تحديد وقياس المستقلبات المشوشة في المرضى المصابين بأمراض خطيرة باستخدام التمثيل الغذائي القائم على الرنين المغناطيسي النووي

يستخدم بحثنا التمثيل الغذائي القائم على الرنين المغناطيسي النووي لتحديد المستقلبات غير المنظمة والمسارات الكيميائية الحيوية التي تتغير في مرضى وحدة العناية المركزة المصابين بأمراض خطيرة ، وقد قمنا أيضا بتضمين مرضى متلازمة الضائقة التنفسية الحادة ، وهي حالة رئوية شديدة. من خلال التنميط ومقارنة التوقيعات الأيضية ، نهدف إلى الكشف عن الاضطرابات الكيميائية الحيوية المرتبطة بتطور المرض وتخصيص العلاجات لتحسين النتائج. في الواقع ، نحن نحاول معالجة الفجوة في فهم خلل التنظيم الأيضي في جميع فئات مرضى متلازمة الضائقة التنفسية الحادة ، والتي تشمل مرضى متلازمة الضائقة التنفسية الحادة الخفيف والمتوسط والشديد.

لتحسين رؤيتنا ، من أجل فهم أفضل للمرض وتطوره ، بهدف عام هو تحسين نتائج المريض من خلال توفير الطب الدقيق والشخصي. يوفر الرنين المغناطيسي النووي سهولة تحضير العينة ، مما يحافظ على سلامة المصل لإعادة التحليل والكشف عن المستقلبات المعروفة وغير المعروفة دون اشتقاق كيميائي. يوفر بيانات كمية قابلة للتكرار ، مما يضمن قياس مستقلب موثوق.

على عكس الأساليب المستهدفة ، يتيح الرنين المغناطيسي النووي استكشافا حساسا وغير متحيز للتغيرات الأيضية ، مما يجعله مثاليا لاكتشاف التوقيعات والمسارات في تطور المرض. ستعزز النتائج التي توصلنا إليها أبحاث متلازمة الضائقة التنفسية الحادة من خلال الكشف عن التغيرات الأيضية في مراحل مختلفة ، والتي لم تتم دراستها بشكل كاف. باستخدام التمثيل الغذائي القائم على الرنين المغناطيسي النووي ، نهدف إلى تحديد المستقلبات والمسارات غير المنظمة ، مما يؤدي إلى توقيعات محتملة للتشخيص المبكر والتشخيص والتنبؤ والعلاج في الوقت المناسب.

يعمل هذا النهج على تطوير الإدارة الشخصية وتعميق المعرفة في التنميط الأيضي متعدد الحالات. مهدت نتائجنا الطريق لأسئلة علمية جديدة ، مثل: كيف تؤثر مستقلبات معينة تم تحديدها في مراحل مختلفة من متلازمة الضائقة التنفسية الحادة على تطور المرض؟ هل يمكن استهداف هذه المسارات غير المنظمة للتدخلات العلاجية المبكرة؟

بالإضافة إلى ذلك ، كيف تختلف هذه التغيرات الأيضية عبر أمراض الجهاز التنفسي أو الالتهابات الأخرى؟ للبدء ، باستخدام إبرة معقمة ، اجمع ملليلترين من الدم من شرايين مريض تم تشخيص إصابته بمتلازمة الضائقة التنفسية الحادة الخفيفة أو المتوسطة أو متلازمة الضائقة التنفسية الحادة. انقل الدم إلى قارورة معقمة واتركه يتجلط لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.

قم بالطرد المركزي للدم المتخثر عند 3 ، 100 جم لمدة 15 دقيقة لفصل المصل. انقل المصل إلى أنابيب معقمة لأجهزة الطرد المركزي الدقيقة ، مما يجعل حصصا من 400 إلى 500 ميكرولتر. قم بتسمية الأنابيب بتفاصيل المريض وتخزينها عند 80 درجة مئوية.

بالنسبة لتجارب الرنين المغناطيسي النووي ، امزج 250 ميكرولترا من كمية المصل مع 250 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي لتقليل تباين الأس الهيدروجيني. دوامة الخليط لمدة 15 ثانية تقريبا لضمان الخلط المتجانس. انقل العينة المحضرة إلى أنبوب الرنين المغناطيسي النووي النظيف مع ملحق متحد المحور يحتوي على TSP بتركيز 0.05 ملليمول.

بعد ذلك ، ضع أنبوب الرنين المغناطيسي النووي في المغناطيس. اكتب WRPA وحدد رقم التجربة المناسب لإعداد تجربة بروتون باستخدام برنامج نبض CPMG. انقر فوق خيار العنوان لإدخال اسم المريض والتفاصيل الضرورية الأخرى.

اكتب قفل واضغط على Enter لقفل المجال المغناطيسي. ثم حدد الخيارات 90٪ ماء و 10٪ أكسيد الديوتيريوم. ثم اكتب ATMM واضغط على Enter لإجراء ضبط ومطابقة المسبار.

بعد ذلك، من خيار معلمات الاكتساب، حدد المعلمات على أنها 64,000 نقطة على 128 عملية فحص لجمع بيانات التحسين. اضبط تأخير الاسترخاء لمدة خمس ثوان ، وعرض مسح طيفي يبلغ 12 جزء في المليون ، ووقت صدى يبلغ 200 ميكروثانية ، يتكرر 300 مرة. قم بتطبيق توسيع الخط بمقدار 0.3 هرتز باستخدام وظيفة النافذة الأسية.

بعد ذلك ، باستخدام أدوات معالجة وتحليل الرنين المغناطيسي النووي ، احصل على أطياف الرنين المغناطيسي النووي. بمجرد الحصول على الأطياف النهائية ، اكتب APK و ABSN لإجراء تصحيح الطور وتصحيح خط الأساس على التوالي. ثم انقر فوق خيار معايرة المحور في اللوحة العلوية وقم بمعايرة ذروة TSP إلى 0 جزء في المليون ، إما تلقائيا أو يدويا.

أخيرا ، قم بنقل البيانات المكتسبة من نظام الرنين المغناطيسي النووي إلى محطة العمل لمزيد من التحليل. بعد الحصول على أطياف الرنين المغناطيسي النووي للمرضى الذين تم تشخيص إصابتهم بمتلازمة الضائقة التنفسية الحادة الخفيفة أو المتوسطة ، افتح برنامج قياس كمية مستقلب الرنين المغناطيسي النووي لمعالجة البيانات. لإجراء تصحيح خط الأساس اليدوي باستخدام طريقة ويتاكر ، افتح الملف الطيفي في وحدة المعالج الخاصة ببرنامج قياس كمية مستقلب الرنين المغناطيسي النووي.

حدد تصحيح خط الأساس، ثم اختر طريقة Whitaker. ضع النقاط في قاعدة القمم في الأطياف بأكملها. بمجرد الانتهاء، احفظ الملفات الطيفية المصححة أساسا في مجلد واحد.

بعد ذلك، لإجراء التجميع الطيفي باستخدام الوحدة النمطية محلل ملفات التعريف، حدد الأدوات، ثم العملية المجمعة، متبوعا بالتجميع الطيفي. لإنشاء ورقة التجميع النهائية للتحليل الإحصائي، حدد المجلد الذي يحتوي على كافة الملفات الطيفية المصححة للخط الأساسي. قسم الأطياف إلى صناديق متساوية الحجم بعرض طيفي محدد يتراوح من 0.01 إلى 0.04 جزء في المليون.

حدد حجم الجرافة وقيم PPM للبداية والنهاية. اختر مجلدا لحفظ أوراق تجميع الإخراج. استبعاد مناطق التحول الكيميائي المقابلة للماء ومذيب TSP لمنع التداخل الطيفي.

سيعرض جدول البيانات النهائي أسماء العينات في صف واحد وقيم الحاوية مع PPM المقابلة في الصفوف الأخرى. قبل إجراء التحليل الإحصائي، قم بتطبيع البيانات باستخدام بعض التطبيع وتحويل السجل وقياس باريتو. للتحليل متعدد المتغيرات ، قم بإجراء تحليل المكون الرئيسي ، والتحليل التمييزي للمربعات الصغرى الجزئية ، والتحليل التمييزي للمربعات الصغرى الجزئية المتعامدة لمراقبة التمييز بين المجموعات ، مما ينتج عنه أهمية متغيرة لدرجات الإسقاط لكل مستقلب مسؤول عن الاختلاف في ملف التمثيل الغذائي.

قم بإجراء اختبار t الخاص بالطالب لتحديد المستقلبات المهمة التي تقل قيمة p عن 0.05. تنتج اختبارات T مخططات شعيرات صندوقية تعرض اختلافات في تركيزات المستقلب. بعد ذلك ، قم بإجراء تحليل المؤشرات الحيوية لإنشاء منطقة أسفل الرسم البياني لمنحنى خصائص تشغيل جهاز الاستقبال.

حدد القائمة النهائية للمستقلبات المهمة بناء على أهمية متغيرة لدرجة الإسقاط أكبر من واحد ، وقيمة p المصححة ب Bonferroni أقل من 0.05 ، ومنطقة أسفل المنحنى أكبر من 0.8. باستخدام قاعدة بيانات التمثيل الغذائي البشري ، حدد المستقلبات المقابلة لقيم PPM محددة. قبل البدء في القياس الكمي ، باستخدام وحدة المعالج ، قم بمعايرة المركب المرجعي المحدد للدراسة.

انقر فوق خيار معايرة مؤشر التحول الكيميائي وأدخل تركيز المركب المرجعي. اسحب ذروة البرنامج إلى الذروة المرجعية الطيفية واضبط ارتفاعها وعرضها. بمجرد محاذاة القمم المرجعية الطيفية مع ذروة البرنامج، انقر فوق قبول.

بعد ذلك ، افتح الأطياف المطلوبة في وحدة ملف تعريف وحدد المكتبة المركبة المناسبة للدراسة. في الجزء السفلي من الشاشة ، سيتم عرض قائمة بالمستقلبات. حدد المستقلب محل الاهتمام من القائمة.

انقر فوق قيمة PPM في الزاوية العلوية من الشاشة. قم بتكبير الأطياف إلى مقياس PPM المحدد للمستقلب. في هذه المرحلة ، تظهر قمتان على الشاشة ، أحدهما يمثل البيانات المسجلة والآخر ، يظهر كخط منقط يمثل ذروة البرنامج.

اسحب ذروة البرنامج لمواءمتها مع الذروة المسجلة، واضبط الارتفاع والموضع للمطابقة. بمجرد محاذاة القمم بشكل صحيح ، اقرأ تركيز المستقلب من القيمة المعروضة تحت العنوان التركيز بالمللي مولار. لإنشاء ملف الإخراج ، ضمن قائمة الأدوات ، انقر فوق خيار Batch Operations وحدد المجلد المطلوب لحفظ ملف الإخراج.

أظهر تحليل المكون الرئيسي تجمعا مميزا بين مجموعات مرضى متلازمة الضائقة التنفسية الحادة الخفيفة والمتوسطة. كشف التحليل التمييزي للمربعات الصغرى الجزئية المتعامدة عن فصل واضح بين مجموعات متلازمة الضائقة التنفسية الحادة الخفيفة والمعتدلة ، مع التركيز على الاختلافات الأيضية. كشف اختبار t للطالب وتحليل المؤشرات الحيوية عن مستقلبات رئيسية غير منظمة بين متلازمة الضائقة التنفسية الحادة الخفيفة والمتوسطة.

تم تحديد اللاكتات والأيزولوسين على أنهما مستقلبات غير منظمة بشكل كبير مرتبطة بشدة متلازمة الضائقة التنفسية الحادة.