نموذج التهاب البنكرياس الانسدادي المزمن الذي تم إنشاؤه من خلال التخثير الكهربائي

يصف هذا البروتوكول نهجا جديدا لنمذجة التهاب البنكرياس الانسدادي المزمن ، والذي يتضمن تصور قناة البنكرياس والتخثير الكهربائي لقناة البنكرياس للتسبب في انسداد قناة البنكرياس.

هناك العديد من الطرق لبناء نماذج حيوانية لالتهاب البنكرياس المزمن ، بما في ذلك حقن الصوديوم داخل الصفاق وربط قناة البنكرياس ، والتي لها حدودها. طور فريقنا مؤخرا نموذجا جديدا للتخثير الكهربائي لالتهاب البنكرياس المزمن في الفئران ، والذي يتميز بأنه لا يتطلب أدوية حقن طويلة أو طريقة صعبة لإتقانها. ويمكنهم بسهولة إنشاء نموذج التهاب البنكرياس المزمن.

يوفر استخدام التخثر الكهربائي للحث على التهاب البنكرياس المزمن في الفئران نموذجا أكثر ملاءمة وتجريبيا ، مما يوفر وسيلة واعدة للبحث المستقبلي في هذا المجال. للبدء ، ضع الماوس المخدر على وسادة تسخين للحفاظ على درجة حرارة الجسم. باستخدام أداة تشذيب ، احلق الشعر بين الصدر وأسفل البطن.

بعد ذلك ، استخدم المقص لعمل شق بطول سنتيمترين في وسط البطن ، متبوعا بشق بطول سنتيمتر واحد بين الجزء العلوي من البطن وعملية الخنجر. استخدم موسع البطن لتحديد منطقة البنكرياس للتخثير الكهربائي. باستخدام قطعة قطن معقمة ، حدد الاثني عشر من الجزء الخلفي من الجزء العلوي الأيسر من البطن وقم بتدويره لتصور القناة الصفراوية التي تربط الكبد.

قم بسد القناة الصفراوية المشتركة القريبة مؤقتا باستخدام مشبك الأوعية الدموية الدقيقة لمنع التسريب الرجعي في الكبد. قم بتوصيل أنبوب البولي إيثيلين 0.25 × 0.35 ملم بإبرة 0.25 ملم واخترق المنطقة المحيطة بالأمبولة ، بهدف الحليمة الاثني عشر الكبيرة. أدخل الأنبوب في الحليمة وقم بتمريره في منتصف الطريق إلى القناة الصفراوية ، ثم أوقف الدخول.

ابدأ تشغيل مضخة التسريب ، وقم بنقع محلول الميثيلين الأزرق 0.2٪ حتى تصبح قناة البنكرياس زرقاء. بعد التسريب ، اسحب أنبوب البولي إيثيلين للخارج وقم بإزالة مشبك الأوعية الدموية الدقيقة. استخدم مسحات قطنية معقمة لإصلاح البنكرياس ، وقم بتوجيه سكين التخثير الكهربائي إلى المنطقة ذات اللون الأزرق.

بعد ضبط معلمات التشغيل للتخثير الكهربائي ، استخدم النحاس النقي كمادة للقطب الكهربائي وقم بتطبيق العلاج على البنكرياس لمدة ثانيتين إلى ثلاث ثوان مع تجنب الأوعية الدموية. استمر في التخثير الكهربائي حتى يتغير لون المنطقة الملطخة باللون الأزرق الميثيلين إلى الأصفر أو البني. عندما لا يكون محلول التلوين الأزرق مرئيا في البنكرياس ، أوقف التخثير الكهربائي.

بعد الجراحة ، ضع الفأر في صندوق بولي إيثيلين مبطن بمواد الفراش. بعد التخثير الكهربائي لقناة البنكرياس ، قم بتخدير الفأر وضعه على منصة تشغيل. لجمع الدم من خلال الضفيرة المدارية ، أمسك الجلد برفق على الظهر لإنشاء نتوء طفيف في مقلة العين.

بعد ذلك ، ضع نهاية أنبوب شعري في زاوية العين وأدخله برفق تحت مقلة العين بزاوية 30 إلى 45 درجة. قم بتدوير الشعيرات الدموية حتى يبدأ الدم في التدفق. بعد جمع الدم ، أغلق الجفون عن طريق الضغط اللطيف بالشاش.

قم بالطرد المركزي للدم عند 1 ، 200 جرام لمدة 15 دقيقة واجمع المادة الطافية في أنبوب جديد. قم بقياس الأميليز والبيليروبين وحمض الهيالورونيك باستخدام مجموعات متوفرة تجاريا ، باتباع توصيات الشركة المصنعة. بعد ذلك ، ضع الماوس الرحيم على طاولة العمليات عند أربع درجات مئوية.

باستخدام المقص والملقط ، قم بعمل شق V في جدار البطن لفضح تجويف البطن. قم بإزالة البنكرياس وقسمه إلى ثلاثة أجزاء للتلطيخ. ثبت البنكرياس في محلول بولي فورمالديهايد 4٪ ، ثم قم بتضمين البنكرياس الثابت في البارافين للتقسيم.

قم بتقطيع كتل البارافين إلى أقسام بسمك 0.5 ملم وقم بتلطيخها بالهيماتوكسيلين واليوزين ، وكذلك بصبغة ماسون لتحليل الكيمياء المناعية. راقب أنسجة البنكرياس الملطخة تحت المجهر الضوئي. أظهر تلطيخ الهيماتوكسيلين يوزين خلايا أسينية بنكرياس متناثرة ودليلا على التهاب البنكرياس المزمن في مجموعة التخثير الكهربائي في اليوم 14.

في اليوم 28 ، لوحظت علامات تعافي الأنسجة وانعكاس علم الأمراض في خلايا البنكرياس الأسينارية. كشف تلطيخ ماسون عن تليف أكثر بكثير في مجموعة التخثير الكهربائي مقارنة بالمجموعة الوهمية. أظهر التلوين الكيميائي المناعي مستويات مرتفعة من ألفا واحد ، ونوع واحد من الكولاجين ، وأكتين ألفا للعضلات الملساء في مجموعة التخثير الكهربائي ، مما يشير إلى درجة أعلى من التهاب البنكرياس المزمن.

زادت مستويات حمض الهيالورونيك في مجموعة التخثير الكهربائي ، وبلغت ذروتها في اليوم 21 ، بينما ظلت مستقرة في المجموعة الوهمية. ارتفعت مستويات البيليروبين بشكل ملحوظ بحلول اليوم 14 في مجموعة التخثير الكهربائي ، مما أظهر ذروة في اليوم 21 ، في حين لم تظهر المجموعة الوهمية أي تغييرات. ارتفعت مستويات الأميليز في مجموعة التخثير الكهربائي في اليوم 14 ، تلاه انخفاض بحلول اليوم 28 ، حيث أظهرت المجموعة الوهمية اختلافا طفيفا.