الكشف عن قلويدات الإرغوت المنظمة في مصفوفات الطعام عن طريق قياس طيف الحركة الأيونية المحاصرة بالكروماتوغرافيا السائلة - قياس الطيف الكتلي لوقت الرحلة

هدف مجموعتنا هو اقتراح منهجية تحليلية جديدة تمكن من التحكم الفعال في الملوثات والمخلفات في المصفوفات المختلفة من خلال تحديد المقصورة الفريدة للمركبات. حاولنا حل بعض التحديات المتعلقة بسلامة الأغذية باستخدام منصات تحليلية متقدمة ومعالجة مستدامة للعينات. تسلط الأبحاث الحديثة حول السموم الفطرية الضوء على التطورات في طرق الكشف مثل قياس الطيف الضخم وأجهزة الاستشعار الحيوية.

كما يستكشف الأثر الصحي والاستراتيجيات للحد من التلوث ، بهدف تحسين سلامة الأغذية وتطوير عمليات إزالة السموم الفعالة في الممارسات الزراعية. يعد قياس الطيف الكتلي مفتاحا للكشف عن المخلفات الكيميائية والملوثات ، بما في ذلك السموم الفطرية في الطعام. أدت التطورات الحديثة في قياس الطيف الكتلي إلى تحويل البحث من طريقة تحليلية مستهدفة إلى طريقة تحليلية غير مستهدفة ، مع تسويق حركة الأيونات ، وقياس الطيف الكتلي عالي الدقة الذي ساهم في هذا الاتجاه المتنامي.

يسمح بالقياس الكمي التحليلي لكل قلويد إرغوت منظم. قد يؤدي التحليل الكروماتوغرافي لهذه المركبات إلى التقدير الكمي الخاطئ ، خاصة إذا لم يتم حل القمم بشكل كاف. لذا فإن تنفيذ مطياف الحركة الأيونية يوفر بعدا آخر لتحديدها بناء على قيم حركتها.

لا يقتصر اهتمامنا بالبحوث المستقبلية على مواصلة معالجة مكافحة الملوثات الناشئة في الأغذية فحسب ، بل ينصب أيضا التركيز على المراقبة البيولوجية للكشف والبشري. من الأهمية بمكان فهم العلاقة بين التعرض البيئي والصحة ، وقياس المواد الكيميائية والسموم والمستقلبات الأخرى في السوائل البيولوجية. للبدء ، قم بإعداد قارورتين كهرمانيتين سعة 1.5 مليلتر مع 500 ميكرولتر من المحلول الوسيط ، وقارورة أخرى بمزيج من المذيبات كمحلول غسيل.

أثناء تكييف عمود الكروماتوغرافيا السائلة ، اكتب قائمة العمل ، بما في ذلك الحلين. في عمود ملف الأسلوب في قائمة العمل، قم بتحميل ملف أسلوب الاستحواذ، المحفوظ مع المعلمات المطلوبة. قم بإنشاء مجلد لحفظ جميع ملفات البيانات المكتسبة.

قم بتوجيه جميع العينات إلى المجلد المحدد في عمود نموذج المسار. انتقل إلى شريط الأدوات العلوي للبرنامج وقم بتشغيل قائمة العمل. بمجرد تنفيذ قائمة العمل ، افتح البرنامج النوعي.

لتحميل كافة العينات التي تم تحليلها، حدد ملف، متبوعا بفتح قائمة العمل. انقر بزر الماوس الأيمن على عينة تتوافق مع حل EA. انتقل إلى تحرير الكروماتوغرام ، ثم حدد النوع ، متبوعا بالكروماتوجرام الأيوني المستخرج.

أدخل الكتلة الجزيئية النظرية للأيون البروتوني لكل EA ، ثم انقر فوق إضافة وموافق. ستظهر ستة كروماتوغرامات أيونية مستخرجة ، تتوافق مع ستة EAs وepimers الخاصة بها. في كل كروماتورسم أيوني مستخرج ، ستظهر قمتان تقابلان EA الرئيسي و epimer الخاص به. انقر بزر الماوس الأيمن أثناء تحديد المنطقة الكاملة لقمة واحدة ، وسيظهر طيف التنقل الأيوني.

انتقل إلى المحور x من طيف الحركة الأيونية ، وانقر بزر الماوس الأيمن ، وانقر على المقطع العرضي للتصادم. إذا لم تظهر قيمة CCS ، فانقر بزر الماوس الأيمن على طيف التنقل وحدد نسخ إلى مخطط الموبابيلوج ، ثم انقر بزر الماوس الأيمن مرة أخرى على طيف التنقل وحدد حالة الشحن المخصصة. أدخل الكتلة الدقيقة وشحنة الأيون.

ثم بناء على بيانات التجزئة من الأدبيات وقواعد البيانات ، قارن وحدد أيون المنتج الأكثر كثافة كنقطة تعريف مجانية. لاحظ وقت الاستبقاء وقيمة احتجاز الكربون وتخزينه والكتلة الدقيقة لإضافة الأيونات الرئيسية لكل EA لإنشاء طريقة القياس الكمي. بعد ذلك ، افتح برنامج معالجة البيانات وانقر فوق علامة التبويب إدارة الطريقة ، ثم انقر فوق إعدادات التحليل.

أدخل اسم كل EA جنبا إلى جنب مع وقت الاحتفاظ به وقيمة CCS وكتلة المقاربات البروتونية. اضبط التفاوت المسموح به لكل نقطة تعريف حسب الضرورة أثناء استخدام الإعدادات الافتراضية. للبدء ، قم بتكييف عمود الكروماتوغرافيا السائلة وتكوين معلمات الاكتساب.

قم بوزن جرام واحد من العينة في أنبوب طرد مركزي سعة 50 ملليلترا. أضف أربعة ملليلتر من محلول الاستخراج ، وقم بتدوير العينة لمدة دقيقة واحدة. جهاز الطرد المركزي للعينة لمدة خمس دقائق عند 9 ، 750 جم وأربع درجات مئوية.

انقل المادة الطافية بالكامل إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 ملليلتر يحتوي على 150 ملليغرام من خليط المواد الماصة ، وقم بتدوير العينة لمدة دقيقة واحدة. بعد الطرد المركزي للعينة ، اجمع المادة الطافية وانقلها إلى قارورة زجاجية كهرمانية سعة أربعة ملليلتر. تبخر المستخلص تحت تيار لطيف من النيتروجين ، ثم أعد تكوين العينة في 750 ميكرولتر من خليط ماء الميثانول.

باستخدام حقنة سعة ملليلتر، قم بتصفية العينة من خلال مرشح نايلون بحجم 0.22 ميكرومتر في قارورة كروماتوغرافية كهرمانية سعة 1.5 ملليلتر. للبدء ، قم بإعداد قلويد الإرغوت ، أو عينات EA ، واحصل على منحنى المعايرة المتطابق مع المصفوفة باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة. افتح البرنامج الكمي وانتقل إلى علامة التبويب المهمة السريعة.

انقر فوق استيراد دفعة. بمجرد استيراد الدفعة ، انقر فوق دفعة العملية أسفل دفعة الاستيراد. بعد اكتمال معالجة البيانات ، انتقل إلى فحص المراجعة وتحقق من المشكلات المتعلقة بالتكامل التلقائي ، مثل القمم الكروماتوغرافية غير الصحيحة التي تكون قريبة جدا من بعضها البعض.

إذا كان الأمر كذلك، فقم بتضييق نطاق أو توسيع القيم التي تشير إلى تفاوت وقت الاستبقاء و/أو تفاوت قيمة احتجاز الكربون وتخزينه، و/أو الخطأ الجماعي الذي تم إنشاؤه في البداية في ملف الطريقة الكمية، وأعد معالجة البيانات. إذا استمر التكامل التلقائي لذروة الحدود القصوى غير الصحيحة، فحدد يدويا المنطقة في المخطط اللوني التي تظهر في نافذة فحص المراجعة. في علامة التبويب إدارة الدفعات، انتقل إلى نافذة تركيز الدفعة، وحدد قيمة تركيز لكل مستوى تم إنشاؤه مسبقا.

بمجرد الانتهاء ، انقر فوق حفظ التركيزات. انقر فوق تحديد الدفعة ، واضبط المعلمات مثل النموذج لتناسب بيانات المعايرة ، والانتظار ، وإجبار النموذج على عبور الصفر. بمجرد اكتمال القياس الكمي لقلويدات الإرغوت ، انقر فوق علامة التبويب الكمية ، ثم انقر بزر الماوس الأيمن على مجلد الدفعات في أقصى اليسار وحدد إنشاء تقرير.

أخيرا ، اختر تحليل الكمية وقم بتصدير التقرير بالتنسيق المطلوب. كشف الفصل الكروماتوغرافي عن قمم واضحة لكل زوج من EA epimer باستثناء الإرغوتامين والإرغوتامين ، والتي أظهرت تداخلا طفيفا بسبب أوقات الاحتفاظ القريبة بهما. سمح مطياف الحركة الأيونية بفصل خط الأساس للإرغوتامين والإرغوتامين ، مما يوفر قيما مميزة لاحتجاز ثاني أكسيد الكربون وتخزينه.

أظهر تحليل تأثير كتم الإشارة أو تحسينها تداخلا ضئيلا في المصفوفة بمدى سالب 32٪ إلى 18٪ ، مما يسمح بالقياس الكمي الدقيق باستخدام منحنى المعايرة القياسي ، باستثناء الإرجماترانين المطلوب من منحنى المعايرة المتطابق مع المصفوفة. تم تأكيد دقة الطريقة من خلال معدلات الاسترداد لجميع التحليلات في حدود 72 إلى 117٪ باستثناء الإرغوتامين ، والتي أظهرت قيم استرداد من 43 إلى 45٪ تراوحت قيم القياس الكمي من 0.65 إلى 2.6 نانوجرام لكل مليلتر ، مما يؤكد حساسية الطريقة.