منهجية محسنة لتوصيل السوائل إلى رئة الفأر: التنبيب باستخدام منظار الأذن للمستهلك

[مذيع] منهجية محسنة لتوصيل السوائل إلى رئة الفأر. التنبيب باستخدام منظار الأذن للمستهلك. تمت مراجعة جميع الإجراءات الحيوانية وهذا المحتوى من قبل قسم الطب المقارن بجامعة تولين وتمت الموافقة عليها بموجب البروتوكول 1810. اطلب موافقة IACUC واستشر الموظفين البيطريين في مؤسستك قبل المتابعة. يعتمد تطوير العلاجات الرئوية الجديدة على التوصيل الموثوق به والمتكرر إلى رئة الفأر ولكنه اعتمد تقليديا على الإعطاء داخل الأنف أو الشفط الفموي البلعومي عن طريق اللسان الكامل أو القطع الجراحي. قللت الطريقة التالية من التباين مقارنة باللسان الممتلئ ، مما يسمح لأفواج الأصغر. كما أنها أقل توغلا بكثير من القطع. الإجراء ، الخطوة الأولى ، الإعداد. استخدمت مجموعة التنبيب للقوارض في البداية السفن ذات أسافين أمان التنبيب. هذه أكمام مخروطية صغيرة تناسب أكثر من قسطرة مرنة مقاس 20 بوصة واحدة. أنها تمنع القسطرة من إتلاف الكارينا. نظف إسفين الأمان باستخدام وسادة تحضير الأيزوبروبانول قبل استخدامه. حرك إسفين الأمان النظيف ، باللون الأخضر هنا ، على القنية المرنة قياس 20. اجمع الأدوات الأخرى اللازمة بما في ذلك منظار الأذن التجاري ، والهاتف المحمول ، وحامل الماوس مع مخروط الأنف ، والملقط المثني ، والمسننة بدقة ، والأنبوب الرغامي ، وضوء الألياف البصرية ، إذا كنت تستخدم. نظف كل هذه الأشياء باستخدام وسادة تحضير الأيزوبروبانول قبل الاستخدام. خذ حوالي 20 سم طول الأنابيب المرنة. قم بثنيها على شكل حرف U وأضف وصلة قفل إغراء من طرف واحد. قم بتأمين شكل حرف U بربطة عنق ملتوية. أضف اثنين إلى 300 ميكرولتر من الماء المصفى المعقم أو الحبر الهندي إلى الأنبوب. فيما يلي ، يشار إلى هذا التجميع باسم أنبوب الفقاعة. خذ حلقة خياطة عن طريق ربط خياطة حريرية بحجم 13 سم في دائرة. ضع هذه الحلقة في الجزء العلوي من حامل الماوس وتأكد من تأمين جانبي الخيط جيدا. ضع حامل الماوس أعلى قاعدة الضوء المكبر المعدني. ضع الأيدي المساعدة حول مكان فم الفأر. ضع الفأر في غرفة الحث. استخدم معدل تدفق ثابت للأكسجين بمعدل 0.8 لتر في الدقيقة و 2٪ إيزوفلوران. تخدير الفأر بما يكفي حتى لا يستيقظ أثناء وضع مخروط الأنف. لا تمنع معدل تنفس الفأر بشكل كبير. تساعد الأنفاس المنتظمة في تقدير الطيات الصوتية. قم بتوصيل منظار الأذن بالهاتف المحمول وتأكد من استقرار موجز الفيديو. توخي الحذر ، لتقليل تعرض الباحث للأيزوفلوران أثناء هذا الإجراء ، استخدم جهاز تنفس كيميائي في حالة إجراء عمليات تنبيب متعددة أو تدريب على هذه الطريقة. بدلا من ذلك ، قم بإجراء الإجراء في عدد قليل من الخشب. الخطوة الثانية ، التدريج الحيواني. خذ الأول من غرفة الحث بمجرد نومه. قم بتقطيعها ووضع أسنانها العلوية على طول الخياطة. ضع توترا خفيفا على للحفاظ على موضع الخيط أثناء وضع الماوس مرة أخرى على الحامل. اضبط زاوية الرقبة للخلف قليلا ، مع وضع الرقبة في امتداد طفيف من خمس إلى 15 درجة. ادفع مخروط الأنف برفق فوق الأنفاد. لا تدفع مخروط الأنف لأسفل بقوة لأنه يمكن أن يتداخل مع الخيط الذي يعلق الماوس. باستخدام ملقط كبير مثني مسنن بدقة ، أمسك اللسان بإحكام بالقرب من الشفة السفلية قدر الإمكان. اسحبه بقوة لأسفل وبعيدا عن الأسنان العلوية وإلى جانب الأسنان السفلية. يمكن أن يؤدي الحذر أو الجر المطول أو التوتر المفرط أو سحق اللسان إلى الإضرار بصحة. يرجى مراقبة علامات الصدمة بما في ذلك الكدمات أو النزيف أو التورم أو جفاف اللسان. إذا لوحظ أي منها ، فقم بإجهاض الإجراء وتنبيه الموظفين البيطريين. إذا كنت تستخدم أيدي المساعدة ، ادعم الملقط في هذا الوضع. قم بتغذية ضوء الألياف البصرية في حالة الاستخدام من خلال القسطرة المرنة مع وضع إسفين أمان التنبيب في مكانه. الخطوة الثالثة ، التقدير البصري للأحبال الصوتية والتنبيب. مع وجود منظار الأذن في يدك غير المهيمنة ، اضغط برفق على اللسان. ثم قم بزاوية الكاميرا ومصدر الضوء الخاص بها لتصور الحبال الصوتية بالقرب من قاعدة اللسان. نظرا للاختلافات الطفيفة في علم التشريح ولون الأنسجة ، استخدم الحركة المرتبطة بالتنفس لتأكيد التحديد الهيكلي. عند البدء لأول مرة ، قد يكون توجيه المرء في موجز الفيديو أمرا صعبا. هذه هي الطيات الصوتية الزائفة. هذه هي الحبال الصوتية الحقيقية. هذا هو انعكاس الأنسجة الشدقية. هذا هو المسبار وضوء الألياف البصرية. هذا هو لسان المزمار. هذا هو الحنك الرخو. هذا هو ريما جلوتيديس ، هدفك للتنبيب. هذه هي شفة منظار الأذن ، تثبط اللسان. هذه هي المنطقة المحظورة. مع إضاءة الألياف البصرية ، في حالة الاستخدام ، قم بتغذية القنية بجانب منظار الأذن ، مما يجعل قاعدة اللسان أو جزء الشفة من منظار الأذن ملامسا خفيفا. كمرجع ، اضبط زاوية الاقتراب للقسطرة لتكون ضحلة جدا. مباشرة بعد إدخال القسطرة ، أقل من ملليمتر واحد خارج الطيات الصوتية ، ارفع طرف القسطرة بحيث يكون موازيا تقريبا لأعلى المقعد. هذا يمنع لسان المزمار من إجبار القسطرة ظهريا على دخول المريء. لاحظ أنه يجب ألا تكون هناك مقاومة تقريبا عند تقدم القسطرة. إذا واجهت مقاومة ، فقم بإزالة القسطرة على الفور واترك التنفس يعود إلى طبيعته. إذا لوحظ نزيف ، استشر الطاقم البيطري. الخطوة الرابعة ، تأكيد وضع الأنبوب الرغامي. بالإضافة إلى التأكيد البصري على أن الأنبوب في المكان الصحيح باستخدام منظار الأذن ، توفر القصبة الهوائية مقاومة أقل أثناء التنسيب من المريء. يبلغ عمق الإدخال البصري حوالي خمسة ملليمترات خارج الطيات الصوتية. يمكن رؤية الضوء من خلال الرقبة كطريقة ثانوية لتأكيد أن عمق الإدخال مناسب. لاحظ أن إسفين أمان التنبيب يجب أن يمنع العمق المفرط في وضع أنبوب القصبة الهوائية. سيمنع إسفين الأمان صدمة القرنية ، ولكن لا يجب أن يمنع التقدم. ثم ، أثناء تثبيت الأنبوب الرغامي في مكانه ، قم بإزالة ضوء الألياف البصرية. تأكد من وضع القسطرة بشكل مناسب باستخدام طريقة أنبوب الفقاعة. قم بتثبيت أنبوب الفقاعة في مكانه باستخدام القفل السفلي. يجب أن يكون حجم المد والجزر واضحا على الفور. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فإن الأنبوب الرغامي في غير محله. قم بإزالته بسرعة واترك معدل التنفس الطبيعي للماوس بالعودة. الخطوة الخامسة ، الولادة داخل القصبة الهوائية. يشبه إلى حد كبير طريقة سحب اللسان للولادة الفموية البلعومية ، فإن الولادة عن طريق التنبيب تخاطر بإغراق. في الفئران المراهقة والبالغة ، 50 ميكرولتر هو حجم آمن بشكل عام من السوائل لتوصيله وهو كاف للانتشار في جميع أنحاء الرئتين. في حالة استخدام ماصة للإعطاء ، فقم بإدخال الحجم المطلوب مباشرة في القسطرة واسمح للفأر باستنشاق المحلول. لضمان التوصيل المنتشر إلى الرئتين ، بالإضافة إلى السائل الذي يتم توصيله إلى الرئتين مع ما يصل إلى 500 ميكرولتر من الهواء. إذا رغبت في ذلك ، يمكن إجراء انخفاضات متعددة في الماصة دون المخاطرة بالشفط السلبي للسائل الذي يتم توصيله. لاحظ أن استخدام أكثر من حجم المد والجزر ، حوالي 200 ميكرولتر ، قد يكون ضروريا عند غسل اللقاح بالهواء. ومع ذلك ، فإن استخدام 500 ميكرولتر لا يخاطر بالصدمة لأنه لا يمثل سوى نصف السعة الحيوية. الخطوة السادسة ، تقييم التسليم. يمكن صنع ضوء الألياف البصرية المحمول باليد من مكونات رخيصة الثمن ويسهل الحصول عليها. يمكن استخدام مجموعة الألياف البصرية التجارية ، كما هو موضح هنا. ومع ذلك ، فإن غطاء أنبوب مخروطي سعة 50 مل مع ثقب مثقوب فيه باستخدام إبرة قياس 20 يتم من خلالها تغذية كابل ألياف بصرية بلاستيكية بحجم 75 ملم يكفي. تم استخدام كل من الأجهزة التجارية والمصنوعة يدويا في هذا الفيديو. النتائج التمثيلية، تؤدي الولادة داخل القصبة الهوائية باستخدام التنبيب إلى تحسين الولادة وتقليل التباين عند مقارنتها بالشفط الفموي البلعومي عن طريق سحب اللسان. مقارنة مباشرة لسحب اللسان والتنبيب الموجه. ثلاثة محققين مختلفين يتمتعون بمستويات مدفونة من الخبرة أو طلب منهم تسليم 50 ميكرولترا من الحبر الهندي المخفف عن طريق البلعوم عن طريق سحب اللسان إلى الفئران C57 BL / 6J التي تتراوح أعمارها بين 10 و 12 أسبوعا من كلا الجنسين. قام باحثان أيضا بتسليم نفس مخزون وحجم الحبر إلى الرئة عن طريق التنبيب كما هو موصوف. تمت إزالة الرئتين بعد وقت قصير من الولادة وتم تصويرهما بتكبير 2x. تم تقييم الصور الفوتوغرافية للمنطقة الملطخة من قبل باحث مستقل أعمى باستخدام الصورة J. ووجدت أن المزيد من منطقة الرئة ملطخة إذا تم استخدام التنبيب. علاوة على ذلك ، تم تقليل التباين ، الذي يتم التعبير عنه كنسبة مئوية من الانحراف عن المتوسط ، إذا تم استخدام التوصيل داخل القصبة الهوائية بعد التنبيب بدلا من سحب اللسان. يتم إعداد هذه المحطة المستخدمة للتنبيب الموجه كما هو موضح. من اليسار ، ماصات للتسليم ، أنبوب فقاعة لتأكيد وضع أنبوب القصبة الهوائية المناسب ، ملقط ، ملعقة ، منظار أنف للأطفال ، أيدي مساعدة ، ضوء مكبر ، حامل فأر مع مخروط أنف ، مسبار الألياف البصرية وغرفة تحريض التخدير. ينتج عن التنبيب توصيل أكبر إلى الرئة مع تقلبات أقل مقارنة بشفط OP. تم إعطاء جرعات من أنثى الفئران C البالغة من العمر 10 أسابيع بجرعة واحدة من 10 إلى 11 VG من AIV 6.2 luciferase وتم تقييمها بالتصوير الحيوي في الجسم الحي بعد سبعة أيام. قبل 10 دقائق من التصوير ، تم حقنهم تحت الجلد باستخدام لوسيفيرين. تظهر صور تمثيلية للفئران التي تتلقى AV 6.2 luciferase عن طريق شفط OP بعد سحب اللسان أو التثبيت داخل القصبة الهوائية عن طريق التنبيب. أدى الشفط الفموي البلعومي عن طريق سحب اللسان إلى توزيع الإشارة في أجزاء مختلفة من مجرى الهواء العلوي ، بينما أدى التنبيب إلى إشارة مركزة في الرئة. المناطق ذات الأهمية هي نفس المنطقة ، ويظهر متوسط الإشعاع داخل المنطقة على الصورة. كشف القياس الكمي لإشارات لوسيفيراز عن تحسين كفاءة التوصيل إلى الرئتين عن طريق التنبيب وأكد بشكل أكبر على انخفاض التباين في التوصيل باستخدام هذه الطريقة. الخلاصة ، كما هو موضح في الأشكال السابقة ، يظهر التلقيح بين الرئة باستخدام طريقة سحب اللسان التقليدية توزيعا غير مكتمل وغير متسق للتلقيح وتباينا أكبر في مقدار وصوله إلى الرئتين. في المقابل ، أدت طريقة التنبيب إلى توصيل أكثر اتساقا لكل من الرئتين اليمنى واليسرى وكانت أقل تنوعا. النتائج الإيجابية المثبتة بقوة لطريقة التنبيب هذه هي ، أولا ، تركيب قابل للتكرار لما يصل إلى 50 ميكرولترا في رئتي الفأر ، واثنان ، التوزيع المنتشر للسائل المغرس في جميع أنحاء الرئتين ، وثلاثة ، انخفاض انتشار اللقاح خارج الرئتين. هذه الطريقة سريعة وآمنة ويمكن دمجها في الإجراءات المختبرية دون معدات مكلفة أو تدريب مكثف للوقت.