Name: اختبار التمرير المختبري للسلامة Prion (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: اكتشف طريقة مسح الأسطح لاكتشاف البريونات باستخدام تقنية RT-QuIC في بيئات المختبرات والعيادات. تساعد هذه الطريقة الباحثين على تقييم فعالية إزالة التلوث وضمان السلامة المخبرية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+proteinaceous+infectious+particles+cause+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie.</a> Science. 216 (4542), 136-144 (1982).</li>
<li>Bolton, D. C., McKinley, M. P., Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+protein+that+purifies+with+the+scrapie+prion%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of a protein that purifies with the scrapie prion.</a> Science. 218 (4579), 1309-1311 (1982).</li>
<li>Oesch, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cellular+gene+encodes+scrapie+PrP+27-30+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A cellular gene encodes scrapie PrP 27-30 protein.</a> Cell. 40 (4), 735-746 (1985).</li>
<li>Caughey, B., Raymond, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+scrapie-associated+form+of+PrP+is+made+from+a+cell+surface+precursor+that+is+both+protease-+and+phospholipase-sensitive%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The scrapie-associated form of PrP is made from a cell surface precursor that is both protease- and phospholipase-sensitive.</a> J Biol Chem. 266 (27), 18217-18223 (1991).</li>
<li>Deleault, N. R., Harris, B. T., Rees, J. R., Supattapone, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+native+prions+from+minimal+components+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Formation of native prions from minimal components in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (23), 9741-9746 (2007).</li>
<li>Gajdusek, D. C., Zigas, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degenerative+disease+of+the+central+nervous+system+in+New+Guinea%3A+the+endemic+occurrence+of+%26%2334%3Bkuru%26%2334%3B+in+the+native+population%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Degenerative disease of the central nervous system in New Guinea: the endemic occurrence of &#34;kuru&#34; in the native population.</a> N Engl J Med. 257, 974-978 (1957).</li>
<li>Centers for Disease Control. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+degenerative+neurologic+disease+in+patients+who+received+pituitary-derived+human+growth+hormone%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR+Morb+Mortal+Wkly+Rep%22%5BJournal%5D)">Fatal degenerative neurologic disease in patients who received pituitary-derived human growth hormone.</a> MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 34, 359-361 (1985).</li>
<li>Duffy, P., Wolf, J., Collins, G., DeVoe, A. G., Streeten, B., Cowen, D. Letter: possible person-to-person transmission of Creutzfeldt-Jakob disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDuffy%2C+P+%22N+Engl+J+Med%22">N Engl J Med</a>. 290 (12), 692-693 (1974).</li>
<li>Brown, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iatrogenic+Creutzfeldt-Jakob+disease+at+the+millennium%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Iatrogenic Creutzfeldt-Jakob disease at the millennium.</a> Neurology. 55 (8), 1075-1081 (2000).</li>
<li>Huillard d'Aignaux, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incubation+period+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+in+human+growth+hormone+recipients+in+France%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Incubation period of Creutzfeldt-Jakob disease in human growth hormone recipients in France.</a> Neurology. 53 (6), 1197-1201 (1999).</li>
<li>Marzewski, D. J., Towfighi, J., Harrington, M. G., Merril, C. R., Brown, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+following+pituitary-derived+human+growth+hormone+therapy%3A+a+new+American+case%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease following pituitary-derived human growth hormone therapy: a new American case.</a> Neurology. 38, 1131-1133 (1988).</li>
<li>Hannah, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+after+receipt+of+a+previously+unimplicated+brand+of+dura+mater+graft%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease after receipt of a previously unimplicated brand of dura mater graft.</a> Neurology. 56 (8), 1080-1083 (2001).</li>
<li>Shimizu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+with+florid-type+plaques+after+cadaveric+dura+mater+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Neurol%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease with florid-type plaques after cadaveric dura mater grafting.</a> Arch Neurol. 56 (3), 357-362 (1999).</li>
<li>Antoine, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+after+extracranial+dura+mater+embolization+for+a+nasopharyngeal+angiofibroma%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease after extracranial dura mater embolization for a nasopharyngeal angiofibroma.</a> Neurology. 48 (5), 1451-1453 (1997).</li>
<li>Esmonde, T., Lueck, C. J., Symon, L., Duchen, L. W., Will, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+and+lyophilised+dura+mater+grafts%3A+report+of+two+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease and lyophilised dura mater grafts: report of two cases.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 56, 999-1000 (1993).</li>
<li>Willison, H. J., Gale, A. N., McLaughlin, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+following+cadaveric+dura+mater+graft%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease following cadaveric dura mater graft.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 54, 940(1991).</li>
<li>Diringer, H., Braig, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectivity+of+unconventional+viruses+in+dura+mater%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Infectivity of unconventional viruses in dura mater.</a> Lancet. 334, 439-440 (1989).</li>
<li>Peden, A. H., Head, M. W., Ritchie, D. L., Bell, J. E., Ironside, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+vCJD+after+blood+transfusion+in+a+PRNP+codon+129+heterozygous+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Preclinical vCJD after blood transfusion in a PRNP codon 129 heterozygous patient.</a> Lancet. 364 (9433), 527-529 (2004).</li>
<li>Will, R. G., Matthews, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+case-to-case+transmission+of+Creutzfeldt-Jakob+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Evidence for case-to-case transmission of Creutzfeldt-Jakob disease.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 45, 235-238 (1982).</li>
<li>el Hachimi, K. H., Chaunu, M. P., Cervenakova, L., Brown, P., Foncin, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Putative+neurosurgical+transmission+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+with+analysis+of+donor+and+recipient%3A+agent+strains%5BTitle%5D)+AND+%22C+R+Acad+Sci+III%22%5BJournal%5D)">Putative neurosurgical transmission of Creutzfeldt-Jakob disease with analysis of donor and recipient: agent strains.</a> C R Acad Sci III. 320 (4), 319-328 (1997).</li>
<li>Alper, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+agent+of+scrapie+replicate+without+nucleic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Does the agent of scrapie replicate without nucleic acid.</a> Nature. 214, 764-766 (1967).</li>
<li>Casassus, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((France+halts+prion+research+amid+safety+concerns%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">France halts prion research amid safety concerns.</a> Science. 373 (6554), 475-476 (2021).</li>
<li>Brandel, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variant+Creutzfeldt-Jakob+disease+diagnosed+7.5+years+after+occupational+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Variant Creutzfeldt-Jakob disease diagnosed 7.5 years after occupational exposure.</a> N Engl J Med. 383 (1), 83-85 (2020).</li>
<li>Flechsig, E., Hegyi, I., Enari, M., Schwarz, P., Collinge, J., Weissmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+scrapie+by+steel-surface-bound+prions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Transmission of scrapie by steel-surface-bound prions.</a> Mol Med. 7 (10), 679-684 (2001).</li>
<li>Zobeley, E., Flechsig, E., Cozzio, A., Enari, M., Weissmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectivity+of+scrapie+prions+bound+to+a+stainless+steel+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Infectivity of scrapie prions bound to a stainless steel surface.</a> Mol Med. 5 (4), 240-243 (1999).</li>
<li>Brown, P., Gajdusek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+scrapie+virus+after+3+years%27+interment%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Survival of scrapie virus after 3 years' interment.</a> Lancet. 337 (8736), 269-270 (1991).</li>
<li>Seidel, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scrapie+agent+%28strain+263K%29+can+transmit+disease+via+the+oral+route+after+persistence+in+soil+over+years%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Scrapie agent (strain 263K) can transmit disease via the oral route after persistence in soil over years.</a> PLoS One. 2 (5), e435(2007).</li>
<li>Maddison, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+sources+of+scrapie+prions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Environmental sources of scrapie prions.</a> J Virol. 84 (21), 11560-11562 (2010).</li>
<li>Pritzkow, S., Morales, R., Lyon, A., Concha-Marambio, L., Urayama, A., Soto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+prion+disease+transmission+through+common+environmental+materials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Efficient prion disease transmission through common environmental materials.</a> J Biol Chem. 293 (9), 3363-3373 (2018).</li>
<li>Alper, T., Cramp, W., Haig, D., Clarke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+agent+of+scrapie+replicate+without+nucleic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Does the agent of scrapie replicate without nucleic acid.</a> Nature. 214 (90), 764-766 (1967).</li>
<li>Bernoulli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Danger+of+accidental+person-to-person+transmission+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+by+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Danger of accidental person-to-person transmission of Creutzfeldt-Jakob disease by surgery.</a> Lancet. 309 (8009), 478-479 (1977).</li>
<li>Brown, P., Rohwer, R. G., Green, E. M., Gajdusek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+chemicals%2C+heat%2C+and+histopathologic+processing+on+high-+infectivity+hamster-adapted+scrapie+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Effect of chemicals, heat, and histopathologic processing on high- infectivity hamster-adapted scrapie virus.</a> J Infect Dis. 145 (5), 683-687 (1982).</li>
<li>Brown, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+disinfection+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+virus%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Chemical disinfection of Creutzfeldt-Jakob disease virus.</a> N Engl J Med. 306, 1279-1282 (1982).</li>
<li>Dickinson, A. G., Taylor, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+of+scrapie+agent+to+decontamination%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Resistance of scrapie agent to decontamination.</a> N Engl J Med. 299, 1413-1414 (1978).</li>
<li>Hunter, G. D., Millson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+heat+stability+and+chromatographic+behavior+of+the+scrapie+agent%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Studies on the heat stability and chromatographic behavior of the scrapie agent.</a> J Gen Microbiol. 37, 251-258 (1964).</li>
<li>Pattison, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+of+the+scrapie+agent+to+formalin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Resistance of the scrapie agent to formalin.</a> J Comp Pathol. 75, 159-164 (1965).</li>
<li>Fraser, H., Farquhar, C., McConnell, I., Davies, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+scrapie+disease+process+is+unaffected+by+ionising+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Clin+Biol+Res%22%5BJournal%5D)">The scrapie disease process is unaffected by ionising radiation.</a> Prog Clin Biol Res. 317, 653-658 (1989).</li>
<li>Yuan, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+detection+of+chronic+wasting+disease+prions+recovered+from+environmentally+relevant+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Int%22%5BJournal%5D)">Sensitive detection of chronic wasting disease prions recovered from environmentally relevant surfaces.</a> Environ Int. 166, 107347(2022).</li>
<li>Simmons, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+sensitive+determination+of+residual+prion+infectivity+from+prion-decontaminated+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22mSphere%22%5BJournal%5D)">Rapid and sensitive determination of residual prion infectivity from prion-decontaminated surfaces.</a> mSphere. 9, e00504-e00524 (2024).</li>
<li>Orru, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+detection+of+pathological+seeds+of+alpha-synuclein%2C+tau+and+prion+protein+on+solid+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Sensitive detection of pathological seeds of alpha-synuclein, tau and prion protein on solid surfaces.</a> PLoS Pathog. 20 (4), e1012175(2024).</li>
<li>Wilham, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+end-point+quantitation+of+prion+seeding+activity+with+sensitivity+comparable+to+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Rapid end-point quantitation of prion seeding activity with sensitivity comparable to bioassays.</a> PLoS Pathog. 6 (12), e1001217(2010).</li>
<li>Srivastava, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+quantitation+of+pathological+alpha-synuclein+in+patient+biospecimens+by+RT-QuIC+seed+amplification+assays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Enhanced quantitation of pathological alpha-synuclein in patient biospecimens by RT-QuIC seed amplification assays.</a> PLoS Pathog. 20 (9), e1012554(2024).</li>
<li>Hughson, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+prions+and+amyloid+seeds+with+hypochlorous+acid%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Inactivation of prions and amyloid seeds with hypochlorous acid.</a> PLoS Pathog. 12 (9), e1005914(2016).</li>
<li>Williams, K., Hughson, A. G., Chesebro, B., Race, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+chronic+wasting+disease+prions+using+sodium+hypochlorite%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Inactivation of chronic wasting disease prions using sodium hypochlorite.</a> PLoS One. 14 (10), e0223659(2019).</li>
<li>Taylor, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoclaving+standards+for+Creutzfeldt-Jakob+disease+agent+%5Bletter%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Autoclaving standards for Creutzfeldt-Jakob disease agent [letter].</a> Ann Neurol. 22 (4), 557-558 (1987).</li>
<li>Brown, P., Rohwer, R. G., Gajdusek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newer+data+on+the+inactivation+of+scrapie+virus+or+Creutzfeldt-Jakob+disease+virus+in+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Newer data on the inactivation of scrapie virus or Creutzfeldt-Jakob disease virus in brain tissue.</a> J Infect Dis. 153 (6), 1145-1148 (1986).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Fisherbrand&nbsp; مسحات رغوة PurSwab</td><td>كتالوج العلامة التجارية فيشر</td><td># 14-960-3E</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q IQ 7005 نظام المياه عالي النقاء</td><td>MilliporeSigma</td><td>Q7005T0C</td><td></td></tr><tr><td>جهاز طرد مركزي صغير ، 6000 دورة في الدقيقة</td><td>Southern Labware</td><td>MLX-306</td><td></td></tr><tr><td>قارئ لوحة أوميغا</td><td>BMG Labtech</td><td>FLUOstar قارئ</td><td></td>لوحة أوميغا</tr><tr><td>Q700 سونيكاتور</td><td>QSonica</td><td>Q700-110</td><td></td></tr><tr><td>بروتين بريون الهامستر المؤتلف</td><td>MNPROtein-Hamster</td><td>الهامستر الهامستر السوري ، الأحماض الأمينية 90-231</td><td></td></tr><tr><td>Savant speedvac&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>SPD1030-230</td><td></td></tr><tr><td>الكريات النانوية السيليكا (50 نانومتر) نانو</td> <td>مركب &nbsp ؛</td><td>SISN50-25 م</td><td></td></tr></tbody></table>

اختبار التمرير المختبري للسلامة prion

Prion Safety Laboratory Swipe Test

وصف مكتوب للنتائج الإيجابية والسلبية (بما في ذلك أدوات التحكم في اللوحة والمسحات الإيجابية/السلبية)
يتم تضمين مسحات التحكم السلبية في مسحة المراقبة لمراقبة تلوث البريون المحتمل الذي يمكن إدخاله أثناء عملية المسح والاستخراج والتركيز. يجب أن تتضمن أول لوحة RT-QuIC التي يتم إجراؤها لترصد شهري معين ضوابط المسحة الإيجابية والسلبية. تفشل الضوابط السلبية الناجحة في عبور عتبة التألق الإيجابي (الشكل 6 أ). تشير هذه النتيجة إلى أن التلوث لم يدخل أثناء الإجراءات التجريبية. ستظهر مستخلصات مسحة التحكم الإيجابية الناجحة بذرا إيجابيا في جميع الآبار المكررة لعينة معينة (كانت مسحات التحكم الإيجابية ملوثة بسلالة اعتلال دماغي المنك القابلة للانتقال المتكيفة مع الهامستر Hyper (HY TME) متجانسة. يسمح تضمين سلسلة تخفيف التحكم الإيجابي بتحديد حساسية اكتشاف البريون لتجربة معينة (الشكل 6 أ).
عند فحص عينات مستخلص المسحة السطحية ، يمكن اعتبار الأسطح التي تفشل في إظهار البذر فوق عتبة التألق الإيجابية المحددة مسبقا سالبة بريون (الشكل 6 ب). على العكس من ذلك ، ستظهر مستخلصات المسحة السطحية الملوثة بالبريون قدرات بذر أعلى من عتبة التألق الإيجابية ، على الرغم من أن نسبة النقطة القصوى (MPR) ووقت التألق يمكن أن تختلف مقارنة بالتحكم في اللوحة الإيجابية المضمنة (الشكل 6 ب). يتم تسليط الضوء على قدرة الطريقة على تقييم التطهير الكافي من خلال الأسطح الملوثة بالبريون المعالجة بالتبييض ، والتي تفشل الآن في بذر RT-QuIC (الشكل 6 ب).
الأهم من ذلك ، في حين أن مختبرنا يعرف العينة الموجبة على أنها عينة تتجاوز عتبة التألق الإيجابية المحددة في نصف الآبار المتكررة على الأقل ، فمن الضروري لكل مختبر أن يضع معاييره الخاصة. يمكن أيضا استخدام معدل تكوين الأميلويد (RAF) ووقت التألق للمساعدة في تحديد عتبات خاصة بالمختبر للإيجابية.
لقد لاحظنا نتائج القطع الأثرية السطحية التي تتجاوز عتبة التألق الإيجابي ولكن مع منحنيات حركية متغيرة وبعد فترة طويلة بشكل غير طبيعي إلى التألق مقارنة بعينات التحكم الإيجابية (الشكل 6 ج). يجب تفسير هذه النتائج بحذر لأنها قد تكون ناتجة عن وجود غبار أو مواد كيميائية متبقية موجودة على السطح. تسلط هذه النتائج الضوء على ضرورة النظافة العامة للمختبرات ، وكذلك معايير التمييز بين البذر الإيجابي الحقيقي والإيجابي الكاذب.
يجب أن يتم التخلص من النفايات البيولوجية الصلبة والسائلة وفقا للمبادئ التوجيهية الحالية للتخلص من المخاطر البيولوجية لمؤسسة معينة. تشمل تقنيات تطهير البريون الشائعة العلاج بهيدروكسيد الصوديوم أو هيبوكلوريت الصوديوم (التبييض) أو التعقيم عند 134 درجة مئوية لمدة 18 دقيقة43،44،45،46.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig01.jpg"> 
الشكل 1: نظرة عامة تخطيطية على اختبار التمرير المختبري لسلامة البريون. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig01large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig02.jpg"> 
الشكل 2: نموذج تخطيط موقع المسح. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig02large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig03.jpg"> 
الشكل 3: تضمن تصميم تجربة العينة لأدوات التحكم في المسحة اختبار التمرير المختبري لسلامة البريون. (أ) تخطيط العينة لعناصر التحكم في مستخلص المسحة السلبية والإيجابية. (ب) ينبغي إعادة تعليق أدوات التحكم في مستخلص المسحات السلبية والإيجابية ب 50 ميكرولتر من H2O. يجب إنشاء تخفيف 10 أضعاف لمستخلص المسحة المعلقة عن طريق تخفيفه في محلول تخفيف الأنسجة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig03large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig04.jpg"> 
الشكل 4: تصميم تجربة عينة لمستخلصات مسحة السطح من اختبار التمرير المختبري لسلامة البريون. (أ) تخطيط العينة لمستخلصات المسحة السطحية. (ب) يجب إعادة تعليق عينات مستخلص المسحة السطحية ب 20 ميكرولتر من محلول تخفيف الأنسجة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig04large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig05.jpg"> 
الشكل 5: اختبار التمرير الشهري لمختبر سلامة البريون. يستخدم المخطط الانسيابي لتفسير النتائج وتحديد الاستجابة المناسبة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig05large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig06.jpg"> 
الشكل 6: تجربة مسح السطح التمثيلي. (أ) لوحة التحكم في المسحة السطحية التي تحتوي على عناصر تحكم سلبية في مستخلص المسحة في ثلاث نسخ (DPBS ، متجانس دماغ الهامستر غير المصاب 10-4 و 10-10) وعناصر التحكم في مستخلص المسحة الإيجابية في ثلاث نسخ (HY brain homogenate 10-3). (ب) مستخلصات المسحة التمثيلية للأسطح التي تم مسحها قبل التلوث ، بعد التلوث ب HY 10-3 ، وبعد معالجة الأسطح الملوثة بالتبييض. (ج) مقارنة تتبع التألق بين تجانس الدماغ غير المصاب 10-4 ، وتجانس الدماغ HY 10-3 ، ومستخلص المسحة من سطح الطاولة المغطى بغشاء ناعم من الغبار. تتضمن أدوات التحكم في اللوحة السلبية للوحتين A و B فارغة (محلول تخفيف الأنسجة) وتجانس دماغ الهامستر غير المصاب 10-4. تتضمن اللوحة B إضافة تجانس الدماغ غير المصاب 10-4 والتحكم الإيجابي في اللوحة لتجانس الدماغ HY 10-3. تم تحديد عتبة التألق الإيجابية (موضحة بخط أحمر متقطع) لتكون عند 2. نسبة النقطة القصوى (MPR) التي تم الإبلاغ عنها هي الحد الأقصى للتألق مقسوما على قراءة التألق الأولية التي حصل عليها قارئ اللوحة. تمثل كل نقطة مكررا تقنيا واحدا لنوع عينة معين. يتم تقديم المتوسط والانحراف المعياري. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig06large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
الجدول 1: نموذج التوثيق الشهري لموقع المسحة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/Table%201.xlsx" target="_blank">الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.</a>
الشكل التكميلي 1: قالب تخطيط موقع المسح. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/Supplementary%20Figure%201.pdf" target="_blank">الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الملف.</a>
الشكل التكميلي 2: نموذج التوثيق الشهري لموقع المسح. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/Supplementary%20Figure%202.pdf" target="_blank">الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الملف.</a>

اختبار التمرير المختبري للسلامة Prion

Transmission of iatrogenic prion disease has occurred from contaminated neurosurgical tools, transplant materials, and occupational exposure to ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

نحن هنا تصف الرواية مقايسة لرصد امتصاص بريون والاتجار بها من قبل خلايا المناعة فورا بعد التلقيح داخل الصفاق عن طريق تنقية والتوسيم fluorescently قضبان بريون مجمعة من المواد في المخ المصابة ثم رصد واستيعاب الحركة من موقع الحقن وتتميز الخلايا التوسط في هذه الأحداث.

رصد خلايا المناعة الاتجار نيون بريون قضبان وبعد ساعات من العدوى داخل الصفاق

التضخيم البروتين دوري misfolding (PMCA) هو فحص المختبر في لدراسة تحويل بريون والحواجز سلالة والأنواع. ويمكن أيضا أن تستخدم لفحص الكشف عن بريون.

تضخيم بروتين دوري Misfolding من البريونات

الزبالين لديها القدرة على نقل من المعدية التي تنتقل البريونات اعتلال الدماغ الإسفنجي في فضلاتها إلى مناطق خالية من المرض. نحن أساليب التفاصيل المستخدمة لتحديد ما إذا تبقى البريونات سكرابي الماوس تكييفها المعدية بعد مرور الرغم من أن الجهاز الهضمي من الغربان الأمريكية (غراب brachyrhynchos)، مستهلكا شيوعا من الحيوانات النافقة.

إجراءات لتحديد المعدية البريونات بعد المرور عبر الجهاز الهضمي لأنواع الطيور

يعد قياس الحاجز أمام انتقال أمراض البريون بين الأنواع أمرا صعبا وعادة ما ينطوي على تحديات حيوانية أو فحوصات كيميائية حيوية. هنا ، نقدم اختبار تحويل بروتين البريون في المختبر مع القدرة على التنبؤ بحواجز الأنواع.

تقييم المنقولة جنون الأنواع دماغي الحواجز مع<em&gt; في المختبر</em&gt; بريون تحويل البروتين الفحص

يعد إجراء المقايسات الفيروسية في مختبر BSL-4 أكثر تعقيدا مقارنة بالعمل في مختبر BSL-2 بسبب احتياطات السلامة الإضافية المطلوبة. هنا ، نقدم نظرة عامة على الممارسات والإجراءات المستخدمة داخل مختبر BSL-4 توضح الاستخدام المناسب لخزانة السلامة البيولوجية من الفئة الثانية ، وإدارة / التخلص من النفايات ، وإزالة العينات.

احتياطات السلامة وإجراءات التشغيل في (A) مختبر BSL-4: 2. الممارسات العامة

ويصف هذا البروتوكول منهجية الفائق للشاشة وظيفيا للإرث القائم على البروتين في S. cerevisiae.

الفرز الفائق للإرث القائم على البروتين في سيريفيسيا س.

نقدم هنا، بروتوكولا لوصف تقنية تضخيم بريون بسيطة وسريعة وفعالة، طريقة التحويل في الوقت الحقيقي التي يسببها مهتز (RT-كويك).

في الوقت الحقيقي مهتز الناجمة عن تحويل الفحص للكشف عن البريونات CWD في المواد البرازية

يوفر الاختبار المناعي المناعي السريع المباشر (DRIT) بديلاً معترفاً به من قبل المنظمة العالمية لصحة الحيوان ومنظمة الصحة العالمية (OIE/WHO) لاختبار الأجسام المضادة الفلورية المباشرة (DFA) لتشخيص داء الكلب. يسمح هذا الاختبار للتطبيقات الميدانية التي يمكن تنفيذها في حوالي 1 ساعة على انطباعات الدماغ باستخدام الفحص المجهري الخفيف.

تعزيز مراقبة داء الكلب باستخدام اختبار سريع مباشر للمناعة الكيميائية

نقدم بروتوكولًا كاملًا لتشخيص داء الكلب الحيواني بعد الوفاة في ظل الظروف الميدانية باستخدام اختبار تشخيصي مناعي سريع (RIDT) ، من أخذ عينات من خزعة الدماغ إلى التفسير النهائي. كما أننا نُصف التطبيقات الأخرى التي تستخدم الجهاز للتحليل الجزيئي وgenotyping الفيروسي.

حقل ما بعد الوفاة داء الكلب اختبار تشخيصية مناعية سريعة لإعدادات الموارد المحدودة مع مزيد من التطبيقات الجزيئية

يتطلب وضع العلامات المناعية لبروتين البريون غير الطبيعي باستخدام بروتوكولات الكيمياء الهيستولوجية المناعية عينة محددة ومنهجيات تحضير الأجسام المضادة المضادة ل PrP. يصف هذا البروتوكول الخطوات الرئيسية في إزالة الخاتمة لضمان وضع العلامات المناعية المناسبة ل PrP وتقليل تلطيخ الخلفية غير المحدد. أيضا ، يأخذ هذا النهج في الاعتبار تدابير السلامة الحيوية عند إجراء دراسات الكيمياء الهيستولوجية المناعية مع الأنسجة المصابة بالبريون.

الكشف عن بروتين البريون غير الطبيعي بواسطة الكيمياء الهيستولوجية المناعية

اكتشف طريقة مسح الأسطح لاكتشاف البريونات باستخدام تقنية RT-QuIC في بيئات المختبرات والعيادات. تساعد هذه الطريقة الباحثين على تقييم فعالية إزالة التلوث وضمان السلامة المخبرية.

اختبار التمرير المختبري للسلامة Prion

استكشف المزيد من الفيديوهات