مقابلة : HIV - 1 الحمض النووي الختان Proviral باستخدام تطورت Recombinase

أنا JohE Hvar وأتوجه إلى قسم بيولوجيا الخلية والبيولوجيا ، معهد HE Pet في هامبورغ ، ألمانيا. معهد HE PET هو معهد أبحاث أساسي يركز حصريا على PE البشري والفيروسات المسببة للأمراض ونعم ، والقضايا المتصلة ، كما أقول. لذا فإن قسمنا مهتم في المقام الأول بالتحقيق في تنظيم التعبير الجيني لفيروس نقص المناعة البشرية ، والتفاعل في التفاعل داخل الخلايا بشكل خاص لفيروس نقص المناعة البشرية مع مكونات الخلية المضيفة.

بناء على هذه البيانات ، نحاول أيضا تطوير علاجات جديدة وتجريبية لمرض فيروس نقص المناعة البشرية. مشكلة فيروس نقص المناعة البشرية هي أن فيروس نقص المناعة البشرية هو فيروس قهقري أو فيروس عدسي ، ومثل كل فيروس قهقري ، يندمج فيروس نقص المناعة البشرية عند إصابة الخلية المضيفة ، الجينوم الفيروسي في جينوم الخلية المضيفة. حتى الآن ، لا يمكن للمرء التخلص من الفيروس المتكامل بعد الآن.

هذا يعني ، فيما يتعلق بالعلاج ، أننا نتحدث عن مرض مزمن مع علاج مدى الحياة وبشكل أساسي مع جميع المشاكل المرتبطة بالعلاجات مدى الحياة مثل الآثار الجانبية للأدوية ، وحدوث المقاومة وما إلى ذلك. حسنا ، لسنوات عديدة في البحث الأساسي ، نعرف ما يسمى بإعادة التركيب ، التي تحدث بشكل طبيعي في إعادة التركيب مثل الخميرة أو البكتيريا ، على سبيل المثال. ويتم التعرف على هذه إعادة التركيب ، وتسلسلات الحمض النووي المحددة ، وخلط الجينات ، وإعادة ترتيب الجينوم وما إلى ذلك.

وعلى وجه الخصوص ، يتم استخدام إعادة تركيب واحدة تسمى إعادة تركيب decre في البحث الأساسي والموقع في البحث الأساسي. و CRE يتعرف بشكل أساسي على تسلسله المحدد. وإذا كان لديك تسلسل يقع بين موقعين للتعرف ، فإن CRE قادر على استئصال التسلسل المتداخل بشكل أساسي.

لذا فإن الفكرة سابقا منذ 10 أو 15 سنون من الدواء للقضاء على الفيروس وعلى الجانب الآخر ، لاستخدام مثل التركيبة مثل الحزن ، على سبيل المثال ، لاستئصال الملف الشخصي. الحمض النووي ، يجب أن يكون هذا ممكنا من الناحية النظرية لأنه عند الإصابة ، يقوم فيروس نقص المناعة البشرية بالنسخ العكسي ، وجينوم RA الخاص به إلى الحمض النووي ، وبسبب تسلسل عملية النسخ العكسي هذا يسمى التكرارات الطرفية الطويلة يتم إنشاؤها وتحدد بشكل أساسي الخمسة bris أو البداية وحدود brime الحرة ، نهاية الملف الشخصي المتكامل D.So من الناحية النظرية ، إذا كان بإمكان المرء أن يتوصل إلى إعادة تركيب ثلاثية ، فإن إعادة التعرف على وجه التحديد في تسلسل في LTR ، لذلك ، فإن الخلاف سيهاجم بشكل أساسي الطرف الخمسة الرئيسي ونهاية الحزام والطريق الحرة للملف الشخصي المتكامل ، ويستأصل الحمض النووي الحمض النووي ، ويقضي بشكل أساسي على الفيروس من الخلية المطهرة. الآن ، مشكلة فيروس نقص المناعة البشرية هي أن لدينا عزلات مختلفة ربما أيضا في ، في ، في شخص واحد ، مريض واحد ، ومع ذلك ، خاصة كما نعلم حتى الآن ، يكون التسلسل في بداية ونهاية فيروس الجينوم الفيروسي.

وبعبارة أخرى، فإن LTRs محفوظة أكثر من جينات فيروس نقص المناعة البشرية على سبيل المثال. لذلك أعتقد أن هناك فرصة جيدة أن نتمكن من الإفلات من عدد قليل من إعادة التركيب التي تعترف بشكل أساسي بالنضج الواسع لجميع عزلات فيروس نقص المناعة البشرية. وإذا لم يكن الأمر كذلك ، فعلينا في الأساس إنشاء واحدة جديدة عن طريق التطور الجزيئي ، والتي يمكن أن تكون في المستقبل شبه آلية.

وستكون العملية أسرع بكثير من القيام بذلك في المختبر. في زميلنا ، جاء الدكتور فرانك من معهد ماكس سبلانك في نهاية الصورة. في الأساس هو خبير في إعادة التركيب وكل شيء.

في الأساس ما استخدمه هو ما نسميه طريقة التطور الجزيئي. لكن الطريقة تعتمد على تقنية تفاعل البوليمر المتسلسل PCR. ويأخذ جين أمشاط درجة إعادة التركيب التي تحدث بشكل طبيعي ويقوم بإعداد تفاعلات تفاعل البوليميراز المتسلسل أو تفاعلات تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعددة في الظروف التي تقدم طفرات بطريقة عشوائية.

والحيلة الآن هي اختيار الإصدارات الجديدة من إعادة التركيب التي اكتسبت قدرة جديدة أو نشاطا جديدا ، أي التعرف على التسلسلات الخاصة بفيروس نقص المناعة البشرية. وهو يفعل ذلك في دورات متكررة. هو ، هو ، استغرق حوالي 120 أو أكثر من 120 دورة للقيام بهذا النوع من طريقة التطور الجزيئي الجزيئي.

عندما توصل أخيرا إلى هذا المحدد ، يطلق عليه الآن ثلاثة لإعادة التركيب المحدد ل LTR مع هذا التركيب الجديد الذي يتعرف الآن على وجه التحديد على تسلسل فيروس نقص المناعة البشرية. لذا كانت الدراسة الأولية هنا هي التجارب مع المؤتلفات التي أجريت هنا في معهد HE PET في هامبورغ. وما فعلناه هو بشكل خاص أننا قدمنا هذا التلفز مع النواقل ، وناقلات الجينات في مزرعة الخلايا البشرية التي أصيبت بعزل سريري إلى حد ما من H HIV V one.

وبمرور الوقت ، على مدى ستة إلى ثمانية أسابيع ، تمكنا من إثبات ذلك. الآن المؤتلف مثير من الناحية الكمية ، فقد قاموا بدمج ملف تعريف فيروس نقص المناعة البشرية DA ، ويتم علاج الثقافة بأكملها بشكل أساسي عن طريق التخلص من فيروس نقص المناعة البشرية. هناك بالتأكيد العديد من المشاكل مع هذه التكنولوجيا.

بادئ ذي بدء ، علينا التأكد من أن التعبير عن الريكومبيناز لا يسبب آثارا جانبية سامة. نحن لا نفعل ذلك ، لا نتوقع هذا لأنه بالنسبة لإعادة التركيبات التي تحدث بشكل طبيعي مثل gre ، هناك ما يسمى بالحيوانات المعدلة وراثيا موجودة. يعبرون عن إعادة تركيب GRE هذه ولا بأس ، لذلك هناك بعض المشاكل ، ولكن ليست كبيرة جدا.

ويمكنني أن أقول ذلك في هذه المرحلة. لذلك هناك أمل في عدم وجود آثار جانبية سامة ، لكنك لا تعرف أبدا متى يتعين عليك إجراء التجارب. وهناك أيضا مشاكل أنا, ربما لن نتعرف على كل عزلة سريرية معها حتى نحصل على عزلة سائدة, عزل فيروس نقص المناعة البشرية في المريض, يمكننا التخلص منها.

لكننا سنختار من بين العزل البسيط والبسيط بمرور الوقت. هذا ، لا نعرف ، علينا إجراء هذه التجارب. ثم هناك مشكلة كبيرة في توصيل الجينات ، مع تقنية النواقل.

علينا استخدام ما يسمى بنواقل الفيروسات العدسية أو أيضا نواقل الفيروسات القهقرية لتوصيل الجين أو الجين المؤتلف. فهل هناك آثار جانبية؟ هناك ، هل تسبب هذه النواقل آثارا سامة؟

هذه هي كل الأسئلة التي لدينا. أيضا ، نأمل في تحسين نشاط الأمشاط. هم ، إعادة التركيب تعمل بشكل أسرع مما نراه الآن ، أسبوعين ، النشاط.

لذا فهذه كلها أسئلة مفتوحة يتعين علينا تطويرها خلال السنوات القادمة. وهذه هي المشكلة الآن بالتأكيد لأن إعادة التركيب غير متوفرة عن طريق الفم. لذلك لن تكون هناك حبوب منع الحمل ، حبوب إعادة التركيب بشكل جيد ، وتتخلص من الفيروس.

لذلك ، ولكن التكهن بالعلاج المستقبلي ، علينا التفكير في مناهج العلاج الجيني. لذلك ربما يمكن للمرء أن يتصور أننا نعزل ما يسمى بالخلايا الجذعية المكونة للدم أو الخلايا الإيجابية CD 34 من دم مرضى المرضى المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية. ثم في المختبر نقدم جين الأمشاط في خلايا المريض.

أخيرا ، نعيد الإدخال ، ونعيد حقن المريض ، ونكبح جماح ، ونغرس خلايا المريض ، والآن يقومون بتعديل خلايا المريض وراثيا في ظهر نفس المريض. لذا ما يجب أن يحدث هو أن الجهاز المناعي أو الجهاز المكونة للدم للمريض يعاد تكوينه بمرور الوقت جزئيا على الأقل مع الخلايا التي عند الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية ، يمكنهم التخلص من الفيروس لأنهم الآن يعبرون عن إعادة التركيب. لذا سيكون التأثير هو أن الحمل الفيروسي سينخفض في المريض ولكنه سيحسن نوعية الحياة بالتأكيد.

ويمكننا أيضا أن نأمل أن يعيد الجهاز المناعي إعادة تكوين هؤلاء المرضى جزئيا على الأقل. حتى الآن ، الوظيفة ، الخلايا المناعية التي تعمل بكامل طاقتها ، ستكون قادرة على مهاجمة الخلايا المصابة لفترة طويلة المتبقية في هؤلاء المرضى. ما إذا كان بإمكاننا حقا القضاء التام على فيروس نقص المناعة البشرية من مريض أم لا ، لا يمكننا معرفة ذلك في هذا الوقت.