Name: الضبط الدقيق لاتجاه Caenorhabditis elegans على وسادات أجار الموجهة لتصوير التجديد العصبي (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T14:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: تعلم كيفية ضبط اتجاه Caenorhabditis elegans بدقة على وسادات أجار الموجهة باستخدام قوالب PDMS لتحسين تصوير التجديد العصبي. هذه الطريقة تساعد الباحثين على دراسة آليات تجديد الجهاز العصبي المركزي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>تصنيع وسادات أجار موجهة باستخدام قوالب PDMS للتحكم في اتجاه

<ol><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li>
<li>Bargmann, C. I., Avery, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+killing+of+cells+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Laser killing of cells in Caenorhabditis elegans.</a> Methods Cell Biol. 48, 225-250 (1995).</li>
<li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+self-regulating+feed-forward+circuit+controlling+C-elegans+egg-laying+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A self-regulating feed-forward circuit controlling C-elegans egg-laying behavior.</a> Curr Biol. 18 (19), 1445-1455 (2008).</li>
<li>Chung, S. H., Mazur, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femtosecond+laser+ablation+of+neurons+in+C.+elegans+for+behavioral+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Phys+A-Mater+Sci+Process%22%5BJournal%5D)">Femtosecond laser ablation of neurons in C. elegans for behavioral studies.</a> Appl Phys A-Mater Sci Process. 96 (2), 335-341 (2009).</li>
<li>Zellag, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CentTracker%3A+a+trainable%2C+machine-learning-based+tool+for+large-scale+analyses+of+Caenorhabditis+elegans+germline+stem+cell+mitosis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">CentTracker: a trainable, machine-learning-based tool for large-scale analyses of Caenorhabditis elegans germline stem cell mitosis.</a> Mol Biol Cell. 32 (9), 915-930 (2021).</li>
<li>Huang, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+neuron+in+C.+elegans+orchestrates+multiple+motor+outputs+through+parallel+modes+of+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A single neuron in C. elegans orchestrates multiple motor outputs through parallel modes of transmission.</a> Curr Biol. 33 (20), 4430-4445.e6 (2023).</li>
<li>Rasmussen, N. R., Dickinson, D. J., Reiner, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ras-dependent+cell+fate+decisions+are+reinforced+by+the+RAP-1+small+GTPase+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Ras-dependent cell fate decisions are reinforced by the RAP-1 small GTPase in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 210 (4), 1339-1354 (2018).</li>
<li>Rivera Gomez, K., Schvarzstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immobilization+of+nematodes+for+live+imaging+using+an+agarose+pad+produced+with+a+vinyl+record%5BTitle%5D)+AND+%22MicroPubl+Biol%22%5BJournal%5D)">Immobilization of nematodes for live imaging using an agarose pad produced with a vinyl record.</a> MicroPubl Biol. 2018, (2018).</li>
<li>Chung, S. H., Clark, D. A., Gabel, C. V., Mazur, E., Samuel, A. D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+AFD+neuron+in+C.+elegans+thermotaxis+analyzed+using+femtosecond+laser+ablation%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The role of the AFD neuron in C. elegans thermotaxis analyzed using femtosecond laser ablation.</a> BMC Neuroscience. 7 (1), 30(2006).</li>
<li>Gerhold Abigail, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+regulation+of+stem+and+progenitor+cell+mitotic+progression+by+in+situ+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Investigating the regulation of stem and progenitor cell mitotic progression by in situ imaging.</a> Curr Biol. 25 (9), 1123-1134 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>125 مل قارورة إرلينماير</td><td>كورنينج</td><td>4980-125</td><td></td></tr><tr><td>33 1/2 دورة في الدقيقة أو 12 بوصة طويلة اللعب (LP) سجل الفينيل&nbsp;</td><td>N / A</td><td>N /</td><td>A عمق القناة الفردية: 50 & micro; م ، العرض: 200 وميكرو ؛ م</td></tr><tr><td>30 مل حقنة بلاستيكية</td><td>فيشر Scientific</td><td>50-793-817</td><td></td></tr><tr><td>90٪ بلاتين ، 10٪ سلك إيريديوم</td><td>Tritech Research &nbsp ؛</td><td>PT-9010</td><td>تستخدم لإنشاء</td></tr><tr><td>رقائق الألومنيوم اختيار البلاتين&nbsp;</td><td>أمازون</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>كلوريد الكالسيوم</td><td>فيشر Scientific</td><td>AAL131910B</td><td></td></tr><tr><td>لوح زجاجي</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td>7 بوصة × 5 في لوح زجاجي مأخوذ من الإطار &nbsp ؛</td></tr><tr><td>ماصة زجاجية</td><td>فيشر Scientific</td><td>13-678-20A</td> تستخدم لإنشاء لوحة ساخنة <td>من البلاتين</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Thermofisher</td><td>SP88857104</td><td></td></tr><tr><td>كبريتات المغنيسيوم</td><td>فيشر الشرائح</td><td>المجهرية العلمية AA3333736</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Mckesson</td><td>938360</td><td></td></tr><tr><td>علم الأحياء الجزيئي الصف agar&nbsp;</td><td>المعيار العلمي</td><td>A1705</td><td></td></tr><tr><td>فوسفات البوتاسيوم ثنائي القاعدة &nbsp;</td><td>فيشر Scientific</td><td>P290-500</td><td></td></tr><tr><td>فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة &nbsp;</td><td>فيشر ساينتفيك</td><td>P285-500</td><td></td></tr><tr><td>أزيد الصوديوم</td><td>فيشر AAJ2161022</td><td></td><td></td></tr><tr><td>كلوريد الصوديوم العلمي &nbsp ؛</td><td>فيشر Scientific</td><td>BP358-212</td><td></td></tr><tr><td>غطاء زجاجي مربع</td><td>فيشر سيانتيفك</td><td>12-541-016</td><td></td></tr><tr><td>SYLCAP 284-F (علاج سريع) سيليكون المطاط الصناعي طقم مغلف ، شفاف ، واضح بصريا ، مزيج 10: 1 ، 500 جم / مل (0.5 كجم) ، أسرع من Sylgard 184 وما شابه ذلك & nbsp ؛</td><td>MicroLubrol</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>فراغ مجفف &nbsp ;</td><td>فيشر ساينتفيك</td><td>08-648-100</td><td></td></tr><tr><td>صحن وزن&nbsp;</td><td>فيشر ساينتفيك</td><td>01-549-750</td><td></td></tr></tbody></table>

الضبط الدقيق لاتجاه caenorhabditis elegans على وسادات أجار الموجهة لتصوير التجديد العصبي

Fine Adjustment of Caenorhabditis elegans Orientation on Channeled Agar Pads for Imaging Neuroregeneration

تصنيع قالب PDMS يؤدي تدوير ضغط الفراغ أثناء تصنيع القالب إلى ثقب وإزالة فقاعات الهواء من PDMS غير المعالج ، مما يضمن قالبا خاليا من الفقاعات. كما هو موضح في الشكل 3D يظهر ، ترتفع الفقاعات إلى السطح وتثقب. يمكن أن تنتج القوالب الخالية من الفقاعات قنوات نظيفة.
تصلب قالب PDMS عند وضع اللوح الزجاجي على سجل الفينيل ، تجنب إنشاء فجوات هوائية. يمكن أن تؤدي هذه الفجوات إلى سمك غير متساو أو عيوب في السطح. يمكن اكتشاف الفقاعات ، إن وجدت ، بصريا. يؤدي الضغط على اللوح الزجاجي من جانب إلى آخر إلى إزاحة الهواء ، مما يقلل من تكوين الفقاعات ويضمن سمك قالب متساو موضح في الشكل 4 أ.
استخدام وسادات أجار موجهة للتوجيه الدقيق ل C. ايليجانس تسمح وسادات الأجار الموجهة بالتوجيه الدقيق ل C. ايليجانس. قمنا بتعيين اتجاه عن طريق دحرجة برفق باستخدام سلك بلاتيني ، مع التحقق من الاتجاه باستخدام المعالم ، مثل الفرج أو الأمعاء على شكل حرف S (الشكل 5 أ ، ج). نؤكد الاتجاه تحت مجهر تشريح الفلورسنت قبل نقل إلى مجهر مقلوب موضح في الشكل 5 ب ، د.
تقييم تجديد ألياف الخلايا العصبية باستخدام وسادات أجار موجهة تعمل وسادات الأجار الموجهة على تحسين جودة التصوير لتجديد الخلايا العصبية من خلال توجيه على النحو الأمثل. يقلل وضع ألياف الخلايا العصبية المتجددة بالقرب من العدسة الشيئية من تشتت الضوء وامتصاصه ، مما يعزز وضوح الصورة. يوضح الشكل 5E ، F أن وضع موقع التجديد بالقرب من الهدف يعزز جودة التصوير ، مما يسهل تحليلا أكثر دقة لإعادة نمو الخلايا العصبية.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig01.jpg"> 
الشكل 1: Caenorhabditis elegans على وسادات مسطحة وموجهة. (أ) على وسادة أجار مسطحة في اتجاه DV ؛ الفرج يواجه الغطاء. (ب) إدخال الغطاء يدفع الفرج إلى الجانب ، مما يجبر على الاتجاه الجانبي. (ج) على وسادة أجار موجهة في اتجاه DV. (د) يبقى في اتجاه DV بعد إدخال الغطاء. (ه) صورة المجال الساطع لمتحور الأسطوانة على وسادة أجار موجهة في اتجاه DV. (F) صورة Brightfield مع غطاء ، يظل نفس مثل E في اتجاه DV. الاختصارات: DV = ظهري بطني. خط الطول = جانبي. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig01large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig02.jpg"> 
الشكل 2: مواد ومعدات تصنيع PDMS. (أ) مجموعة المطاط الصناعي السيليكوني SYLCAP 284-F. (ب) المقياس. (ج) حقنة بلاستيكية. (د) مجفف الفراغ. (ه) لوح ساخن. (F) سجل فينيل طويل التشغيل مقاس 12 بوصة ، قم بتفكيكه حسب الحاجة. (ز) لوح زجاجي. اختصار: PDMS = بولي ديميثيل سيلوكسان. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig02large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig03.jpg"> 
الشكل 3: خلط وتنظيف PDMS غير المعالج. (أ) امزج القاعدة وعامل المعالجة في الدرج. (ب) ضع الدرج في غرفة مفرغة. (ج) قم بتدوير الفراغ ثلاث مرات للسماح للفقاعات بالظهور. (د) بعد ساعة واحدة ، انفجرت معظم الفقاعات. لاحظ تحسين الإرسال من خلال PDMS. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig03large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig04.jpg"> 
الشكل 4: إدخال لوح زجاجي إلى PDMS غير المعالج بدون فقاعات. (أ) إدخال لوح زجاجي على سجل الفينيل بدون فقاعات. (ب) إزالة قالب PDMS المتصلب من السجل ، مع قنوات تفصيلية داخلية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig04large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig05.jpg"> 
الشكل 5: صور Brightfield و Fluorescence ل C. ايليجانس مثبتة على أجار موجه. (أ) صورة Brightfield لحيوان في اتجاه DV الثنائي. معلم تشريحي لتوجيه DV: أمعاء حلزونية على شكل حرف S (يشار إليها الأنسجة الداكنة بالسهم) تعبر خط الوسط ~ 60٪ من المسافة من الأنف إلى الذيل. (ب) صورة مضان للخلايا العصبية في اتجاه DV ، نفس مثل A. (ج) صورة المجال الساطع لحيوان في اتجاه خط العرض. معلم تشريحي لتوجيه خط العرض: الفرج المواجه للجانب. (د) صورة مضان للخلايا العصبية في اتجاه خط الطول ، نفس مثل C. (ه) التوجيه مع التجديد (السهم) في الجانب الأعمق (البعيد) من. (و) التوجيه مع التجديد في الجانب الضحل الأقرب إلى الهدف؛ تجديد أوضح (سهم). أشرطة المقياس = 20 ميكرومتر. الاختصارات: DV = ظهري بطني. خط الطول = جانبي. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig05large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

الضبط الدقيق لاتجاه Caenorhabditis elegans على وسادات أجار الموجهة لتصوير التجديد العصبي

Caenorhabditis elegans is a model organism widely used for studying biological processes. Its transparency and small size make it ideal for imaging ...

fine-adjustment-caenorhabditis-elegans-orientation-on-channeled-agar

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

أثناء التصوير المباشر ل C. ايليجانس ، يمكن استخدام وسادة الاغاروز لتثبيت الديدان الخيطية دون إتلافها أو تجفيفها. يصف هذا الفيديو كيفية تحضير وسادة تثبيت بسيطة للفحص المجهري.

تحضير شريحة الديدان الخيطية: طريقة لتركيب على وسادة أجار

المصدر: Doser، R.، et al. التصوير تحت الخلوي لمعالجة الكالسيوم العصبي في الجسم الحي. J. Vis. Exp. (2023)يوضح هذا الفيديو التصوير في الجسم الحي لتدفق الكالسيوم تحت الخلوي في الخلايا العصبية في الحبل العصبي البطني لسلالات Caenorhabditis elegans المعدلة وراثيا. يتم استخدام مؤشرين متميزين للكالسيوم: مؤشر سيتوبلازمي في سلالة واحدة ومؤشر الميتوكوندريا في سلالة أخرى. لوحظت الخلايا العصبية تحت المجهر الفلوري لمراقبة التغيرات في الوقت الفعلي في شدة التألق داخل السيتوبلازم العصبي والميتوكوندريا ، مما...

تصوير ديناميكيات الكالسيوم تحت الخلايا في الخلايا العصبية لالتهاب الغدة المائية

مع صغر الجسم التشريح العصبي شفافة موثقة جيدا، ومجموعة من التقنيات الجينية قابلة...

الكالسيوم في الجسم الحي التصوير الخلايا العصبية في C. ايليجانس

نحن تصف أساليب لدراسة جوانب amylopathies في...

A<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em&gt; النظام النموذجي للدراسات Amylopathy

يصف هذا البروتوكول كيفية تقسيم الصورة الخلايا داخل الأنسجة في انواع معينة ايليجانس الأجنة. بينما العديد من البروتوكولات تصف كيفية انقسام الخلايا في صورة الجنين في وقت مبكر، ويصف هذا البروتوكول كيفية صورة انقسام الخلايا داخل الأنسجة النامية خلال منتصف أواخر مرحلة التطور الجنيني.

تصور أرومة عصبية خلال الانقسام السيتوبلازمي<em&gt; C. ايليجانس</em&gt; مرحلة التطور الجنيني

ايليجانس كاينورهابديتيس (C. ايليجانس) نموذج جيد لدراسة النقل محواري وداخل الخلايا. وهنا أصف على بروتوكول في فيفو تسجيل وتحليل للنقل محواري وإينترافلاجيلار في C. ايليجانس.

التثبيت من ايليجانس كاينورهابديتيس "تحليل النقل داخل الخلايا" في الخلايا العصبية

توضح هذه الدراسة القياسات الكمية لحجم متشابك والتعريب، ومورفولوجيا العضلات، وشكل الميتوكوندريا في C. elegans باستخدام أدوات معالجة الصور المتاحة بحرية. يسمح هذا النهج للدراسات المستقبلية في C. elegans بمقارنة كمية مدى التغيرات الهيكلية للأنسجة والأعضاء نتيجة للطفرات الوراثية.

المناهج الكمية لدراسة الهياكل الخلوية ومورفولوجيا الأعضاء في الكنورهابدية

وقد تم تقديم بروتوكول لتصوير microtubules الحيوية في الجسم الحي باستخدام البروتين ملزمة نهاية المسمى fluorescently. وصفنا أساليب لتسمية, صورة, وتحليل microtubules الحيوية في الخلايا العصبية الميكروتبول الجانبي الخلفي (PLM) من C. elegans.

في الجسم الحي تقييم ديناميات Microtubule والتوجه في Caenorhabditis elegans الخلايا العصبية

تصف الطرق الحالية نهجا غير متناسب لتصوير الكالسيوم عالي الدقة وشبه المجزأ في الجسم الحي في Caenorhabditis elegans باستخدام مؤشرات الكالسيوم المشفرة وراثيا المتاحة بسهولة.

التصوير تحت الخلوي للتعامل مع الكالسيوم العصبي في الجسم الحي

تصف الورقة تحسين معلمات اكتساب الفحص المجهري الفلوري لتصور النقل المحوري للشحنات الموسومة الداخلية بدقة خلية عصبية واحدة في الديدان الخيطية الحية.

تحسين تصور النقل المحوري للبضائع الداخلية بواسطة الفحص المجهري الفلوري في التهاب Caenorhabditis elegans الحي

تعلم كيفية ضبط اتجاه Caenorhabditis elegans بدقة على وسادات أجار الموجهة باستخدام قوالب PDMS لتحسين تصوير التجديد العصبي. هذه الطريقة تساعد الباحثين على دراسة آليات تجديد الجهاز العصبي المركزي.

الضبط الدقيق لاتجاه Caenorhabditis elegans على وسادات أجار الموجهة لتصوير التجديد العصبي

استكشف المزيد من الفيديوهات