July 11th, 2025
يصف البروتوكول الحالي طريقة فعالة من حيث التكلفة لتنقية الخلايا الجذعية الوسيطة لنخاع العظم (BMSCs) شديدة التجانس (BMSCs) وتوسيعها وتوصيفها من الفئران. يسهل هذا النهج الحصول على كميات كبيرة من BMSCs ذات إمكانات عالية للانتشار والتمايز ، ودعم نماذج الفئران وتطوير الأبحاث قبل السريرية.
يوفر بحثنا طريقة منخفضة التكلفة لتنقية وتوسيع الخلايا الجذعية الوسيطة لنخاع عظام الفأر المتجانسة. يساعد هذا الباحثين في الحصول على خلايا كافية عالية الجودة ذات قدرات نمو وتمايز قوية. يتمثل التحدي الرئيسي في أبحاث الخلايا الجذعية لنخاع العظم في تطوير بروتوكول مباشر وفعال لعزل الخلايا الجذعية الوسيطة لنخاع العظم. تتيح هذه الطريقة للخلايا الجذعية الوسيطة لنخاع العظم النمو بشكل جانبي عن طريق تجنب الاضطراب. يستخدم التمرير الثالث ، ويتجنب تأثيرات النمو الإضافية ، ويحافظ على الخلايا المكونة للدم لدعم صحة الخلايا الجذعية ووظيفتها.
[مدرب] للبدء ، انقع الفأر الرحيم في 75٪ ، والإيثانول لمدة خمس دقائق. باستخدام مقص تشريح معقم ، قم بعمل شق حوالي سنتيمتر واحد في الطرف الخلفي ، بالقرب من وتر العرقوب. ثم قم بإجراء شق دائري حول الطرف الخلفي لفضح الظنبوب البعيد. قشر الجلد من موقع الشق لأعلى باتجاه الورك لإزالة الجلد من كلا الطرفين الخلفيين. قطع على طول العظم الحرقفي لفصل رأس الفخذ عن عظم الورك. باستخدام مشرط معقم، قم بإزالة أكبر قدر ممكن من الأوتار والعضلات من الظنبوب والشظية لتخفيف التنظيف لاحقا. أعد العظام النظيفة إلى الطبق الذي يحتوي على PBS مع 2٪ بنسلين وستربتومايسين قبل نقلها إلى غطاء معقم. خذ حقنة سعة 50 مل وقم بتوصيل الإبرة المرفقة مع المحقنة. املأ المحقنة ب 20 مل من وسط ألفا MEM ، واستبدل الإبرة بالإبرة التي تأتي مع حقنة ملليلتر واحد. في غطاء المحرك المعقم ، استخدم المقص لقطع طرفي عظم الفخذ أو الساق المنفصل. الآن ، أدخل الإبرة في العظم عند الحافة المقطوعة واغسل نخاع العظم في طبق زراعة الخلايا 100 ملم يحتوي على وسط ألفا MEM كامل. استمر في التنظيف حتى يصبح العظم شاحبا بشكل واضح ، مما يشير إلى نجاح استخراج النخاع. قم بإزالة الماصة لأعلى ولأسفل 40 مرة باستخدام طرف ماصة سعة ملليلتر واحد لتفريق أي مجاميع خلايا. الآن ، قم بتصفية تعليق الخلية من خلال مصفاة خلية 40 ميكرومتر في أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل لإزالة الحطام وشظايا الأنسجة والكتل غير المشتتة. اضبط الحجم الإجمالي على 15 ملليلترا باستخدام وسيط ألفا MEM الكامل ، وانقل تعليق الخلية المفلتر إلى طبق مزرعة 100 ملم. أمسك الطبق بكلتا يديك وحركه برفق 15 مرة بحركة ثمانية لتوزيع الخلايا بالتساوي عبر الطبق. أخيرا ، ضع طبق الاستزراع في حاضنة ثاني أكسيد الكربون بنسبة 37 درجة مئوية بنسبة 5٪ ومزرعة لمدة خمسة أيام. يوضح هذا الشكل التقدم المورفولوجي للخلايا اللحمية لنخاع العظم من الاستخراج الأولي إلى المقطع الثالث في الثقافة. ظهرت خلايا نخاع العظم المستخرجة حديثا في الغالب أحادية النواة مع قطرات دهنية متناثرة مرئية في جميع أنحاء الحقل. بحلول اليوم الخامس من المزرعة ، بدأت الخلايا على شكل مغزل في الظهور ووصلت إلى ما يقرب من 60٪ إلى 80٪ من التقاء ، واستمرت في الزيادة في الكثافة بحلول اليوم السابع. من الممر الأول إلى المقطع الثالث ، حافظت الخلايا اللحمية لنخاع العظم على مغزل أو مورفولوجيا مغزلية ، وشكلت طبقة أحادية واضحة مع مستعمرات مترابطة ، ولم تظهر أي علامات على موت الخلايا المبرمج مثل حبيبات السيتوبلازم أو التجزئة النووية. أكد قياس التدفق الخلوي أن CD29 و CD44 و Sca-1 تم التعبير عنها بشكل كبير في الخلايا اللحمية لنخاع العظام. كان التعبير عن علامات CD31 و CD45 من السلالات البطانية والمكونة للدم ضئيلا. أكد القياس الكمي للعلامة أيضا مستويات التعبير العالية ل CD29 و CD44 و Sca-1 مقارنة ب CD31 و CD45.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
تقدم هذه الدراسة طريقة فعالة من حيث التكلفة لتنقية وتوسيع الخلايا الجذعية الوسيطية لنخاع العظام عالية التجانس (BMSCs) من الفئران. لا يقوم البروتوكول بتبسيط عملية العزل فحسب، بل يعزز أيضًا قدرات التكاثر والتمايز للخلايا الجذعية الوسيطية لنخاع العظام التي تم الحصول عليها، مما يتقدم بالبحوث ما قبل السريرية باستخدام نماذج الفئران.
Reliable purification and expansion of homogeneous mouse bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) is critical for preclinical model development and translational research. This protocol enables consistent generation of high-quality BMSCs with validated phenotypes, supporting robust target validation and mechanistic de-risking in early discovery. Standardized BMSC workflows reduce biological variability, enhancing predictive confidence across R&D portfolios.
This protocol integrates at the interface of early discovery and preclinical model development, providing a foundation for lead identification and translational research.