في المختبر اختبار تجلط الدم لأجهزة مساعدة البطين

نهدف إلى تطوير بروتوكول عملي ويمكن الوصول إليه لتحديد النقاط الساخنة المحتملة للتخثر في أجهزة المساعدة البطينية ، وسد الفجوة الحرجة بين النماذج الأولية المبكرة والتجارب على. استمرت التجارب على كطريقة أساسية لتقييم تجلط الدم في أجهزة مساعدة البطين. في حين أن ديناميكيات الموائع الحسابية أصبحت أداة لا تقدر بثمن للتحقق من التصميم ، إلا أنها لا يمكن أن تحل محل التحقق من الصحة في المختبر وفي الجسم الحي حتى الآن.

الطبيعة المعقدة لوجود تخثر الدم والعديد من العوامل المربكة ، مما يجعل من الصعب التمييز بين تجلط الدم الفعلي للجهاز والتحف التجريبية. لا تزال الطرق المختبرية لتقييم تجلط الدم في أجهزة المساعدة البطينية غير مستغلة بشكل كاف ، ولا توجد طريقة موحدة حتى الآن. من خلال تقديم بروتوكول شامل ودليل فيديو ، نأمل في تسهيل اعتماد طرق الطاولة على نطاق أوسع.

تعالج هذه الطريقة تحديا تقنيا وأخلاقيا في تطوير الأجهزة الطبية ، مما يقلل من الاعتماد على التجارب على ، مع تحسين القدرة على اكتشاف مخاطر تجلط الدم في وقت مبكر من عملية التطوير. للبدء ، املأ حلقة الاختبار ب 150 مل من الدم. تخلص من كل الهواء المحاصر في الحلقة.

إذا كنت تستخدم مضخة دم ذات تدفق محوري ، فقم بتدويرها في وضع رأسي لتحرير الهواء عن طريق الطفو. إذا كنت تستخدم مضخة طرد مركزي ، فقم بقلبها رأسا على عقب وقم بتدويرها لضمان عدم احتجاز الهواء في مسارات التدفق الثانوية. اضغط برفق على أسطح الأنابيب والخزان واضغط على أي فقاعات هواء لإخراجها.

افحص عن كثب الأقسام الأفقية للأنابيب والتقاطعات بين الأنابيب والموصلات للتأكد من عدم وجود فقاعات هواء. اضغط على الكيس الوريدي لتقريب مستوى السائل من الجزء العلوي الضيق. ثم قم بتثبيت الكيس بمرقئ عبر خط السائل للتخلص من واجهة السائل والهواء ، وأغلق محبس تنفيس الهواء.

بعد ذلك ، أغلق محبس في نهاية خطوط الضغط. قم بإزالة أنبوب مقياس الضغط وقم بإرفاق حقنة سعة ثلاثة ملليلتر. افتح محبس المحطة واسحب ملليلترا إلى ملليلترين من السائل في خط التمديد ، حوالي أربعة سنتيمترات.

أغلق المحبس وافصل المحقنة وأعد توصيل أنبوب مقياس الضغط. افتح محبس المحطة لتمكين قراءات الضغط. أخيرا ، قم بتجهيز منفذ أخذ العينات باستخدام حقنة.

بعد ذلك ، قم بقص أو تمزيق منديل خال من النسالة إلى ثلاثة أجزاء متساوية. قم بلف زاوية جزء واحد لتشكيل طرف وإدخاله في منفذ الحقن لامتصاص الدم المتبقي. تحريف الجزء الثاني.

بللها بالمحلول الملحي ، وأدخل الطرف المبلل في المنفذ لإزالة كل الدم المتبقي. استخدم الجزء الثالث لامتصاص أي محلول ملحي متبقي في المنفذ. ابدأ الآن تشغيل جهاز المساعدة البطينية ، أو VAD ، بسرعة منخفضة وقم بتشغيله لمدة خمس ثوان تقريبا لإخراج أي فقاعات هواء محاصرة داخل المضخة.

أوقف المضخة. إذا ظهرت أي فقاعات في الكيس ، كرر إلغاء البث. أعد تشغيل المضخة بسرعة منخفضة لتدوير الدم في الحلقة.

انقل ملليلترا واحدا من الهيبارين الصوديوم ، ومليلترين من محلول كلوريد الكالسيوم المحضر ، و 1.5 مل من EDTA إلى أنابيب منفصلة. لإضافة الهيبارين إلى الدم في الحلقة، قم بشفط 75 وحدة من الهيبارين في ماصة دقيقة، وقم بتوزيعها في حقنة سعة ثلاثة ملليلتر عن طريق توزيع الماصة في نفس الوقت وسحب مكبس المحقنة دون انسكاب. استخدم المنفذ العرضي لمحبس ثلاثي الاتجاهات لإدارة المواد في الحلقة باستخدام حقنة.

قم بتدوير قفل إغراء الذكر على محبس التثبيت بحيث يكون منفذ الحقن متجها لأعلى لاحتجاز فقاعات الهواء في الأعلى. الآن قم بتوصيل المحقنة بمنفذ الحقن عبر قفل الإغراء بحيث يكون المنفذ متجها لأعلى وتوجيه المحقنة عموديا لأسفل. اسحب مكبس المحقنة لملئه بالدم واخلط الهيبارين بالدم أثناء شفط أي هواء في المحقنة.

اسمح لفقاعات الهواء بالارتفاع إلى أعلى المحقنة. ثم قم بحقن الخليط في الحلقة ، مع ضمان عدم دخول الهواء. نقل الدم داخل وخارج المحقنة من أربع إلى خمس مرات للتأكد من أن الدم الهباري لا يبقى محصورا في المساحة الموجودة في الميناء.

لمعايرة وقت التخثر المنشط ، أو ACT ، للدم في الحلقة ، أضف أولا 750 ميكرولتر من محلول كلوريد الكالسيوم أحادي المولار إلى 150 مل من الدم في الحلقة. لمنع تخثر الدم ، قم بحقن السائل بسرعة بعد إزالة الهواء المتبقي. بدلا من ذلك ، قم بتخفيف كلوريد الكالسيوم في المحقنة بملليلتر واحد من محلول ملحي مخزن ثلاثي لتقليل التخثر المبكر.

بعد ترك كلوريد الكالسيوم المحقون يدور لمدة دقيقتين على الأقل ، قم بتوصيل حقنة سعة ملليلتر واحد بمنفذ أخذ العينات. اسحب وتخلص من 0.5 مل من الدم المهدر لإزالة الدم الراكد من المنفذ. بعد ذلك ، قم بإرفاق حقنة جديدة سعة مليلتر واحد بمنفذ أخذ العينات واسحب 0.5 مل من الدم لتحليلها.

قم بقياس وقت التخثر المنشط باستخدام نظام تخثر الدم الكامل في نقطة الرعاية. نظف منفذ أخذ العينات باستخدام مناديل خالية من النسالة كما هو موضح من قبل. راجع قيم المعايرة بالتحليل الحجمي لإبلاغ تركيز كلوريد الكالسيوم المستهدف.

قم بزيادة تركيز الكالسيوم بشكل تدريجي لتحقيق وقت تخثر منشط يبلغ 300 ثانية. ابدأ اختبار تجلط الدم في المختبر بمجرد تحقيق ACT البالغ 300 ثانية في الحلقة. اضبط المضخة على معدل التدفق والضغط المطلوبين عن طريق تعديل سرعة الدوار وتنظيم المقاومة باستخدام مشبك هوفمان.

قم بقياس ACT كل 15 دقيقة عن طريق سحب عينة دم من الحلقة ووضع قطرة دم في أداة ACT ، كما هو موضح سابقا. إذا انخفض ACT إلى أقل من 200 ثانية ، فقم بحقن 25 وحدة إضافية من الهيبارين الصوديوم في الحلقة. بعد ساعة واحدة ، قم بحقن 1.5 مل من EDTA 0.5 مولار في الحلقة لمنع المزيد من التخثر.

دع EDTA يدور ويخلط لمدة دقيقتين ، ثم أوقف المضخة. باستخدام المرقئ ، قم بتثبيت الأنبوب المتصل بمدخل ومخرج المضخة ، ووضع المشابك على بعد ثلاثة إلى أربعة سنتيمترات من أشواك المدخل والمخرج. افصل الأنبوب بعناية لتحرير المضخة.

ثم قم بتصريف الدم من المضخة وحلقة التدفق في وعاء. أخيرا، قم بغسل الماصة الملحية من خلال مدخل ومخرج المضخة لغسل أي دم متبقي. لوحظ ترسب الصفائح الدموية باستمرار على طول جذور الشفرات في نماذج المضخة.

أدى التلميع الكهربائي لمكونات التيتانيوم إلى القضاء على تكوين الجلطة في هذه المناطق. كان للنموذج الأولي أيضا استقطاب غير كامل في تقاطع مكون الإسكان الأمامي والخلفي ، مما أدى إلى شق حيث يتسرب الدم ويتخثر. أدى اللف والتلميع إلى تحسين تركيب المكونات وتقليل تكوين الجلطة.

يمكن أن تؤدي الأخطاء الإجرائية وإلغاء البث غير المكتمل للحلقة إلى إدخال القطع الأثرية. في هذه الحالة ، أدى خطأ تجريبي أثناء حقن كلوريد الكالسيوم إلى تخثر موضعي ، ودخلت الجلطة الناتجة إلى مضخة Maglev ذات الطرد المركزي ، مما أدى إلى إغلاق مسار التدفق. غالبا ما تكون الجلطات الكروية غير الملتصقة التي لوحظت على الأسطح نتيجة لفقاعات الهواء المغلفة داخل الجلطات.

كما تم تغليف المواد الغريبة والحطام المتداولة في الحلقة في الجلطة والالتصاق بأسطح المضخات. كان الجلطة الحلقية عند تقاطعات موصل الأنابيب مؤشرا على نطاق ACT الأمثل أثناء الاختبار.