إنشاء نموذج فأر مع فرط حساسية السعال عن طريق استنشاق حامض الستريك

السعال المزمن يضعف بشكل كبير نوعية الحياة ، مما يتسبب في ظهور ملح وعبء اقتصادي كبير. نحن نركز على مدى ملاءمة السعال ، وخاصة آلية فرط حساسية السعال. نؤسس نموذجا للفأر مع فرط حساسية السعال ، والذي سيتم استخدامه لمزيد من الدراسة حول آلية السعال المزمن. بالمقارنة مع النماذج الحيوانية الأخرى ، وخاصة خنازير غينيا ، فهي أسهل في الصيانة ، وأكثر فعالية من حيث التكلفة ، وقابلة للتلاعب الجيني. بروتوكولنا سهل التشغيل. النموذج أسهل في التباين. الماجستير هو أكثر جدوى. سيكون هذا النموذج ذا قيمة أيضا لمزيد من الدراسة حول الآلية والعلاجات الجديدة المحتملة للسعال المزمن.

[الراوي] للبدء ، ضع الفئران في غرفتين مستقلتين ، كل منهما متصل ببخاخات بالموجات فوق الصوتية. تعرض المجموعة النموذجية لرذاذ حامض الستريك 0.1 مولار, والمجموعة الضابطة للرذاذ الملحي العادي بنسبة 0.9٪. اضبط معدل الانحلال على الحد الأقصى لقيمة ثلاثة ملليلتر في الدقيقة واضبط التعرض على ساعتين يوميا على مدار أسبوعين. بعد كل جلسة ، أعد الفئران إلى أقفاصها الخاصة. قم بإعداد نظام تخطيط تحجم الجسم بالكامل غير الجراحي لقياس حساسية السعال. قم بتوصيل الغرف ومحولات التدفق وتدفق التحيز والمكونات الأخرى. قم بمعايرة النظام بالنقر فوق الزر معايرة لضمان قياسات دقيقة. بعد ذلك ، قم بإنشاء دراسة جديدة للسعال في برنامج النظام للفئران. قم بتكوين معلمات الدراسة للسماح بدقيقة واحدة للتأقلم ، و 10 دقائق لوقت الاستجابة ، و 10 دقائق لتسليم المحلول الكيميائي. بعد ذلك ، ضع كل فأر واعي في غرف فردية ، مما يضمن فأرة واحدة فقط لكل غرفة. بعد ذلك ، أضف ملليلترا واحدا من المحلول الكيميائي المناسب ، مثل المحلول الملحي العادي أو حامض الستريك أو الكابسيسين إلى البخاخات لتسجيل عدد أحداث السعال بمجرد بدء الإجراء. قم بإعداد الأدوات لقياس فرط الاستجابة لمجرى الهواء. قم بإنشاء دراسة استجابة الجرعة في برنامج النظام للفئران. تكوين معلمات القياس وتسلسل المهام. دقيقة واحدة للتأقلم ، و 30 ثانية لتوصيل الميثاكولين ، وثلاث دقائق لوقت الاستجابة ، ودقيقة واحدة للتعافي. ضع كل فأر واعي في غرف فردية ، مما يضمن فأرة واحدة فقط لكل غرفة. بعد ذلك ، أضف 50 ميكرولترا من PBS أو الميثاكولين إلى البخاخات وابدأ الدراسة. سجل قيمة بنه ، مما يشير إلى تضيق الشعب الهوائية استجابة لزيادة تركيزات الميثاكولين. زادت حساسية السعال بشكل ملحوظ في المجموعة النموذجية بعد أسبوع واحد واستمرت طوال فترة التعرض. لم يلاحظ أي وفيات في النموذج أو المجموعة الضابطة أثناء الدراسة. بعد التعرض ، كان عدد أحداث السعال التلقائي أعلى بشكل ملحوظ في المجموعة النموذجية منه في المجموعة الشاهدة. كانت حساسية السعال الناجمة عن المحلول الملحي الطبيعي وحمض الستريك والكابسيسين أعلى بشكل ملحوظ في المجموعة النموذجية بعد التعرض. ظل فرط استجابة مجرى الهواء قابلا للمقارنة بين المجموعتين مع عدم وجود فرق كبير بعد النمذجة. للبدء ، اجمع الدم من الجيب الحجاجي للفأر القتل رحيم في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 ملليلتر. ضع الأنبوب على الثلج ، وقم بالطرد المركزي للدم عند 3000 جم لمدة 10 دقائق عند أربع درجات مئوية. استخدم ماصة لجمع المادة الطافية ونقلها. بعد ذلك ، افتح الصندوق لكشف القصبة الهوائية وأدخل إبرة ساكنة عيار 22 في القصبة الهوائية. اغسل القصبة الهوائية ثلاث مرات باستخدام 0.5 مل من PBS المبرد مسبقا واجمع سائل غسيل القصبات الهوائية. بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي للسائل الذي تم جمعه عند 500 جم لمدة 10 دقائق عند أربع درجات مئوية. اجمع المادة الطافية ، وقم بتخزينها عند -80 درجة مئوية. أعد تعليق الحبيبات في 100 ميكرولتر من PBS. افتح الصدر لكشف الرئتين وقم بإزالة أنسجة الرئة بعناية. ضع أنسجة الرئة المجمعة في قوارير مبردة. لم يلاحظ وجود فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات في إجمالي عدد الخلايا الالتهابية والتفاضلية في سائل غسل القصبات الهوائية.