نموذج فأر لتقييم النتائج الهيكلية والوظيفية طويلة المدى بعد عكس انسداد الحالب أحادي الجانب لفترات طويلة

يعمل مختبري على الآليات والعلاج لتحسين النتائج طويلة المدى بعد إصابة الكلى ، وينصب التركيز المحدد لهذا البروتوكول على تطوير أداة لدراسة النتائج طويلة المدى بعد عكس انسداد المسالك البولية. لقد قمنا بتطوير نموذج فأر لانسداد الحالب القابل للانعكاس من جانب واحد ، والذي يسمح لنا بتقييم النتائج الوظيفية والهيكلية طويلة المدى لعكس انسداد المسالك البولية في الكلى. تتطلب الطرق الأخرى عمليات جراحية متعددة أو خبرة جراحية مجهرية ، والتي لا تستطيع معظم المختبرات الوصول إليها. بالإضافة إلى ذلك ، نظرا لأن هذا انسداد أحادي الجانب ، فإن معظم الطرق الأخرى لا تسمح بالتقييم الوظيفي للتعافي دون إجراء اختبارات وظائف الكلى المنقسمة. هناك حقا اثنان فقط. الأول هو وضع ثابت لمشبك الأوعية الدموية في نفس الموضع على الحالب القريب في كل تجربة ، والثاني هو إزالة المشبك الوعائي بعد عدة أيام دون التسبب في تلف الحالب أو الكلى.

[راشيل] للبدء ، قم بإعداد الجانب الجراحي لفأر مخدر بالمطهرات. قم بعمل شق ظهري طولي بطول 1.5 سم على طول خط الوسط عبر الجلد والطبقات تحت الجلد باستخدام المقص والملقط. قم بعمل شق صغير من خلال عضلة الجناح الأيسر واللفافة فوق الكلى. ثم مع زوج من الملقط ، قم بإخراج الكلية اليسرى. باستخدام ملقط حاد. قم بتشريح الدهون بعناية في القطب السفلي وبعض الأنسجة الضامة بالقرب من الحالب. حدد موقع منطقة الحالب. ثم افصل الحالب مع نسيجته الضامة عن عنيق الكلى لتجنب تضمين الوريد الكلوي والشريان مع المشبك. استخدم أدوات تطبيق المشبك لفتح المشبك الوعائي ووضعه مباشرة أسفل الحوض الكلوي على الحالب. استخدم العلامات الموجودة على المشبك لضمان تطبيق ضغط موحد عبر جميع الفئران. الآن استخدمي قطعة قطن معقمة مبللة بمحلول ملحي لدفع الكلى برفق مع المشبك مرة أخرى إلى الفضاء خلف الصفاق. ثم خياطة طبقة العضلات باستخدام خياطة قابلة للامتصاص. استخدم مشابك الجلد لإغلاق طبقة الجلد. لإزالة مشبك الحالب ، قم بإزالة مشابك الجرح ثم قم بتنظيف منطقة الجراحة دون إعادة تشكيلها باستخدام الشقوق الأصلية للوصول إلى المشبك. أعد فتح طبقة العضلات وفضح المساحة خلف الصفاق. استخدم الملقط لتحديد موقع المشبك بعناية في الفضاء خلف الصفاق دون إخراج الكلى. باستخدام أدوات تطبيق المشبك ، افتح المشبك برفق أثناء سحب الأنسجة المحيطة بعيدا باستخدام ملقط لإزالته بأمان. الآن قم بإخراج الكلى لفحص الحوض الكلوي بحثا عن انسداد. يؤكد تورم الحوض الكلوي استسقاء الكلى. ادفع الكلية مرة أخرى إلى الفضاء خلف الصفاق باستخدام قطعة قطن معقمة مبللة بمحلول ملحي وخياطة الشق كما هو موضح. لإجراء استئصال الكلية المقابل ، أعد فتح الموقع الظهري باستخدام شق الجلد الأصلي. في الحجم, عضلة الجناح الأيمن, ولفافة فوق الكلى. ثم قم بإخراج الكلية اليمنى باستخدام الملقط. امسك الكلية اليمنى بملقط ناعم ومنحني وقم بتشريح القطبين العلوي والسفلي بعيدا عن الأنسجة المحيطة. بعد تحرير الكلى ، اربط خياطة حريرية فورو حول الأوعية الكلوية والحالب باستخدام عقدة جراحية مزدوجة. انتظر لمدة 30 ثانية تقريبا حتى تصبح الكلى داكنة. ثم أمسكها بملقط منحني أملس وقم بإزالتها عن طريق القطع بعيدا إلى العقدة باستخدام مقص منحني. ادفع عنيق الكلى المتبقي برفق إلى الفراغ الخلفي للبريتون باستخدام قطعة قطن معقمة مبللة بمحلول ملحي ، ثم أغلق طبقات العضلات والجلد باستخدام الغرز والمشابك. تم أخذ قياسات البقاء على قيد الحياة ووظائف الكلى النموذجية بعد 84 يوما من انسداد الحالب أحادي الجانب القابل للانعكاس. قارنت الدراسات الوظيفية انسداد الحالب أحادي الجانب القابل للانعكاس مع استئصال الكلية وحده لنيتروجين اليوريا في الدم ، ومعدل الترشيح الكبيبي عبر الجلد ، والأسمولية البولية بعد 18 ساعة من الحرمان من الماء. كانت قيم الأسمولية البولية أقل بشكل ملحوظ من الفئران التي تتحكم في استئصال الكلية في نفس النقاط الزمنية.