غسل المحلول الملحي لأخذ عينات من البيئة المكروية المناعية للأنف للكلاب

ندرس الاستجابات المناعية المرتبطة بالعلاج الإشعاعي المصابة بأورام الأنف. نحن نحاول فهم كيف يمكننا تحسين نتائج العلاج الإشعاعي لمرضى السرطان عن طريق تعديل جهاز المناعة. يمكن أن تكون التحولات في البيئة المكروية المناعية مهمة في دراسة تأثيرات العلاج. لذلك ، من المطلوب التحليل المتسلسل لخلايا البيئة المكروية. ومع ذلك ، قد يكون من الصعب أخذ عينات من أنسجة تجويف الأنف باستخدام خزعات متكررة بسبب التشريح المعقد وميل الغشاء المخاطي للنزيف.

تسمح تقنية غسل الأنف المالحة بأخذ عينات تسلسلية من البيئة المكروية المناعية لتجويف الأنف مع الحد الأدنى من اضطراب الأنسجة. يمكن تحليل الخلايا والبروتينات التي تم جمعها باستخدام تقنية غسل الأنف باستخدام فحوصات مختلفة للتحقيق في حالة البيئة المكروية المناعية للأنف بمرور الوقت.

قبل يوم واحد من الإجراء ، املأ 520 مليلتر من المحاقن بمحلول ملحي فسيولوجي معقم. قم بتغطية المحاقن بإحكام وضعها في حاضنة على حرارة 37 درجة مئوية لتدفئتها طوال الليل. ثم ضع المخدر الخارجي على طاولة العلاج. اضبط رأس ليكون مائلا لأسفل ، بشكل طبيعي ومريح بعيدا عن حافة الطاولة لتسهيل جمع عينات غسل الأنف على النحو الأمثل. قم بتضخيم سوار الأنبوب الرغامي لضمان إحكام إغلاق مجرى الهواء. لغسل الأنف ، قم بقص ثماني قسطرة مطاطية حمراء فرنسية معقمة في القاعدة لتلائم بشكل مريح إحدى المحاقن المعبأة مسبقا سعة 20 مليلترا والتي تحتوي على محلول ملحي دافئ. باستخدام علامة دائمة ، ضع علامة على الطرف الأساسي للقسطرة للإشارة إلى نقطة البداية عند مدخل فتحة الأنف. تأكد من أن الطول المحدد مسبقا يمتد داخل الأنف مع وضع الطرف في الموقع المطلوب. بعد ذلك ، قم بقص طرف القسطرة لتتناسب مع طول القسطرة داخل الأنف المحدد ، مع التأكد من أنها ستهبط في المكان المناسب داخل تجويف الأنف. لإجراء عملية غسل الأنف ، قم بتعيين شخص واحد لتغذية القسطرة في تجويف الأنف وإعطائها ، والشخص الآخر لجمع العينة عند خروجها من الأنف. ضع شخصا واحدا أمام رأس وتحته ، مرتديا القفازات. قم بتوجيه القسطرة المطاطية الحمراء برفق إلى الجانب الإنسي من تجويف الأنف حتى تتماشى العلامة الموجودة على القسطرة مع مدخل فتحة الأنف. في الوقت نفسه ، يحمل الشخص الآخر أنبوبا مخروطي سعة 50 مليلتر أسفل فتحة الأنف مع وجود القسطرة في مكانها. باستخدام يد واحدة ، قم بإغلاق فتحة الأنف المقابلة برفق. ابدأ في ضخ المحلول الملحي في تجويف الأنف بضغط بطيء وثابت أو بضخ نبضي مع الحفاظ على رأس بزاوية هبوطية. اجمع سائل التصريف في أنبوب مخروطي سعة 50 مليلتر موضوعا أسفل فتحة الأنف. بعد العملية ، اسمح للكلب بالتعافي من التخدير مع إبقائه مستلقيا خارجيا ورأسه لأسفل. سجل الآن الحجم الإجمالي لسائل غسل الأنف الذي تم جمعه بالنسبة للكمية الإجمالية للمحلول الملحي المنقوع. لمعالجة العينة ، قم بدوامة أو ماصة عينات غسل الأنف برفق داخل الأنابيب المخروطية لتفتيت كتل الحطام والخلايا. مرر العينات المجمعة عبر مرشح خلية 70 ميكرومتر لإزالة الحطام الكبير في المخاط. الطرد المركزي للعينات المفلترة عند 300 جم لمدة خمس إلى 10 دقائق لتشكيل حبيبات خلية. باستخدام ماصة ، قم بشفط المادة الطافية بعناية من عينات أجهزة الطرد المركزي. قم بإيداع المادة الطافية في أنبوب نظيف لتحليل البروتين اللاحق. أخيرا ، أعد تعليق كريات الخلية في PBS أو الحل المفضل لمقايسات الخلية ذات الأهمية.