اختبار الحواجز الفسيولوجية لانتقال الفيروس عن طريق Microinjection في المن

إذا كانت ناقلات فعالة للفيروسات النباتية ، إذا كانت حقنة دقيقة للفيروس ، فإن الإجراء الذي سنعرضه لك اليوم هو تقنية تسمح للباحثين بحقن الفيروس مباشرة في خلية hemos في الرجفان الأذيني ، متجاوزا القناة الهضمية ، وهو أحد العائقين الرئيسيين لانتقال الفيروس بطريقة دائرية. مرحبا ، أنا سيسيليا تامرين ديهي ما بعد الدكتوراه في قسم أمراض النبات بجامعة كورنيل. سأوضح لكم اليوم كيفية حقن الفيروس في فيروس الخلايا الدموية AFI الذي يمكن أن ينتقل بعد ذلك إلى أنواع نباتية مختلفة.

على سبيل المثال ، هذا النبات FE مصاب بفيروس أوراق البطاطس PLRV. يمكنك أن ترى الفرق بين النبات السليم والمصاب. أبرز الأعراض هي التصلب العصبي.

PLRV هو فيروس لوثير يحمله APHIS في الهيموليفوم ، وهو ما يعادل الحشرة لدم الثدييات. عندما يتغذى AFI غير المصاب على نبات مصاب ، فإنه يصاب بالفيروس من خلال الأنفلونزا النباتية ، والتي يمكنك رؤيتها هنا. بمجرد تناوله ، يجب أن ينتقل الفيروس من أمعاء الحشرات إلى الهيموليمف ثم يجب أن يمر عبر الغدة اللعابية حتى ينتقل مرة أخرى إلى نبات ESE.

وإذا كان الأمر قد يستغرق العديد من الفيروسات عند التغذي على نبات ESE ، فسوف يمر المزيد من الأجزاء عبر الأمعاء والغدد اللعابية. العائقان الرئيسيان أمام انتقال العدوى يصيب المزيد من النباتات لاختبارها. إذا تم تعطيل AFI لنقل الفيروس ، فإننا نطعم AFIS على الأنسجة المصابة لمدة يومين ، ثم نسمح لها بالتغذية في نبات صحي لمدة خمسة أيام.

ثم يتم تبخير النبات وبعد ثلاثة أسابيع نبدأ في البحث عن الأعراض. عندما نجد الرجفان الأذيني الذي لا يمكنه نقل الفيروس ، يمكننا تقييم أي من الحاجزين يوقف الفيروس باستخدام إجراء الحقن المجهري ، والذي سأريكم اليوم. في هذا الإجراء ، يتم حقن الفيروس مباشرة في الخلية الدموية هناك ، متجاوزا حاجز انتقال الأمعاء مباشرة.

لذلك دعونا نبدأ وسأوضح لك كيفية الحقن الدقيق لبعض القمة. إذن هذا هو الزجاج، الإبر الزجاجية التي نستخدمها. نقوم بسحب الإبر الزجاجية من هذه الدروع الزجاجية باستخدام APU apu.

إذن هذا هو الحاقن الصغير. للقيام بالحقن الدقيق للفيروس. سأبدأ في وضع الإبرة في حامل الإبرة.

لذلك أنا فقط أضع الإبرة وأضعها في مكانها. لذا سأقوم الآن بتحميل الفيروس في الإبرة إلى أعلى هذه الدفة. الآن نحن بحاجة إلى وضع AFI للحقن المجهري.

لذلك سآخذ AFI مع ضغط الألم وسأضعه في حامل AFI. من الناحية المثالية ، سأحاول وضع الجزء الخلفي من المن على الحامل حتى أتمكن من الوصول إلى الجزء البطني من الرجفان الأذيني. حسنا ، رائع.

الآن يمكننا المضي قدما والحقن الجزئي. حسنا ، الآن سأقوم بوضع الإبرة وسأقوم بتقريبها من الرجفان الأذيني. حتى الآن سأقوم بإحضار الإبرة إلى ملامسة مع الرجفان الأذيني واختراق الهيكل الخارجي ، أفضل شيء هو محاولة الاختراق بين الجزء الموجود في قاعدة الساقين.

لذلك سأقوم بالحقن. الآن أقوم بأخذ AFI من الفرشاة وأضعها في ورقة الاسترداد حيث سأسمح لها بالتسجيل للحظة. لذلك نحن بحاجة أيضا إلى الحقن الدقيق للتحكم في afi.

يتم إجراء هذا الحقن الدقيق للتحكم فقط مع المخزن المؤقت بدون الفيروس. المخزن المؤقت الذي نستخدمه هو 0.1 مخزن مؤقت للفوسفات ، ودرجة الحموضة سبعة. لذلك سأضع A المناسب في نبات صحي حيث سأسمح له بالملاءمة لمدة خمسة أيام بعد أن أقوم بمصير النبات وانتظار تطور الأعراض بعد الحقن الدقيق ل NA السفلي الذي تقطعت به السبل خلال أسبوع كل يوم ، يتم قياس مستوى التعبير عن الجين المستهدف في afi.

لذلك قمنا للتو بحقن الميكرو أفيت لم يكن قادرا على نقل الفيروس. إذا كان AFI قادرا على نقل الفيروس بعد الحقن المجهري ، فهذا يعني أن AFI هذا يحتوي على حاجز أمعاء كان يمنع الفيروس. إذا لم يكن هناك تطور أعراض من ناحية أخرى ، فهذا يعني أن هذا الالتهاب يحتوي على حاجز قوي للغدد اللعابية.

لذلك أظهرنا للتو كيفية حقن الفيروس في حشرات المن. يستخدم هذا الإجراء نفسه لحقن الحمض النووي الريبي الذي تقطعت به السبل في حشرات المن لإجراء تداخل العين RNI ، وهي تقنية مثيرة للاهتمام للمساعدة في دراسة وظيفة الجينات في المن. هذا كل شيء للحقن الدقيق.

أتمنى أن تستمتع به وسيكون مفيدا لتجاربك. شكرا.