عزل وتحليل قوس الأبهر وآفات الجذر في نموذج فأر تصلب الشرايين

تبحث الدراسة في تطور آفة تصلب الشرايين في قوس الأبهر وجذر الفئران بالضربة القاضية LDLR ، وتقدم بروتوكولا للعزل والتلطيخ والتحليل لتقييم تكوين لويحات شدة تصلب الشرايين. إلى جانب الفحص النسيجي المستخدم في هذه الدراسة ، تشمل التقنيات العملية لتقييم تصلب الشرايين أيضا العلامات الكيميائية الحيوية واختبارات البيولوجيا الجزيئية والموجات فوق الصوتية للأوعية الدموية. تشكل دقة إجراء التشريح أكبر عقبة تقنية في أداء تجريد الأبهر في الجسم الحي داخل نموذج الفأر لتصلب الشرايين.

للبدء ، ضع الفئران التي تم القتل الرحيم فيها في وضع ضعيف على لوح رغوي مغطى بطبقة إلى طبقتين من الورق الماص. إصلاح الأطراف مع دبابيس لتثبيت الجسم. رش 75٪ إيثانول على بطن الفئران لتنظيف وترطيب الفراء.

استخدم الملقط للإمساك بالجلد البطني للفأر. ثم باستخدام مقص ناعم ، قم بقص الجلد من قاعدة البطن إلى أعلى الرقبة. افتح جدار البطن واستخدم الملقط لرفع القص.

اقطع كل من الحجاب الحاجز والأضلاع لكشف التجويف الصدري. إزالة المريء والقصبة الهوائية لتسهيل تنظيف الشرايين السباتية. قم بإزالة الأعضاء بما في ذلك الكبد والرئتين والطحال والجهاز الهضمي والبنكرياس بعناية مع الحفاظ على الكلى والشريان الأورطي البطني.

عند تشريح الشرايين المساريقية، ارفع الأمعاء وقم بعمل شقوق بعيدا عن الشريان الأورطي لتجنب التلف. الآن ، ضع الماوس تحت مجهر استريو لتوفير مجال مراقبة واضح ومحاذاة مصدر الضوء البارد مع منطقة التشريح. باستخدام حقنة 10 مليلتر مملوءة ب PBS ، قم بالحقن ببطء في قمة البطين الأيسر بإبرة ولاحظ تمدد الشريان الأورطي.

امسح الدم والسوائل برفق في منطقة التشريح باستخدام المناديل الورقية لكشف مجال الرؤية بالكامل. بعد ذلك ، أمسك الجزء الحجابي من الشريان الأورطي الصدري بالملقط ، واستخدم مقص زنبركي لقطع النسيج الضام بين الشريان الأورطي وجدار العضلات الصدرية اسحب القلب برفق باستخدام الملقط وارفع الشريان الأورطي الصدري.

راقب فروع قوس الأبهر وقم بتشريح الدهون العرضية والأنسجة الضامة حول قوس الأبهر وفروعه لأعلى على طول الشريان الأورطي الصدري. تشريح الشريان الأورطي البطني والشرايين الحرقفية المشتركة لأسفل على طول الشريان الأورطي الصدري. قم بقص أنسجة القلب وقطع النصف السفلي من القلب على طول مستوى مواز للأذينين ، وضع القلب المشذب في وسط تخزين مناسب.

قبل تشريح قوس الأبهر ، ضع حشية صغيرة داكنة اللون تحته لخلق تباين. التقط صورة لمنطقة قوس الأبهر. اقطع الشرايين الحرقفية المشتركة من واحد إلى ملليمترين تحت تشعبها ، وقم بقص الفروع الصغيرة للشريان الأورطي على طول العمود الفقري لتحريره.

بعد فصل الشرايين الكلوية بالقرب من الكلى ، قم بقطع الأوعية الفرعية الثلاثة في الرقبة من نهاياتها البعيدة. أخيرا ، قم بقطع الشريان الأورطي الصاعد بالقرب من القلب. قم بإعداد مليلتر واحد من محلول بارافورمالدهيد 4٪ في أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 مل مسبقا.

ضع الشريان الأورطي في الأنبوب المحضر ، وثبته في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة على الأقل. بعد ذلك ، انقل الشريان الأورطي إلى طبق بتري يحتوي على PBS لمنعه من الجفاف. تحت المجهر الاستريو ، قم بإزالة أي دهون عرضية متبقية بعناية باستخدام ملقط ومقص زنبركي لتقليل التداخل في قياس البلاك.

باستخدام مقص زنبركي ، افتح الشريان الأورطي بعناية على طول محوره الطولي الداخلي. بالتتابع ، قم بقطع الفروع الثلاثة للقوس الأبهري على طول الجانب الجانبي إلى مستوى انحناء قوس الأبهر ، مما يسمح له بالانتشار بالكامل. في هذه المرحلة ، إما أن تستمر في تلطيخ الزيت الأحمر O ، أو قم بتخزين الشريان الأورطي في 4٪ بارافورمالدهيد لتحليله في المستقبل.

ضع الشريان الأورطي المفتوح المقطوع في طبق مكون من ستة آبار. أضف ملليلترا واحدا من الماء المقطر المزدوج المعقم إلى كل بئر واغسله لمدة خمس دقائق على شاكر. ضع صفيحة الآبار الستة في غطاء دخان وجففها في الهواء لمدة 20 دقيقة حتى تختفي علامات مائية مرئية.

أضف ملليلترا واحدا من محلول العمل Oil Red O المحضر حديثا إلى كل بئر. بعد رج اللوحة لمدة 20 دقيقة ، قم بإزالة محلول Oil Red O من الآبار. أضف ملليلترين من الماء المقطر المزدوج المعقم إلى كل بئر واغسلها لمدة خمس دقائق.

بعد ثلاث غسلات ، احتفظي بالشريان الأورطي في ماء مقطر مزدوج. انقل الشريان الأورطي إلى شريحة ، وضع وسادة مطاطية سوداء أسفل الشريحة لتحسين التباين. انشر الشريان الأورطي أثناء المشاهدة تحت المجهر الاستريو.

الآن ، ضع الشريحة على ورقة بيضاء لتحسين التباين بشكل أكبر. ضع مسطرة بجانب الشريحة واحصل على صورة فوتوغرافية باستخدام الكاميرا. قم بتخزين الشريان الأورطي المعالج في أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 مل يحتوي على مليلتر واحد من PBS للحفاظ على رطوبته.

زادت أوزان جسم الفئران بالضربة القاضية LDLR التي تتغذى على نظام غذائي على الطراز الغربي بشكل ملحوظ مقارنة بأولئك الذين يتغذون على نظام غذائي تشاو. كانت مستويات الدهون الثلاثية في البلازما والكوليسترول الكلي أعلى بشكل ملحوظ في مجموعة النظام الغذائي الغربي منها في المجموعة الضابطة. أظهر تلطيخ زيت الأبهر الأحمر O تراكما شديدا للدهون في شرايين الفئران بالضربة القاضية LDLR التي تتغذى على النظام الغذائي الغربي مقارنة بأولئك الذين يتبعون نظاما غذائيا على الطريقة الغربية.

ترتبط زيادة رواسب الدهون بآفات تصلب الشرايين الأكثر حدة. كانت منطقة آفة جذر الأبهر واللب النخر أكبر بكثير في الفئران التي تتغذى على النظام الغذائي الغربي مقارنة بالفئران التي تتغذى على النظام الغذائي الغذائي. أكد القياس الكمي لمنطقة آفة جذر الأبهر والمنطقة النخرية أن النظام الغذائي الغربي أدى إلى تفاقم تكوين لويحات تصلب الشرايين في الفئران بالضربة القاضية LDLR.