Live-Cell F&#246;rster Resonance Energy Transfer Imaging of Metabolically Regulated Akt Activation Dynamics in HepG2 Cells

Javed Akhtar; Muhammad Imran; Jiahe Wang; Gang Ma; Guanyu Wang

doi:10.3791/68075

تصوير نقل طاقة رنين الخلية الحية لديناميكيات تنشيط Akt المنظمة الأيضية في خلايا HepG2

JoVE Journal
Cancer Research

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Cancer Research

Live-Cell Förster Resonance Energy Transfer Imaging of Metabolically Regulated Akt Activation Dynamics in HepG2 Cells

تصوير نقل طاقة رنين الخلية الحية لديناميكيات تنشيط Akt المنظمة الأيضية في خلايا HepG2

Full Text

785 Views

08:03 min

May 23, 2025

DOI: 10.3791/68075-v

Javed Akhtar^1,2,3,4,5, Muhammad Imran⁶, Jiahe Wang^1,2,3, Gang Ma⁵, Guanyu Wang^1,2,3

¹Laboratory of Biocomplexity and Engineering Biology, School of Medicine,The Chinese University of Hong Kong, ²Futian Biomedical Innovation R&D Center,The Chinese University of Hong Kong, ³Ciechanover Institute of Precision and Regenerative Medicine, School of Medicine,The Chinese University of Hong Kong, ⁴Department of Immunology and Microbiology, School of Life Sciences,Southern University of Science and Technology, ⁵Department of Biology, School of Life Sciences,Southern University of Science and Technology, ⁶Department of Computer Science and IT,University of Southern Punjab

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

هنا ، نقدم بروتوكولا لتحديد الديناميكيات الزمانية المكانية لتنشيط Akt والفسفرة في خلايا HepG2 الحية. يعد تصوير فورستر لنقل الطاقة بالرنين (FRET) أداة قوية توفر رؤى قيمة حول مسارات إشارات الأنسولين وتنظيم التمثيل الغذائي في الخلايا السرطانية.

يعد عدم التجانس الخلوي عقبة أمام الوصف الدقيق لتعقيدات الديناميكيات الخلوية ، والتي يتم حساب متوسطها بشكل أساسي. هذا هو السبب في أننا هنا لتصوير خلايا مفردة. أدت التطورات الحديثة في أجهزة الاستشعار الحيوية FRET المشفرة وراثيا إلى تحسين الخصوصية وأحدثت ثورة في التتبع في الوقت الفعلي ل Akt داخل الخلايا ، وهو أمر فعال في فهم الوراثة غير المتجانسة وتطوير العلاجات الدوائية الشخصية.

السرطان والسكري يمر بمسارات التمثيل الغذائي المعقدة. لفك تشفير التعقيد الحيوي لمسار إشارات الأنسولين في السرطان ، نستخدم تصوير FRET للخلايا الحية المتطور بدقة خلية واحدة. وجدنا أن تحسين المجهر متحد البؤر وتكوين الأجهزة والبرامج جنبا إلى جنب مع الضبط الدقيق لطاقة الليزر وضبط كسب الكاشف أمر بالغ الأهمية لتقليل أي ضوضاء وحديث طيفي في إشارات FRET.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos