جمع سائل غسل الأنف الفئران دون تلوث الدم

يركز بحثنا على تطوير طريقة لجمع سائل غسل الأنف من الفئران بكميات كبيرة ، ومعالجة تحديين رئيسيين: تحقيق إنتاجية عالية ومنع تلوث الدم.

هناك طريقتان لجمع سائل غسل الأنف: مسار البلعوم ، الذي ينتج عنه كميات أكبر ، ومسار القصبة الهوائية ، الذي يقلل من تلوث الدم.

تتيح طريقتنا جمع كمية كبيرة من سائل غسل الأنف من البلعوم ، بينما يساعد وضع كرات قطنية في فم القوارض على تقليل تلوث الدم. النهج بسيط وفعال من حيث التكلفة.

للكشف عن تلوث الدم في العينة ، نستخدم طريقة الطب الشرعي ، والمعروفة باسم تفاعل اللويمينول. تفاعل اللوميني بسيط وأكثر حساسية من الطرق الأخرى.

تركيز IgG في الدم أعلى بكثير من تركيز سائل غسل الأنف. طريقتنا ، التي تتجنب تلوث الدم ، ضرورية في البحوث المناعية. كما أنها مناسبة لتحليل الجزيئات الأخرى ، مثل الميكروبيوم ، حيث يمكن أن يؤدي تلوث الدم إلى الإضرار بالدقة.

[الراوي] للبدء ، ضع الفأر القتل الرحيم على ظهره على صفيحة جراحية ، وقم بإصلاح الأطراف الأربعة باستخدام دبابيس. باستخدام حقنة سعة ملليلتر واحد ، اجمع الدم من القلب. باستخدام المقص ، افتح تجويف البطن لفضح الأعضاء الحشوية والحجاب الحاجز. شق الحجاب الحاجز والأضلاع للكشف عن الأذين الأيمن. ثم ثقب الأذين الأيمن بالمقص لتصريف الدم المتبقي. ضع ثلاث كرات قطنية في فم أثناء سحب اللسان للأمام. بعد ذلك ، ارفع الرأس إلى وضع الأنف لأعلى ، واستخدم المقص لفصل الفك السفلي لمنع تلوث الدم في سائل غسل الأنف. استبدل كرات القطن بأخرى طازجة لتجنب تلوث الدم. بعد توقف النزيف ، قم بحقن 200 ميكرولتر من PBS المعقم في choana واجمع سائل غسل الأنف الذي يتم إخراجه من فتحتي الأنفيم في أنبوب سعة 1.5 مل. لتحضير محلول المخزون للكشف عن التلألؤ الكيميائي ، قم بإذابة ملليغرام واحد من اللمينول وخمسة ملليغرام من بيروكسيد الصوديوم في مليلتر واحد من الماء المعقم داخل أنبوب سعة 1.5 ملليلتر. قم بتغطية الأنبوب بورق الألمنيوم ، وقم بتخزينه على أربع درجات مئوية حتى الاستخدام. بعد ذلك ، قم بإعداد حل عملي عن طريق تخفيف محلول المخزون عشرة أضعاف بالماء منزوع الأيونات. ماصة ميكرولترين من عينة سائل غسل الأنف في آبار من صفيحة 96 بئرا. أضف 100 ميكرولتر من محلول اللومينول المخفف إلى كل بئر ، ورج اللوحة المكونة من 96 بئرا لفترة وجيزة لخلط المحتويات. لاحظ مباشرة تفاعل التلألؤ الكيميائي في الظلام. يقدم هذا الشكل مقارنة بين تركيزات الغلوبولين المناعي A عبر أنواع العينات المختلفة. في سائل غسل الأنف ، يكون تركيز الغلوبولين المناعي A أقل في العينات التي تم جمعها باستخدام الطريقة الجديدة مقارنة بالطريقة التقليدية ، في حين أن عينات سائل غسيل المصل والقصبات الهوائية لا تظهر فروقا جوهرية بين الطريقتين. تشير هذه البيانات إلى أن الطريقة الجديدة تقلل من التلوث في عينات الأنف ، مما يؤدي إلى قياسات أكثر دقة للجلوبولين المناعي A. لوحظ نمط مماثل للغلوبولين المناعي G ، مع تركيزات أقل بكثير في سائل غسل الأنف الذي تم جمعه باستخدام الطريقة الجديدة مقارنة بالطريقة التقليدية. في المقابل ، لا تظهر عينات سائل غسيل المصل والقصبات الهوائية مرة أخرى أي اختلافات ذات دلالة بين الطريقتين ، مما يشير إلى أن النهج الجديد يقلل باستمرار من التلوث في عينات الأنف ويحسن موثوقية قياسات الغلوبولين المناعي G.