نموذج بتر الطرف الخلفي تحت الركبة للجرذ وإعادة تعصيب عضلية مستهدفة فورية

يبحث بحث ما في الألم المرتبط بإصابة الأعصاب وبتر الأطراف، وكيف يمكن أن يؤثر إعادة توجيه الأعصاب على هذا الألم. وبما أن عملية البتر تحد من إجراء تقييمات الألم القياسية، فإن هذا البروتوكول يستخدم اختبارات معدلة وبديلة لقياس سلوكيات الألم بعد عملية البتر.

للبدء، يتم إحضار جرذ من سلالة Sprague Dawley يتراوح عمره بين 8 إلى 10 أسابيع ويزن ما بين 250 إلى 300 grams. قم بتشغيل وسادة التدفئة وتجهيز مجال جراحي معقم. قم بترتيب جميع الأدوات والمواد المعقمة المطلوبة للجراحة.

بعد تخدير الجرذ باستخدام الإيزوفلوران بجرعة استهلالية بنسبة 4% وجرعة صيانة تتراوح بين 1 إلى 2%، قم بحلاقة المنطقة بدءاً من أسفل الظهر وصولاً إلى كامل طول الطرف الخلفي. نظف موقع الجراحة بمحلول بوفيدون أيودين المطهر، ثم امسحه بمسحة كحولية تحضيرية. كرر هذه العملية مرتين إضافيتين.

استخدم حقنة توبيركولين لحقن ملوكسيكام بجرعة 1 mg/kg تحت الجلد. استخدم مسطرة لتحديد خط مفصل الركبة، ثم ضع علامتين إضافيتين على مسافة 2 cm و 3 cm في الاتجاه القاصي من الركبة.

استخدم مشرطاً لإجراء شق جلدي محيطي على بُعد ثلاثة سنتيمترات من الجهة القاصية للركبة. قم بإجراء تشريح كليل وحاد لفصل الجلد بشكل محيطي عن العضلات الكامنة تحته حتى يتراجع الجلد بحرية. كرر عملية التقويض عبر طبقات العضلات الأعمق للتشريح وصولاً إلى العظم مع الحفاظ على المستويات النسيجية.

استخدم قلماً لتحديد موقع عظمي الظنبوب والشظية على بُعد سنتيمتر واحد من الجهة الدانية بالنسبة للشق المحيطي. استخدم مقصات عظام صغيرة لقطع الظنبوب والشظية عند الموقع المحدد. استخدم الكي الكهربائي للسيطرة على النزيف وتحقيق الإرقاء.

افحص طرف العظمة وقم ببرد أو تشذيب الحواف الحادة حسب الحاجة. استخدم خيط جراحة مضفر قابل للامتصاص من قياس 4-O لتقريب الحواف الأمامية للمقصورات العضلية فوق عظمة الساق، وثبتها بأربع إلى ست غرز متقطعة متباعدة بالتساوي. قم بمحاذاة وإغلاق المقصورات العضلية الأمامية والخلفية معاً فوق العظمة لتشكيل وسادة عضلية.

أغلق الجلد جانبياً باستخدام غرز متقطعة من خيوط مضفرة قابلة للامتصاص بمقاس 4-O، مع تجنب وضعها على الجزء الحامل للوزن من الجذع. ضع لاصق الجلد على طول خط الشق. قم بعمل شق طولي في الثلم الألوي بطول 1.5 إلى 2 سنتيمتر، على بعد خمسة مليمترات تقريباً خلف عظم الفخذ.

استخدم التشريح غير الحاد لفصل العضلات الألوية وعضلات المأبض، وكشف العصب الوركي في المنطقة القريبة من تفرعه الثلاثي. حدد الفروع الحركية القريبة، بما في ذلك الفرع الكبير الموجود أسفل العضلة الفخذية الذيلية أو CFM وتفرعاتها. ارفع عضلة CFM باستخدام الملقط وقم بقطعها.

استخدم ملقط Dumont للجراحة المجهرية الدقيقة لتحييد فروع العصب نصف الغشائي والعضلة ذات الرأسين الفخذية عن طريق التشريح الكليل. أمسك بغلاف العصب (epinurium) وافتحه طولياً باستخدام مقص زنبركي منحني دقيق. ثم قم بفصل فروع العصب.

حافظ على الفرع الذنبي الفخذي وقم بفصل الفروع المتبقية بالقرب من الجذع الوركي. قم بثني الفروع الحركية نحو الأسفل لتسهيل عملية المواءمة. استخدم مقصات زنبركية منحنية لفتح غلاف العصب الخارجي وفصله لتحييد التفرع الثلاثي للعصب الوركي.

استخدم ملاقط دقيقة لفصل الفروع العصبية برفق. استخدم الملاقط للإمساك بكل من الفروع الثلاثة، وهي العصب الشظوي المشترك، والعصب الظنبوبي، والعصب السورالي، على مسافة تتراوح من 5 إلى 10 مليمترات بعيداً عن نقطة التفرع الثلاثي. وأثناء تطبيق الشد، اقطع كل عصب من الناحية القاصية واستأصل جزءاً يتراوح طوله من 5 إلى 10 مليمترات من القطعة.

استخدم خيوط نايلون 10-0 لإجراء المفاغرات عن طريق توصيل العصب العجاني المشترك بالعصب نصف الغشائي أولاً. استخدم ثلاث عقد على الأقل لكل غرزة. تأكد من وضع الخيوط دون شد، مع تجنب الإفراط في الربط أو ثني العصب، وقم بتوزيع المفاغرات دون وجود زوايا حادة.

بعد ذلك، يتم توصيل العصب الظنبوبي بالفرع الكبير للعضلة ذات الرأسين الفخذية، وتوصيل العصب الساقي بالفرع الصغير للعضلة ذات الرأسين الفخذية. أما في حالات البتر بدون إعادة تعصيب العضلات المستهدفة، فبعد كشف الفروع الوركية، يُستخدم خيط حريري 5-O وملقط لربط الأعصاب الشظوية المشتركة والظنبوبية والساقية، مع التأكد من أن الرباط يضغط على العصب ويتم تثبيته بأربع عقد مربعة. يتم سحب كل عصب برفق نحو الجهة القريبة باستخدام العقدة، ثم يتم قطعه على مسافة تتراوح بين 1 إلى 2 ملم من الجهة القاصية للرباط.

قم بإزالة 10 millimeters من الجزء القاصي للعصب، ثم تابع عملية البتر كما تم توضيحه سابقاً. بعد إغلاق الشق الجراحي، ضع لاصقاً جلدياً على طول خط الشق. راقب الجرذ يومياً لمدة سبعة أيام للتأكد من سلامة الجرح، وعدم وجود علامات عدوى أو ألم أو ضيق، وتدخل إذا لزم الأمر وفقاً لإرشادات IACUC.

انخفضت عتبات السحب الميكانيكي التي تم قياسها بواسطة اختبار Von Frey بشكل ملحوظ عن المستوى المرجعي، وظلت منخفضة عبر النقاط الزمنية التي تلت عملية البتر. وأظهر اختبار الدبوس ميلاً نحو زيادة الاستجابات الضارة بمرور الوقت مقارنة بالمستوى المرجعي. وكانت فرط الحساسية للبرد في الجزء المتبقي من الطرف قوية وظلت مستمرة مقارنة بالمستوى المرجعي عبر جميع النقاط الزمنية.

يتيح هذا البروتوكول تقييم استراتيجيات مختلفة للتعامل مع الأعصاب في سياق بتر الأطراف. ويكمن التحدي الأكبر عند تنفيذ هذا البروتوكول في التعامل غير الرضحي مع الأعصاب التي يقل عرضها عن 1 mm. ويمكن للدراسات المستقبلية التوسع في هذا العمل لتحسين النماذج وتطوير طرق أكثر موثوقية لدراسة ألم الطرف الشبحي.