توصيف الحويصلات خارج الخلية من السوائل البيولوجية

الحويصلات خارج الخلية كمؤشرات حيوية للمرض ، تعكس الحالات الفسيولوجية. يتيح نهجنا استخراج البيانات الغنية من أحجام الدموع الصغيرة ، مما يعزز أبحاث المركبات الكهربائية في السوائل البيولوجية. تشمل التحديات التجريبية الرئيسية الحصول على تركيزات كافية من الحويصلة خارج الخلية من عينات صغيرة ، وتقليل فقدان العينة أثناء العزل ، وتحسين التحليل لمنع تشبع الرقاقة أو اكتشاف الإشارة الضعيفة.

يتجاوز هذا البروتوكول خطوات العزل ، مما يقلل من وقت المعالجة ، ويسمح بتحليل الحويصلات خارج الخلية من أحجام العينات الثانوية ، مما يجعله مثاليا للعينات البيولوجية المحدودة ، مثل الدموع. تعتبر المؤشرات الحيوية غير الغازية ضرورية للكشف المبكر عن اضطرابات القرنية وإدارتها. تتيح المؤشرات الحيوية للحويصلات خارج الخلية مراقبة المرض والعلاجات الشخصية وامتثال المريض بشكل أفضل وتحسين نوعية الحياة.

مختبرنا رائدا في تحليل الحويصلات خارج الخلية في عينات المسيل للدموع من أشخاص KC ، وتحديد توقيعات tEV الفريدة. هذا يمهد الطريق للتشخيص المستقبلي والأهداف العلاجية التي تركز على المركبات الكهربائية. للبدء ، حدد العينات البيولوجية وشريحة رباعي السبانين على مساحة العمل.

ماصة 70 ميكرولترا من العينات البيولوجية البشرية التي تم خلطها مسبقا مع المحلول B من مجموعة رباعي السبانين البشرية على شريحة. ضع الفيلم على لوح غسيل رقائق لمنع تبخر العينة. بعد 16 ساعة ، ضع اللوحة في غسالة الرقائق.

أغلقه في مكانه وأغلق الغطاء. اضغط على خيار CW-TETRA v0 في غسالة الرقائق. أثناء غسل الرقائق ، قم بإعداد 300 ميكرولتر من محلول الحجب لكل شريحة.

أضف 0.6 ميكرولتر من كل جسم مضاد لكل شريحة إلى محلول الحظر. قم بتدوير محلول الحجب باستخدام كوكتيل الأجسام المضادة لضمان الخلط الشامل. عند اكتمال غسل الرقائق ، أضف 250 ميكرولترا من محلول الحجب مع كوكتيل الجسم المضاد فوق كل شريحة.

ثم أغلق الغطاء واضغط على متابعة. عندما تغرد غسالة الرقائق ، قم بإزالة لوحة غسيل الرقائق. حرك الرقائق لأعلى المنحدر.

ضع اللوحة مرة أخرى في غسالة الرقائق ، مع التأكد من تثبيتها بإحكام في مكانها. أغلق الغطاء واضغط على متابعة. للبدء ، قم بتشغيل محلل الجسيمات النانوية.

قم بتشغيل برنامج المسح الضوئي على سطح المكتب المتصل بمحلل الجسيمات النانوية. حدد مجلد الشريحة لاختيار كل شريحة tetraspanin وتحديد موقعها في Chip Position على الظرف. انقر فوق المربعات الثلاثة أسفل موضع الرقاقة لتشغيل التألق.

ستتحول المربعات إلى اللون الأصفر والأزرق والأحمر. اضغط على غطاء الظرف واسحبه لإزالته. ثم قم بتأمين رقائق التتراسبانين المحملة بالعينة بإحكام على الظرف.

قم بمحاذاة أوتاد غطاء الظرف مع الثقوب واضغط لأسفل. حرك الغطاء لتثبيته في مكانه. ثم ضع الظرف على المسرح وأغلقه في مكانه.

بعد ذلك ، انقر فوق Scan Chips من واجهة البرنامج ، ثم انقر فوق موافق. بمجرد أن تنتقل المرحلة بالكامل إلى الجهاز ، أغلق الباب. عند اكتمال الفحص ، افتح الباب لإخراج المرحلة والتحقق من النتائج. إذا نجحت عمليات الفحص ، فتخلص من الرقائق.

ضع المجموعة التالية من الرقائق على الظرف. بدلا من ذلك ، أعد ظرف الظرف الفارغ إلى المسرح. اخرج من البرنامج وقم بإيقاف تشغيل الجهاز عند الانتهاء.

لوحظت مستويات التألق المثلى للحويصلات خارج الخلية في قنوات CD63 و CD81 و CD9 ، بينما ظلت قناة التحكم MIgG سوداء ، مما يؤكد خصوصية التحكم. تم تقليل CD81 للسوائل البيولوجية. لا يوجد مضان في قنوات CD63 و CD81 و CD9 يدل على عدم وجود حويصلات خارج الخلية.

كان التشبع المفرط في التألق واضحا ، مما يجعل من الصعب تمييز البيانات ذات المغزى بسبب الملصقات المفرطة ، لا سيما في قنوات CD63 و CD81 و CD9.