Name: فحص الجزيئات الصغيرة واختبار السمية في يرقات الزرد في المراحل المبكرة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T14:10:00.000+00:00
Duration: 2 min 52 s
Description: اكتشف بروتوكول فحص الأدوية في يرقات الزرد بعمر 3-7 أيام بعد الإخصاب باستخدام التقييم المورفولوجي. تساعد هذه الطريقة الباحثين على دراسة آثار المواد الكيميائية على التطور الجنيني.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Teame, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29+as+biomedical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Front%22%5BJournal%5D)">The use of zebrafish (Danio rerio) as biomedical models.</a> Anim Front. 9 (3), 68-77 (2019).</li>
<li>Howe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li>
<li>Patton, E. E., Zon, L. I., Langenau, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+disease+models+in+drug+discovery%3A+From+preclinical+modelling+to+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Zebrafish disease models in drug discovery: From preclinical modelling to clinical trials.</a> Nat Rev Drug Discov. 20 (8), 611-628 (2021).</li>
<li>Clift, D., Richendrfer, H., Thorn, R. J., Colwill, R. M., Creton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+analysis+of+behavior+in+zebrafish+larvae%3A+Effects+of+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">High-throughput analysis of behavior in zebrafish larvae: Effects of feeding.</a> Zebrafish. 11 (5), 455-461 (2014).</li>
<li>Keenan, S. R., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+developmental+phases+of+zebrafish+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">The developmental phases of zebrafish myogenesis.</a> J Dev Biol. 7 (2), 12(2019).</li>
<li>Tonelli, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+A+resourceful+vertebrate+model+to+investigate+skeletal+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Endocrinol+%28Lausanne%29%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: A resourceful vertebrate model to investigate skeletal disorders.</a> Front Endocrinol (Lausanne). 11, 489(2020).</li>
<li>OECD. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Test+no.+236%3A+Fish+embryo+acute+toxicity+%28FET%29%22">Test no. 236: Fish embryo acute toxicity (FET)</a>. , (2013).</li>
<li>Chen, J. R., Lai, Y. H., Tsai, J. J., Hsiao, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+fluorescent+staining+platform+for+drug-screening+and+mechanism-analysis+in+zebrafish+for+bone+mineralization%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Live fluorescent staining platform for drug-screening and mechanism-analysis in zebrafish for bone mineralization.</a> Molecules. 22 (12), 2068(2017).</li>
<li>He, H., Wang, C., Tang, Q., Yang, F., Xu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possible+mechanisms+of+prednisolone-induced+osteoporosis+in+zebrafish+larva%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Possible mechanisms of prednisolone-induced osteoporosis in zebrafish larva.</a> Biomed Pharmacother. 101, 981-987 (2018).</li>
<li>Huang, H. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+bone+transgenic+zebrafish+in+anti-osteoporosis+chemical+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Model+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Application of bone transgenic zebrafish in anti-osteoporosis chemical screening.</a> Animal Model Exp Med. 1 (1), 53-61 (2018).</li>
<li>Haney, M. G., Moore, L. H., Blackburn, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+screening+of+primary+patient+derived+tumor+xenografts+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Drug screening of primary patient derived tumor xenografts in zebrafish.</a> J Vis Exp. (158), e60996(2020).</li>
<li>Nishimura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+zebrafish+in+systems+toxicology+for+developmental+toxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Congenit+Anom+%28Kyoto%29%22%5BJournal%5D)">Using zebrafish in systems toxicology for developmental toxicity testing.</a> Congenit Anom (Kyoto). 56 (1), 18-27 (2016).</li>
<li>Hayot, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+toxicity+of+chemicals+using+a+zebrafish+vibration+startle+response+screening+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Evaluating toxicity of chemicals using a zebrafish vibration startle response screening system.</a> J Vis Exp. (203), e66153(2024).</li>
<li>Hoyberghs, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DMSO+concentrations+up+to+1%25+are+safe+to+be+used+in+the+zebrafish+embryo+developmental+toxicity+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Toxicol%22%5BJournal%5D)">DMSO concentrations up to 1% are safe to be used in the zebrafish embryo developmental toxicity assay.</a> Front Toxicol. 3, 804033(2021).</li>
<li>Lipton, J. H., Brümmendorf, T. H., Sweet, K., Apperley, J. F., Cortes, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+considerations+in+the+management+of+patients+treated+with+bosutinib+for+chronic+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Hematol%22%5BJournal%5D)">Practical considerations in the management of patients treated with bosutinib for chronic myeloid leukemia.</a> Ann Hematol. 103 (9), 3429-3442 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1.5 مل أنبوب الطرد المركزي</td><td>الدقيق Starlab</td><td>E1415-1510</td><td></td></tr><tr><td>10 & micro ؛ L ماصة دقيقة (P10)</td><td>Gilson</td><td>F144802&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>10/20 وميكرو ؛ أطراف ماصة L</td><td>Starlab</td><td>S1110-3810</td><td></td></tr><tr><td>1000 & micro ؛ L ماصة دقيقة (P1000)</td><td>Gilson</td><td>F123602&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>1000 & ميكرو; أطراف ماصة</td><td>L Starlab</td><td>S1111-6001</td><td></td></tr><tr><td>لوحة 12 بئر</td><td>Starlab</td><td>CC7672-7512</td><td>معقمة ، ملفوفة واحدة ، غير معالجة ، بغطاء</td></tr><tr><td>20 وميكرو ؛ L ماصة دقيقة (P20)</td><td>Gilson</td><td>F123600&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>200 وميكرو ؛ L ماصة دقيقة (P200)</td><td>جيلسون</td><td>F123601&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>200 وميكرو ؛ L ماصة متعددة القنوات&nbsp;</td><td>جيلسون</td><td>F81024</td><td></td></tr><tr><td>200 & مايكرو; نصائح ماصة L</td><td>Starlab</td><td>S1113-1006</td><td></td></tr><tr><td>لوحة 96 بئر</td><td>Starlab</td><td>CC7672-7596</td><td>معقمة ، ملفوفة واحدة ، مسطحة القاع ، غير معالجة ، مع غطاء</td></tr><tr><td>خزانات تربية ذات قاع مائل داخلي للشبكة ، فواصل خزان وأغطية</td><td>Tecniplast</td><td>ZB17BTISLOP ، ZB17BTE ، &nbsp ؛ ZB17BTL ، ZB17BTD</td> مصفاة <td>شبكية داخلية مائلة</td></tr> <tr><td></td><td>للخزان /</td><td>/</td><td></td></tr> <tr><td>قفازات النتريل</td><td>مركاتور</td> <td>/</td><td>/</td></tr> <tr><td>طبق بيتري &nbsp ؛</td><td>Starlab</td><td>CC7672-3394 / CC7672-3359</td><td>100 × 20 مم أو 60 × 15 مم</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leica M205 FCA مجهر ستيريو مضان</td><td>Leica</td><td>10450826</td><td></td></tr><tr><td>حاضنة بلتيير مبردة بما في ذلك 2 رف مع وحدة خفيفة بيضاء باردة</td><td>Memmert</td><td>IPP110ecoplus ، T8</td><td>مجهزة بدورة</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> نهارية / ليلية <tr><td>ثنائي ميثيل سلفوكسيد</td><td>Biochem Chemopharma</td><td>504341000</td><td>لتحضير محلول 1٪ في E3</td></tr><tr><td>كلوريد الكالسيوم ثنائي هيدرات</td><td>Biochem Chemopharma</td><td>303080500</td><td>لتحضير E3</td></tr><tr><td>كبريتات المغنيسيوم هيبتاهيدرات</td><td>Biochem Chemopharma</td><td>313060500</td><td>لتحضير E3</td></tr><tr><td>كلوريد البوتاسيوم</td><td>Biochem Chemopharma</td><td>316030500</td><td>لتحضير E3</td></tr><tr><td>SCREEN-WELL &nbsp ؛ مكتبة مسار Wnt (Bosutinib)</td><td>Enzo</td><td>BML-2838-0500</td><td></td></tr><tr><td>كلوريد الصوديوم</td><td>فيشر Scientific</td><td>S / 3161/53</td><td>لتحضير E3</td></tr></tbody></table>

فحص الجزيئات الصغيرة واختبار السمية في يرقات الزرد في المراحل المبكرة

Small Molecule Screening and Toxicity Testing in Early-stage Zebrafish Larvae

يمكن النظر إلى التشوهات بشكل فردي أو تراكمي على مدار الجدول الزمني التجريبي حتى 7 dpf. يمكن استخدام الحد الأقصى لدرجة التشكل لكل شذوذ لحساب التشوهات المورفولوجية كنسبة مئوية من عدد اليرقات المستخدمة. على سبيل المثال ، إذا كانت درجات مورفولوجيا وذمة التامور في اليوم 7 عند 19 و 20 للهدافين 1 و 2 ، على التوالي ، من أصل درجة محتملة تبلغ 24 ، مما يعني أن 19 أو 20 يرقة من أصل 24 تظهر وذمة التامور ، فيمكن حساب النسبة المئوية للدرجة على النحو التالي:
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67759/67759eq1.jpg">
يوضح الجدول التكميلي S1 نتائج تسجيل التشكل (لكلا الهدافين) عند 4 dpf بعد اختبار السمية لمركب Bosutinib ، وهو مثبط للتيروزين كيناز موصوف لعلاج سرطان الدم النخاعيالمزمن 15. يتم تكرار نفس تسجيل التشكل للأسماك المكشوفة التي تتراوح أعمارها بين 5 dpf و 7 dpf. تم اختبار المركب باستخدام نطاق تركيز من 100 ميكرومتر إلى 6.25 ميكرومتر. تم إجراء ثلاث تكرارات تقنية في نقاط زمنية مختلفة ، وتم استخدام متوسط معدل الوفيات التراكمي عند 7 dpf لتحديد LC50 ، وهو التركيز الذي تعيش فيه 50٪ من اليرقات. يمكن تحديد LC50 في أي نقطة زمنية للتعرض. ومع ذلك ، نوصي بحساب هذا عند 7 dpf.
تم استخدام متوسط الوفيات التراكمي عند 7 dpf لإنشاء منحنى LC50 ، والذي يمكن رؤيته في الشكل 3. بالنسبة لبوسوتينيب ، قدر تركيز LC50 ب 37.95 ميكرومتر.
ملاحظة: ينطبق تركيز LC50 المقدر هذا بشكل صارم على هذا النظام النموذجي ويمكن استخدامه بعد ذلك لمزيد من فحوصات التنميط الظاهري في المصب.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67759/67759fig1.jpg"> 
الشكل 1: تخطيطي لفحص الأدوية المقترح في اليرقات عند 3-7 dpf. تم إعداد لوحات الاختبار المكونة من 96 بئرا لفحص خمسة تركيزات تتراوح بين 100 ميكرومتر و 6.25 ميكرومتر لمركب Bosutinib. الاختصار: dpf = أيام ما بعد الإخصاب. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/67759fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67759/67759fig2.jpg"> 
الشكل 2: عيوب مورفولوجية تمثيلية لوحظت في يرقات سمك الزرد عند 5 dpf المعرضة لتركيزات كيميائية مختلفة (بعد يومين من التعرض). (أ) الضابط (غير المتأثر) ، (ب) يرقات الزرد التي تظهر وذمة التامور الخفيفة ، (ج) الزرد مع وذمة التامور الشديدة ونزيف صفار البيض ، (د) الزرد مع تأخر في النمو ، وانخفاض التصبغ ، ومثانة سباحة صغيرة ، (ه) الزرد مع صفار منتفخ وزعنفة ذيلية ملتوية ، (و) الزرد مع عدم وجود زعنفة ذيلية ، (ز) الزرد مع الحبل الظهري المنحني ، (ح) الزرد ذو الذيل المقطوع ، و (أنا) سمك الزرد الميت مع النخر. لوحظت العيوب برؤوس الأسهم الحمراء. أشرطة المقياس = 1 مم. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/67759fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67759/67759fig3.jpg"> 
الشكل 3: منحنى LC50 يظهر التركيز مقابل النسبة المئوية للوفيات. كانت التركيزات الخمسة المختبرة هي 100 ميكرومولار ، و 50 ميكرومتر ، و 25 ميكرومتر ، و 12.5 ميكرومتر ، و 6.25 ميكرومتر ، مع نسبة الوفيات 100٪ و 100٪ و 29.2٪ و 12.5٪ و 12.5٪ على التوالي. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/67759fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>العيوب المورفولوجية</td>
			<td>وصف</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>وذمة التامور</td>
			<td>تراكم السوائل حول القلب مع تمدد القلب وخلل في الدورة الدموية</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ضربات القلب (في الدقيقة)</td>
			<td>تقليل عدد النبضات في الدقيقة</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>صفار</td>
			<td>وجود أو عدم وجود وذمة صفار البيض أو نزيف يمكن أن يحدث في وقت واحد مع عيوب القلب</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>تمديد صفار البيض</td>
			<td>صفار البيض المتورم أو الرقيق أو الغائب</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>حبل الظهري المنحني</td>
			<td>وجود حبل الظهري الملتوي أو المتموج و / أو ذيل منحني</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>المثانة السباحة</td>
			<td>وجود مثانة السباحة أو غيابها أو تطورها الجزئي</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>تصبغ</td>
			<td>خلايا ميلانينية أقل أو معدومة مقارنة بالأسماك غير المعالجة في نفس العمر</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>نخر</td>
			<td>وجود (خفيف أو شديد) أو عدم وجود نخر في أي جزء من الجسم</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>تأخر التطوير</td>
			<td>تأخر التطور أو توقف مقارنة بعناصر التحكم البرية من نفس العمر.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>الاستجابة للمس</td>
			<td>تأخر الاستجابة أو عدم الاستجابة بعد الذهول (على سبيل المثال، استخدام طرف ماصة)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>اقتطاع</td>
			<td>غياب جسم الزرد الخلفي (أي تكوين الذيل)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>زعانف</td>
			<td>وجود أو عدم وجود الزعنفة الذيلية التي قد تكون مصحوبة بامتداد صفار رفيع</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>محور الجسم المنخفض</td>
			<td>الأسماك التي تبدو طبيعية ولكن عند قياسها تكون أقصر في الطول</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
الجدول 1: قائمة بالعيوب المورفولوجية البصرية التي يمكن ملاحظتها بعد دراسات التعرض للأدوية.
الجدول التكميلي S1: النتائج المورفولوجية التمثيلية ل Bosutinib عند 4 dpf (يوم واحد بعد التعرض). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/SupplementalTable_1.xlsx" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتحميل هذا الجدول.</a>

Zebrafish have become a prominent model organism for human translational research, toxicity testing of small molecules and environmental pollutants, ...

small-molecule-screening-toxicity-testing-early-stage-zebrafish

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

اسماك الزرد نطاق واسع ، واستنادا في الجسم الحي شاشة جزيء صغير

نحن هنا وصف رواية عالية المحتوى فحص الالتهاب الناجم كيميائيا يهدف إلى التعرف على المناعة تغييري bioactives. لقد نجحنا في الجمع بين المجهر الآلي مع العرف مخطوطات البرمجيات المتقدمة تمكين الكمي الآلي للاستجابة التهابية، فضلا عن مزيد من معالجة البيانات وتحليلها، والتعدين، والتخزين.

تسهيل اكتشاف المخدرات: مؤتمتة فحص التهاب عالية المحتوى في الزرد

في هذه المقالة ، يتم استخدام أجنة الزرد لفحص السمية الكيميائية. ترتبط السمية الكيميائية بقراءات النمط الظاهري. يوضح بروتوكول العينة نهجا منهجيا لإجراء فحص السمية الكيميائية.

فحص السمية الكيميائية القائمة على الجنين: تقييم التأثيرات على نمو أجنة أسماك الزرد

تصف هذه المقالة الاستجابة السلوكية لسمك الزرد للمركبات السامة من خلال مراقبة حركة اليرقات. ينظر البروتوكول أيضا في مثال على استجابة يرقات الزرد للملوثات البيئية.

مقايسة حركة اليرقات: طريقة عالية الإنتاجية لدراسة السمية السلوكية العصبية لمركب في يرقات الزرد

الزرد هو كائن حي تجريبي ممتاز لدراسة العمليات التنموية الفقاريات والأمراض التي تصيب البشر النموذج. هنا، نحن تصف بروتوكول بشأن كيفية تنفيذ اليدوية شاشة الكيميائية عالية الإنتاجية في الأجنة الزرد مع ككل جبل التهجين الموضعي (WISH) في القراءة خارج.

دليل جزيء صغير شاشة تقترب عالية الإنتاجية عن طريق الزرد الأجنة

وتستخدم أجنة سمك الحمار الوحشي لتقييم سمية المركبات الكيميائية. وهي تتطور خارجيا وحساسة للمواد الكيميائية، مما يسمح بالكشف عن التغيرات الفينوتية خفية. تتطلب التجربة فقط كمية صغيرة من المركب، والتي تضاف مباشرة إلى لوحة تحتوي على الأجنة، مما يجعل نظام الاختبار فعالة وفعالة من حيث التكلفة.

التقييم السريع لسمية المركبات الكيميائية باستخدام أجنة سمك الحمار الوحشي

يتم تقديم بروتوكول تجريبي مفصل في هذه الورقة لتقييم السمية السلوكية العصبية للملوثات البيئية باستخدام نموذج يرقات حمار وحشي ، بما في ذلك عملية التعرض واختبارات المؤشرات السلوكية العصبية.

دراسة الآثار السلوكية العصبية للملوثات البيئية على يرقات حمار وحشي

نماذج زيونوجراف وزينوجراف تسمح لفحص المخدرات عالية الإنتاجية والتصوير الفلورسنت للخلايا السرطانية البشرية في بيئة صغيرة في الجسم الحي. قمنا بتطوير سير عمل لفحص المخدرات على نطاق واسع آلي على عينات سرطان الدم المشتقة من المريض في سمك الحمار الوحشي باستخدام مجهر الفلورسينس الآلي مجهزوحدة التصوير.

فحص المخدرات للمريض الأولي المشتقة الورم Xenografts في حمار وحشي

تم استغلال الزرد مؤخرا كنموذج للتحقق من صحة معدلات الإشعاع المحتملة. يصف هذا البروتوكول الخطوات التفصيلية لاستخدام أجنة الزرد في تجارب الفحص القائمة على الإشعاع وبعض النهج القائمة على الملاحظة لتقييم تأثير العلاجات والإشعاع المختلفة.

يرقات الزرد كنموذج لتقييم المحسسات الإشعاعية المحتملة أو الواقيات

نحن نصف سير عمل نظام الفحص وتحليل البيانات لتقييم سمية المركبات الكيميائية بناء على استجابة اهتزاز جنين الزرد. يسجل النظام تحركات أجنة الزرد عند التعرض لمحفز اهتزازي ويسمح بإجراء تقييم متكامل للسمية العامة / الفتك والسمية العصبية العضلية.

تقييم سمية المواد الكيميائية باستخدام نظام فحص الاستجابة المفاجئة لاهتزاز الزرد

اكتشف بروتوكول فحص الأدوية في يرقات الزرد بعمر 3-7 أيام بعد الإخصاب باستخدام التقييم المورفولوجي. تساعد هذه الطريقة الباحثين على دراسة آثار المواد الكيميائية على التطور الجنيني.

فحص الجزيئات الصغيرة واختبار السمية في يرقات الزرد في المراحل المبكرة

استكشف المزيد من الفيديوهات