مارس 7, 2025
يصف هذا البروتوكول إجراء فحص الأدوية في يرقات الزرد بعد 3-7 أيام من الإخصاب متبوعا بالتقييم المورفولوجي.
للبدء ، اجمع أجنة الزرد في المراحل المبكرة بعد ثلاثة أيام من الإخصاب في طبق بتري. باستخدام ماصة صغيرة سعة 1000 ميكرولتر مضبوطة على حجم 100 ميكرولتر، انقل جنينا واحدا مفقس صحي المظهر إلى كل بئر من لوح 96 بئر. الآن ، قم بإدخال الكمية اللازمة من مادة الاختبار الكيميائية في كل بئر من صفيحة 12 بئر.
ثم اضبط الحجم الإجمالي على 2.4 مل مع E3 متوسط. قم بإعداد التحكم في السيارة وفقا للمذيب المستخدم لإذابة مادة كيميائية لاختبار المخزون. باستخدام ماصة سعة 200 ميكرولتر، قم بإزالة أي محلول E3 موجود من كل بئر من لوحة البئر 96.
استخدم ماصة صغيرة ثماني القنوات لاستبدالها ب 100 ميكرولتر من وسط الاختبار المحضر لكل تركيز. تأكد من اختبار ما مجموعه 24 يرقة لكل تركيز. بعد 24 ساعة ، استخدم مجهر ضوئي ستيريو لإجراء التسجيل المورفولوجي.
قم بتسجيل التشكل باستخدام طريقة ثنائية ، حيث يشير الغائب إلى التشكل الطبيعي ويشير الحاضر إلى وجود خلل مورفولوجي. عند اكتمال التسجيل ، قم بإزالة 50 ميكرولترا من الوسط من كل بئر. استبدله ب 50 ميكرولتر من وسط الاختبار الطازج.
قم بإزالة وتسجيل أي يرقات ميتة ، ثم احتضان اليرقات عند 28.5 درجة مئوية مع دورة ضوء 14 ساعة و 10 ساعات من الظلام. أظهرت أسماك الزرد بعد خمسة أيام من الإخصاب أنماطا ظاهرية متنوعة بعد يومين من التعرض للأدوية. لوحظت أسماك الحمار الوحشي غير المتأثرة كالمعتاد ، بينما كانت الوذمة التامور الخفيفة واضحة في بعض الأسماك.
لوحظ وذمة التامور الشديدة ، مصحوبة بنزيف صفار البيض وامتداد صفار البيض في حالات أخرى. كما لوحظ تأخر التطور مع انخفاض التصبغ ومثانة السباحة والطول الإجمالي. تضمنت الأنماط الظاهرية الإضافية أسماك الزرد ذات الصفار المتورم والزعنفة الذيلية الملتوية ، والزعنفة الذيلية الغائبة ، والحبل الظهري المنحني.
أظهرت الحالات الشديدة اقتطاعا ووفيات مع نخر.
تحدد هذه الدراسة بروتوكولاً لفحص الأدوية في يرقات أسماك الزرد، التي تتراوح أعمارها بين 3-7 أيام بعد الإخصاب، مع التركيز على التقييمات المورفولوجية بعد التعرض للأدوية. الهدف هو تحليل مختلف النتائج المظهرية الناتجة عن العلاجات الكيميائية المختلفة.
Standardized small molecule screening and toxicity testing in early-stage zebrafish larvae addresses a critical gap in preclinical safety assessment. This protocol enables reproducible, quantitative evaluation of compound-induced morphological changes, supporting predictive confidence in early drug discovery. Integrating robust zebrafish-based toxicity data informs portfolio triage and de-risks downstream development.
This zebrafish-based protocol fits at the intersection of early discovery and preclinical safety, bridging in vitro screening and mammalian model validation.