجعل من المستحيل تقريبا اكتشاف انتشار إزالة الاستقطاب.

تتمثل ميزة هذا البروتوكول في الاستفادة من كل من التصوير والفيزيولوجيا الكهربية في الجسم الحي لتأكيد غياب أو وجود إزالة الاستقطاب المنتشرة بعد إصابة الدماغ الرضحية الخفيفة. لقد بدأنا في فهم دور نشر إزالة الاستقطاب في السلوك الحاد وعلم الأمراض والعجز المعرفي طويل المدى المرتبط ب MTBIs. للبدء ، ضع المخدر في إطار تجسيمي وحافظ على درجة حرارة جسم باستخدام وسادة تدفئة.

باستخدام شفرة مشرط رقم 10 ، قم بعمل شق على طول خط الوسط من المنقاري إلى الذيلي. وتطبيق الغراء cyanoacrylate على الفور على شق. ثم انشر الجلد بشكل جانبي لكشف الجمجمة.

أضف قطرة إضافية أو قطرتين من غراء سيانواكريليت على الجمجمة لتوفير حماية إضافية. أثناء تجفيف الغراء ، استخدم مقصا جراحيا معقما لزيادة حجم الشق فوق المخيخ. بعد ذلك ، باستخدام مثقاب 0.8 ملم ، قم بحفر ثقوب تجريبية من خلال الجمجمة وتحويل البراغي إلى الجمجمة.

قم بلف الأسلاك الزائدة حول المسمار ، مما يسمح ببعض الركود لوضع مرحلة الرأس لاحقا. بمجرد وضع جميع براغي الجمجمة في مكانها ، قم بتوصيل جميع المسامير الذهبية بموصل مرحلة الرأس المطلوب. أمسك الموصل في مكانه باستخدام الذراع التجسيمي ، ضع دبابيس الموصل بالقرب من رؤوس البراغي دون اتصال سلك.

أغلق المنطقة بأكملها بغراء سيانواكريليت ، مما يضمن عدم إزعاج منطقة التصوير أمام براغي الجمجمة. قم ببناء الأسمنت السني حول قاعدة المسامير الذهبية ، مما يضمن عدم توصيل المسامير الذهبية من براغي الجمجمة بتلك الموجودة في مرحلة الرأس. اسمح لأسمنت الأسنان بالشفاء قبل إزالة موصل مرحلة الرأس.

للبدء ، قم بتشغيل كمبيوتر IOS ولوحة لوحة LED. قم بتركيب المخدر المزروع بالقطب الكهربائي في سرير الصدمات أسفل الكاميرا. واضبط حلقة التركيز لتغطية السطح القشري.

بعد تحميل الإشارة الضوئية الجوهرية ، أو إعدادات IOS ، اضغط على الزر Live لعرض الماوس وتوسيط جمجمة أسفل الكاميرا. ثم اضغط على Multi-D Acquisition للوصول إلى إعدادات الاستحواذ وتحديد النقاط الزمنية المطلوبة. احفظ الصور في مسار الملف المعين ببادئة الاسم المناسبة.

قم بتوصيل المسامير الذهبية من بموصل مرحلة الرأس ثم إلى مرحلة الرأس. قم بتشغيل كمبيوتر الفيزيولوجيا الكهربية وقم بتوصيل الكمبيوتر بمعدات الفيزيولوجيا الكهربية. بعد تحميل الإعدادات الخاصة ببرنامج Intan ، انقر فوق أيقونة اختيار تنسيق الملف ، وفي النافذة المنبثقة ، حدد ملف واحد لكل تنسيق نوع الإشارة.

بعد ذلك ، في علامة التبويب BW ضمن عرض النطاق الترددي للأجهزة ، حدد عرض النطاق الترددي لمكبر الصوت من 0.13 إلى 500 هرتز. حدد عريض ضمن محدد شاشة الفلتر. بعد تعيين مرشحات التمرير المنخفض والعالي ، انقر فوق رمز تحديد اسم الملف لتحديد مسار الملف المطلوب للحفظ.

بالنسبة للتأثير ، قم بتشغيل المصادم الكهرومغناطيسي ونفض الغبار على الرافعة للتحقق مما إذا كان الطرف يتراجع ويمتد بشكل صحيح. ضع بسرعة على سرير رغوي وحرك السرير أسفل طرف الاصطدام. قم بمحاذاة طرف الاصطدام مع خط الوسط وضعه على بعد ملليمتر واحد منقاري من البرجما.

ثم اخفض طرف الاصطدام حتى يلامس الجزء العلوي من رأس بقوة. ادفع الذراع لسحب طرف المصطادم ، ثم قم بخفضه يدويا بمقدار خمسة ملليمترات قبل تنشيط ذراع الاصطدام. قم بإزالة على الفور من السرير الرغوي وضعه أسفل الكاميرا للتصوير في غضون خمس ثوان.

انقر فوق الحصول على لبدء تصوير IOS في نافذة الاستحواذ متعدد الأبعاد. التقط صورا لمدة أربع دقائق لتسجيل حدث إزالة الاستقطاب المنتشر بالكامل. لبدء تسجيل الفيزيولوجيا الكهربية ، انقر فوق أيقونة التسجيل في برنامج Intan.

عند الانتهاء من التسجيل ، افصل عن مرحلة الرأس والموصل وضعه مرة أخرى في قفصه. لفتح مكدس الصور ، انقر فوق ملف ، متبوعا بالاستيراد وتسلسل الصور. ارسم مربعا باستخدام المؤشر ، مع تحديد منطقة الاهتمام ، لإنشاء مخطط انتشار إزالة الاستقطاب.

انتقل إلى الصورة ، متبوعا ب Stacks ، و Plot Z-axis Profile لرسم الرسم البياني وانقر فوق الزر Live. في المؤامرة التي تم إنشاؤها ، انقر فوق قائمة لإنشاء قائمة بالقيم. للمرئيات ، قم بتحويل الصورة ذات التدرج الرمادي باستخدام جدول بحث Fire.

لوحظ انتشار إزالة الاستقطاب ينتشر عبر القشرة والأوعية الدموية الكبيرة عبر النافذة. أظهر النشاط عالي التردد في تسجيلات الفيزيولوجيا الكهربية عودة سريعة في الوهمية بعد إزالة الأيزوفلوران. ولكن في التي تنزلت الاستقطاب ، ظل النشاط عالي التردد مكبوبا لعدة دقائق قبل التعافي.

أظهرت مخططات القوة ارتفاعا واضحا في القوة بعد التعافي من القمع في كلتا الحالتين.