Name: تحضير عيون الخنازير للفحص المجهري للانعكاس متحد البؤر لتصور شبكة ألياف الكولاجين الزجاجي (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: تعلم تصوير شبكة ألياف الكولاجين في الجسم الزجاجي باستخدام المجهر الانعكاسي متحد البؤر لدراسة تغيراته وعلاقتها بانفصال الشبكية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Sebag, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitreous+and+vision+degrading+myodesopsia%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Vitreous and vision degrading myodesopsia.</a> Prog Retin Eye Res. 79, 100847(2020).</li>
<li>Phillips, J. D., Hwang, E. S., Morgan, D. J., Creveling, C. J., Coats, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+mechanics+of+the+vitreoretinal+interface%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mech+Behav+Biomed+Mater%22%5BJournal%5D)">Structure and mechanics of the vitreoretinal interface.</a> J Mech Behav Biomed Mater. 134, 105399(2022).</li>
<li>Seider, M. I., Conell, C., Melles, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complications+of+acute+posterior+vitreous+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Complications of acute posterior vitreous detachment.</a> Ophthalmology. 129 (1), 67-72 (2022).</li>
<li>Ketkar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitreomacular+traction+-+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Eye%22%5BJournal%5D)">Vitreomacular traction - a review.</a> Eye. 39 (4), 710-717 (2025).</li>
<li>Filas, B. A., Zhang, Q., Okamoto, R. J., Shui, Y. -B., Beebe, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+degradation+identifies+components+responsible+for+the+structural+properties+of+the+vitreous+body%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Enzymatic degradation identifies components responsible for the structural properties of the vitreous body.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (1), 55(2014).</li>
<li>Taufalele, P. V., VanderBurgh, J. A., Muñoz, A., Zanotelli, M. R., Reinhart-King, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiber+alignment+drives+changes+in+architectural+and+mechanical+features+in+collagen+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Fiber alignment drives changes in architectural and mechanical features in collagen matrices.</a> PLoS One. 14 (5), e0216537(2019).</li>
<li>Bishop, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+macromolecules+and+supramolecular+organisation+of+the+vitreous+gel%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel.</a> Prog Retin Eye Res. 19 (3), 323-344 (2000).</li>
<li>Los, L. I., van Luyn, M. J. A., Nieuwenhuis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+the+rabbit+vitreous+body%3A+Lamellae%2C+Cloquet%27s+channel+and+a+novel+structure%2C+the+%27Alae+canalis+Cloqueti%27%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Organization of the rabbit vitreous body: Lamellae, Cloquet's channel and a novel structure, the 'Alae canalis Cloqueti'.</a> Exp Eye Res. 69 (3), 343-350 (1999).</li>
<li>Voytik-Harbin, S. L., Brightman, A. O., Waisner, B. Z., Robinson, J. P., Lamar, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+intestinal+submucosa%3A+A+tissue-derived+extracellular+matrix+that+promotes+tissue-specific+growth+and+differentiation+of+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Small intestinal submucosa: A tissue-derived extracellular matrix that promotes tissue-specific growth and differentiation of cells in vitro.</a> Tissue Eng. 4 (2), 157-174 (1998).</li>
<li>Bos, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+fibril+organisation+in+mammalian+vitreous+by+freeze+etch%2Frotary+shadowing+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Micron%22%5BJournal%5D)">Collagen fibril organisation in mammalian vitreous by freeze etch/rotary shadowing electron microscopy.</a> Micron. 32 (3), 301-306 (2001).</li>
<li>Bembridge, B. A., Crawford, G. N. C., Pirie, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase-contrast+microscopy+of+the+animal+vitreous+body%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Phase-contrast microscopy of the animal vitreous body.</a> Br J Ophthalmol. 36 (3), 131-142 (1952).</li>
<li>Filas, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+imaging+of+enzymatic+vitreolysis-induced+fiber+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Quantitative imaging of enzymatic vitreolysis-induced fiber remodeling.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (12), 8626-8637 (2014).</li>
<li>Los, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rabbit+as+an+animal+model+for+post-natal+vitreous+matrix+differentiation+and+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Eye%22%5BJournal%5D)">The rabbit as an animal model for post-natal vitreous matrix differentiation and degeneration.</a> Eye. 22 (10), 1223-1232 (2008).</li>
<li>Bredfeldt, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+segmentation+of+collagen+fibers+from+second-harmonic+generation+images+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Computational segmentation of collagen fibers from second-harmonic generation images of breast cancer.</a> J Biomed Opt. 19 (1), 016007(2014).</li>
<li>Liu, Y., Keikhosravi, A., Mehta, G. S., Drifka, C. R., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+quantifying+fibrillar+collagen+alignment%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Methods for quantifying fibrillar collagen alignment.</a> Methods Mol Biol. 1627, 429-451 (2017).</li>
<li>Wershof, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+FIJI+macro+for+quantifying+pattern+in+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">A FIJI macro for quantifying pattern in extracellular matrix.</a> Life Sci Alliance. 4 (3), e202000880(2021).</li>
<li>François, J., Victoria-Troncoso, V., Albarran, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+histochemical+structure+of+the+vitreous+fibers+studied+by+phase-contrast+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The histochemical structure of the vitreous fibers studied by phase-contrast microscopy.</a> Am J Ophthalmol. 69 (5), 763-773 (1970).</li>
<li>Hwang, E. S., Morgan, D. J., Sun, J., Hartnett, M. E., Toussaint, K. C., Coats, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confocal+reflectance+microscopy+for+mapping+collagen+fiber+organization+in+the+vitreous+gel+of+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Confocal reflectance microscopy for mapping collagen fiber organization in the vitreous gel of the eye.</a> Biomed Opt Express. 14 (2), 932(2023).</li>
<li>Harris, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+in+vitro+type+I+collagen+fibrillogenesis+by+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Visualizing in vitro type I collagen fibrillogenesis by transmission electron microscopy.</a> Methods Mol Biol. 1627, 367-383 (2017).</li>
<li>Arevalo, R. C., Urbach, J. S., Blair, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size-dependent+rheology+of+type+I+collagen+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Size-dependent rheology of type I collagen networks.</a> Biophys J. 99 (8), L65-L67 (2010).</li>
<li>Raub, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+assessment+of+collagen+gel+microstructure+and+mechanics+using+multiphoton+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Noninvasive assessment of collagen gel microstructure and mechanics using multiphoton microscopy.</a> Biophys J. 92 (6), 2212-2222 (2007).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>أغاروز الأول</td><td>VWR</td><td>0710-500G</td><td></td></tr><tr><td>سيليكون متعدد الاستخدامات 1 سد، شفاف</td><td>جنرال الكتريك</td><td>2795576</td><td></td></tr><tr><td>إسفنجة السليلوز (رمح عين ويك-سيل)</td><td>بيفر -فيزيتيك</td><td>000865</td><td></td></tr><tr><td>قاعدة مخصصة بثلاث شوك&nbsp;</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>محول مخصص لتركيب زجاج الغطاء الكبير</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>زجاج غطاء كبير بقطر 1.42" x&nbsp; 2.36" رقم 1</td><td>تيد بيلا</td><td>260460-100</td><td></td></tr><tr><td>ليغو (قاعدة كلاسيكية، 1 × 8 بلاطات، 1 × 8 طوب، 1 × 6 لوحات)</td><td>ليغو</td><td>11023, 3008, 3666, 4162</td><td></td></tr><tr><td>شفرات الميكروتوم (ملف عالي)&nbsp;</td><td>ليكا بيوسيستمز</td><td>14035838926</td><td></td></tr><tr><td>هدف سيليكون 30x من أوليمبوس UPlanSApo</td><td>أوليمبوس</td><td>UPLSAPO30XS</td><td></td></tr><tr><td>صينية مكعبات ثلج كبيرة من السيليكون (Samuelworld)</td><td>الامازون</td><td>713243280060</td><td></td></tr><tr><td>مناديل الأنسجة (Kimwipes)&nbsp;</td><td>كيمبرلي كلارك</td><td>34120</td><td></td></tr></tbody></table>

تحضير عيون الخنازير للفحص المجهري للانعكاس متحد البؤر لتصور شبكة ألياف الكولاجين الزجاجي

Preparing Porcine Eyes for Confocal Reflectance Microscopy to Visualize the Vitreous Collagen Fiber Network

تم تصوير عين واحدة من كل من الخنازير البالغة الثلاثة (أنثى تبلغ من العمر 4 أشهر ، وذكر يبلغ من العمر 5 أشهر ، وأنثى تبلغ من العمر 6 أشهر) بعد تقسيم العين في مستوى محوري عبر الأطراف السفلية. تم الحصول على ستة مواقع تصوير في مستوى التقسيم XY ، متباعدة 4 مم. في كل موقع تصوير ، تم الحصول على شبكة متجاورة 4 × 4 من صور 70 ميكرومتر × 70 ميكرومتر (الشكل 8). لكل خنزير ، تم تحليل كل صورة على حدة لعدة معلمات (الجدول 1).
تم قياس كثافة الألياف بطريقتين: 1) الط...

The vitreous is a clear gel that fills the space between the lens and retina. Its structure is supported by a network of collagen fibers, which likely ...

preparing-porcine-eyes-for-confocal-reflectance-microscopy-to

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

في هذا الفيديو ، نوضح تشريح الجزء الأمامي الحامل للقرنية من عين الخنازير. يمكن استخدام الجزء المعزول لزراعة الأعضاء لدراسة الفيزيولوجيا المرضية لاضطرابات العين.

تشريح الجزء الأمامي للعين: طريقة لعزل الجزء الأمامي الحامل للقرنية من عين الخنازير

تقدم هذه المقالة طريقة لتسمية fluorescently الكولاجين التي يمكن استخدامها لمزيد من الإصلاح على حد سواء والتصوير الحي من الثقافات الخلية 3D. كما نقوم بتوفير بروتوكول الأمثل لتصور البروتينات هيكل الخلية الذاتية من الخلايا المستزرعة في بيئات 3D.

وكشف عن المنظمة هيكل الخلية من خلايا سرطان الغازية في 3D

يوضح هذا الإجراء في الجسم الحي بالقرب من الأشعة تحت الحمراء التصوير مضان من أنشطة إعادة عرض الكولاجين في الفئران وكذلك فيفو السابقين تلطيخ من الكولاجين في أقسام الأنسجة باستخدام قفص الكولاجين الببتيدات المحاكاة التي يمكن أن تكون تسببت الصورة لهجن مع فروع الكولاجين التشويه والتحريف.

التصوير مبدل طبيعة الكولاجين السواحل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; و<em&gt; خارج الحي</em&gt; عن طريق التهجين أثار صور من المحاكاة محبوس الكولاجين الببتيدات

الهدف من هذا البروتوكول هو إظهار تقنية فعالة لعزل اللب الزجاجي الكامل والسليم والقشرة من عيون الخنازير بعد الوفاة.

زجاجي كله فكاهة تشريح لتحليل Vitreodynamic

علينا أن نظهر ثلاث تقنيات إعداد الأنسجة المختلفة للتصور المناعي للفئران بيريسيتيس microvascular الشبكية و أي البرد-أقسام والجامع--يتصاعد والعزلة ناقص التوتر لشبكة الأوعية الدموية.

البرد الشبكية-الفروع، الجامع--يتصاعد، والتحضيرات ناقص التوتر المفرج معزولة للتصور المناعي من بيريسيتيس ميكروفاسكولار

الهدف من هذا البروتوكول هو توصيف نموذج جديد للتنكس العصبي الزرق على أساس الكي الحراري 360 درجة للضفيرة الوعائية الحوفية ، مما يؤدي إلى ارتفاع ضغط الدم العيني تحت الحاد.

الكي الكامل الدائرة للضفيرة الوعائية الداكنة حول القزحية للزرق المستحث جراحيا في القوارض

هنا ، يتم تقديم طريقة سهلة المتابعة لزراعة الخلايا الظهارية الصبغية الصبغية الأولية في المختبر في المختبر .

الثقافة الأولية للخلايا الظهارية الصبغية الشبكية الخنازير

يحدد هذا البروتوكول خطوات محاذاة صور التصوير المقطعي للتماسك البصري للضوء المرئي في الجسم الحي (vis-OCTF) مع الصور متحدة البؤر خارج الجسم الحي لشبكية العين نفسها لغرض التحقق من مورفولوجيا الحزمة المحورية لخلية العقدة العقدية المرصودة في الصور في الجسم الحي .

محاذاة الألياف المقطعية للتماسك البصري للضوء المرئي مع الصور متحدة البؤر لشبكية العين للماوس نفسه

يصف هذا البروتوكول طريقة موثوقة للحصول على عمليات تجميد عالية الجودة لعيون الأرانب الكاملة. إنه يفصل تشريح عين الأرنب ، والتثبيت ، والتضمين ، وإجراءات التقسيم ، والتي يمكن تكييفها بسهولة لاستخدامها في أي دراسة تستخدم الكيمياء الهيستولوجية المناعية في عيون أكبر.

الحصول على عمليات تجميد عالية الجودة لعين الأرنب الكاملة 

تم فحص الخلايا المحيطة في الأوعية الدموية الشبكية عن طريق تلطيخ الفلورسنت المناعي باستخدام مستقبلات عامل النمو المشتق من الصفائح الدموية β بعد الحقن المداري الرجعي ليكتين الطماطم الفلوري. تمت معالجة شبكية العين المسماة بطريقة تطهير الأنسجة وتم تركيبها بالكامل لتصور المناظر ثلاثية الأبعاد للخلايا المحيطة بالأوعية الدموية الشبكية تحت مجهر متحد البؤر.

تصور ثلاثي الأبعاد للخلايا الوعائية الشبكية في الفئران عن طريق التلوين المناعي 

تعلم تصوير شبكة ألياف الكولاجين في الجسم الزجاجي باستخدام المجهر الانعكاسي متحد البؤر لدراسة تغيراته وعلاقتها بانفصال الشبكية.

تحضير عيون الخنازير للفحص المجهري للانعكاس متحد البؤر لتصور شبكة ألياف الكولاجين الزجاجي

استكشف المزيد من الفيديوهات