طريقة مكررة لتوصيل بليوميسين داخل القصبة الهوائية لنماذج الفئران القابلة للتكاثر وقليلة التوغل للتليف الرئوي

نهدف إلى تطوير نموذج توصيل دوائي قابل للتكرار، قليل التوغل، يعتمد على الرذاذ، لتحفيز التليف الرئوي وتحسين تقييم الأدوية قبل السريري. يتيح نموذجنا توصيل الأدوية بشكل منتظم وموثوق مع تقليل الصدمات الجراحية وتحسين قابلية التكرار عبر التجارب. نخطط لتطبيق هذا النموذج لاختبار علاجنا الفريد للتليف الرئوي وإصابة رئوية سريرية.

للبدء، باستخدام حقنة معقمة بسعة ملليلتر واحد، اسحب ثلاثة ملليتر من كلوريد الصوديوم 0.9٪ المعقم، ثم حقن كلوريد الصوديوم في قارورة تحتوي على 15 وحدة من هيدروكلوريد البلوميسين. حرك القارورة بلطف حتى يذوب مسحوق البليوميسين بالكامل للحصول على محلول مخزون بسعة خمس وحدات لكل مليلتر. أليكوت المحلول الأصلي في أنابيب طرد مركزية دقيقة معقمة بسعة 1.5 ملليلتر.

ثم جهز محاليل عاملة بسعة 3.75 وحدة لكل ملليلتر و2.5 وحدة لكل ملليلتر عن طريق تخفيف المخزن بمحلول ملحي معقم. جهز جهاز توصيل الهباء الجوي لضمان وجود إبرة السحاب، وحقنة النفخ، وعمود الجرعات جميعها. اغمر حقنة توصيل الهباء الجوي في محلول ملحي معقم.

استنشق السائل ببطء، توقف لمدة ثماني ثوان، ثم طرد السائل بسرعة. ثم أعد ملء الحقنة بمحلول ملحي معقم بعد الطرد النهائي. قم بتثبيت إبرة الرذاذ وتأكد من أن الوصلة مملوءة بالمحلول الملحي.

ثم أغمر الإبرة المجمعة بالكامل في محلول ملحي معقم. لتحضير إبرة الرذاذ بمحلول البلوميسين، يتم استنشاقها وإخراجها ثلاث مرات مع توقفات مدتها ثماني ثوان بين كل دورة. استنشق محلول البلومايسين العامل إلى الحقنة.

أدخل عمودا بجرعة 25 ميكرولتر فوق عمود 50 ميكرولتر لمعايرة الحجم الكلي. طرد أي محلول زائد. ثم ضع الفأر المخدر على منصة التنبب.

اربط القواطع العلوية بحلقة السلك وثبت الأطراف لتثبيت الفأرة في مكانها. باستخدام ملقط منحني، اسحب اللسان برفق. أدخل منظار حنجرة صغير لرؤية وكشف الحنجرة.

ثم أدخل إبرة الرذاذ عموديا عبر الحنيب المكشوف وتوصيل رذاذ البليوميسين بسرعة إلى القصبة الهوائية. بعد ذلك، ضع الفأرة على وسادة تدفئة للحفاظ على درجة حرارة الجسم. راقب الفأر باستمرار حتى يتعافى تماما من التخدير.

قم بعمل قرص على إصبع القدم للتحقق من ردود الفعل والتأكد من أن الفأر على قيد الحياة. كشفت صبغات الهيماتوكسيلين والإيوزين عن سماكة خفيفة في جدار السنخة وتليف موضعي في مجموعة البلومايسين التي تبلغ خمس وحدات لكل كيلوغرام. بينما أظهرت مجموعة 7.5 وحدة لكل كيلوغرام انهيارا واسعا في الحويصلات الهوائية وآفات ليفية شديدة.

أظهر قياس درجة آشكروفت المعدلة زيادة تعتمد على الجرعة في شدة التليف في الفئران المعالجة بالبليومايسين مقارنة بالفئران التي تم علاجها بالمحلول الملحي. كشفت صبغة ماسون الثلاثية الألوان عن زيادة ترسيب الكولاجين في مجموعة الخمس وحدات لكل كيلوغرام والتليف الخلالي الواسع في مجموعة 7.5 وحدة لكل كيلوغرام. أكد قياس المناطق الإيجابية للكولاجين زيادة كبيرة تعتمد على الجرعة في ترسيب الكولاجين بعد علاج البليومايسين.

أظهر التلوين المناعي الكيميائي زيادة في التعبير عن بروتين Col1A1 في رئتي مجموعتي البليومايسين مع ملاحظة تلوين أقوى وأوسع في مجموعة 7.5 وحدة لكل كيلوغرام. كان محتوى الهيدروكسي برولين أعلى بشكل ملحوظ في كلا المجموعتين المعالجتين بالبليومايسين، مما أكد زيادة تراكم الكولاجين في أنسجة الرئة. انخفض التزام الرئة الساكن بشكل ملحوظ بطريقة تعتمد على الجرعة في المجموعات التي عولجت بالبليومايسين.

كانت القدرة الاستنشاقية أقل بشكل ملحوظ فقط في مجموعة البلومايسين 7.5 وحدة لكل كيلوغرام مقارنة بالمحلول الملحي. ارتفعت نسبة الإيلاستينات في الجهاز التنفسي بشكل ملحوظ في مجموعة 7.5 وحدة لكل كيلوغرام مقارنة بالمحلول الملحي. انخفض التزام الجهاز التنفسي بشكل كبير فقط في مجموعة 7.5 وحدة لكل كيلوغرام.