ديسمبر 19, 2025
يقدم هذا البروتوكول تقنية استنشاق دقيق بسيطة لعزل الخلايا الجسدية الحية (SCs) من السائل المنوي المحفوظ للخيول بالتجميد. على عكس الطرق التقليدية، تتجنب هذه التقنية الزراعة المخبرية الطويلة وتتغلب على تلوث المنوية، مما يتيح الاستخدام الفوري في استنساخ الخلايا الجسدية.
نهدف إلى إظهار أن الخلايا الجسدية من السائل المنوي المحفوظ بالتجميد يمكن أن تكون مفيدة لاستعادة الأفراد ذوي القيمة الوراثية العالية. تحدينا الحالي هو القدرة على اختيار خلايا جسدية تحتوي على حمض نووي ثنائي الصيغة الصبغية سليم لاستخدامها كممنح نووي. للبدء، قم بإزالة مصاصات السائل المنوي الخاصة بالخيول من خزان النيتروجين السائل.
عرضها للهواء لمدة 10 ثوان، ثم أذيبها في حمام مائي عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 ثانية. خذ عينة بحجم 250 ميكرولتر من السائل المنوي المذاب. قم بتخفيفه بملليلتر واحد من DMEM-F12 المتوسط المكمل.
حضن خليط السائل المنوي عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. قم بإخراج 25 ميكرولتر من التخفيف الحاضن إلى أنبوب، وتخفيفه بسعة 975 ميكرولتر من DPBS مع 0.1 ملليغرام لكل ملليلتر من كحول البوليفينيل أو بولي فينيل بيروليدون. اخلط التعليق بلطف.
حافظ على خليط السائل المنوي المخفف عند 37 درجة مئوية طوال عملية جمع. ضع غطاء بتري يحتوي على سائل منوي مخفف للخيول على مرحلة المجهر للتحضير لجمع الخلايا الجسدية. اختر ميكروبايبت بقطر مناسب لجمع الخلايا الجسدية وربطها بنظام الشفط الميكانيكي.
أدخل الماصي بحذر في القطرة الدقيقة واصطفها مع قاعدة غطاء الطبق. بمجرد أن تستنشق الماصة وسط الزراعة، ابدأ في التقاط الخلايا الجسدية بشكل فردي. ركز على أسفل القطرة الصغيرة، حيث تظهر أشكال الخلايا المختلفة.
ضع طرف الماصي الدقيقة بجانب كل خلية جسدية، واسحب تحت ضغط سلبي. اجمع الخلايا المستديرة والممدودة، بغض النظر عن الحجم. بعد جمع 10 خلايا، وضعها في قطرة صغيرة بسعة 10 ميكرولتر تقع على السطح العلوي لغطاء الطبق.
احتفظ بجميع الخلايا الجسدية المجمعة ضمن هذا القطرة الدقيقة طوال عملية الجمع. بمجرد جمع العدد المطلوب من الخلايا الجسدية، قم بإجراء عملية غسل بسيطة باستخدام قطرات دقيقة لإزالة المنوية والحطام والملوثات الميكروبية. باستخدام غطاء صحون ثان، قم بغسل متتالي من ثلاث خطوات للخلايا الجسدية.
استخدم ميكروبايبت لنقل الخلايا الجسدية إلى القطرة الأولى، ودعها تستقر لمدة ثلاث إلى خمس دقائق. نقل الخلايا من القطرة الأولى إلى الثانية باستخدام نفس الإجراء. كرر النقل مرة أخرى وضع الخلايا الجسدية في القطرة الثالثة.
وأخيرا، يتم إيداع الخلايا الجسدية المعزولة في قطرة دقيقة محضرة مخصصة لنقل نواة الخلايا الجسدية. نجحت تقنية الشفط الدقيق في استعادة الخلايا الجسدية من السائل المنوي المحفوظ بالتجميد، مع معدلات التقاط تتراوح بين 317.7 إلى 424.7 خلية في الساعة عبر ثلاثة فحول. الفحل رقم 3 يظهر أعلى إنتاجية.
تم تحديد خمسة أنواع خلايا جسدية مميزة بناء على الحجم والشكل. حددنا مجموعة من الخلايا الجسدية تختلف في الشكل وقابلية البقاء في السائل المنوي المحفوظ بالتجميد، والذي قد يكون مفيدا كمتبرع نووي. يمكن اختيار الخلايا بناء على شكلها، ولا يتطلب إجراء الزراعة الأولية.
سنركز على تحسين فعالية هذه الخلايا بعد تكسير سائل الخيول المنوي.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
يعرض هذا البروتوكول تقنية الترشيح الدقيق لعزلة الخلايا الجسدية القابلة للحياة من السائل المنوي الفرس المجمد. تتجنب هذه الطريقة ثقافات طويلة في المختبر وتلوث الحيوانات المنوية، مما يسمح بالاستخدام الفوري في استنساخ الخلايا الجسدية.
Efficient recovery of viable somatic cells from cryopreserved equine semen addresses a critical bottleneck in genetic resource utilization for advanced reproductive technologies. This microaspiration technique enables immediate access to diploid donor cells for somatic cell nuclear transfer (SCNT), bypassing the need for prolonged culture and mitigating sperm contamination. The approach expands the potential for genetic rescue and portfolio diversification in animal biotechnology pipelines.
This microaspiration method integrates at the interface of genetic resource recovery and SCNT-based cloning, bridging cryopreservation banking with immediate nuclear donor preparation.