Name: تعصيب العضيات المعوية البشرية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-17T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: اكتشف كيفية تعصيب العضيات المعوية البشرية لعلاج قصور الأمعاء لدى الأطفال. يدمج هذا النهج الجهاز العصبي المعوي باستخدام الإشارات الكيميائية الحيوية والقوى الميكانيكية الحيوية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Wales, P. W., Christison-Lagay, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+bowel+syndrome%3A+epidemiology+and+etiology%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Short bowel syndrome: epidemiology and etiology.</a> Semin Pediatr Surg. 19 (1), 3-9 (2010).</li>
<li>Spencer, A. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+short+bowel+syndrome%3A+redefining+predictors+of+success%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Pediatric short bowel syndrome: redefining predictors of success.</a> Ann Surg. 242 (3), discussion 409-412 403-409 (2005).</li>
<li>Goulet, O., Pigneur, B., Charbit-Henrion, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+enteropathies+involving+defects+in+enterocyte+structure+or+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Best+Pract+Res+Clin+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Congenital enteropathies involving defects in enterocyte structure or differentiation.</a> Best Pract Res Clin Gastroenterol. 56-57, 101784(2022).</li>
<li>Koglmeier, J., Lindley, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+diarrhoeas+and+enteropathies%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Congenital diarrhoeas and enteropathies.</a> Nutrients. 16 (17), 2971(2024).</li>
<li>Duggan, C. P., Jaksic, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+intestinal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Pediatric intestinal failure.</a> N Engl J Med. 377 (7), 666-675 (2017).</li>
<li>Spence, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+intestinal+tissue+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human pluripotent stem cells into intestinal tissue in vitro.</a> Nature. 470 (7332), 105-109 (2011).</li>
<li>McCracken, K. W., Howell, J. C., Wells, J. M., Spence, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+human+intestinal+tissue+from+pluripotent+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generating human intestinal tissue from pluripotent stem cells in vitro.</a> Nat Protoc. 6 (12), 1920-1928 (2011).</li>
<li>Bajpai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CHD7+cooperates+with+PBAF+to+control+multipotent+neural+crest+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">CHD7 cooperates with PBAF to control multipotent neural crest formation.</a> Nature. 463 (7283), 958-962 (2010).</li>
<li>Workman, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+human+pluripotent-stem-cell-derived+intestinal+tissues+with+a+functional+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Engineered human pluripotent-stem-cell-derived intestinal tissues with a functional enteric nervous system.</a> Nat Med. 23 (1), 49-59 (2017).</li>
<li>Schlieve, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+cell+implantation+restores+enteric+nervous+system+function+and+alters+the+gastrointestinal+transcriptome+in+human+tissue-engineered+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Neural crest cell implantation restores enteric nervous system function and alters the gastrointestinal transcriptome in human tissue-engineered small intestine.</a> Stem Cell Rep. 9 (3), 883-896 (2017).</li>
<li>Fattahi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deriving+human+ENS+lineages+for+cell+therapy+and+drug+discovery+in+Hirschsprung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Deriving human ENS lineages for cell therapy and drug discovery in Hirschsprung disease.</a> Nature. 531 (7592), 105-109 (2016).</li>
<li>Barber, K., Studer, L., Fattahi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+enteric+neuron+lineages+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Derivation of enteric neuron lineages from human pluripotent stem cells.</a> Nat Protoc. 14 (4), 1261-1279 (2019).</li>
<li>Finkbeiner, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome-wide+analysis+reveals+hallmarks+of+human+intestine+development+and+maturation+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Transcriptome-wide analysis reveals hallmarks of human intestine development and maturation in vitro and in vivo.</a> Stem Cell Rep. 4 (6), 1140-1155 (2015).</li>
<li>Boyle, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+transplantation+of+human+intestinal+organoids+enhances+select+tight+junction+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo transplantation of human intestinal organoids enhances select tight junction gene expression.</a> J Surg Res. 259, 500-508 (2021).</li>
<li>Finkbeiner, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+tissue-engineered+small+intestine+using+embryonic+stem+cell-derived+human+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">Generation of tissue-engineered small intestine using embryonic stem cell-derived human intestinal organoids.</a> Biol Open. 4 (11), 1462-1472 (2015).</li>
<li>Mahe, M. M., Brown, N. E., Poling, H. M., Helmrath, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+model+of+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo model of small intestine.</a> Methods Mol Biol. 1597, 229-245 (2017).</li>
<li>McNeill, E. P., Gupta, V. S., Sequeira, D. J., Shroyer, N. F., Speer, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+murine+host+sex+as+a+biological+variable+in+transplanted+human+intestinal+organoid+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of murine host sex as a biological variable in transplanted human intestinal organoid development.</a> Dig Dis Sci. 67 (12), 5511-5521 (2022).</li>
<li>Singh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+transplantation+sites+for+human+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of transplantation sites for human intestinal organoids.</a> PLoS One. 15 (8), e0237885(2020).</li>
<li>Watson, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+model+of+human+small+intestine+using+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">An in vivo model of human small intestine using pluripotent stem cells.</a> Nat Med. 20 (11), 1310-1314 (2014).</li>
<li>Cortez, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+human+intestinal+organoids+into+the+mouse+mesentery%3A+A+more+physiologic+and+anatomic+engraftment+site%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Transplantation of human intestinal organoids into the mouse mesentery: A more physiologic and anatomic engraftment site.</a> Surgery. 164 (4), 643-650 (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>محلول الأحماض الأمينية غير الأساسية 100x (NEAA)</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>15 مل أنابيب مخروطية</td><td>Thermo Scientific</td><td>12565269</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>07920</td> <td>"كاشف انفصال الخلايا الأنزيمية"</td></tr> <tr><td>B-27 مكمل غذائي (50x) ، مطروحا منه فيتامين أ</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>12587010</td><td>ل ENCC</td></tr><tr><td>مكمل B-27 (50x) ، 17504044 Gibco الخالي من المصل</td><td></td><td></td><td>لمقياس الدم HIO</td></tr><tr><td>Bright-Line</td><td>Hausser Scientific</td><td>3120</td><td></td></tr><tr><td>Corning Costar Ultra-Low Attachment Microplates</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-601</td><td></td></tr><tr><td>Corning Flat-Bottom Plate 24 جيدا ، TC المعالجة</td><td>VWR</td><td>29442-044</td><td></td></tr><tr><td>Corning Flat-Bottom Plate 3516 6 well</td><td>VWR</td><td>29442-042</td><td></td></tr><tr><td>Essential 6 Media</td><td>Thermo Fischer</td><td>A1516401</td><td></td></tr><tr><td>Essential 8 Media</td><td>Thermo Fischer</td><td>A2858501</td><td>وسائط الخلايا الجذعية البديلة ، المستخدمة في لوحات NCC.</td></tr><tr><td>ملقط رفيع</td><td>الرأس دومون</td><td>11223-20</td><td></td></tr><tr><td>فورما ستيري سيكل i160</td><td>50145522</td><td></td><td>جيبكو</td></tr><tr><td>المتقدم DMEM / F12</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>12634-010</td><td></td></tr><tr><td>جيبكو هيبس 1 م</td><td>ثيرموفيشر ساینتيفيك</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>جيبكو نيوروبازال متوسط</td><td>ثيرموفيشر ساینتيك</td><td>21103-049</td><td></td></tr><tr><td>Glutagro ، 200 ملي متر ، 100x</td><td>Corning</td><td>25-015-CI</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>H9 البشري ESC</td><td>Wicell بنك الخلايا الجذعية الدولي</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>HyCloneTM FBS معرف</td><td>VWR</td><td>16777-002</td><td></td></tr><tr><td>LabGard خزانة السلامة البيولوجية</td><td>Nuaire</td><td>Nu-430-400</td><td></td></tr><tr><td>مصفوفة غشاء القاعدية Matrigel GFR ، خالية من الفينول الأحمر ، خالية من LDEV</td><td>Corning</td><td>356231</td> <td>"مصفوفة غشاء القاعد ثلاثية الأبعاد واضحة"</td></tr> <tr><td>مصفوفة Matrigel hESC المؤهلة ، مصفوفة</td><td>Corning</td><td>354277</td> خالية من LDEV <td>"مصفوفة غشاء القاعدي ثلاثية الأبعاد"</td></tr> <tr><td>الماصات الدقيقة</td><td>Eppendorf (100-1000 ، 20-200 ، 10-100 ، 2-20 ، 0.5-10 ، 0.1-2.5 uL)</td> <td>2231300008</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR 1</td><td>تقنيات الخلايا الجذعية</td><td>85850</td> <td>"وسائط الخلايا الجذعية" يتضمن رقم الكتالوج الملحق 5x ، الذي يجب إضافته بكميات كبيرة مسبقا.</td></tr><tr><td>مكمل N-2 (100x)</td> <td>17502048 جيبكو</td><td></td><td>لمكمل HIO</td></tr><tr><td>N-2 ، CTS (أنظمة العلاج الخلوي) A1370701</td> <td>ثيرمو فيشر</td><td></td><td>ل ENCC. صياغة مختلفة قليلا.</td></tr><tr><td>نيكون DS-Fi2 TS-100 مجهر</td><td>نيكون</td><td>TS100</td><td></td></tr><tr><td>وسائط مكيفة Noggin</td> مركز <td>تكساس الطبي مركز أمراض الجهاز الهضمي GEMS Core ، معوي / عضوي فرعي النواة</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>البنسلين - الستربتومايسين (10،000 وحدة / مل)</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr> أنظمة <tr><td>توجيه الخلايا</td><td>البشرية المؤتلفة GFH6-100</td><td></td><td></td></tr><tr><td>المؤتلف البشري BMP-4</td><td>فيشر Scientific</td><td>314BP010</td><td></td></tr><tr><td>بروتين EGF البشري المؤتلف ، CF</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>236-EG-200</td><td></td></tr><tr><td>المؤتلف البشري FGF الأساسي / FGF2 (146 aa) بروتين</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>233-FB-010</td><td></td></tr><tr><td>المؤتلف البشري FGF-4</td><td>Peprotech</td><td>100-31</td><td></td></tr><tr><td>ReLeSR</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>5872</td><td>"كاشف تفكك الخلايا الجذعية"</td></tr><tr><td>حمض الريتينويك</td><td>SIGMA</td><td>R2625-50MG</td><td></td></tr><tr><td>أنابيب Microfuge خالية من الريناز ، 2 مل</td><td>Thermo Scientific</td><td>AM12425</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>R-Spondin وسائط مكيفة</td> مركز <td>تكساس الطبي مركز أمراض الجهاز الهضمي GEMS Core ، معوي / عضوي فرعي النواة</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>SB 431542 ، Tocris Bioscience</td><td>Fisher Scientific</td><td>16-141-0</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall ST 16R أجهزة الطرد المركزي</td><td>الحرارية العلمية</td><td></td><td></td></tr><tr><td>القياسية رؤوس ماصة واسعة</td><td>الفتحة VWR</td><td>89049-166</td><td></td></tr><tr><td>Stemolecule Chir99021 في محلول</td><td>Stemgent</td><td>04-0004-02</td><td></td></tr><tr><td>أطراف ماصة مرشح معقمة</td><td>VWR (1000uL ، 200uL ، 10uL)</td><td>76322-154, 76322-150, 89174-520</td><td></td></tr><tr><td>Vitronectin XF</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>7180</td><td>مصفوفة غشاء قاعدية ثلاثية الأبعاد بديلة ، تستخدم لألواح NCC.</td></tr></tbody></table>

تعصيب العضيات المعوية البشرية

Innervation of Human Intestinal Organoids

ينظم ENS الوظائف الأساسية للأمعاء الدقيقة الناضجة ، بما في ذلك التمعج ، وامتصاص العناصر الغذائية ، ونقل السوائل ، وصيانة الحاجز الظهاري. وبالتالي ، فإن الهدف من تعصيب HIOs هو تزويد هذه التركيبات بالعناصر اللازمة لتطوير وظائف أكثر نضجا وأعلى مستوى. تحقيقا لهذه الغاية ، يدرس مختبرنا على وجه التحديد تطوير ENS داخل HIOs بالإضافة إلى النتائج الوظيفية في مراحل مختلفة.
من المهم مراقبة نمو الخلايا وتمايزها وشكلها بمرور الوقت للتأكد من أن كل خطوة تتقدم كما هو متوقع قبل الانتقال إلى المرحلة التالية. يحد...

The complexity of intestinal cytoarchitecture and function poses significant challenges for the creation of the bioengineered small intestine. Techniques ...

يركز بحثنا على توليد الأمعاء المهندسة للأنسجة كحل لمتلازمة الأمعاء القصيرة. يركز مختبرنا على تحسين تكامل الجهاز العصبي المعوي وتحسين التنظيم المكاني والتنوع الخلوي والوظيفة. نأمل أن نتمكن يوما ما من إنشاء حل يغير حياة الأطفال الذين يعانون من فشل الأمعاء من خلال إنشاء أمعاء معدلة بيولوجيا.يتطلب تعصيب العضيات المعوية البشرية محاكاة نمو الأمعاء البشرية ، وقد يكون هذا أمرا صعبا. يتطلب تطوير الجهاز العصبي المعوي إشارات كيميائية حيوية وكذلك قوى ميكانيكية حيوية. تركز الدراسات المستقبلية لمختبرنا على تحسين نمو الجهاز العصبي المعوي داخل العضيات المعوية البشرية.نحن ندرس التنظيم المكاني بالإضافة إلى التنوع الخلوي ، وقد استخدمنا مؤخرا تقنية تصوير ثلاثية الأبعاد جديدة طورها الدكتور هيراث والتي يمكنها توصيف وتحديد ENS بقوة داخل عضيات الأمعاء. سيساعدنا هذا في تحسين نموذجنا وتلخيص تطور الأمعاء البشرية ووظيفتها. أولا ، خذ صفيحة اليوم 15 إلى 21 من خلايا القمة العصبية المعوية المزروعة أو كرويات ENCC وقم بإزالة الوسائط بعناية من البئر.أضف ملليلترا واحدا من كاشف انفصال الخلايا الأنزيمية الدافئة إلى البئر واحتضنه عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. ثم اضغط على جانب اللوحة لتسهيل التفكك الكروي. باستخدام ماصة دقيقة P1000 ذات طرف واسع الفم، قم بمعايرة الخليط عن طريق سحب العينة برفق لأعلى ولأسفل حتى تصبح الخلايا متجانسة.انقل تعليق ENCC إلى أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلترا. اغسل البئر بملليلتر واحد من وسائط خلية القمة العصبية الدافئة لجمع أي خلايا متبقية ، ثم أضفها إلى الأنبوب المخروطي. الآن قم بالطرد المركزي لتعليق الخلية عند 300 جم لمدة دقيقة واحدة.ثم استنشق المادة الطافية باستخدام طرف ماصة معقمة. بعد ذلك ، باستخدام طرف ماصة واسع الفم ، أعد تعليق حبيبات الخلية في مليلتر واحد من وسط خلية القمة العصبية الدافئة. اجمع الكرات الكروية المستنبتة في منتصف الأمعاء الخلفية من جميع آبار الصفيحة العضوية المعوية البشرية باستخدام طرف ماصة واسع الفم وانقلها إلى أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلترا.أضف الحجم المحسوب لتعليق ENCC في الأنبوب المخروطي الذي يحتوي على الأمعاء الكروية الخلفية الوسطى. باستخدام طرف ماصة واسع الفم، قم بتقشير الخليط برفق لخلط الكرات الكروية و ENCCs بشكل موحد. جهاز الطرد المركزي لتعليق الخلية المدمجة عند 300 جم لمدة دقيقة واحدة.قم بشفط المادة الطافية بعناية باستخدام طرف ماصة معقمة. ثم أعد تعليق حبيبات الخلية الناتجة في عامل نمو بارد خال من الفينول ، ويقلل من مصفوفة الغشاء القاعدي. بعد ذلك ، قم بعمل الماصة التي يبلغ حجمها 30 ميكرولتر من الكرات الكروية المعوية الخلفية المعلقة و ENCCs في مصفوفة الغشاء القاعدي الشفاف إلى وسط كل بئر جاف.بمجرد طلاء جميع القطرات ، قم بتغطية اللوحة ، واقلبها ، وضعها في حاضنة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 30 دقيقة. في اليوم صفر ، بمجرد بلمرة مصفوفة الغشاء القاعدي الشفاف ، قم بتغطية كل قطرة ب 500 ميكرولتر من اليوم الدافئ من صفر إلى ثلاثة وسائط HIO. في اليوم الثالث ، قم باستنشاق اليوم بعناية من صفر إلى ثلاثة وسائط HIO من جانب كل بئر دون إزعاج قطرة مصفوفة الغشاء القاعدي الشفافة.استبدلها ب 500 ميكرولتر من وسائط اليوم الدافئ من ثلاثة إلى 14 وسائط HIO وأعد اللوحة إلى الحاضنة. في اليوم 14 ، افحص كل بئر تحت المجهر لتقييم عدد هياكل HIO + ENS النامية في كل قطرة من مصفوفة الغشاء القاعدي ثلاثية الأبعاد الواضحة. أضف 30 ميكرولترا من مصفوفة الغشاء القاعدي الشفاف إلى أنابيب الطرد المركزي الدقيقة سعة ملليلترتين واحتفظ بها على الجليد.تحت غطاء التدفق الصفحي ، استخدم ملقطا دقيقا لإزالة قطرة مصفوفة الغشاء القاعدي ثلاثية الأبعاد الشفافة بعناية التي تحتوي على HIO + ENS. قم بفصل هياكل HIO + ENS الفردية برفق باستخدام الملقط. باستخدام ملقط دقيق أو طرف ماصة واسع الفم، ضع كل هيكل معزول HIO+ENS في أنابيب أجهزة الطرد المركزي الدقيقة التي تحتوي على 30 ميكرولترا من مصفوفة الغشاء القاعدي الشفافة.ثم قم بعمل قطرة سعة 30 ميكرولتر من HIO+ENS المعلق في مصفوفة غشاء القاعدية الشفافة في وسط كل بئر جاف. بمجرد أن تتبلمر القطرات ، أضف 500 ميكرولتر من اليوم الدافئ الطازج من ثلاثة إلى 14 وسائط HIO + ENS إلى كل بئر واحتضن اللوحة طوال الليل. في اليوم 15 ، استنشق بعناية من اليوم الثالث إلى 14 وسائط من جانب كل بئر دون إزعاج القطرة المبلمرة.استبدل الوسائط ب 500 ميكرولتر من وسائط اليوم الدافئ من 15 إلى 28 وسائط HIO + ENS. أظهرت الزراعة المشتركة HIO-ENS نموا كبيرا مع تطور الهياكل الوسيطة ، وشكلت نتوءات رقيقة وضبابية ، مما أدى إلى إنشاء حدود تشبه الهالة حول الالتواءات الظهارية بحلول اليوم 30. هاجرت ENCCs نحو HIOs ، المدمجة في اللحمة المتوسطة ، ونجت في المختبر ، كما هو موضح في مضان GFP داخل HIOs ، مما يؤكد إشارات البقاء والتمايز الكافية من اللحمة المتوسطة.عبرت المزارع المشتركة المزروعة HIO + ENS عن علامات عصبية ، بما في ذلك HuCD ، وعلامات الدبقية مثل S100 beta بعد النمو في الجسم الحي ، مما يؤكد التمايز إلى كل من الخلايا العصبية والخلايا الدبقية.

innervation-of-human-intestinal-organoids

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

علم الأحياء النمائي

يوضح هذا الفيديو طريقة إنشاء عضيات الأعصاب الحركية عن طريق زراعة الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة البشرية أولا في وسط خاص لتشكيل كرويات ، ثم تمييزها إلى خلايا عصبية حركية باستخدام مثبطات محددة ، وأخيرا زراعتها في شريحة ميكروسويدية لتمديد المحاور وتشكيل عضيات الأعصاب الحركية.

تطوير عضيات العصب الحركي البشري المشتقة من iPSC باستخدام رقاقة الموائع الدقيقة

يسمح هذا البروتوكول بتمايز الخلايا البشرية متعددة القدرات إلى عضويات معوية. يحاكي البروتوكول التطور البشري الطبيعي عن طريق تمييز الخلايا إلى مجموعة من الأديم الباطن النهائي والأديم الباطن الخلفي ثم ظهارة الأمعاء. هذا يجعل البروتوكول مناسبا لدراسة كل من نمو الأمعاء وكذلك تطبيقات نمذجة الأمراض.

توليد عضويات معوية مشتقة من hiPSC لتطبيقات النمذجة التنموية والمرضية

هنا نقدم اثنين من البروتوكولات التي تسمح النمذجة من التفاعلات المعوية apical محددة. تسهل الطبقات الأحادية المعوية المشتقة من الجهاز وثقافات واجهة الهواء السائل (ALI) توليد الظهارة المتباينة بشكل جيد والتي يمكن الوصول إليها من كلا الجانبين الإنارة والباسولاتيري ، في حين أن الأجهزة المعوية المقلوبة القطبية تعرض جانبها العضي وقابلة للمقاسات عالية الإنتاجية.

أساليب الثقافة لدراسة التفاعلات Apical محددة باستخدام نماذج الجهاز المعوي

هنا ، يتم وصف طرق مفصلة لتوليد والحفاظ على وتوصيف العضيات المعوية الدقيقة والقولونية المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات. تم تصميم هذه الطرق لتحسين قابلية التكاثر وتوسيع قابلية التوسع وتقليل وقت العمل المطلوب لطلاء ومرور العضيات.

توليد وصيانة وتوصيف العضيات المعوية والقولونية المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات

يقدم هذا البروتوكول تعليمات مفصلة لإنشاء عضويات الأمعاء الدقيقة الفئرانية ، وعزل الخلايا اللمفاوية الفطرية من النوع 1 من الأمعاء الدقيقة الفئرانية الصفيحة propria، وإنشاء مزارع مشتركة ثلاثية الأبعاد (3D) بين كلا النوعين من الخلايا لدراسة التفاعلات ثنائية الاتجاه بين الخلايا الظهارية المعوية والخلايا اللمفاوية الفطرية من النوع 1.

المشاركة في زراعة الأعضاء الظهارية في الأمعاء الدقيقة الفئرانية مع الخلايا اللمفاوية الفطرية

يتم دمج المواد العضوية المعوية المشتقة من الخزعة وتقنيات الأعضاء على الرقائق في منصة فسيولوجية دقيقة لتلخيص وظائف الأمعاء الخاصة بالمنطقة.

الجمع بين المواد العضوية البشرية وتكنولوجيا الأعضاء على الرقاقة لنمذجة الوظائف الخاصة بالمنطقة المعوية

هنا ، نقدم بروتوكولا لتوليد عضويات معوية للفئران واستخدامها في العديد من التطبيقات النهائية. غالبا ما تكون الفئران نموذجا مفضلا قبل السريري ، ويملأ النظام العضوي المعوي القوي الحاجة إلى نظام في المختبر لمرافقة الدراسات في الجسم الحي .

توليد والتلاعب من العضويات المعوية الفئران

يجمع البروتوكول بين تقنية العضوية المعوية البشرية والتحليل النسخي أحادي الخلية لتوفير نظرة ثاقبة مهمة في بيولوجيا الأمعاء غير المستكشفة سابقا.

استخدام الكائنات العضوية المعوية البشرية لفهم ظهارة الأمعاء الدقيقة على مستوى النسخ أحادي الخلية

تحدد هذه الدراسة بروتوكولا لتوليد طبقات أحادية ثنائية الأبعاد من عضيات الخنازير المشتقة من الأمعاء الدقيقة والغليظة. يتميز نمو هذه الطبقات الأحادية بزيادة قيم TEER ، مما يشير إلى سلامة ظهارية قوية. بالإضافة إلى ذلك, هذه أحادية الطبقات يعرض الاستجابات الإفرازية الفسيولوجية في تجارب غرفة أوسينج بعد تطبيق فورسكولين.

عضيات معوية خنزير ثنائية الأبعاد تعكس الخصائص الفسيولوجية للأمعاء الأصلية

تم إعاقة نمذجة نمو الدماغ البشري بسبب التعقيد غير المسبوق للأنسجة الظهارية العصبية. هنا ، يتم وصف طريقة للتوليد القوي من عضيات الدماغ لتحديد الأحداث المبكرة لنمو الدماغ البشري ونمذجة صغر الرأس في المختبر.

جيل المستمدة IPSC-Organoids الدماغ البشري لنموذج اضطرابات النمو العصبي في وقت مبكر

اكتشف كيفية تعصيب العضيات المعوية البشرية لعلاج قصور الأمعاء لدى الأطفال. يدمج هذا النهج الجهاز العصبي المعوي باستخدام الإشارات الكيميائية الحيوية والقوى الميكانيكية الحيوية.

تعصيب العضيات المعوية البشرية

استكشف المزيد من الفيديوهات