الإنبات غير المتكافئ والتجديد القائم على النباتات للأوراق للأوركيد الطبية المهددة بالانقراض Hemipilia cucullata من البذور الناضجة

يركز بحثي على تحسين بروتوكولات زراعة الأنسجة لبساتين الفاكهة المهددة بالانقراض لتعزيز الحفظ والتكاثر على نطاق واسع والاستخدام المستدام لهذه النباتات الطبية القيمة. يتمثل التحدي الرئيسي في تحقيق معدلات إنبات وتجديد متسقة عبر أنواع الأوركيد حيث يتطلب كل منها تحسين الوسائط الخاصة بالأنواع والتحكم الدقيق في ظروف النمو. لقد طورنا بروتوكولات فعالة لزراعة الأنسجة للعديد من النباتات المهددة بالانقراض ، مما يتيح استعادة الأنواع ودعم إعادة الإعمار في الموائل الطبيعية.

لا يوجد نظام فعال لزراعة الأنسجة القابلة للتكرار لمعالجة Hemipilia cucullata للتكاثر والترميم والحفظ. غالبا ما تحتاج بساتين الفاكهة الأرضية إلى فطريات تكافلية محددة يكون عزلها وتحديدها معقدا. طريقة تكافلية تبسط التكاثر وتجاوز هذه الخطوات.

يتيح عملنا الإنبات العالي والتجديد السريع للنبات من الحالات الناضجة ، مما يقضي على الاعتماد على الفطريات ويقدم نهجا أسرع وأكثر موثوقية لتكاثر Hemipilia cucullata. للبدء ، ضع الكبسولة في دورق أضف قطرة إلى قطرتين من المنظف إلى الدورق للشطف.

اغسل الكبسولة تحت ماء الصنبور الجاري لمدة خمس دقائق. ثم باستخدام ورق ماص معقم ، قم بإزالة الماء السطحي المتبقي من الكبسولة. الآن ، اغمر الكبسولة في 75٪ إيثانول لمدة 30 ثانية.

تعقيم الكبسولة عن طريق غمرها في 50 مل من محلول هيبوكلوريت الصوديوم 20٪ يحتوي على حوالي 5٪ من الكلور المتاح. ثم أضف قطرتين من منظف غسل الصحون المنزلي غير المخفف إلى المحلول واحتضن الكبسولة لمدة 10 إلى 12 دقيقة. اشطف الكبسولة خمس مرات بالماء المقطر المعقم لإزالة أي مطهر متبقي.

ثم باستخدام مشرط معقم ، قم بإزالة ما يقرب من ملليمتر واحد من كل من القمة وطرفي العنيق في الكبسولة. قم بعمل شق صغير في الطرف العلوي من الكبسولة لفضح البذور وجمعها في طبق بتري معقم. باستخدام ملقط معقم ، قم بتفريق ما يقرب من 500 إلى 600 بذرة بالتساوي في كل زجاجة ثقافة تحتوي على الوسط المحضر.

دع البذور تمتص الماء وتستقر في قاع الوسط السائل. حافظ على المزارع عند 25 درجة مئوية مع دورة ضوئية ومظلمة لمدة 12 ساعة وشدة ضوء تبلغ 36 ميكرومول لكل متر مربع في الثانية. راقب إنبات البذور أسبوعيا.

سجل أي تغييرات مورفولوجية مرئية وقم بتصوير الثقافات للتوثيق. اختر نباتات صحية بحجم سنتيمتر إلى سنتيمترين دون اسوداد مرئي أو اصفرار كامل لاستطالة اللقطة. باستخدام ملقط معقم ومبرد ، انقل 8-12 نبتة معقمة إلى كل زجاجة تحتوي على وسط استطالة البراعم المحضر حديثا.

وزع النباتات بالتساوي داخل كل زجاجة. بعد خمسة أسابيع من استطالة البراعم ، اختر نباتات ذات براعم متطورة بالكامل وأوراق صحية لأخذ عينات من الأوراق. استئصال الأوراق المعقمة الموسعة بالكامل من نبات صحي باستخدام مشرط معقم.

قم بإزالة المنطقة القمية وهوامش الأوراق. ثم قم بتقطيع كل ورقة إلى شرائح 0.5 × 0.5 سم تقريبا باستخدام مشرط معقم في ظروف معقمة. ضع 10 أجزاء من الأوراق على وسط الحث PLB بحيث يكون السطح المحوري متجها لأعلى.

تأكد من أن كل جزء يلامس الوسط بقوة. ثم قم بزراعتها لمدة خمسة أسابيع. أخيرا ، قم بتقييم عدد PLBs المستحثة بنجاح واحسب معدل الحث كنسبة مئوية.

سجل متوسط ارتفاع البرعم بالسنتيمتر واحسب عدد البراعم المتكونة لكل نبات. تميز إنبات البذور في الوسط السائل بشكل واضح بظهور أجنة خضراء من طبقة البذرة في حوالي 60 يوما ، والتي شكلت لاحقا بروتوكورم كروية من 80 إلى 85 يوما. تم تحقيق أعلى معدل إنبات بنسبة 72٪ في الوسط السائل المكمل ب 0.5 ملليغرام لكل لتر NAA.

أنتج الوسط B5 الذي يحتوي على 0.5 ملليغرام لكل لتر بنزيلدينين و 0.2 ملليغرام لكل لتر NAA أعلى معدل تكاثر بروتوكورم بمتوسط 5.3 بروتوكورم تم تشكيله حديثا لكل نبات. أظهرت البروتوكورمز المزروعة في وسط B5 مع تركيبة منظم النمو الأمثل نموا قويا وتصبغا أخضر صحيا ، متفوقة على تلك المزروعة على وسط MS في نفس الظروف. لوحظ أكبر عدد من الفروع لكل مزرعة بمتوسط أربعة مع ملليغرام واحد لكل لتر من كل بنزيلامينين و NAA ، تليها عن كثب NAA وحدها عند 0.5 ملليغرام لكل لتر.

تم تعزيز استطالة البراعم بشكل أكبر بمزيج من 0.5 ملليغرام لكل لتر بنزيلادينين ومليغرام واحد لكل لتر NAA ، مما أدى إلى متوسط ارتفاع النبات 4.8 سم. تم تحقيق أعلى معدل تحريض للأجسام الشبيهة بالبروتوكورم بنسبة 44.3٪ باستخدام ثلاثة ملليغرام لكل لتر بنزيلامينين مع 0.2 ملليغرام لكل لتر NAA.