تحضير وصيانة تجربة القفص المتساوي الإيجابي للاستبعاد الحيوي لزرع البراز البشري في الفئران الخالية من الجراثيم

درسنا التفاعل بين البكتيريا والمضيف ، وقام عاملنا الداخلي والخارجي بتعديل هذه العلاقة لتغيير الصحة. على وجه التحديد ، نحن مهتمون بفهم دور البكتيريا في تطور السرطان وتطوره وعلاجه. نحن ومختبر الميكروبيوم الآخر نستخدم نظام القفص الإيجابي ISO لنقل مجتمع البراز من موضوع بشري إلى مضيف فأر متلقي لإنشاء مجتمع ميكروبي مستقر وطويل الأجل.

مكنتنا هذه التكنولوجيا من تحقيق اكتشاف جديد حول دور البكتيريا السريرية ذات الصلة في الصحة والمرض. وجدت العديد من التجارب السريرية المستقبلية ارتباطات بين ميكروبات معينة وتطور السرطان وتطوره والاستجابة للعلاج ، لكن الارتباط لا يعني السببية. إن إضفاء الطابع الإنساني على الفئران الخالية من الجراثيم مع عينات البراز البشرية يمكن التحقق من صحة العلاقة السببية في نماذج السرطان ذات الصلة.

باستخدام نظام القفص الإيجابي ISO ، أظهرنا أن سلالات معينة من البكتيريا من المستجيب للعلاج المناعي البشري ، ومرضى سرطان الرئة ذو الخلايا غير الصغيرة يمنحون استجابة للفئران التي تحمل أورام الرئة المتعاملة. للبدء ، ضع 10 مناديل في خزان غمس ثاني أكسيد الكلور المعقم وتأكد من أنها صابون بالكامل. ثم ، باستخدام أسطوانة متدرجة ، املأ كيسا بلاستيكيا كبيرا بما لا يقل عن 100 مل من معقم ثاني أكسيد الكلور.

رج الكيس للتأكد من نقع جميع الأسطح الداخلية وضعه جانبا. قم بإزالة قفص ISO واحد من الحامل وضعه في خزان غمس معقم بثاني أكسيد الكلور ، مما يضمن ملامسة السائل بالكامل. استخدم مناديل مبللة لفرك جميع أسطح الأقفاص.

بعد نقع القفص ، اطلب من مساعد فتح الكيس البلاستيكي المنقوع. ضع القفص بالداخل وأغلق الفتحة على الفور. باستخدام زجاجة رذاذ ، رش فتحة الكيس بمعقم ثاني أكسيد الكلور.

بمجرد تعبئة جميع الأقفاص والإمدادات ، اغمر القفازات المقاومة للمواد الكيميائية في معقم ثاني أكسيد الكلور. في غضون ذلك ، انقل المناديل المنقوعة إلى خزانة السلامة الحيوية وانقع جميع الأسطح. بالنسبة للأسطح غير المحمية ، اضغط على المناديل فوقها دون لمسها.

بعد 20 دقيقة ، باستخدام قفازات معقمة مقاومة للمواد الكيميائية ، انقل كل قفص وزجاجة إلى خزانة السلامة الحيوية المعقمة. لفتح قفص ISO المغلق بإحكام ، ارفع الألسنة البيضاء على المشابك الموجودة على جانبي الغطاء واسحب كل مشبك جانبيا لفتح الغطاء. باستخدام الملقط المعقم داخل القفص أعلى الرف السلكي ، قم بإزالة زجاجة الماء الفارغة وضعها داخل الغطاء.

قم بإزالة الختم المطاطي وصب الماء في الزجاجة لملئه. باستخدام ملقط معقم ، ضع الفوهة على زجاجة الماء واضغط لأسفل بقوة لإغلاقها. ثم ، باستخدام ملقط معقم ، ارفع الرف السلكي وحركه للخلف عدة بوصات لإنشاء فتحة في قاع القفص.

ضع الملقط المعقم على الرف السلكي ، مع التأكد من عدم ملامسة المقابض لأسطح الأقفاص. عند استلام قرص النقل ، اطلب من المساعد أن يمسك الغطاء البلاستيكي ويفكه جزئيا بحيث يتعرض السطح المنقوع ولكن لا يلمس. ارتداء قفازات مقاومة للمواد الكيميائية مبللة بمعقم ثاني أكسيد الكلور ، قم بإزالة قرص النقل من الغلاف البلاستيكي ووضعه على سطح مستو داخل خزانة السلامة الحيوية المعقمة.

لفتح قرص النقل ، انزع الشريط الذي يغلق محيط القرص ثم قم بإزالة الغطاء. بعد ذلك ، باستخدام الملقط المعقم الذي كان يرتكز مسبقا على الرف السلكي ، قم بمعالجة غطاء المقصورة لمحاذاة الفتحة مع الماوس المراد نقله. باستخدام ملقط معقم ، أمسك قاعدة ذيل الماوس من خلال الفتحة الموجودة في غطاء قرص النقل ، ورفع الماوس ونقله إلى قفص ISO من خلال الفتحة بين الرف السلكي والقفص.

بمجرد نقل جميع الفئران ، استبدل الرف السلكي بالملقط المعقم. ارفع غطاء القفص وضعه مرة أخرى فوق القفص. ارفع كل مشبك من غطاء القفص لأعلى وخفضه بعناية على جوانب القفص.

ادفع الألسنة البيضاء لأسفل لإغلاق غطاء القفص بإحكام. الآن ، اطلب من المساعد رش كل فوهة من موقع الإرساء على رف القفص باستخدام معقم ثاني أكسيد الكلور. قم بإزالة القفص من خزانة السلامة الحيوية وقم بإرساؤه على رف القفص.

فجر ثوب جراحي معقم جديد وقفازات جراحية معقمة بدلا من القفازات المقاومة للمواد الكيميائية. لتحضير إبر التزقيم ، قم بفك كل كيس تعقيم واستخدم الجزء الداخلي من الحقيبة كسطح راحة جاف معقم. قم بتوصيل إبرة التزقيم بالمحقنة.

افتح أنبوب الملاط البرازي واسحب 200 ميكرولتر من الملاط في كل حقنة. باستخدام الملقط ، أمسك قاعدة ذيل الماوس وضعها على رف السلك. كبح الماوس برفق عن طريق جرجر الجلد المترهل خلف الرقبة.

أثناء إمساك الماوس في وضع رأسي رأسي ، أدخل إبرة التزقيم وقم بحقن الملاط البرازي برفق. قم بإزالة الإبرة على الفور بعد الحقن. ضع الماوس مباشرة في أحد الأكواب المعقمة للمراقبة.

بعد أن تتلقى جميع الفئران التزقيم ، استخدم الملقط لنقل كل فأر مرة أخرى إلى سرير القفص. كان هيكل مجتمع براز الفأر المتوافق مع البشر مختلفا اختلافا كبيرا بين الأنماط الظاهرية للاستجابة في جميع النقاط الزمنية الثلاث. لم تظهر الفئران المستقيمة في براز المستجيب أي فرق في بنية المجتمع الميكروبي بين الأسبوعين الأول والثاني ، والأسبوعين الثاني والرابع.

بينما أظهرت الفئران المستعمرة البراز غير المستجيب بنية مجتمع ميكروبية مختلفة بين الأسبوعين الأول والثاني ، ولكن بنية مماثلة بين الأسبوعين الثاني والرابع. أظهرت اللقاحات من المتبرعين البشريين تمثيلا متزايدا ل Blautia و Eubacterium و ruminococcus و Streptococcus ، بينما زادت الفئران المتلقية من الوفرة النسبية للبكتيريا و Lachnoclostridium و Marvinbryantia و Parabecteroides.