Name: نظام ثقافة مشتركة معدل لفهم تفاعلات الخلايا الحبيبية والثيكا في المبيض البقري (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T13:25:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: استكشف نموذج زراعة مشتركة لخلايا الثيكا والحبيبية البقرية لدراسة التفاعلات الباراكرينية وديناميكيات الجريبات. يوفر هذا النموذج بيئة فسيولوجية لتحليل التواصل الخلوي في علم الأحياء التناسلي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Adams, G. P., Jaiswal, R., Singh, J., Malhi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+understanding+ovarian+follicular+dynamics+in+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Progress in understanding ovarian follicular dynamics in cattle.</a> Theriogenology. 69 (1), 72-80 (2008).</li>
<li>Forde, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oestrous+cycles+in+Bos+taurus+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Reprod+Sci%22%5BJournal%5D)">Oestrous cycles in Bos taurus cattle.</a> Anim Reprod Sci. 124 (3-4), 163-169 (2011).</li>
<li>Hennet, M. L., Combelles, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antral+follicle%3A+A+microenvironment+for+oocyte+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">The antral follicle: A microenvironment for oocyte differentiation.</a> Int J Dev Biol. 56 (10-12), 819-831 (2012).</li>
<li>Christenson, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+resource%3A+Preovulatory+LH+surge+effects+on+follicular+theca+and+granulosa+transcriptomes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Research resource: Preovulatory LH surge effects on follicular theca and granulosa transcriptomes.</a> Mol Endocrinol. 27 (7), 1153-1171 (2013).</li>
<li>Baufeld, A., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+cell+plating+density+mimics+an+early+post-LH+stage+in+cultured+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Increasing cell plating density mimics an early post-LH stage in cultured bovine granulosa cells.</a> Cell Tissue Res. 354, 869-880 (2013).</li>
<li>Baufeld, A., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Tissue+culture+model+of+estrogen-producing+primary+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Tissue culture model of estrogen-producing primary bovine granulosa cells.</a> J Vis Exp. (139), e58208(2018).</li>
<li>Gutierrez, C. G., Campbell, B. K., Webb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+long-term+bovine+granulosa+cell+culture+system%3A+Induction+and+maintenance+of+estradiol+production%2C+response+to+follicle-+stimulating+hormone%2C+and+morphological+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Development of a long-term bovine granulosa cell culture system: Induction and maintenance of estradiol production, response to follicle- stimulating hormone, and morphological characteristics.</a> Biol Reprod. 56 (3), 608-616 (1997).</li>
<li>Hamel, M., Vanselow, J., Nicola, E. S., Price, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androstenedione+increases+cytochrome+P450+aromatase+messenger+ribonucleic+acid+transcripts+in+non-luteinizing+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Androstenedione increases cytochrome P450 aromatase messenger ribonucleic acid transcripts in non-luteinizing bovine granulosa cells.</a> Mol Reprod Dev. 70, 175-183 (2005).</li>
<li>Chandrasekher, Y. A., Fortune, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+oxytocin+on+steroidogenesis+by+bovine+theca+and+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Effects of oxytocin on steroidogenesis by bovine theca and granulosa cells.</a> Endocrinology. 127 (2), 926-933 (1990).</li>
<li>Silva, J. M., Price, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+follicle-stimulating+hormone+on+steroid+secretion+and+messenger+ribonucleic+acids+encoding+cytochromes+P450+aromatase+and+cholesterol+side-chain+cleavage+in+bovine+granulosa+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effect of follicle-stimulating hormone on steroid secretion and messenger ribonucleic acids encoding cytochromes P450 aromatase and cholesterol side-chain cleavage in bovine granulosa cells in vitro.</a> Biol Reprod. 62 (1), 186-191 (2000).</li>
<li>Gong, J. G., McBride, D., Bramley, T. A., Webb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+recombinant+bovine+somatotrophin%2C+insulin-like+growth+factor-I+and+insulin+on+bovine+granulosa+cell+steroidogenesis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Effects of recombinant bovine somatotrophin, insulin-like growth factor-I and insulin on bovine granulosa cell steroidogenesis in vitro.</a> J Endocrinol. 143 (1), 157-164 (1994).</li>
<li>Baufeld, A., Koczan, D., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-lactate+induces+specific+genome-wide+alterations+of+gene+expression+in+cultured+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">L-lactate induces specific genome-wide alterations of gene expression in cultured bovine granulosa cells.</a> BMC Genomics. 20 (1), 273(2019).</li>
<li>Baddela, V. S., Sharma, A., Plinski, C., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palmitic+acid+protects+granulosa+cells+from+oleic+acid+induced+steatosis+and+rescues+progesterone+production+via+cAMP+dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Mol+Cell+Biol+Lipids%22%5BJournal%5D)">Palmitic acid protects granulosa cells from oleic acid induced steatosis and rescues progesterone production via cAMP dependent mechanism.</a> Biochim Biophys Acta Mol Cell Biol Lipids. 1867 (8), 159159(2022).</li>
<li>Sharma, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+free+fatty+acids+affect+bovine+granulosa+cell+function%3A+a+molecular+cue+for+compromised+reproduction+during+negative+energy+balance%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr+Connect%22%5BJournal%5D)">Elevated free fatty acids affect bovine granulosa cell function: a molecular cue for compromised reproduction during negative energy balance.</a> Endocr Connect. 8 (5), 493-505 (2019).</li>
<li>Hillier, S. G., Whitelaw, P. F., Smyth, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follicular+oestrogen+synthesis+-+The+two-cell%2C+two-+gonadotrophin+model+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Follicular oestrogen synthesis - The two-cell, two- gonadotrophin model revisited.</a> Mol Cell Endocrinol. 100, 51-54 (1994).</li>
<li>Campen, K. A., Lavallee, M., Combelles, C. M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+bisphenol+S+on+bovine+granulosa+and+theca+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Domest+Anim%22%5BJournal%5D)">The impact of bisphenol S on bovine granulosa and theca cells.</a> Reprod Domest Anim. 53 (2), 450-457 (2018).</li>
<li>Glister, C., Richards, S. L., Knight, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+morphogenetic+proteins+%28BMP%29+-4%2C+-6%2C+and+-7+potently+suppress+basal+and+luteinizing+hormone-induced+androgen+production+by+bovine+theca+interna+cells+in+primary+culture%3A+could+ovarian+hyperandrogenic+dysfunction+be+caused+by+a+defect+in+thecal+BMP+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Bone morphogenetic proteins (BMP) -4, -6, and -7 potently suppress basal and luteinizing hormone-induced androgen production by bovine theca interna cells in primary culture: could ovarian hyperandrogenic dysfunction be caused by a defect in thecal BMP signaling.</a> Endocrinology. 146 (4), 1883-1892 (2005).</li>
<li>Wrathall, J. H., Knight, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+inhibin-related+peptides+and+oestradiol+on+androstenedione+and+progesterone+secretion+by+bovine+theca+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Effects of inhibin-related peptides and oestradiol on androstenedione and progesterone secretion by bovine theca cells in vitro.</a> J Endocrinol. 145 (3), 491-500 (1995).</li>
<li>Shores, E. M., Picton, H. M., Hunter, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regulation+of+pig+theca+cell+steroidogenesis+by+LH%2C+insulin-like+growth+factor+I+and+granulosa+cells+in+serum-free+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Differential regulation of pig theca cell steroidogenesis by LH, insulin-like growth factor I and granulosa cells in serum-free culture.</a> J Reprod Fertil. 118 (2), 211-219 (2000).</li>
<li>Gregoraszczuk, E. L., Ptak, A., Karniewska, M., Ropstad, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+of+defined+mixtures+of+PCBs%2C+p%2Cp%27-DDT+and+its+metabolite+p%2Cp%27-DDE%2C+on+co-culture+of+porcine+theca+and+granulosa+cells%3A+steroid+secretion%2C+cell+proliferation+and+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Action of defined mixtures of PCBs, p,p'-DDT and its metabolite p,p'-DDE, on co-culture of porcine theca and granulosa cells: steroid secretion, cell proliferation and apoptosis.</a> Reprod Toxicol. 26 (2), 170-174 (2008).</li>
<li>Rak, A., Drwal, E., Wróbel, A., Gregoraszczuk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistin+is+a+survival+factor+for+porcine+ovarian+follicular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Resistin is a survival factor for porcine ovarian follicular cells.</a> Reproduction. 150 (4), 343-355 (2015).</li>
<li>Kotsuji, F., Tominaga, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+granulosa+and+theca+cell+interactions+in+ovarian+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">The role of granulosa and theca cell interactions in ovarian structure and function.</a> Microsc Res Tech. 27 (2), 97-107 (1994).</li>
<li>Orisaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+ovarian+theca+cells+on+granulosa+cell+differentiation+during+gonadotropin-independent+follicular+growth+in+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Effects of ovarian theca cells on granulosa cell differentiation during gonadotropin-independent follicular growth in cattle.</a> Mol Reprod Dev. 73 (6), 737-744 (2006).</li>
<li>Tajima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+granulosa+and+theca+cell+interactions+in+ovarian+follicular+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Role of granulosa and theca cell interactions in ovarian follicular maturation.</a> Microsc Res Tech. 69 (6), 450-458 (2006).</li>
<li>Tajima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+ovarian+theca+cells+on+apoptosis+and+proliferation+of+granulosa+cells%3A+changes+during+bovine+follicular+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effects of ovarian theca cells on apoptosis and proliferation of granulosa cells: changes during bovine follicular maturation.</a> Biol Reprod. 66 (6), 1635-1639 (2002).</li>
<li>Allegrucci, C., Hunter, M. G., Webb, R., Luck, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+bovine+granulosa+and+theca+cells+in+a+novel+serum-free+co-culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Interaction of bovine granulosa and theca cells in a novel serum-free co-culture system.</a> Reproduction. 126 (4), 527-538 (2003).</li>
<li>Santaguida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Side+by+side+comparison+between+dynamic+versus+static+models+of+blood-brain+barrier+in+vitro%3A+A+permeability+study%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Side by side comparison between dynamic versus static models of blood-brain barrier in vitro: A permeability study.</a> Brain Res. 1109 (1), 1-13 (2006).</li>
<li>Pardridge, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Isolated+Brain+Microvessel%3A+A+Versatile+Experimental+Model+of+the+Blood-Brain+Barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Isolated Brain Microvessel: A Versatile Experimental Model of the Blood-Brain Barrier.</a> Front Physiol. 11, 398(2020).</li>
<li>Schneider, F., Brüssow, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+preovulatory+administered+depot+gonadotrophin-releasing+hormone+agonist+on+reproductive+hormone+levels+and+pregnancy+outcome+in+gilts%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Fertil+Dev%22%5BJournal%5D)">Effects of a preovulatory administered depot gonadotrophin-releasing hormone agonist on reproductive hormone levels and pregnancy outcome in gilts.</a> Reprod Fertil Dev. 18 (8), 857-866 (2006).</li>
<li>Nimz, M., Spitschak, M., Schneider, F., Fürbass, R., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Down-regulation+of+genes+encoding+steroidogenic+enzymes+and+hormone+receptors+in+late+preovulatory+follicles+of+the+cow+coincides+with+an+accumulation+of+intrafollicular+steroids%5BTitle%5D)+AND+%22Domest+Anim+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Down-regulation of genes encoding steroidogenic enzymes and hormone receptors in late preovulatory follicles of the cow coincides with an accumulation of intrafollicular steroids.</a> Domest Anim Endocrinol. 37, 45-54 (2009).</li>
<li>Amsterdam, A., May, J. V., Schomberg, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+effect+of+insulin+and+follicle-stimulating+hormone+on+biochemical+and+morphological+differentiation+of+porcine+granulosa+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Synergistic effect of insulin and follicle-stimulating hormone on biochemical and morphological differentiation of porcine granulosa cells in vitro.</a> Biol Reprod. 39 (2), 379-390 (1988).</li>
<li>Monga, R., Sharma, I., Datta, T. K., Singh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+serum-free+buffalo+granulosa+cell+culture+and+analysis+of+genes+involved+in+terminal+differentiation+from+FSH-+to+LH-responsive+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Domest+Anim+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Characterization of serum-free buffalo granulosa cell culture and analysis of genes involved in terminal differentiation from FSH- to LH-responsive phenotype.</a> Domest Anim Endocrinol. 41 (4), 195-206 (2011).</li>
<li>Bao, B., Garverick, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+steroidogenic+enzyme+and+gonadotropin+receptor+genes+in+bovine+follicles+during+ovarian+follicular+waves%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Expression of steroidogenic enzyme and gonadotropin receptor genes in bovine follicles during ovarian follicular waves: A review.</a> J Anim Sci. 76 (7), 1903-1921 (1998).</li>
<li>Bao, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+messenger+ribonucleic+acid+encoding+luteinizing+hormone+receptor%2C+cytochrome+P450+side+chain+cleavage%2C+and+aromatase+are+associated+with+recruitment+and+selection+of+bovine+ovarian+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Changes in messenger ribonucleic acid encoding luteinizing hormone receptor, cytochrome P450 side chain cleavage, and aromatase are associated with recruitment and selection of bovine ovarian follicles.</a> Biol Reprod. 56 (5), 1158-1168 (1997).</li>
<li>Orisaka, M., Tajima, K., Tsang, B. K., Kotsuji, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte-granulosa-theca+cell+interactions+during+preantral+follicular+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ovarian.+Res%22%5BJournal%5D)">Oocyte-granulosa-theca cell interactions during preantral follicular development.</a> J. Ovarian. Res. 2 (1), 9(2009).</li>
<li>Gilbert, I., Robert, C., Dieleman, S., Blondin, P., Sirard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+effect+of+the+LH+surge+in+bovine+granulosa+cells+during+the+peri-ovulation+period%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Transcriptional effect of the LH surge in bovine granulosa cells during the peri-ovulation period.</a> Reproduction. 141 (2), 193-205 (2011).</li>
<li>Kotsuji, F., Kamitani, N., Goto, K., Tominaga, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bovine+theca+and+granulosa+cell+interactions+modulate+their+growth%2C+morphology%2C+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Bovine theca and granulosa cell interactions modulate their growth, morphology, and function.</a> Biol Reprod. 43 (5), 726-732 (1990).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x محلول الملح المتوازن من هانك HBSS (ث ملغ / كالوريوس ، فينول أحمر)</td><td>بيو & باع</td><td>بكالوريوس. L201-10</td><td>تذوب في ماء عالي النقاء ؛ اضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 من محلول الهضم (HBSS و HEPES) وقم بإجراء الترشيح المعقم قبل الاستخدام</td></tr><tr><td>إبرة 18 جرام ، 40 مم ، قطر 1.2 مم</td><td>روث</td><td>281 طن 1</td><td>إبرة يمكن التخلص منها ، اختصار</td></tr><tr><td>حقنة 3 مل (Omnifix Luer)</td><td>روث</td><td>22.1 ريال</td><td></td></tr><tr><td>أكوتاز</td><td>ميرك</td><td>أ 6964</td><td>فرع الشركة: سيجما ألدريتش</td></tr><tr><td>أمفوتريسين ب (250 & ميكرو; جم / مل)</td><td>بيو & باع</td><td>بكالوريوس. AB17.01050</td><td></td></tr><tr><td>أندروستينيديون</td><td>ميرك</td><td>46033</td><td>نستخدم محلول مخزون 10 ملي مولار ، مخفف بنسبة 100٪ من الإيثانول ؛ فرع الشركة: سوبيلكو</td></tr><tr><td>مجهر كارل زايس تكنيفال2</td><td>كارل زايس جينا</td><td>لا ينطبق</td><td>تستخدم مع ضوء الحادث Schott KL 1600 LED</td></tr><tr><td>BSA (5٪)</td><td>ميرك</td><td>أ 3311</td><td>فرع الشركة: سيجما ألدريتش</td></tr><tr><td>مصفاة خلية (100 & م حجم المسام)</td><td>سارستيدت</td><td>83.3945.100</td><td>تركيب أنابيب الطرد المركزي سعة 50 مل</td></tr><tr><td>الكولاجين R (0.2 ٪)</td><td>سيرفا</td><td>47254</td><td></td></tr><tr><td>الكولاجيناز NB8 (10٪)</td><td>نوردمارك</td><td>S1745601</td><td></td></tr><tr><td>حاوية تجميد الخلايا CoolCell LX&nbsp;</td><td>ميرك</td><td>CLS432002</td><td>منتج من كورنينج</td></tr><tr><td>قوارير الحفظ بالتبريد (2 مل)</td><td>TPP فاوست</td><td>TPP89020</td><td></td></tr><tr><td>طبق ثقافة ، 12 بئر ، قاع مسطح</td><td>TPP فاوست</td><td>TPP92112</td><td></td></tr><tr><td>طبق ثقافة ، 24 بئر ، قاع مسطح</td><td>TPP فاوست</td><td>TPP92424</td><td></td></tr><tr><td>طبق ثقافة ، 6 آبار ، قاع مسطح</td><td>TPP فاوست</td><td>TPP92006</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>روث</td><td>4720.1</td><td></td></tr><tr><td>DPBS بدون Ca2+, Mg2+</td><td>بيو & باع</td><td>بكالوريوس. ال 182-10</td><td>يذوب في ماء فائق النقاء والأوتوكلاف قبل الاستخدام</td></tr><tr><td>استراديول ، 17 ب- [2،4،6،7-3H]</td><td>هارتمان أناليتيك</td><td>ART1555</td><td></td></tr><tr><td>مصل ربلة الساق الجنينية (FBS Superior Stabil)</td><td>بيو & باع</td><td>FBS. س 0615</td><td></td></tr><tr><td>FSH (~ 7,000 وحدة دولية / مجم ؛ من الغدة النخامية البشرية)</td><td>ميرك</td><td>إف 4021</td><td>نحن نفضل استخدام حل مخزون من 2 & ز / مل ، مخفف في 0.9 ٪ كلوريد الصوديوم ؛ فرع الشركة: سيجما ألدريتش</td></tr><tr><td>إدراج زراعة الخلايا المعلقة (0.4 &micro; م حجم المسام)</td><td>سيلكيورت</td><td>9320412</td><td>أثناء الطلب كن على دراية بالخصائص المختلفة للإدخالات ؛ نحن نفضل غشاء PET شفاف للفحص المجهري التباين للطور</td></tr><tr><td>HEPES (1 م)</td><td>روث</td><td>9105.2</td><td>اضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 من محلول الهضم (HBSS و HEPES) وقم بإجراء الترشيح المعقم قبل الاستخدام</td></tr><tr><td>هولو ترانسفيرين (ماشية)</td><td>ميرك</td><td>تي 1283</td><td>تذوب في ماء معقم فرع الشركة: سيجما ألدريتش</td></tr><tr><td>مجموعة innuPREP RNA الصغيرة 2.0</td><td>IST innuscreen</td><td>845-KS-2040250</td><td></td></tr><tr><td>الأنسولين (10 مجم / مل ؛ من البنكرياس البقري)</td><td>ميرك</td><td>ط0516</td><td>تذوب في 1x PBS ؛ فرع الشركة: سيجما ألدريتش</td></tr><tr><td>L-الجلوتامين (200 ملم)</td><td>بيو & باع</td><td>بكالوريوس. ك 0283</td><td></td></tr><tr><td>LR3-IGF-1</td><td>ميرك</td><td>ط1146</td><td>نحن نستخدم محلول مخزون من 200 &micro ؛ ز / مل ، مذاب في 10 ملي حمض الهيدروكلوريك و 1x PBS مع 1 مجم / مل BSA. فرع الشركة: سيجما ألدريتش</td></tr><tr><td>NanoDrop 1000 مقياس الطيف الضوئي</td><td>ثيرماسايفكتيفيك</td><td>لا ينطبق</td><td>قياس تركيز الحمض النووي الريبي</td></tr><tr><td>NEA (100x)</td><td>بيو & باع</td><td>بكالوريوس. ك 0293</td><td></td></tr><tr><td>البنسلين / الستربتومايسين (10،000 وحدة دولية / 10 مجم / مل)</td><td>بيو & باع</td><td>بكالوريوس. أ2213</td><td></td></tr><tr><td>مياه نقية مناسبة لزراعة الخلايا</td><td>ميرك</td><td>دبليو 3500</td><td>فرع الشركة: سيجما ألدريتش</td></tr><tr><td>طقم تخليق (كدنا) SensiFAST</td><td>بيولين</td><td>بيو -65054</td><td>يتم توفيره من خلال شريك التوزيع BioCat</td></tr><tr><td>بيكربونات الصوديوم (7.5٪)</td><td>بيو & باع</td><td>بكالوريوس. L1713</td><td></td></tr><tr><td>سيلينيت الصوديوم</td><td>ميرك</td><td>س 9133</td><td>تذوب في ماء معقم فرع الشركة: سيجما ألدريتش</td></tr><tr><td>ثيرموشاكر TS-100C</td><td>فيشر العلمية</td><td>12357627</td><td>تستخدم مع كتلة HC18 (Cat.-No. 12337627)</td></tr><tr><td>&ألفا ؛ - ميم</td><td>بيو & باع</td><td>بكالوريوس. إف 0915</td><td></td></tr></tbody></table>

نظام ثقافة مشتركة معدل لفهم تفاعلات الخلايا الحبيبية والثيكا في المبيض البقري

A Modified Co-Culture System for Understanding Granulosa-Theca Cell Interactions in the Bovine Ovary

على الرغم من عزل TCs و GCs باستخدام تقنيات فصل ميكانيكية راسخة تعتمد على تجزئة المسامي ، فقد تم تقييم التعبير عن الجينات الخاصة بنوع الخلية CYP17A1 و CYP19A1 للقضاء على خطر التلوث المتبادل. تم التعبير عن CYP17A1 حصريا في TCs المعزولة حديثا ، بينما تم التعبير عن CYP19A1 في الغالب في GCs المعزولة حديثا (الشكل 2).
يتيح نظام الزراعة المشتركة تجزئة خلايا ثيكا البقرية والحبيبات على الجانبين المتعارضين لإدراج الغشاء ، وبالتالي تقليد التنظيم المكاني في الجسم الحي . بعد ثلاثة أيام في الثقافة ، أظهرت TCs مورفولوجيا مسطحة وممدودة لأنها تنتشر عبر سطح غشاء الإدخال المطلي بالكولاجين ، مما يشير إلى الارتباط الناجح (الشكل 3 أ). عند استزراعها بمفردها لمدة 9 أيام بأكملها ، استمرت TCs في التكاثر ووصلت إلى الالتقاء بحلول اليوم 9 (الشكل 3 ب). في المقابل ، طورت GCs المزروعة بمفردها لمدة 6 أيام على غشاء الإدخال المطلي بالكولاجين نمطا ظاهريا يشبه الخلايا الليفية ، وهو سمة من سمات GCs في المختبر (الشكل 3 ج). بالإضافة إلى ذلك ، كما هو موضح سابقا ، تميل GCs إلى تكوين مجموعات ، وهي سمة نموذجية لهذه الخلايا في الثقافة5،7،31،32. في نظام الزراعة المشتركة ، لم يلاحظ أي اختلافات مورفولوجية واضحة في TCs أو GCs عند مقارنتها بالثقافات الأحادية المطابقة للوقت (الشكل 3D) ، مما يشير إلى أن البيئة القائمة على الإدراج تحافظ على السلوك الخلوي الطبيعي. ومع ذلك ، نظرا للقيود الفنية ، لا يزال التقييم المجهري للزراعة المشتركة يمثل تحديا ، لا سيما في تمييز وتقييم مورفولوجيا TC بشكل مستقل عن الخلايا الأخرى. للتغلب على هذه القيود ، يتم حاليا معالجة بروتوكول محسن لتثبيت الخلايا وفقا لاستكشاف استراتيجيات بديلة لتحديد الخلايا في حالة عدم وجود أجسام مضادة خاصة بالخلايا للتلوين المناعي.
تم تقييم وظيفة نظام الاستزراع المشترك من خلال تحليل إنتاج الهرمونات والتعبير عن جينات العلامات الرئيسية ل TCs و GCs33،34 ، مما يؤكد الأدوار الستيرويدية الخاصة بنوع الخلية. كشفت المقارنة بين الاستزراع الأحادي GC ونموذج الاستزراع المشترك عن مستويات مماثلة من الاستراديول (E2) المنتجة في المختبر. ومع ذلك ، كما هو متوقع ، أنتجت الثقافة الأحادية TC كميات ضئيلة فقط من E2 ، بما يتفق مع فرضية 2-cell-2-gonadotropin (الشكل 4 أ) 15 ، والتي تنص على أن خلايا theca تفتقر إلى القدرة على تصنيع E2 بشكل مستقل.
لمزيد من التقييم للأهمية الفسيولوجية لظروف الاستزراع ، تم فحص التعبير عن جينات العلامة الرئيسية33. وفقا لفرضية موجهة الغدد التناسلية 2-2-2-GAGENTOPIN ، تم التعبير عن CYP19A1 في الغالب في GCs ، بينما تم اكتشاف CYP17A1 بشكل أساسي في TCs ، وهو نمط لوحظ في كل من ظروف الزراعة الأحادية والمشتركة (الشكل 4 ب ، ج). والجدير بالذكر أن وفرة النسخ CYP19A1 كانت أعلى في GCs داخل نظام الاستزراع المشترك مقارنة بالثقافة الأحادية GC ، على الرغم من عدم وجود اختلافات ملحوظة في تركيزات الاستراديول.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig1.jpg"> 
الشكل 1: التمثيل التخطيطي لإعداد زراعة الخلايا. (أ) رسم تخطيطي يوضح غرفة التلقيح المصممة خصيصا ، والتي تستخدم أنبوبا مقطوعا على الملحق المقلوب لمنع تسرب الوسائط طوال فترة الاستزراع الأولية. (ب) الجدول الزمني للإجراء التجريبي: تمت زراعة TCs على الملحق المقلوب لمدة ثلاثة أيام للسماح بالتوصيل. تم قلب الإدخال ، وتم زرع GCs على الجانب الآخر ، تليها ستة أيام إضافية من الثقافة. قارنت الدراسة TCs و GCs المستزرعة بشكل منفصل بنظام الاستزراع المشترك TC-GC. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig2.jpg"> 
الشكل 2: التعبير الجيني عن العلامات الخاصة بنوع الخلية في الخلايا الحبيبية المعزولة حديثا وخلايا ثيكا. (أ) تم التعبير عن CYP17A1 حصريا في TCs ، بينما (ب) تم اكتشاف CYP19A1 في الغالب في GCs ، مما يؤكد الخصوصية والنقاء الأولي لمجموعات الخلايا المعزولة قبل الثقافة. يتم تقديم البيانات كتعبير نسبي طبيعي إلى المتوسط الهندسي للجينات المرجعية RPLP0 و TBP. يتم عرض المتوسطات والخطأ المعياري للوسائل ، وتم اختبار البيانات للتأكد من طبيعتها وتباين ، وتشير العلامات النجمية إلى اختلافات ذات دلالة إحصائية (ن = 3 ، اختبار t). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig3.jpg"> 
الشكل 3: مورفولوجيا خلايا theca و granulosa في الثقافة. (أ) تم إرفاق TCs المزروعة لمدة 3 أيام بغشاء الإدخال المطلي بالكولاجين. (ب) نمت TCs إلى الالتقاء بعد فترة 9 أيام بأكملها في الثقافة الأحادية. (ج) تعرض GCs النمط الظاهري النموذجي الشبيه بالخلايا الليفية بعد 6 أيام في الثقافة. (د) لا يظهر الاستزراع المشترك للمناطق الانتقالية والمناطق المئوية أي اختلاف مورفولوجي واضح مقارنة بالمزارع الأحادية المتطابقة زمنيا المعنية. تم التقاط هذه الصورة بعد 6 أيام من ثقافة GC و 9 أيام من ثقافة TC (عند نقطة نهاية تجربة الاستزراع المشترك). أشرطة المقياس 100 ميكرومتر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig4.jpg"> 
الشكل 4: تحليل العلامات الوظيفية في نظام الزراعة المشتركة. (أ) تركيزات هرمونات الاستراديول (E2) تؤكد الوظيفة الفسيولوجية لنظام زراعة الخلايا. (ب ، ج) يوضح تحليل التعبير الجيني لعلامة TC CYP17A1 وعلامة GC CYP19A1 الهوية والحالة الوظيفية لكلا مجموعتي الخلايا. تم استخدام المتوسط الهندسي للجينات المرجعية RPLP0 و TBP لحساب التعبير النسبي. يتم عرض الوسائل والخطأ المعياري للوسائل ، وتم اختبار البيانات للتأكد من طبيعتها وتباين ، وتشير العلامات النجمية إلى اختلافات ذات دلالة إحصائية (ن = 3 ، تحليل مستمر أحادي الاتجاه). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

A reliable co-culture of granulosa (GCs) and theca cells (TCs) has the potential to facilitate a more comprehensive understanding of the interactions, ...

a-modified-co-culture-system-for-understanding-granulosa-theca-cell

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

يصف هذا البروتوكول الثقافة الابتدائية / ثقافة مشتركة من الماوس أنسجة المبيض، وذلك باستخدام المبايض من الفئران حديثي الولادة وحويصلات المبيض الفردية من الفئران سابق للبلوغ. تقنيات ثقافة تدعم التنمية بطريقة الفسيولوجية للغاية، مما يسمح للتحقيق في تأثير العوامل الخارجية على المبيض، والتفاعلات بين الحويصلات المبيضية.

الثقافة والمشارك ثقافة ماوس المبايض وحويصلات المبيض

ويرد نموذج ثقافة طويلة الأجل للخلايا granulosa الأبقار تحت ظروف خالية من المصل. هذا النموذج يسمح للباحثين لدراسة آثار مختلف العوامل والظروف ككثافة الطلاء المختلفة على خصائص الإستروجين المنتجة للخلايا granulosa الأبقار.

نموذج زراعة الأنسجة Granulosa البقري الأولية المنتجة للاستروجين خلايا

هنا هي بروتوكولين لتغليف البويضات porcine في ظروف ثقافة 3D. في الأول، يتم تغليف مجمعات الزُنَق (COCs) في الخرز الفيبرين-الجينات. وفي الثانية، يتم وضعها مع جزيئات مسحوق البروبيلين الإيثيلين المفلورة (ميكروبيراكات). يضمن كلا النظامين الظروف المثلى للحفاظ على تنظيمهما ثلاثي الأبعاد.

تحلل Proteolytically Alginate Hydrogels والميكروبات الهيدروفوبية ل Porcine Oocyte تغليف

نحن نصف إجراءات عزل البويضات المتنامية من بصيلات المبيض في المراحل المبكرة من التطور ، وكذلك إعداد نظام ثقافة في المختبر يمكن أن يدعم النمو والتمايز حتى المرحلة الكاملة النمو.

في استراتيجية ثقافة فيترو لبويضات من أوائل الجريب الأنترال في الماشية

في المختبر ثقافة قشرة المبيض البقري وتأثير الغذائية درج خطوة النظام الغذائي على البيئة الدقيقة المبيض هو تقديم. تم استزراع قطع قشرة المبيض لمدة سبعة أيام وتم تقييم المنشطات والسيتوكينات ومراحل الجريب. وكان العلاج النظام الغذائي درج الخطوة زيادة تولد الستيرويد مما أدى إلى تطور الجريب في الثقافة.

الأبقار المبيض القشرة الأنسجة الثقافة

يتطلب التقدم في دراسة تكوين الجريب قبل الكثبان طرقا فعالة لعزل الجريب عن المبايض المفردة. يظهر هنا بروتوكول ميكانيكي مبسط لعزل الجريب عن المبايض البقري باستخدام مروحية الأنسجة والخالط. تسمح هذه الطريقة بجمع عدد كبير من بصيلات preantral القابلة للحياة من مبيض واحد.

عزل بصيلات ما قبل البقرية الصغيرة من المبيض البقري باستخدام مزيج من التجزئة والتجانس والترشيح التسلسلي

هنا ، نصف بروتوكولا لفصل صفار البيض والخلايا الحبيبية وخلايا theca في بصيلات ما قبل الإباضة للطيور. يتيح هذا التعامل الدقيق إجراء تحقيقات نقدية في دور هذه الطبقات في الوظيفة الإنجابية ، مما يساعد على فهم تطور البصيلات ، والتنظيم الهرموني ، وأبحاث الأمراض من أجل تعزيز الإنتاجية الزراعية والرؤى الطبية الحيوية.

فصل حبيبات بصيلات الطيور قبل الإباضة وطبقات خلايا الثيكا للتطبيقات النهائية

نحن نصف طرق عزل الخلايا الجسدية لمبيض الفئران عن جزء مليء بالستروما من المبيض، ولتوليد عضويات جسدية في مبيض الفأر باستخدام نهج خال من السقالات.

استكشاف البيئة الدقيقة للمبيض: طرق العزلة، والزراعة ثنائية الأبعاد، وزراعة الخلايا الجسدية لمبيض الفأر

يصف هذا البروتوكول ميكروفلويديك شارك في ثقافة نموذج للثقافة في وقت واحد ومترجم من الخلايا الظهارية والبكتيريا. ويمكن استخدام هذا النموذج للتحقيق في دور الاشارات الجزيئية للذوبان في مختلف المرضية فضلا عن الشاشة فعالية من السلالات البكتيرية بروبيوتيك المفترضة.

ميكروفلويديك المشارك ثقافة الخلايا الظهارية والبكتيريا للتحقيق في ذوبان الإشارات بوساطة التفاعلات

mStrawberry OP9 الخلايا تسمح لتقييم كامل لجميع ذرية ES المستمدة من الثقافة المشتركة.

تعديل ES / OP9 المشارك الثقافة ينص البروتوكول خصائص محسنة من النسل للدم

استكشف نموذج زراعة مشتركة لخلايا الثيكا والحبيبية البقرية لدراسة التفاعلات الباراكرينية وديناميكيات الجريبات. يوفر هذا النموذج بيئة فسيولوجية لتحليل التواصل الخلوي في علم الأحياء التناسلي.

نظام ثقافة مشتركة معدل لفهم تفاعلات الخلايا الحبيبية والثيكا في المبيض البقري

استكشف المزيد من الفيديوهات