نموذج شامل للفئران لتقييم مسارات نقل الكبد من خلال أخذ عينات لمفاوية وعوية دموية متزامنة

يدرس مختبرنا دور الجهاز اللمفاوي في الأمراض الالتهابية وأمراض القلب الأيضية، ويطور استراتيجيات توصيل الأدوية لاستهداف اللمفاوات لعلاج هذه الأمراض. يتيح هذا البروتوكول تقييم العمليات الكبدية، بما في ذلك أيض الأدوية، وتدفق العناصر الغذائية، وإشارات المناعة، واستجابة الكبد في ظروف متنوعة. للبدء، ضع ذكر من نوع سبريغ-داولي مخدر ويزن حوالي 250-300 جرام وقد تم نقله بنجاح عبر الشريان السباتي والوريد الوداجي في حالة استلقاء ظهري تحت المجهر الجراحي.

قم بعمل شق جلدي أفقي بطول 4-5 سنتيمترات من الخط الأوسط إلى الجانب الأيمن، على بعد حوالي 1.5-2 سنتيمتر أسفل القفص الصدري. قم بسحب الجلد وعمل شقوق متطابقة في العضلات المائلة الخارجية والداخلية. قم بكي أو ربط أي أوعية دموية كبيرة تواجهها أثناء الإجراء.

استخدم مسحات قطنية مبللة بمحلول ملحي لتحريك الكبد نحو الحجاب الحاجز، والمعدة إلى اليسار، والأمعاء الدقيقة إلى الأسفل. حافظ على سحب الأعضاء مع الشاش المبلل بالمحلول الملحي. حدد القناة اللمفاوية الكبدية التي تمتد بمحاذاة الشريان الكبدي وذيليه قليلا، والإنسي للكلية اليمنى وبجوار الوريد الأجوف السفلي.

استخدم القناة اللمفاوية البيضاء المعتمة الأكبر أو البيضاء كمؤشر تشريحي لتحديد القناة اللمفاوية الكبدية الشفافة والضيقة الموجودة في الذيلي. استخدم ملقط جرايف المستقيم لإزالة النسيج الضام الذي يغطي القناة اللمفاوية والوريد الأجوف. أدخل الملقط عبر السرير الدهني تحت الكلية اليمنى لإنشاء نفق تحت الوريد الأجوف.

ادفع الملقط حتى تخرج الأطراف موازية للقناة اللمفاوية الكبدية على الجانب المقابل من الوريد الأجوف. استخدم الملقط للإمساك بالطرف الخارجي للكانيولا المعدة مسبقا واسحب القنية عبر النفق حتى يخرج طرفها من الجهة المقابلة. استخدم ملقط هالستد موسكيتو هيموستات لثني طرف إبرة قياس 25 إلى حوالي 90 درجة.

باستخدام الإبرة المثنية، قم بثقب قناة اللمفاوي الكبدية بحذر على الجانب الأيمن الأقرب إلى المشغل. افحص القنية المملوءة مسبقا بمحلول مضاد للتخثر وقم بإزالة فقاعات الهواء، إن وجدت. أدخل الطرف المائل على بعد حوالي 2 مليمتر داخل القناة.

تأكد من تدفق اللمفاوف في الطرف الخارجي للقناة بمعدل حوالي 100 ميكرولتر في الساعة. قم بتعديل أو إعادة إدخال القنية إذا لم يلاحظ تدفق. سد القنية عند طرف الجمع، ثم ضع قطرة صغيرة من اللاصق البيطري لتثبيت موقع الإدخال.

بمجرد جفاف اللاصق، تأكد من تدفق اللمف عبر الأنبوب. بعد ذلك، أزل الشاش وأعد الأعضاء إلى مواقعها الأصلية. ضع أنبوب الجمع الذي يحتوي على محلول مضاد التخثر أسفل مخرج القنية وتأكد من أن اللمف يتدفق قطريا إلى داخل الأنبوب.

ثم أغلق جدار البطن بخياطة الطبقات الداخلية المائلة الخارجية والجلدية بشكل متتابع. مباشرة بعد القناة اللمفاوية الكبدية، ابدأ إعادة الترطيب عن طريق حقن محلول ملحي معقم بمعدل 1.5-3.0 ملليلتر في الساعة عبر قناة الوريد الوداجي. راقب التنفس وردود الفعل أثناء الحفاظ على التخدير عبر مخروط أنف.

بعد الجرعة العلاجية عبر قناة الوريد الوداجي، اجمع اللمفاوم الكبدي باستمرار في أنابيب تحتوي على محلول مضاد للتخثر. استبدل أنابيب الجمع كل ساعة أو حسب الحاجة. جمع عينات دم الشريان السباتي في النقاط الزمنية المحددة، مع الحفاظ على الحجم الكلي أقل من 10٪ من حجم الدم المقدر في الدورة الدموية قبل أخذ العينة النهائية.

أعد فتح الشق البطني لكشف التجويف العلوي للبطن مع الحفاظ على تخدير عميق وتنفس مستقر. استخدم الشاش المبلل بالملح لسحب الكبد بلطف نحو الحجاب الحاجز، والمعدة إلى اليسار، والأمعاء الدقيقة في الأسفل. حدد الشريان الكبدي الموازي للقناة اللمفاوية الكبدية الواقعة بجوار القناة اللمفاوية المساريقية.

احصل على قناة بولي فينيل بقطر خارجي 0.61 مليمتر وقطر داخلي 0.28 مليمتر، مملوءة مسبقا بمحلول مضاد للتخثر وإزالة أي فقاعات هواء. باستخدام ملقط القزحية المنحني، عزل جزء قصير من الشريان الكبدي. ضع غرزة حريرية 4-0 تحت الشريان.

ارفع الشريان بلطف وضع غرزة ثانية في البعد إلى الأول. ربط الغرز البعيد للتحكم في التدفق العكسي مع ترك الغرز القريب غير مربوط للإغلاق لاحقا. باستخدام مقص دقيق النقطة، قم بعمل شق عرضي صغير على بعد حوالي 0.5 مليمتر في جدار الشريان بين الغرز.

استخدم طرف ملقط دومونت لرفع رف الوعاء لتثبيت تجويف الوعاء لإدخال القنية. أدخل الطرف المشطوف من كانيولا البولي فينيل في الفتحة وتقدم الكانيولا حوالي 2-3 مليمترات. ثبت القنية عن طريق ربط الخيط القريب حول كل من الوعاء والقنوية.

تأكد من الموضع الصحيح عن طريق استنشاق كمية صغيرة من الدم الشرياني الأحمر الفاقع بلطف الداخل. اجمع 0.5-1 ملليلتر من الدم في أنبوب مسجل مسبقا يحتوي على مضاد تخثر. يظهر التعافي اللمفاوي للعلاجات الجزيئية الكبيرة التي تعطى عن طريق الوريد عبر الصدر والكبد واللمفاوف الميساريقية فائدة النموذج في تقييم النقل اللمفاوي.

يحتوي اللمفاوي الكبدي على محتوى دهني إجمالي أقل بكثير من اللمف الصدري والمضاريقي، بينما تركيز البروتين فيه مشابه لتركيز المصادر اللمفاوية الأخرى. يتيح هذا البروتوكول إجراء قياسات متزامنة لللمف الكبدي والدم لتقييم نقل الجزيئات وعملية الأيض وتطهيرها بما في ذلك الأدوية والعناصر الغذائية والإشارات. القنية الدقيقة للقناة اللمفاوية الكبدية تمثل تحديا تقنيا وتتطلب تحديدا تشريحيا دقيقا وتقنية جراحية.

يمكن للدراسات المستقبلية استخدام هذه التقنية لرسم خريطة نقل الكبد، والتخلص من الكبد، والتمثيل الغذائي، مما يعزز فهم أمراض الكبد والعلاجات المستهدفة.