Name: توليد الثقافات الأولية لتصوير الخلايا الحية للخلايا الكيراتينية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T13:25:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: اكتشف بروتوكولاً موثوقاً لزراعة الخلايا الكيراتينية الأولية وتصويرها الحي. تتيح هذه الطريقة مراقبة العمليات الخلوية الديناميكية في الوقت الفعلي لفهم أفضل لبيولوجيا الجلد.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Mateu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+differences+between+neonatal+and+adult+fibroblasts+and+keratinocytes%3A+Donor+age+affects+epithelial-mesenchymal+crosstalk+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Functional differences between neonatal and adult fibroblasts and keratinocytes: Donor age affects epithelial-mesenchymal crosstalk in vitro.</a> Int J Mol Med. 38 (4), 1063-1074 (2016).</li>
<li>Handl, J., Čapek, J., Majtnerová, P., Báčová, J., Roušar, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+repeated+passaging+on+the+susceptibility+of+human+proximal+tubular+HK-2+cells+to+toxic+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Phy+Res+Aca+Sci+Boh%22%5BJournal%5D)">The effect of repeated passaging on the susceptibility of human proximal tubular HK-2 cells to toxic compounds.</a> Phy Res Aca Sci Boh. 69 (4), 731-738 (2020).</li>
<li>Xiao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+cell+cycle+duration+is+a+phenotype+of+human+epidermal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+The%22%5BJournal%5D)">Short cell cycle duration is a phenotype of human epidermal stem cells.</a> Stem Cell Res The. 15 (1), 76(2024).</li>
<li>Noujarède, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sphingolipid+paracrine+signaling+impairs+keratinocyte+adhesion+to+promote+melanoma+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Sphingolipid paracrine signaling impairs keratinocyte adhesion to promote melanoma invasion.</a> Cell Rep. 42 (12), 113586(2023).</li>
<li>Sun, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+image-based+dynamic+high-throughput+analysis+of+adherent+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-prol%22%5BJournal%5D)">An image-based dynamic high-throughput analysis of adherent cell migration.</a> Bio-prol. 11 (6), e3957(2021).</li>
<li>Chapman, S., McDermott, D. H., Shen, K., Jang, M. K., McBride, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+Rho+kinase+inhibition+on+long-term+keratinocyte+proliferation+is+rapid+and+conditional%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+The%22%5BJournal%5D)">The effect of Rho kinase inhibition on long-term keratinocyte proliferation is rapid and conditional.</a> Stem Cell Res The. 5 (2), 60(2014).</li>
<li>U.S. Department of Health and Human Services. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biosafety+in+microbiological+and+biomedical+laboratories%22">Biosafety in microbiological and biomedical laboratories</a>. , 6th edition, Centers for Disease Control and Prevention, National Institutes of Health. USA. (2020).</li>
<li>Poumay, Y., Roland, I. H., Leclercq-Smekens, M., Leloup, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basal+detachment+of+the+epidermis+using+dispase%3A+tissue+spatial+organization+and+fate+of+integrin+alpha+6+beta+4+and+hemidesmosomes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Inv+Der%22%5BJournal%5D)">Basal detachment of the epidermis using dispase: tissue spatial organization and fate of integrin alpha 6 beta 4 and hemidesmosomes.</a> J Inv Der. 102 (1), 111-117 (1994).</li>
<li>Tsuji, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+different+cell-detaching+methods+on+the+viability+and+cell+surface+antigen+expression+of+synovial+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22CellTra%22%5BJournal%5D)">Effects of different cell-detaching methods on the viability and cell surface antigen expression of synovial mesenchymal stem cells.</a> CellTra. 26 (6), 1089-1102 (2017).</li>
<li>Rheinwald, J. G., Green, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+cultivation+of+strains+of+human+epidermal+keratinocytes%3A+the+formation+of+keratinizing+colonies+from+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells.</a> Cell. 6 (3), 331-343 (1975).</li>
<li>Boisseau, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+epidermal+sheets+in+a+serum+free+culture+system%3A+a+further+appraisal+of+the+role+of+extracellular+calcium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Der+Sci%22%5BJournal%5D)">Production of epidermal sheets in a serum free culture system: a further appraisal of the role of extracellular calcium.</a> J Der Sci. 3 (2), 111-120 (1992).</li>
<li>Roshan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+keratinocytes+have+two+interconvertible+modes+of+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Bio%22%5BJournal%5D)">Human keratinocytes have two interconvertible modes of proliferation.</a> Nat Cell Bio. 18 (2), 145-156 (2016).</li>
<li>Nanba, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EGFR-mediated+epidermal+stem+cell+motility+drives+skin+regeneration+through+COL17A1+proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Bio%22%5BJournal%5D)">EGFR-mediated epidermal stem cell motility drives skin regeneration through COL17A1 proteolysis.</a> J Cell Bio. 220 (11), e202012073(2021).</li>
<li>Ścieżyńska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+human+primary+keratinocytes-a+methods+review%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Der%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of human primary keratinocytes-a methods review.</a> Exp Der. 28 (2), 107-112 (2019).</li>
<li>Guo, A., Jahoda, C. A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+of+human+keratinocyte+culture+from+skin+explants%3A+cell+expansion+is+linked+to+markers+of+activated+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Derm%22%5BJournal%5D)">An improved method of human keratinocyte culture from skin explants: cell expansion is linked to markers of activated progenitor cells.</a> Exp Derm. 18 (8), 720-726 (2009).</li>
<li>Orazizadeh, M., Hashemitabar, M., Bahramzadeh, S., Dehbashi, F. N., Saremy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+enzymatic+and+explant+methods+for+the+culture+of+keratinocytes+isolated+from+human+foreskin%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Rep%22%5BJournal%5D)">Comparison of the enzymatic and explant methods for the culture of keratinocytes isolated from human foreskin.</a> Bio Rep. 3 (3), 304-308 (2015).</li>
<li>Usta, S. N., Scharer, C. D., Xu, J., Frey, T. K., Nash, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemically+defined+serum-free+and+xeno-free+media+for+multiple+cell+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+of+tra+med%22%5BJournal%5D)">Chemically defined serum-free and xeno-free media for multiple cell lineages.</a> Ann of tra med. 2 (10), 97(2014).</li>
<li>Lenihan, C., Rogers, C., Metcalfe, A. D., Martin, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+isolation+and+culture+methods+on+epithelial+stem+cell+populations+and+their+progeny-toward+an+improved+cell+expansion+protocol+for+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Cyt%22%5BJournal%5D)">The effect of isolation and culture methods on epithelial stem cell populations and their progeny-toward an improved cell expansion protocol for clinical application.</a> Cyt. 16 (12), 1750-1759 (2014).</li>
<li>Bernstam, L. I., Vaughan, F. L., Bernstein, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Keratinocytes+grown+at+the+air-liquid+interface%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Keratinocytes grown at the air-liquid interface.</a> In Vitro Cell Dev Biol. 22 (12), 695-705 (1986).</li>
<li>Ponce, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+cultivation+of+primary+keratinocytes+from+piglet+skin+for+compartmentalized+co-culture+with+dorsal+root+ganglion+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Bio%22%5BJournal%5D)">Isolation and cultivation of primary keratinocytes from piglet skin for compartmentalized co-culture with dorsal root ganglion neurons.</a> J Cell Bio. 2 (2), 93-115 (2017).</li>
<li>Nygaard, U. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotics+in+cell+culture%3A+friend+or+foe%3F+Suppression+of+keratinocyte+growth+and+differentiation+in+monolayer+cultures+and+3D+skin+models%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Der%22%5BJournal%5D)">Antibiotics in cell culture: friend or foe? Suppression of keratinocyte growth and differentiation in monolayer cultures and 3D skin models.</a> Exp Der. 24 (12), 964-965 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.05٪ تريبسين-إيدتا (1X)، 100 مل</td><td>جيبكو</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>فلتر خلية 100 ميكرومتر</td><td>كورنينج</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>فالكون 15 سي سي</td><td>كورنينج</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>فالكون مخروطي 50 سم مكعب</td><td>كورنينج</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>ميكروبليت بستة آبار</td><td>كورنينج</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>70٪ كحول كاشف، 4 لتر</td><td>VWR للكيماويات</td><td>BDH1164-4LP</td><td>يمكنك أيضا تخفيف خاصتك</td></tr><tr><td>أمفوتيرسين B، 50 مل</td><td>كورنينج</td><td>30-003-CF</td><td>تخفيفه إلى 5X (50 ميكروغرام/مل)</td></tr><tr><td>ديباز، 100 مل</td><td>كورنينج</td><td>354235</td><td>أخفف بنسبة 1:1 باستخدام HBSS، أضف 1x جنتامايسين، ثم قم بتعقيم الفلتر</td></tr><tr><td>إبيلايف، 50 مل</td><td>جيبكو</td><td>MEP1500CA</td><td>أضف HKGS، فكر في المضادات الحيوية</td></tr><tr><td>FBS معطل بالحرارة في مصل البقر الجنيني، 500 مل</td><td>جيبكو</td><td>A52568-01</td><td>FBS</td></tr><tr><td>ملقط</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>جنتاميسين، 10 مل</td><td>جيبكو</td><td>15750-060</td><td>خفف إلى 50 ميكروغرام/مل ل5X</td></tr><tr><td>محلول الملح المتوازن هانك (1X)، 500 مل</td><td>جيبكو</td><td>14170-112</td><td>(HBSS)</td></tr><tr><td>HBSS 5X PSAG</td><td></td><td></td><td>هذا هو تركيزات HBSS + 5X من Pen/Strep/Ampho/Gent</td></tr><tr><td>هيبيكلينز، جالون</td><td>مولنليكه</td><td>57591</td><td>تخفيفه إلى 10٪ باستخدام H20 منزوع الأيونات</td></tr><tr><td>مصل نمو خلايا الكيراتينوسايتا البشرية، 5 مل</td><td>جيبكو</td><td>S-001-5</td><td>تمت إضافته إلى الحياة الفوقية</td></tr><tr><td>البنسلين/ستربتومايسين، 100 مل</td><td>كورنينج</td><td>30-002-Cl</td><td>تخفيفها إلى 5X (تتوفر بحجم 100x) ل5X PSA - 1X لتغيير الوسائط</td></tr><tr><td>طبق بترى 100 مم × 15 مم</td><td>فيشر ساينتيفك</td><td>FB0875713</td><td></td></tr><tr><td>شفرة المشرط رقم 23</td><td>VWR</td><td>76457-480</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE</td><td>جيبكو</td><td>12604021</td><td>بديل أقل حدة للتريبسين العادي</td></tr><tr><td>محلول تعادلي التريبسين</td><td></td><td></td><td>(TNS)، هذا هو HBSS مع 10٪ FBS (بعضهم يستخدم مصلا أقل، 5٪)</td></tr></tbody></table>

توليد الثقافات الأولية لتصوير الخلايا الحية للخلايا الكيراتينية

Generating Primary Cultures for Keratinocyte Live Cell Imaging

Tracking stem cells and committed progenitor behavior at the single-cell level in human skin has been challenging both in vivo and in ...

generating-primary-cultures-for-keratinocyte-live-cell-imaging

Research

JoVE Journal

Bioengineering

الهندسة الحيوية

جيل من الثقافات الطوافة عضوي النمط من الخلايا الكيراتينية الإنسان الأساسية

يصف هذا الفيديو عزل الخلايا الكيراتينية - أبرز خلايا طبقة البشرة في جلد الإنسان ، من خلال استخدام مزيج من طرق الهضم الأنزيمي والتعطيل الميكانيكي. تساعد هذه الطريقة في النمو التفضيلي للخلايا الكيراتينية على أنواع خلايا الجلد الأخرى باستخدام وسط نمو انتقائي.

عزل الخلايا الكيراتينية في جلد الإنسان: طريقة لزراعة الخلايا الكيراتينية الأولية من عينات الجلد

في هذا الفيديو ، نجري فحصا استماضيا للخلايا الكيراتينية التي تم حصادها من الفئران البالغة لتحديد قدرة الخلايا الفردية على التكاثر وتشكيل المستعمرات. تقنية حصاد الخلايا الكيراتينية هذه مفيدة لدراسة الجوانب النهائية الأخرى للتسرطن الكيميائي الجلدي وتعزيز الورم.

مقايسة تكوين مستعمرة الخلايا الكيراتينية: اختبار في المختبر لتقييم قدرة الخلايا الكيراتينية على النمو إلى مستعمرات

توفر هذه المخطوطة إجراء خطوة بخطوة لاشتقاق الخلايا الكيراتينية البشرية وصيانتها من الشعر المقطوع والجيل اللاحق من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان الخالية من التكامل (hiPSCs) بواسطة النواقل العرضية.

جيل من التكامل خالية الإنسان المستحثة متعددة القدرات الخلايا الجذعية عن طريق الشعر المستمدة من الخلايا الكيراتينية

الهدف من هذه الورقة هو توفير بروتوكول شامل ومفصل حول كيفية توليد جلد عضوي بشري معدل وراثيا من الخلايا الكيراتينية للبشرة والأدمة البشرية الزاولة للحيوية.

جيل المعدلة وراثيا الثقافات الجلد الميتة عضوي عن طريق الأدمة الإنسان

تشكل الخلايا الكيراتينية البشرة حاجز الجلد وظيفية ويتم وضعها في الخط الأمامي للدفاع المضيف ضد الشتائم البيئية الخارجية. هنا نحن تصف أساليب العزلة والثقافة الأولية من الخلايا الكيراتينية البشرة من حديثي الولادة والجلد الماوس الكبار، وتحريض من التمايز الطرفية والاستجابة الالتهابية أوفب أثارت من الخلايا الكيراتينية.

عزل وثقافة الكرياتينية الماوس الرئيسية من حديثي الولادة والفأر الكبار الجلد

جلد الإنسان يعمل كخط أول للدفاع ضد البيئة الخارجية. نحن نقدم طريقة لعزل الخلايا الكيراتينيه البشرية الأساسية من الجلد الكبار. هذه الخلايا الكيراتينيه معزولة هي مفيدة في الأجهزة التجريبية العديدة، وهي نموذج مناسب جداً لدراسة الآليات الجزيئية في البيولوجيا الجلدي في المختبر.

جيل واستزراع من الخلايا الكيراتينيه البشرية الأساسية من الجلد الكبار

نقدم هنا بروتوكولا لكفاءة عزل الخلايا الكيراتينيه البشرية الأولية من أنسجة الجلد الكبار. يبسط هذا الأسلوب الإجراء التقليدي باستخدام Y-27632 مثبط لموسيقى الروك في الأجلين المتوسط والتطعيم بصورة عفوية فصل خلايا البشرة من خلايا الجلد.

أسلوب مبسط وفعال لعزل الخلايا الكيراتينيه البشرية الأولية من أنسجة الجلد الكبار

الهدف من هذا البروتوكول هو عزل الخلايا القرنية البشرة من الجلد الظهري للفئران البالغة لمجموعة متنوعة من التطبيقات النهائية مثل البيولوجيا الجزيئية، والكيمياء الحيوية، وفرز الخلايا المنشطة الفلورية، والاستخدامات الأولية في المختبر (على سبيل المثال، clonogenic الخلايا الكيراتينية).

عزل الخلايا الكيراتينية البشرة الماوس وثقافتهم في المختبر Clonogenic

هنا نحن نصف بروتوكول للزراعة المنهجية للشفرات البشرة في ثقافة التعليق ثلاثي الأبعاد. هذا البروتوكول له تطبيقات واسعة النطاق للاستخدام في مجموعة متنوعة من أنواع الأنسجة الظهارية ولنمذجة العديد من الأمراض والحالات البشرية.

إنشاء نظام ثقافة البشرة عالية الإنتاجية لنمذجة اللدونة الخلايا الجذعية Keratinocyte

هنا ، نقدم طريقة لتحليل تصوير الخلايا الحية التي يمكن استخدامها لتتبع سلالات المرور 0 الخلايا الكيراتينية يدويا والتي تسمح بجمع مقاييس الانتشار ، بما في ذلك مصير انقسام الخلية ومدة دورة الخلية.

تصوير الخلايا الحية مع التصوير الفوتوغرافي بفاصل زمني لدراسة حركية تكاثر الخلايا الكيراتينية للبشرة

اكتشف بروتوكولاً موثوقاً لزراعة الخلايا الكيراتينية الأولية وتصويرها الحي. تتيح هذه الطريقة مراقبة العمليات الخلوية الديناميكية في الوقت الفعلي لفهم أفضل لبيولوجيا الجلد.

توليد الثقافات الأولية لتصوير الخلايا الحية للخلايا الكيراتينية

استكشف المزيد من الفيديوهات