القياس الكمي للكريات البيض الملتصقة الناجمة عن مرض السكري في الأوعية الدموية الشبكية

ينصب تركيز البحث في مختبرنا على معرفة أسباب اعتلال الشبكية في مرض السكري وكيف يمكن الوقاية منه. أظهرت العديد من المختبرات أن التكوين الزائد للكريات البيض ، وهو التراكم المفرط لخلايا الدم البيضاء ، في الأوعية الصغيرة للعين يزيد من مرض السكري. وهذا قد يساهم في انسداد وتنكس الأوعية الدموية في شبكية العين في مرض السكري. تسمح هذه التقنية بتصور وقياس شدة داء الكريات البيض في الأوعية الدموية الشبكية. ويمكن استخدامه في الدراسات التي ترغب في تقييم فعالية العلاجات المختلفة ، بما في ذلك الأدوية.

[مدرب] لإعداد مصفاة الضغط ، قم بتوصيل كيس المحلول الملحي بنسبة 0.9٪ في سلسلة. مجموعة القسطرة الوريدية ، وصمام محبس رباعي الاتجاهات ، وإبرة التزقيم. افتح نظام التروية واغسل الخطوط والمنافذ بالمحلول الملحي لمدة دقيقتين بمعدل تدفق يتراوح من 18 إلى 20 مل في الدقيقة لإزالة أي فقاعات هواء. ضع الفأر المخدر على مرحلة التروية. تحديد عملية الخنجري بصريا. مع وجود hemostat في اليد المهيمنة ، قم بتأمين الجلد وحفله. ثم انقل الإرقاء إلى اليد غير المهيمنة وارفع الجلد. بعد ذلك ، باستخدام المقص ، قم بقص رقعة من الجلد بزاوية 90 درجة على العمود الفقري لكشف جدار البطن الخارجي. مع ظهور عملية الخنجري والقفص الصدري ، قم بتشريح ثنائي من خلال جدار البطن ، وتجنب بعناية أي أعضاء أو أوعية رئيسية. الآن ، تخيل بطينات القلب والرئتين من خلال الحجاب الحاجز. باستخدام طرف المقص ، قم بعمل شق في الحجاب الحاجز على جانب واحد بالقرب من العمود الفقري. كشف القلب في التجويف الصدري بعد تقسيم القص. مع وجود ملقط في اليد غير المهيمنة ، أمسك القلب بالقرب من قمته. باستخدام اليد المهيمنة، أمسك إبرة التزقيم المتصلة بالقسطرة الوريدية وثقب قمة القلب. تأكد من أن الطرف الكروي لإبرة التزقيم بارز قليلا من موقع البزل لتجنب ثقب البطين الأيسر بالكامل أو دخول الأوعية الدموية الرئوية. بعد ذلك ، افتح محبس للسماح بتدفق محلول ملحي بنسبة 0.9٪. في نفس الوقت ، استخدم المقص لفتح الأذين الأيمن. استمر في التروية لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق ، مع تحريك الإبرة برفق من جانب إلى آخر ولأعلى ولأسفل لمنع التواء الأوعية الدموية وزيادة تصريف الدم من القلب. بعد التروية ، أدر مقبض محبس التثبيت لإغلاق تدفق المحلول الملحي والسماح بالتدفق من المحقنة إلى إبرة التزقيم. ثم قم ببث 10 مل من محلول concanavalin A يدويا في غضون 30 إلى 35 ثانية. بعد حشو قلب الفأر المخدر بمحلول كونكانافالين أ ، أدر الماوس على جانبه. ضع السبابة لليد غير المهيمنة على الجفن العلوي والإبهام على الجفن السفلي. اسحب الجفون والجلد المحيط بها برفق لإخراج العين ، مما يسمح لها بالانتفاخ جزئيا خارج التجويف. بعد ذلك ، باستخدام المقص المنحني في اليد المهيمنة ، اغرف تحت العين بزاوية 45 درجة. قطع المرفقات العضلية والعصب البصري. باستخدام المقص كملعقة ، انقل العين إلى وعاء صغير. ضع العين على شمع الأسنان للتحضير لفتح الكرة الأرضية. تحت مجهر التشريح ، باستخدام ملقط دقيق ، أمسك الطية الصلبة أو بقايا العضلات المتصلة بالجزء الخلفي من العين ووجه العين بحيث تواجه القرنية جانبا واحدا. قم بعمل شق خلف ومواز للطياف. استخدم مقصا دقيقا لفصل الجزء الأمامي من العين ، بما في ذلك العدسة حول محيط كوب العين ، مما يضمن انفصال الشبكية تماما عن الصلبة. استخرج شبكية العين من الصلبة باستخدام الملعقة الدقيقة. إذا كانت شبكية العين لا تزال متصلة بالعصب البصري، فأدخل مقصا دقيقا بين الشبكية والصلبة لقطع العصب البصري. ضع شبكية العين غير المثبتة على شريحة مع قطرة من PBS. قم بعمل أربع إلى خمس قطع شعاعية في شبكية العين ، مما يخلق نمط أوراق البرسيم بحيث يكون مسطحا. راقب شبكية العين المسطحة المثبتة تحت المجهر بتكبير 100x باستخدام هدف 10x. أظهر الفحص المجهري الفلوري لالأوعية الدموية في الشبكية أن شبكية العين السكرية أظهرت الكريات البيض الخفيفة مع 3 إلى 12 كريات البيض في الشبكية مقارنة ب 1 إلى 3 في الضوابط غير المصابة بالسكري. لوحظت مجموعات كبيرة من الكريات البيض في النماذج الالتهابية التي تواجه تحدي عديدات السكاريد الدهنية على عكس التجمع الخفيف في عينات مرضى السكري.