Name: عزل الحمض النووي الريبي من ظهارة عدسة العين للماوس والكتل السائبة لخلايا الألياف (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-10T12:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: تعلم عزل الحمض النووي الريبي من ظهارة عدسة العين والكتل السائبة لخلايا الألياف في الفئران باستخدام تقنية TRIzol والطرد المركزي. تُمكّن هذه الطريقة الباحثين من دراسة التعبير الجيني المختلف بين أنواع الخلايا.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Lovicu, F. J., Robinson, M. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLovicu%2C+FJ+%22Development+of+the+Ocular+Lens%22">Development of the Ocular Lens</a>. , Cambridge University Press. (2004).</li>
<li>Bassnett, S., Winzenburger, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometric+analysis+of+fibre+cell+growth+in+the+developing+chicken+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Morphometric analysis of fibre cell growth in the developing chicken lens.</a> Exp Eye Res. 76 (3), 291-302 (2003).</li>
<li>Kuszak, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+epithelial+and+fiber+cells+in+the+crystalline+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of epithelial and fiber cells in the crystalline lens.</a> Int Rev Cytol. 163, 305-350 (1995).</li>
<li>Yamamoto, N., Majima, K., Marunouchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+the+proliferating+activity+in+lens+epithelium+and+the+identification+of+tissue-type+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Mol+Morphol%22%5BJournal%5D)">A study of the proliferating activity in lens epithelium and the identification of tissue-type stem cells.</a> Med Mol Morphol. 41 (2), 83-91 (2008).</li>
<li>Bassnett, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+mechanism+of+organelle+degradation+in+the+vertebrate+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">On the mechanism of organelle degradation in the vertebrate lens.</a> Exp Eye Res. 88 (2), 133-139 (2009).</li>
<li>Bassnett, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fate+of+the+Golgi+apparatus+and+the+endoplasmic+reticulum+during+lens+fiber+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The fate of the Golgi apparatus and the endoplasmic reticulum during lens fiber cell differentiation.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 36 (9), 1793-1803 (1995).</li>
<li>Bassnett, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lens+organelle+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Lens organelle degradation.</a> Exp Eye Res. 74 (1), 1-6 (2002).</li>
<li>Bassnett, S., Beebe, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coincident+loss+of+mitochondria+and+nuclei+during+lens+fiber+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Coincident loss of mitochondria and nuclei during lens fiber cell differentiation.</a> Dev Dyn. 194 (2), 85-93 (1992).</li>
<li>Bassnett, S., Shi, Y., Vrensen, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+glass%3A+Structural+determinants+of+eye+lens+transparency%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Biological glass: Structural determinants of eye lens transparency.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 366 (1568), 1250-1264 (2011).</li>
<li>Vrensen, G. F., Graw, J., De Wolf, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+breakdown+during+terminal+differentiation+of+primary+lens+fibres+in+mice%3A+A+transmission+electron+microscopic+study%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Nuclear breakdown during terminal differentiation of primary lens fibres in mice: A transmission electron microscopic study.</a> Exp Eye Res. 52 (6), 647-659 (1991).</li>
<li>Counis, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+nuclear+degradation+during+lens+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Analysis of nuclear degradation during lens cell differentiation.</a> Cell Death Differ. 5 (4), 251-261 (1998).</li>
<li>Piatigorsky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lens+differentiation+in+vertebrates.+A+review+of+cellular+and+molecular+features%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Lens differentiation in vertebrates. A review of cellular and molecular features.</a> Differentiation. 19 (3), 134-153 (1981).</li>
<li>Al-Khudari, S., Donohue, S. T., Al-Ghoul, W. M., Al-Ghoul, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+compaction+of+lens+fibers+affects+the+structure+and+optical+properties+of+rabbit+lenses%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Age-related compaction of lens fibers affects the structure and optical properties of rabbit lenses.</a> BMC Ophthalmol. 7, 19(2007).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22World+Report+on+Vision%22">World Report on Vision</a>. , World Health Organization. Geneva. (2019).</li>
<li>Hashemi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+regional+prevalence+of+age-related+cataract%3A+A+comprehensive+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Global and regional prevalence of age-related cataract: A comprehensive systematic review and meta-analysis.</a> Eye (Lond). 34 (8), 1357-1370 (2020).</li>
<li>Cheng, C., Gong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+roles+of+eph%2Fephrin+signaling+in+the+mouse+lens%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Diverse roles of eph/ephrin signaling in the mouse lens.</a> PLoS One. 6 (11), e28147(2011).</li>
<li>Ibaraki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+brighter+future+for+cataract+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A brighter future for cataract surgery.</a> Nat Med. 3 (9), 958-960 (1997).</li>
<li>Scullica, L., Grimes, P., Mcelvain, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+autoradiographic+studies+of+the+lens+epithelium.+Normal+and+x-irradiated+rat+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Further autoradiographic studies of the lens epithelium. Normal and x-irradiated rat eyes.</a> Arch Ophthalmol. 70, 659-665 (1963).</li>
<li>Caraguel, C. G., Stryhn, H., Gagne, N., Dohoo, I. R., Hammell, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+a+cutoff+value+for+real-time+polymerase+chain+reaction+results+to+fit+a+diagnostic+purpose%3A+Analytical+and+epidemiologic+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Diagn+Invest%22%5BJournal%5D)">Selection of a cutoff value for real-time polymerase chain reaction results to fit a diagnostic purpose: Analytical and epidemiologic approaches.</a> J Vet Diagn Invest. 23 (1), 2-15 (2011).</li>
<li>60/280 and 260/230 ratios. , Thermo Scientific. 
 <a target="_blank" href="https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/CAD/Product-Bulletins/T123-NanoDrop-Lite-Interpretation-of-Nucleic-Acid-260-280-Ratios.pdf">https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/CAD/Product-Bulletins/T123-NanoDrop-Lite-Interpretation-of-Nucleic-Acid-260-280-Ratios.pdf</a> (2009).</li>
<li>Beyer, E. C., Kistler, J., Paul, D. L., Goodenough, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisera+directed+against+connexin43+peptides+react+with+a+43-kd+protein+localized+to+gap+junctions+in+myocardium+and+other+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Antisera directed against connexin43 peptides react with a 43-kd protein localized to gap junctions in myocardium and other tissues.</a> J Cell Biol. 108 (2), 595-605 (1989).</li>
<li>Gong, X., Cheng, C., Xia, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexins+in+lens+development+and+cataractogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Membr+Biol%22%5BJournal%5D)">Connexins in lens development and cataractogenesis.</a> J Membr Biol. 218 (1-3), 9-12 (2007).</li>
<li>Leonard, M., Zhang, L., Bleaken, B. M., Menko, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+n-cadherin+linked+c-src+and+fyn+kinases+in+lens+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for n-cadherin linked c-src and fyn kinases in lens development.</a> Dev Dyn. 242 (5), 469-484 (2013).</li>
<li>Leonard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+n-cadherin+junctions+and+their+role+as+epicenters+of+differentiation-specific+actin+regulation+in+the+developing+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Modulation of n-cadherin junctions and their role as epicenters of differentiation-specific actin regulation in the developing lens.</a> Dev Biol. 349 (2), 363-377 (2011).</li>
<li>Logan, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-cadherin+regulates+signaling+mechanisms+required+for+lens+fiber+cell+elongation+and+lens+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">N-cadherin regulates signaling mechanisms required for lens fiber cell elongation and lens morphogenesis.</a> Dev Biol. 428 (1), 118-134 (2017).</li>
<li>Maddala, R., Nagendran, T., Lang, R. A., Morozov, A., Rao, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rap1+gtpase+is+required+for+mouse+lens+epithelial+maintenance+and+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Rap1 gtpase is required for mouse lens epithelial maintenance and morphogenesis.</a> Dev Biol. 406 (1), 74-91 (2015).</li>
<li>Parreno, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methodologies+to+unlock+the+molecular+expression+and+cellular+structure+of+ocular+lens+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Methodologies to unlock the molecular expression and cellular structure of ocular lens epithelial cells.</a> Front Cell Dev Biol. 10, 983178(2022).</li>
<li>Paul, D. L., Ebihara, L., Takemoto, L. J., Swenson, K. I., Goodenough, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin46%2C+a+novel+lens+gap+junction+protein%2C+induces+voltage-gated+currents+in+nonjunctional+plasma+membrane+of+xenopus+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Connexin46, a novel lens gap junction protein, induces voltage-gated currents in nonjunctional plasma membrane of xenopus oocytes.</a> J Cell Biol. 115 (4), 1077-1089 (1991).</li>
<li>Rong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+gja8+%28alpha8+connexin%29+in+mice+leads+to+microphthalmia+associated+with+retardation+of+lens+growth+and+lens+fiber+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Disruption of gja8 (alpha8 connexin) in mice leads to microphthalmia associated with retardation of lens growth and lens fiber maturation.</a> Development. 129 (1), 167-174 (2002).</li>
<li>Terrell, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+of+mouse+lens+epithelial+cell+lines+and+their+suitability+to+study+RNA+granules+and+cataract+associated+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization of mouse lens epithelial cell lines and their suitability to study RNA granules and cataract associated genes.</a> Exp Eye Res. 131, 42-55 (2015).</li>
<li>White, T. W., Bruzzone, R., Goodenough, D. A., Paul, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+cx50%2C+a+functional+member+of+the+connexin+family+of+gap+junction+proteins%2C+is+the+lens+fiber+protein+mp70%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Mouse cx50, a functional member of the connexin family of gap junction proteins, is the lens fiber protein mp70.</a> Molecular Biology of the Cell. 3 (7), 711-720 (1992).</li>
<li>Xia, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+cell+clusters+and+upregulated+Aqp1+in+connexin+50+knockout+lens+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Altered cell clusters and upregulated Aqp1 in connexin 50 knockout lens epithelium.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 65 (11), 27(2024).</li>
<li>Beyer, E. C., Paul, D. L., Goodenough, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin43%3A+A+protein+from+rat+heart+homologous+to+a+gap+junction+protein+from+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Connexin43: A protein from rat heart homologous to a gap junction protein from liver.</a> J Cell Biol. 105 (6 Pt 1), 2621-2629 (1987).</li>
<li>Gong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+Alpha3+connexin+gene+leads+to+proteolysis+and+cataractogenesis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Disruption of Alpha3 connexin gene leads to proteolysis and cataractogenesis in mice.</a> Cell. 91 (6), 833-843 (1997).</li>
<li>Xu, L., Overbeek, P. A., Reneker, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+analysis+of+E-%2C+N-+and+P-cadherin+expression+in+mouse+eye+development%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Systematic analysis of E-, N- and P-cadherin expression in mouse eye development.</a> Exp Eye Res. 74 (6), 753-760 (2002).</li>
<li>Nishina, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax6+expression+in+the+developing+human+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Pax6 expression in the developing human eye.</a> Br J Ophthalmol. 83 (6), 723-727 (1999).</li>
<li>Wistow, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gamman-crystallin+and+the+evolution+of+the+betagamma-crystallin+superfamily+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Gamman-crystallin and the evolution of the betagamma-crystallin superfamily in vertebrates.</a> FEBS J. 272 (9), 2276-2291 (2005).</li>
<li>Cheng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue%2C+cellular%2C+and+molecular+level+determinants+for+eye+lens+stiffness+and+elasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Ophthalmol+%28Lausanne%29%22%5BJournal%5D)">Tissue, cellular, and molecular level determinants for eye lens stiffness and elasticity.</a> Front Ophthalmol (Lausanne). 4, 1456474(2024).</li>
<li>Huynh, P. N., Cheng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial-temporal+comparison+of+eph%2Fephrin+gene+expression+in+ocular+lenses+from+aging+and+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Ophthalmol+%28Lausanne%29%22%5BJournal%5D)">Spatial-temporal comparison of eph/ephrin gene expression in ocular lenses from aging and knockout mice.</a> Front Ophthalmol (Lausanne). 4, 1410860(2024).</li>
<li>Zelenka, P. S., Gao, C. Y., Saravanamuthu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+culture+of+rat+lens+epithelial+explants+for+studying+terminal+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation and culture of rat lens epithelial explants for studying terminal differentiation.</a> J Vis Exp. (31), e1519(2009).</li>
</ol>

عدسة العين هي عضو شفاف يركز الضوء بدقة على شبكية العين لإنتاج صورة واضحة. تتكون العدسة من نوعين رئيسيين من الخلايا: طبقة أحادية من الخلايا الظهارية التي تغطي نصف الكرة الأمامي والخلايا الليفية التي تشكل الكتلة السائبة للأنسجة (الشكل 1). العدسة مغلفة بغشاء قاعدي كولاجيني يعرف باسم كبسولة العدسة ، والتي تلتصق بها الخلايا الظهارية بإحكام. مع نمو العدسة ، تتكاثر الخلايا الظهارية في خط الاستواء وتتمايز إلى قذائف ناشئة من الخلايا الليفية التي يتم وضعها في طبقات على العدسة بطريقة متحدة المركز1،2،3. يعتمد نمو العدسة مدى الحياة على التكاثر المستمر لهذه المجموعة الصغيرة من الخلايا الظهارية الاستوائية التي تشكل منطقة الإنبات4. عندما تنضج خلايا الألياف ، تتحلل جميع العضيات الخلوية للتخلص من الأجسام المشتتة للضوء5،6،7،8،9،10،11 والحفاظ على شفافية الأنسجة ، ويتم ضغط خلايا الألياف الأعمق في النهاية ، مما ينتج عنه مركز عدسة صلب9،12. بسبب كبسولة العدسة المحيطة ، لا يوجد دوران للخلايا في العدسة ، وتبقى الألياف المنوية في مركز العدسة طوال الحياة حيث يتم إضافة ألياف جديدة في محيط الأنسجة أو القشرة. تتمتع الخلايا الليفية للعدسة بخصائص بصرية مختلفة اعتمادا على عمرها ويمكن أن توفر لقطة زمنية للخصائص البيولوجية المختلفة في كل مرحلة13.
على الرغم من الخيارات الجراحية المتاحة ، فإن إعتام عدسة العين ، الذي يعرف بأنه أي عتامة في العدسة الشفافة عادة ، يظل السبب الرئيسي للعمى في العالم14. يمكن أن يظهر إعتام عدسة العين في ظهارة العدسة أو القشرة أو النواة مع اختلاف الفيزيولوجيا المرضية15. ومع ذلك ، فإن الآليات الخلوية والجزيئية لتكوين إعتام عدسة العين لا تزال غير واضحة16،17. لفهم كيفية منع هذه الأنواع المختلفة من إعتام عدسة العين بشكل أفضل وتطوير بدائل للجراحة ، يجب أن نفهم بشكل أفضل كيف تحافظ هذه الأنواع المختلفة من الخلايا على توازنها في العدسة.
تلعب الخلايا الظهارية والألياف أدوارا فسيولوجية مختلفة في العدسة. يتصارع تكاثر الخلايا ، على سبيل المثال ، على ظهارة العدسة18. وفي الوقت نفسه ، تشتمل ألياف العدسة على الكتلة السائبة للعدسة ، مما يوفر الهيكل وخصائص الانكسار للعدسة9. للحصول على منظور أكثر دقة للعمليات البيولوجية التي تنطوي عليها المقصورات المختلفة للعدسة ، يجب فحص الخلايا الظهارية والألياف بشكل منفصل. هنا ، نقدم طريقة لعزل الظهارة من الكتلة السائبة للخلايا الليفية ، واستخراج mRNA من كل جزء ، وتحليل هذه النصوص باستخدام تفاعل البوليميراز الكمي الكمي للنسخ العكسي (RT-qPCR).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69079/69079fig1.jpg"> 
الشكل 1: مخطط تشريح العدسة. تتكون العدسة من نوعين من الخلايا ، خلايا ظهارية أحادية الطبقة (زرقاء وبرتقالية) تغطي نصف الكرة الأمامي وكتلة كبيرة من ألياف العدسة (بيضاء). النسيج محاط بغشاء كولاجيني رقيق يعرف باسم كبسولة العدسة (تان). الخلايا الظهارية الأمامية (الزرقاء) هادئة بينما تتكاثر الخلايا الظهارية الاستوائية (البرتقالية) وتتمايز وتتمدد لتصبح طبقات جديدة من الخلايا الليفية (بيضاء) في محيط العدسة. يتم تراكب الأجيال الجديدة من الخلايا الليفية على الأجيال السابقة من الألياف في قذائف متحدة المركز. يتم ضغط أقدم خلايا ألياف العدسة في وسط الأنسجة. تم تعديل هذا الرقم من Cheng (2024) 38. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69079/69079fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

<table><tbody><tr><td>أجهزة الطرد المركزي والدوار</td><td>فيشر العلمية</td><td>14285554 م</td><td></td></tr><tr><td>الكلوروفورم ، درجة HPLC</td><td>ألفا عيصر</td><td>22920</td><td></td></tr><tr><td>الإيثانول (190 مقاوم)</td><td>مختبرات ديكون</td><td>2801</td><td></td></tr><tr><td>الإيثانول (200 برهان)</td><td>فيشر الريكواشف الحيوية</td><td>BP2818</td><td></td></tr><tr><td>فيشربراند بيليه مدقة</td><td>فيشر العلمية</td><td>12-141-363</td><td></td></tr><tr><td>ملقط منحني. ملاقط الطلاب # 7</td><td>الأدوات الدقيقة العالمية</td><td>501981</td><td></td></tr><tr><td>ملقط ، مستقيم. دومون # 5</td><td>أدوات العلوم الجميلة</td><td>11252-40</td><td></td></tr><tr><td>ملقط ، مستقيم. ملاقط الطلاب # 4</td><td>الأدوات الدقيقة العالمية</td><td>501978</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes صغير</td><td>كيمبرلي كلارك</td><td>34155</td><td>مسح المهام الدقيق</td></tr><tr><td>MicroAmp قضيب فيلم لاصق</td><td>الأنظمة الحيوية التطبيقية</td><td>4333183</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp EnduraPlate لوحة تفاعل واضحة سريعة 96 بئر مع الباركود</td><td>الأنظمة الحيوية التطبيقية</td><td>4483485</td><td></td></tr><tr><td>الماصات الدقيقة</td><td>إيبندورف</td><td>&nbsp; 01-671-120</td><td></td></tr><tr><td>مجهر ، تشريح</td><td>كارل زايس</td><td>SteREO ديسكفري.V8</td><td></td></tr><tr><td>غطاء لاصق بصري صغير أمبير</td><td>الأنظمة الحيوية التطبيقية</td><td>4360954</td><td></td></tr><tr><td>MiniAmp Thermal Cycler</td><td>الأنظمة الحيوية التطبيقية</td><td>أ37834</td><td></td></tr><tr><td>MixMate لوحة دوامة خلاط</td><td>إيبندورف</td><td>5353000529</td><td></td></tr><tr><td>المياه الجزيئية</td><td>فيشر العلمية</td><td>BP28191</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop مقياس الطيف الضوئي للأشعة فوق البنفسجية Microvolume</td><td>ثيرمو ساينتفيك</td><td>ND-ONE-W</td><td></td></tr><tr><td>نوك ميكروويل ميني صواني</td><td>فيشر العلمية</td><td>12-565-154</td><td>علبة تشريح</td></tr><tr><td>أنابيب PCR</td><td>VWR</td><td>201007-012</td><td></td></tr><tr><td>طبق بتري ، 60 مم × 15 مم</td><td>فيشر العلمية</td><td>FB0875713A</td><td></td></tr><tr><td>محلول ملحي من الفوسفات ، 1x دولبيكو</td><td>جيبكو</td><td>14190-136</td><td></td></tr><tr><td>نصائح ماصة ، 10 & تخرج L</td><td>الولايات المتحدة الأمريكية العلمية</td><td>1161-3700</td><td></td></tr><tr><td>نصائح ماصة ، 1250 & تخرج L XL</td><td>الولايات المتحدة الأمريكية العلمية</td><td>1161-1720</td><td></td></tr><tr><td>نصائح ماصة ، 200 & تخرج الملف الشخصي</td><td>الولايات المتحدة الأمريكية العلمية</td><td>1163-1700</td><td></td></tr><tr><td>نظام QuantStudio 3 PCR في الوقت الحقيقي</td><td>الأنظمة الحيوية التطبيقية</td><td>ط28567</td><td></td></tr><tr><td>النسخ العكسي ، SuperScript IV VILO &nbsp ؛</td><td>إنفيتروجين</td><td>11756050</td><td>نسخ عكسي عالي المعالجة ومقاوم للحرارة</td></tr><tr><td>مجموعة RNA النظيفة والمكثفة 5</td><td>زيمو</td><td>ز1013</td><td></td></tr><tr><td>RNase خالية من المياه</td><td>فيشر الريكواشف الحيوية</td><td>BP2819</td><td></td></tr><tr><td>RNaseZap</td><td>سيغما</td><td>التوصية 2020</td><td>محلول إزالة التلوث RNase</td></tr><tr><td>أجهزة الطرد المركزي الدقيقة SealRite 1.5 مل أنابيب</td><td>الولايات المتحدة الأمريكية العلمية</td><td>1615-5500</td><td></td></tr><tr><td>سوبر فاين فاناس 8 سم</td><td>الأدوات الدقيقة العالمية</td><td>501778</td><td>مقص</td></tr><tr><td>TaqMan FAST Advanced Master Mix ل qPCR</td><td>الأنظمة الحيوية التطبيقية</td><td>4444557</td><td></td></tr><tr><td>مسبار TaqMan للتعبير الجيني (FAM) (MTO)</td><td>ثيرموفيشر العلمية</td><td>4448892</td><td></td></tr><tr><td>تريزول</td><td>إنفيتروجين</td><td>15596026</td><td>محلول حمض الجوانيدينيوم والفينول</td></tr><tr><td>خلاط دوامة</td><td>ثيرمو ساينتفيك</td><td>88880017</td><td></td></tr></tbody></table>

عزل الحمض النووي الريبي من ظهارة عدسة العين للماوس والكتل السائبة لخلايا الألياف

RNA Isolation from Mouse Ocular Lens Epithelium and Fiber Cell Bulk Masses

تم عزل ظهارة العدسة والألياف من الفئران البرية التي يبلغ عمرها 6 إلى 7 أسابيع. تم استخدام ثلاثة فئران في هذه التجارب ، وتم تجميع كبسولتين من العدسة أو كتلتين من الخلايا الليفية من كل فأر معا للحصول على تكرار بيولوجي واحد. كما هو موضح في البروتوكول ، تم استخراج الحمض النووي الريبي باستخدام فصل طور كاشف TRIzol. في المتوسط ، أنتج زوج من ظهارة العدسة والكتل السائبة من الألياف 0.8 ميكروغرام (SD ± 0.2) و 9.7 ميكروغرام (SD ± 2.3) من الحمض النووي الريبي ، على التوالي. كان متوسط التركيز في شطف 15 ميكرولتر 55.4 نانوغرام / ميكرولتر...

The lens is a specialized, transparent tissue in the anterior chamber of the eye that is comprised of two major cell types, epithelial cells and fiber ...

rna-isolation-from-mouse-ocular-lens-epithelium-fiber-cell-bulk

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

هنا، نحن وصف بروتوكول ميكروديسيكشن التقاط ليزر استنساخه (LCM) لعزل trabecular ميشوورك (TM) لتحليل الحمض النووي الريبي المتلقين للمعلومات. القدرة على تحليل التغيرات في التعبير الجيني في TM سوف تساعد في فهم الآليات الجزيئية الكامنة لأمراض العين المتعلقة بالخرائط المواضيعية.

ليزر التقاط ميكروديسيكشن من ميشوورك ترابيكولار نقية جداً من عيون الماوس لتحليل التعبير الجيني

الغدة الدمعية (LG) لديها نوعين من الخلايا التعبير عن α-السلس العضلات الاكتين (αsma): الخلايا العضلية (mecs) و pericytes. MECs هي من أصل الجلد ، وجدت في العديد من الانسجه الغديه ، في حين بيريسيلات هي خلايا العضلات الملساء الاوعيه الدموية من أصل باطن الجلد. هذا البروتوكول يعزل MECs و pericytes من murine LGs.

عزل الخلايا العضلية الفطرية من الغدد الفكه البالغة الدمعية

يصف هذا البروتوكول طرقا لإعداد خلايا ألياف عدسة العين المحيطية والناضجة والنووية للتلطيخ المناعي لدراسة التداخل المعقد من خلية إلى أخرى وبنية الغشاء.

التحضير وتلطيخ التألق المناعي للحزم وخلايا الألياف المفردة من قشرة ونواة عدسة العين

تحدد هذه المخطوطة بروتوكول فيديو مفصل لزراعة الخلايا الظهارية للعدسة الأولية (LECs) ، بهدف تحسين قابلية التكاثر والمساعدة في البحث في إعتام عدسة العين وعتامة الكبسولة الخلفية (PCO). يقدم إرشادات خطوة بخطوة حول تشريح العدسة ، وعزل LECs ، والتحقق من صحتها ، وهو بمثابة دليل قيم ، خاصة للوافدين الجدد في هذا المجال.

تحسين ثقافة الخلايا الظهارية للعدسة الأساسية للماوس: دليل شامل للتربسين

تصف البروتوكولات الحالية تصويرا جديدا كاملا لتصور الهياكل المحيطية في عدسة العين مع طرق لتحديد كمية الصورة. يمكن استخدام هذه البروتوكولات في الدراسات لفهم العلاقة بين الهياكل المجهرية للعدسة بشكل أفضل وتطوير / وظيفة العدسة.

تصوير كامل التركيب لتصور وقياس بنية العدسة الطرفية ومورفولوجيا الخلية وتنظيمها

تصف هذه المخطوطة بروتوكولا مفصلا لعزل خلايا مولر الدبقية في شبكية العين عن عيون الفئران. يبدأ البروتوكول باستئصال وتشريح عيون الفأر ، يليه عزل خلايا مولر وبذرها وزراعتها.

عزل خلايا مولر الدبقية الدبقية لشبكية الفأر الأولية

تعمل ظهارة الشبكية الصبغية (RPE) كحاجز حاسم بين المشيمية والشبكية ، مما يعزز صحة ووظيفة أنواع خلايا الشبكية ، مثل المستقبلات الضوئية. هنا ، نصف بروتوكولا بسيطا وفعالا لعزل وزراعة الفئران البالغة RPE.

طريقة مبسطة لعزل وزراعة الخلايا الظهارية الصبغية للشبكية من الفئران البالغة

لقد حددنا مؤخرا تصلب الشعيرات الدموية في شبكية العين كنموذج جديد لضعف الشبكية المرتبط بمرض السكري. يوضح هذا البروتوكول خطوات عزل الشعيرات الدموية في شبكية الفأر والمصفوفة تحت البطانية من مزارع بطانة الشبكية ، متبوعا بوصف لتقنية قياس الصلابة باستخدام مجهر القوة الذرية.

عزل الشعيرات الدموية في شبكية الفأر والمصفوفة تحت البطانية لقياس الصلابة باستخدام مجهر القوة الذرية

تظهر شبكية العين تنظيما مكانيا معقدا عبر هيكلها الرقائقي. تتطلب تقنيات النسخ المكاني والتسلسل المكانية الحديثة أقساما &lt; الأنسجة بسمك 20 ميكرومتر ، مما يحد من قابليتها لتطبيق أبحاث الشبكية. تنتج طريقة التقطيع بالتبريد المجمدة حديثا أقساما رقيقة من شبكية العين مع الحفاظ على العلاقات المكانية المستوية ، مما يتيح رسم خرائط جزيئية شاملة عبر الصفائح.

أون الوجه التقطيع بالتبريد لشبكية العين الفأرية للتحليل الجزيئي المكاني عالي الأبعاد

هنا، نقدم بروتوكولا للحصول على تعليق خلية واحدة عالية الجودة من قرنيات الفأر الكاملة من خلال الهضم المتسلسل باستخدام الكولاجيناز A والتريبسين. تنتج هذه الطريقة خلايا مفردة قابلة للحياة ذات سلامة RNA عالية، مما يجعلها متوافقة مع التطبيقات اللاحقة مثل تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية وقياس خلية التدفقy.

بروتوكول لجمع التعليق أحادي الخلية من قرنية الفئران

تعلم عزل الحمض النووي الريبي من ظهارة عدسة العين والكتل السائبة لخلايا الألياف في الفئران باستخدام تقنية TRIzol والطرد المركزي. تُمكّن هذه الطريقة الباحثين من دراسة التعبير الجيني المختلف بين أنواع الخلايا.

عزل الحمض النووي الريبي من ظهارة عدسة العين للماوس والكتل السائبة لخلايا الألياف

استكشف المزيد من الفيديوهات