Name: Shrinky - دينك قطرة الشنق : وسيلة بسيطة إلى نموذج الثقافة والأجرام مضغي الشكل (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-03-05T22:18:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: تعلم طريقة سريعة لتشكيل الأجسام الجنينية باستخدام قوالب Shrinky Dink المصغرة. تتيح هذه التقنية التحكم الدقيق في عدد الخلايا الجذعية وتقليل الجهد اليدوي مقارنة بطريقة قطرة التعليق التقليدية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نود أن نشكر CIRM لدعم هذا العمل. وقد تم التبرع بسخاء خط خلية من الدكتور أندراس ناجي في مستشفى ماونت سيناي في تورنتو ، أونتاريو.

1. صنع قالب Shrinky - دينك <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طباعة النمط المطلوب على shrinky - دينك ورقة باستخدام الطابعة تعريف جيد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خبز shrinky - دينك ورقة في 163 درجة مئوية لمدة حوالي 10 دقيقة حتى ، أو تقلصت بشكل كامل وبعد أن حصلت على شكل منتظم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد shrinky - دينك العفن هدأت ، يغرق في حمام الأيزوبروبانول حتى بالكاد يغطي سطح كاملة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعناية ، رش بعض الأسيتون على العفن ويهز الحاويات عدة مرات. لإضافة المزيد من الأيزوبروبانول تغسل الزائدة الأسيتون وكرر هذه الخطوة عدة مرات حتى shrinky العفن تبدو نظيفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزج العفن في الماء المقطر لمدة 10 دقيقة ليغسل المتبقية أي مذيب عضوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الهواء النظيف shrinky العفن. إعادة الحرارة لمدة حوالي 5 دقائق على 163 درجة مئوية وهذا الحبر المدمجة وتتبخر أي مذيب المتبقية. </li></ol> 2. جعل PDMS microwells <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 10:01 PDMS خليط كيل / علاج ، وتستنهض الهمم بقوة لبضع دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان shrinky - دينك العفن في طبق بتري الصغيرة. يصب الخليط PDMS حتى يصل حوالي 1 / 2 سم فوق سطح القالب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طبق في ظل فراغ الجرس للقضاء على جميع الفقاعات من خليط PDMS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طبق مكان في الفرن عند 70 درجة مئوية ، بين عشية وضحاها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع PDMS الصلبة من العفن وربط لشريحة الزجاج فقط من خلال ممارسة الضغط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل first microwell رقاقة ، لأنه بقايا الحبر incrusted بين PDMS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر هذا الإجراء لإنتاج شريحة الثانية التي هي خالية من الحبر ، وشكل أكثر تحديدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف رقاقة microwell باستخدام 70 ٪ حل الايثانول. وضعه تحت مصدر ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 10 دقائق لتعقيم عليه. </li></ol> 3. محاصرة الخلايا في microwells <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عدد الخلايا وتخفيف لهم في وسائل الاعلام الى التركيز الثقافة المطلوب (اعتمادا على كيفية العديد من الخلايا الأولية في الآبار التي ترغب). اعتدنا على سبيل المثال ، للحصول على ما يقرب من 10-15 في الخلايا بشكل جيد (متوسط ​​= 11 ، SD = 5.4 ، ومعدل التحميل = 93 ٪) ، وتركيز 8 × 10 4 خلايا / مل. لتركيز 17 × 10 4 خلايا / مل ، يمكن أن نحصل موثوق بين 25 و 35 خلايا لكل بئر (متوسط ​​= 27.17857 SD = 7.7 ، ومعدل التحميل = 100 ٪). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المكان بعناية microwell رقاقة الطرد المركزي في أنبوب 50 مل تحتوي على قاعدة PDMS طدت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة حوالي مل 2JDP من الحل الخلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في الدقيقة 760 ، و 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الماصة من حل الزائدة وغسل بعناية microwell مع الحل 1X PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> microwell مكان في صحن بيتري الصغيرة ، والحرص أثناء تناول شريحة من أنبوب الطرد المركزي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الزائد باستخدام خلية 1 حل PBS X. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان microwell رقاقة تحت مجهر مقلوب للتحقق من عدد من الخلايا المقصود لكل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان microwell تحتوي على خلايا في الظروف القياسية. <img src="/files/ftp_upload/old/692_2008_7_21_1/692_Figure-01.png" alt="الرقم - 01" width="350" height="183" /></li></ol> 4. خلية الحضانة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتباع بروتوكول EB طبيعي في المختبر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير المتوسطة ببطء من جانب الغرفة ، وتجنب تعكير خلية في microwell. </li></ol>

<ol><li>Keller, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+differentiation+of+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">In vitro differentiation of embryonic stem cells.</a> Curr Opin Cell Biol. 7, 862-869 (1995).</li>
<li>Doetschman, T. C., Eistetter, H., Katz, M., Schmidt, W., Kemler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+in+vitro+development+of+blastocyst-derived+embryonic+stem+cell+lines%3A+Formation+of+visceral+yolk+sac%2C+blood+islands+and+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Embryology+and+Experimental+Morphology%22%5BJournal%5D)">The in vitro development of blastocyst-derived embryonic stem cell lines: Formation of visceral yolk sac, blood islands and myocardium.</a> Journal of Embryology and Experimental Morphology. 87, 27-45 (1985).</li>
<li>Park, J., Cho, C. H., Parashurama, N., Li, Y., Berthiaume, F., Toner, M., Tilles, A. W., Yarmush, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfabrication-based+modulation+of+embryonic+stem+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Microfabrication-based modulation of embryonic stem cell differentiation.</a> Lab Chip. 7, 1018-1028 (2007).</li>
<li>Koike, M., Sakaki, S., Amano, Y., Kurosawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+embryoid+bodies+of+mouse+embryonic+stem+cells+formed+under+various+culture+conditions+and+estimation+of+differentiation+status+of+such+bodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biosci+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Characterization of embryoid bodies of mouse embryonic stem cells formed under various culture conditions and estimation of differentiation status of such bodies.</a> J Biosci Bioeng. 104, 294-299 (2007).</li>
<li>Hwang, N. S., Varghese, S., Elisseeff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+differentiation+of+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Controlled differentiation of stem cells.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60, 199-204 (2008).</li>
<li>Adelman, C. A., Chattopadhyay, S., Bieker, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+BMP%2FBMPR%2FSmad+pathway+directs+expression+of+the+erythroid-specific+EKLF+and+GATA1+transcription+factors+during+embryoid+body+differentiation+in+serum-free+media%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The BMP/BMPR/Smad pathway directs expression of the erythroid-specific EKLF and GATA1 transcription factors during embryoid body differentiation in serum-free media.</a> Development. 129, 539-549 (2002).</li>
<li>Tanaka, N., Takeuchi, T., Neri, O. V., Sills, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-assisted+blastocyst+dissection+and+subsequent+cultivation+of+embryonic+stem+cells+in+a+serum%2Fcell+free+culture+system%3A+applications+and+preliminary+results+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Laser-assisted blastocyst dissection and subsequent cultivation of embryonic stem cells in a serum/cell free culture system: applications and preliminary results in a murine model.</a> J Transl Med. 4, (2006).</li>
</ol>

طورنا طريقة بسيطة الثقافة وسريعة ، وقابلة لتحميل أرقام محددة مسبقا من الخلايا في الآبار microfabricated (مصبوب من Dinks - Shrinky) والمحافظة عليها من أجل التنمية الجسم مضغي الشكل. أخيرا ، فإن هذه الخلايا يمكن الحصول عليها بسهولة لمزيد من التحليل والتجريب. هذه الطريقة هي قابلة لأي مختبر ويتطلب أي معدات مخصصة لأننا تغني عن الحاجة إلى ضوئيه. يمكننا أن يختلف حجم microwells فضلا عن تركيز خلايا / بئرا لتغيير عدد وحجم الهيئات مضغي الشكل.

لوسائل الإعلام مسك (مكلوسكي مختبر بروتوكول) : (مجموع وسائل الإعلام على استعداد : 50ml ؛ 100ML) KO DMEM : 40.8ml ؛ 81.6ml KSR 15 ٪ : 7.5ml ؛ 15ml - 1X بن بكتيريا : 0.5 مل ؛ 1ml 2mm والجلوتامين L - : 0.5 مل ؛ NEAA 1ml : 0.5 مل ؛ 1ml LIF : 100ul ؛ 200ul BMP - 4 (10ng/ml) : 50ul ؛ 100ul المخففة BME : 50ul ؛ 100ul (إضافة 35ul من العقيمة BME المصفاة ل5ml من برنامج تلفزيوني وتصفية تعقيم المحاقن تجاهل بعد 2 أسابيع. تركيز النهائي في الحل هو 0.1 ملم)

shrinky - دينك قطرة الشنق : وسيلة بسيطة إلى نموذج الثقافة والأجرام مضغي الشكل

Shrinky-Dink Hanging Drops: A Simple Way to Form and Culture Embryoid Bodies

الهيئات مضغي الشكل (EB) هي مجاميع من الخلايا الجذعية الجنينية. الطريقة الأكثر شيوعا لإنشاء هذه المجاميع هو الأسلوب قطرة شنقا ، نهجا شاقة من pipetting عدد التعسفي من الخلايا في لوحات جيدا. التفاعلات بين الخلايا الجذعية يجبرن على مقربة من بعضها البعض يروج لجيل من EBS. لأن وسائل الإعلام في كل من الآبار والتي يتم تبادلها يدويا كل يوم ، وهذا النهج هو مكثفة يدويا. وعلاوة على ذلك ، لأن المعايير البيئية بما في ذلك خلية خلية ، والتفاعلات عامل الخلية القابلة للذوبان ، ودرجة الحموضة ، وتوافر الأكسجين ويمكن لحجم المهام EB ، يمكن الحصول عليها من السكان الخلية التقليدية قطرات شنقا حتى عندما تختلف بشكل كبير مثقف في ظل ظروف مماثلة. وقد أظهرت الدراسات الحديثة حقا أن العدد الأولي من الخلايا التي تشكل مجموع يمكن أن يكون لها آثار كبيرة على تمايز الخلايا الجذعية. طورنا طريقة بسيطة الثقافة وسريعة ، وقابلة لتحميل أرقام محددة مسبقا من الخلايا في الآبار وصيانتها microfabricated للتنمية الجسم مضغي الشكل. أخيرا ، فإن هذه الخلايا يمكن الحصول عليها بسهولة لمزيد من التحليل والتجريب. هذه الطريقة هي قابلة لأي مختبر ويتطلب أي معدات متخصصة. نظهر هذا الأسلوب من خلال إنشاء هيئات مضغي الشكل باستخدام الخلايا الحمراء الفلورسنت الماوس سطر (129S6B6 - F1).

نعرض طريقة بسيطة وسريعة لتحميل أرقام محددة مسبقا من الخلايا في الآبار وصيانتها microfabricated للتنمية الجسم مضغي الشكل.

Shrinky - دينك قطرة الشنق : وسيلة بسيطة إلى نموذج الثقافة والأجرام مضغي الشكل

تعد الأجسام الشبيهة بالأجنة (EB) تجمعات من الخلايا الجذعية الجنينية. والطريقة الأكثر شيوعاً لتكوين هذه التجمعات هي طريقة القطرة المعلقة، وهي عملية شاقة...

الأجسام المضغية (Embroid bodies) هي تجمعات من الخلايا الجذعية الجنينية. وتعد طريقة القطرة المعلقة هي الطريقة الأكثر شيوعاً لإنشاء هذه التجمعات، وهي نهج مجهد يتضمن نقل عدد عشوائي من الخلايا باستخدام الماصة إلى أطباق الآبار.تتطلب هذه العملية جهداً يدويًا مكثفًا لأن الوسط الغذائي وكل لوحة آبار يجب استبدالهما يدويًا كل يوم. علاوة على ذلك، أظهرت الدراسات الحديثة أن العدد الأولي للخلايا التي تشكل التجمع يمكن أن يؤثر على تمايز الخلايا الجذعية. ولا توجد طريقة لتحديد عدد الخلايا مسبقًا باستخدام هذه الطريقة.نوضح في هذا الفيديو طريقة بسيطة وسريعة لتحميل أعداد مختلفة من الخلايا في آبار مُصنعة دقيقياً لتطوير الأجسام المضغية. مرحباً، أنا جوناثان باغان من مختبر ميشيل ك. في كلية الهندسة بجامعة كاليفورنيا ميرسيد، وأنا خيسوس لونا أيضاً من مختبر ك. سنعرض لكم اليوم إجراءً لإنشاء الأجسام المضغية في آبار مُصنعة دقيقياً باستخدام جهاز الطرد المركزي.تتضمن هذه العملية الخطوات التالية: إنشاء جهاز دقيق، وتحميل الخلايا الجذعية، وتغذية الخلايا الجذعية. لذا، فلنبدأ الآن. تتمثل الخطوة الأولى في هذه العملية في صنع قالب shrinky dink باستخدام طابعة عالية الدقة.اطبع النمط المطلوب على شرائح shrinky dink. بعد ذلك، اخبز شريحة shrinky D عند درجة حرارة 160 °C لمدة 10 دقائق تقريباً أو حتى تتقلص تماماً وتكتسب شكلاً منتظماً. ثم اترك قالب الحبر المتقلص ليبرد لمدة دقيقتين حتى يصبح بارداً عند لمسه.اغمر القالب في حمام من الإيزوبروبانول حتى يتغطى السطح بالكامل بالكاد. بعد غمر قالب الحبر المتقلص في الإيزوبروبانول، رش بعض الأسيتون بعناية فوق القالب ورج الوعاء عدة مرات. ثم أضف المزيد من الإيزوبروبانول لغسل فائض الأسيتون، وكرر هذه الخطوة عدة مرات حتى يبدو قالب الحبر المتقلص نظيفاً.بعد ذلك، اغمر القالب في الماء المقطر لمدة 10 دقائق لغسل أي بقايا من المذيبات العضوية. وبعد الغمر في الماء، نظف قالب الحبر القابل للانكماش بالهواء باستخدام الهواء المضغوط ثم أعد تسخينه لمدة خمس دقائق تقريبًا عند 160 درجة Celsius. سيؤدي ذلك إلى دمج الحبر وتبخير أي مذيب متبقٍ.ويمكننا الآن الانتقال إلى تحضير الآبار الدقيقة من مادة PDMS. نقوم الآن بتصنيع الآبار الدقيقة من PDMS، والتي ستُستخدم لزراعة الخلايا الجذعية من أجل تطوير الأجسام الجنينية. قم بتحضير خليط من PDMS وعامل المعالجة بنسبة 10 إلى 1، ورجّه بقوة لعدة دقائق.بعد ذلك، صب مزيج PDMS فوق قالب shrinky dink في طبق بتري صغير حتى يصل الارتفاع إلى حوالي نصف سنتيمتر فوق سطح القالب. غالباً ما يمكن ملاحظة فقاعات فوق القالب بعد صب PDMS، لذا يجب إزالتها. ضع الطبق تحت جرس تفريغ لمدة 20 دقيقة للتخلص من جميع الفقاعات من مزيج PDMS.بعد التأكد من إزالة جميع الفقاعات، ضع الطبق في الفرن عند درجة حرارة 7 °C لمدة 20 دقيقة. بعد فترة الحضن، قم بقص الـ PDMS المتصلب من القالب باستخدام شفرة حلاقة. نظفه باستخدام شريط لاصق ثم ثبته على شريحة زجاجية بحيث تكون الفجوات متجهة للأعلى.يتم القيام بذلك ببساطة عن طريق الضغط على الحواف. بعد ذلك، يتم تنظيفه باستخدام محلول ethanol بتركيز 70% ووضعه تحت مصدر ضوء UV لمدة 10 دقائق لتعقيمه.في المرة الأولى التي تقوم فيها بذلك، ستتخلص من الـ PDMS. سيساعد هذا في إزالة أي بقايا حبر زائدة من القالب الخاص بك. ويمكنك بعد ذلك استخدام القالب كما هو.كرر إجراء القولبة مرة أخرى لإنتاج شريحة ثانية خالية من الحبر وذات شكل أكثر تحديداً. تأكد من إجراء تفريغ كهربائي لمدة 20 ثانية قبل البدء لإنشاء سطح محب للماء لتسهيل عملية التحميل. بعد صنع الآبار الدقيقة من مادة PMS، يمكن الآن استخدامها لدراسة أجسام Enid.دعونا ننتقل إلى الخطوات العملية. للبدء، يجب عد الخلايا وتخفيفها في وسط زراعة الخلايا للوصول إلى التركيز المطلوب، والذي يعتمد على عدد الخلايا الأولية التي ترغب في وضعها في الآبار. لقد وجدنا أنه عند استخدام تركيز 1.5 times 10 to the fourth cells per milliliter، نحصل على 14 cells per well في كل بئر يتم ملؤه.أضف 2 mL من محلول الخلايا إلى أنبوب طرد مركزي سعة 50 mL يحتوي على قاعدة PDMS متصلبة. ضع شريحة الآبار الدقيقة بعناية في أنبوب الطرد المركزي، ثم قم بإجراء الطرد المركزي لمدة خمس دقائق عند 760 RPM. بعد ذلك، اسحب الوسط باستخدام الماصة وضع شريحة الآبار الدقيقة في طبق بتري صغير.كن حذراً لتجنب الانسكاب أثناء إخراج الشريحة من أنبوب الطرد المركزي. بعد ذلك، ضع شريحة الآبار الدقيقة تحت مجهر مقلوب للتحقق من تحميل كل بئر. ضع الشريحة في الحامل وحضن الآبار الدقيقة التي تحتوي على الخلايا في الظروف القياسية لمدة 24 ساعة.من أجل الحفاظ على الخلايا، يمكن تغيير الوسط ببطء من جانب الغرفة بعد مرور 24 ساعة. تجنب إزعاج الخلايا في البئر الدقيق. ويمكن القيام بذلك يومياً.الميزة الجيدة هي أنك تقوم بعملية السحب بالماصة مرة واحدة واستبدال جميع الأوساط الغذائية، بدلاً من الاضطرار إلى استبدال الوسط لكل بئر على حدة، كما هو الحال في قطرات التعليق التقليدية. لقد أوضحنا لك للتو كيفية زراعة الخلايا وتكوين أجسام جنينية باستخدام قوالب "شرينكي دينك". وتعد هذه الطريقة مفيدة للغاية لأنها بسيطة وسريعة وأقل إجهاداً من الناحية اليدوية مقارنة بطريقة قطرة التعليق، كما أنها لا تتطلب استخدام الطباعة الحجرية الضوئية.بالإضافة إلى ذلك، يمكننا التحكم في عدد الخلايا التي نبدأ بها تكوين الأجسام الجنينية. هذا كل شيء. شكراً للمشاهدة وبالتوفيق في تجاربكم.

shrinky-dink-hanging-drops-simple-way-to-form-culture-embryoid

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

هذا الفيديو يوضح كيفية السلوك في المختبر من تمايز الخلايا الجذعية الجنينية للهيئات مضغي الشكل باستخدام طريقة قطرة شنقا.

التمايز في المختبر من خلايا الجنينية الماوس (MES) الجذعية باستخدام أسلوب إسقاط الشنق

وصفنا بسيطة ، طريقة سريعة لتوليد أنسجة 3D مثل الأجسام الشبه الكروية وإمكانية تطبيقها لقياس الاختلافات في خلية خلية التفاعلات.

إسقاط خلية بسيطة الشنق بروتوكول الثقافة للجيل 3D الأجسام الشبه الكروية

&lt; p class = "jove_content"&gt;يوضح هذا الفيديو فحصا لتوليد عضيات دماغية من الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات (iPSCs). يتم تحفيز iPSCs البشرية لتشكيل أجسام جنينية (EBs). يتم زراعة EBs فوق سقالة بوليمر باستخدام وسيط تحريضي ، مما يعزز التمايز إلى الخلايا الجذعية العصبية والخلايا السلفية والخلايا العصبية غير الناضجة. أخيرا ، يتم تضمين EBs في مصفوفة ونقلها إلى وسيط صيانة لتكوين العضيات الدماغية.

توليد العضيات الدماغية المستحثة متعددة القدرات المشتقة من الخلايا الجذعية

يوضح هذا الفيديو عملية توليد كرات الخلايا العصبية باستخدام تقنية ثقافة القطرات المعلقة. داخل القطرات المعلقة ، تتحرك الخلايا نحو القاع ، ويتم تجميعها ذاتيا في هياكل ثلاثية الأبعاد تشكل كرات عصبية ، والتي يمكن استخدامها في الدراسات العصبية البيولوجية.

تطوير كرات الخلايا العصبية باستخدام تقنية ثقافة القطرة المعلقة

يوضح الفيديو تمايز الخلايا الجذعية الجنينية للفأر (mESCs) إلى الأجسام الجنينية (EBs) بطريقة القطرة المعلقة. عند تعليق mESCs في قطرات معلقة واحتضانها ، تتجمع الخلايا لتشكيل EBs ، والتي يتم تمييزها بشكل أكبر إلى خلايا سلفية عصبية (NPCs) باستخدام وسيط تمايز مكمل بحمض الريتينويك (RA).

توليد الأسلاف العصبية من الخلايا الجذعية الجنينية للفأر بطريقة القطرة المعلقة

يعرض هذا الفيديو استخدام تقنية إضاءة الضوء اللين الجانبي لتحسين التصور بالعين المجردة للأجسام الجنينية ، وبالتالي تسهيل التلاعب بها ونقلها أثناء زراعة العضوية الدماغية. يوضح إعداد إضاءة الضوء الناعم ، وطرق تغيير الوسائط ونقل الجسم الجنيني ، بالإضافة إلى إجراء إحداث التمايز العصبي في الأجسام الجنينية لتطور العضوية الدماغية.

تقنية لتحسين الثقافة العضوية الدماغية باستخدام إضاءة الضوء اللاتيني الناعم

تعد ثقافة القطرات المستقيمة خارج الجسم الحي بديلا للتقنيات التجريبية الحالية في المختبر وفي الجسم الحي. هذا البروتوكول سهل التنفيذ ويتطلب كميات أقل من الكاشف ، مع السماح بالقدرة على التلاعب بالأوعية الدموية الجنينية ودراستها ، وتشكل التشكل ، وتكوين الأعضاء.

باستخدام<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; الثقافات تستقيم القطرة من الجامعة الجنين هيئات لدراسة العمليات التنموية خلال الماوس توالد

هنا نصف بروتوكولا لتوليد عضويات الكلى من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات (hPSCs). يولد هذا البروتوكول عضويات الكلى في غضون أسبوعين. يمكن استزراع عضويات الكلى الناتجة في قوارير دوارة واسعة النطاق أو لوحات تحريك مغناطيسية متعددة الآبار لنهج اختبار الأدوية المتوازية.

طريقة مبسطة لتوليد عضويات الكلى من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات

توفر المواد العضوية الدماغية فرصا غير مسبوقة لدراسة تطور الأعضاء وأمراض الأمراض البشرية. على الرغم من تحقيق نجاح كبير مع أنظمة الزراعة العضوية الدماغية ، إلا أنه لا تزال هناك صعوبات تشغيلية في تطبيق هذه التكنولوجيا. يصف هذا البروتوكول إجراء عضوي دماغي يسهل التغيير المتوسط والنقل العضوي.

تسهيل الثقافة العضوية الدماغية من خلال إضاءة الضوء الناعم الجانبي

يوفر البروتوكول الحالي إجراء خطوة بخطوة لتوليد وصيانة وتشيخ الكائنات العضوية الدماغية المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان (iPSCs). تتيح هذه الطريقة زراعة ونضج العضويات الدماغية لفترات طويلة ، مما يسهل نمذجة العمليات التي تنطوي عليها شيخوخة الدماغ والتسبب في الأمراض المرتبطة بالعمر.

تصنيع قوي للأنسجة من أجل زراعة طويلة الأمد لعضويات الدماغ المشتقة من iPSC لأبحاث الشيخوخة

هنا ، نقدم بروتوكولا شاملا لتوليد وتحليل المصب لعضويات الدماغ البشري باستخدام تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية والنواة الواحدة.

توليد وتحليل المصب للنسخ أحادي الخلية وأحادي النوى في عضويات الدماغ

تعلم طريقة سريعة لتشكيل الأجسام الجنينية باستخدام قوالب Shrinky Dink المصغرة. تتيح هذه التقنية التحكم الدقيق في عدد الخلايا الجذعية وتقليل الجهد اليدوي مقارنة بطريقة قطرة التعليق التقليدية.

Shrinky - دينك قطرة الشنق : وسيلة بسيطة إلى نموذج الثقافة والأجرام مضغي الشكل

استكشف المزيد من الفيديوهات