Name: وعلى النقيض من مرحلة التدخل التفاضلية المجهري التباين (DIC) (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-06T17:41:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: تعلم تقنيات مجهر التباين الطوري والتداخل التفاضلي المجهري لتحسين رؤية العينات البيولوجية الشفافة. هذه الطرق تكشف التفاصيل الدقيقة للهياكل الخلوية بدقة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

العديد من مقاطع الفيديو على النقيض مما يدل المرحلة ، واتخذت من مدينة دبي للإنترنت المجهري مقال آخر عن طريق الفيديو ، بعنوان <a href="details.stp?ID=197">طبقات التكافل</a> . إن الرب يسلم تكرم هذه المساهمة التي قدمها مختبر يدبيتر.

بروتوكول النص الكامل لهذا النهج التجريبي هو متاح في <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0401/current/abstract ">البروتوكولات الحالية في بيولوجيا الخلية.</a>

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

وعلى النقيض من مرحلة التدخل التفاضلية المجهري التباين (dic)

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

وكثيرا ما يستخدم على النقيض من المرحلة المجهري لإنتاج النقيض للشفافية ، وغير ممتصة للضوء ، والعينات البيولوجية. تم اكتشاف هذه التقنية التي Zernike ، في عام 1942 ، الذي حصل على جائزة نوبل لانجازاته. وقد تم المجهري مدينة دبي للإنترنت ، وعرض في أواخر 1960s ، شعبية في البحوث الطبية الحيوية لأنه يسلط الضوء على حواف عينة من التفاصيل الهيكلية ، ويقدم مقاطع عالية الدقة البصرية للعينات كثيفة بما في ذلك خلايا الأنسجة ، والبيض ، والأجنة ، ولا تعاني من هالات المرحلة النموذجية على النقيض من المرحلة الصور. هذا البروتوكول يسلط الضوء على المبادئ والتطبيقات العملية لهذه التقنيات المجهري.

هذا البروتوكول يسلط الضوء على المبادئ والتطبيقات العملية للمرحلة التداخل والتباين التفاضلية (DIC) الميكروسكوب

وعلى النقيض من مرحلة التدخل التفاضلية المجهري التباين (DIC)

غالبًا ما يُستخدم المجهر بتباين الطور لإحداث تباين في العينات البيولوجية الشفافة التي لا تمتص الضوء. وقد اكتُشفت هذه التقنية بواسطة ...

يُعد المجهر الضوئي أحد أكثر الأدوات تمكيناً، إن لم يكن أكثرها، في مجال الأبحاث الطبية الحيوية. واعتماداً على تطبيقك، تكون هناك أنماط إضاءة مختلفة مرغوبة لعرض العينات. سيوضح هذا الفيديو نمطين بصريين للإضاءة بالضوء النافذ، وهما تباين الطور، ومجهر تباين التداخل التفاضلي (DIC).مرحباً، أنا فيكتوريا سان فروليك من مرفق التصوير البصري المركزي في مركز جامعة تكساس للعلوم الصحية في سان أنطونيو. سأوضح لكم اليوم كيفية فحص العينات بشكل صحيح باستخدام مجهر تباين الطور ومجهر تباين التداخل التفاضلي. لذا، دعونا نبدأ.لا يُعد الفحص المجهري التقليدي بالمجال المضيء (Brightfield microscopy) مناسبًا لفحص العينات الشفافة وعديمة اللون. وغالبًا ما يُستخدم المجهر المتباين الطوري (Phase contrast microscopy) لإيجاد التباين في العينات البيولوجية الشفافة التي لا تمتص الضوء. وقد اكتشف هذه التقنية زوراخ في عام 1942، وحصل على جائزة نوبل تقديرًا لإنجازه هذا.مجهر تباين الأطوار هو مجهر ضوئي للمجال المضيء مُضاف إليه عدسات شيئية خاصة لتباين الأطوار، والتي تحتوي على صفيحة أو حلقة طور، بالإضافة إلى حلقة تكثيف بدلاً من الحجاب الحاجز. تقع هذه الحلقة عادةً في برج المكثف، ويجب اختيار حجم الحلقة المناسب وفقاً للعدسات الشيئية المختلفة. بعد إعداد إضاءة كولر (Kohler illumination)، اختر العدسة الشيئية المناسبة لتباين الأطوار، ثم أدر حلقة الطور الملائمة إلى الموضع الصحيح في المكثف.بمجردما يتم محاذاة حلقة المرحلة في الشيئية وحلقة المكثف بشكل صحيح لتكونا متمركزتين ومتداخلتين، يمكننا عرض العينة وضبط التركيز بدقة. لذا دعونا نوضح كيف يبدو تباين المرحلة من خلال المجهر. إليكم نظرة على شريحة من كبد جرذ.تحت مجهر تباين الأطوار. تعزز هذه الطريقة مظهر المواد البيولوجية عن طريق تغيير التباين من درجات مختلفة من اللون الرمادي إلى تدرجات من الأسود إلى الأبيض. ومع ذلك، ستلاحظ أن العينات محاطة بهالة، مما يؤدي إلى طمس البنية الدقيقة.تعتبر هذه الهالة نتاجاً ثانوياً للإضاءة بواسطة الحلقة الطورية. ستلاحظ الآن عند الانتقال إلى الحقل المضيء أن هذه العينة يصعب رؤيتها للغاية. وبالعودة إلى تباين الطور، يمكننا رؤية بنية وشكل الخلايا في نسيج كبد الجرذ بوضوح منذ إدخال هذه التقنية في أواخر الستينيات.لقد حظيت مجهرية التباين التداخلي التفاضلي أو DIC بشعبية واسعة في الأبحاث الطبية الحيوية لأنها تنتج صوراً عالية الدقة للبنى الدقيقة من خلال تعزيز الواجهات المتباينة، وتكون الصورة الناتجة عبارة عن مقطع بصري رقيق جداً. وفي الواقع، فإن قدرة DIC على إنتاج مقاطع بصرية جعلت منها نمطاً مفيداً لإضاءة الضوء النافذ كبديل للمجهر البؤري. ويعد مجهر DIC مجهراً ضوئياً للمجال المضيء مع إضافة العناصر التالية: مستقطب يوضع بين مصدر الضوء والمكثف.منشور تقسيم شعاع DIC في جزء المكثف، ومنشور دمج شعاع DIC خلف الشيئية مباشرةً، ومحلل في الفضاء اللانهائي قبل العدستين. ومن أجل الحصول على أفضل أداء من بصريات DIC، من المهم أولاً محاذاة المجهر الضوئي لإضاءة كوهلر (Kohler illumination)، ثم وضع عناصر DIC في المسار البصري. يمر الضوء من المصدر عبر مستقطب ثم يتم تقسيمه بواسطة المنشور الأول.تنتقل هذه الحزم المزدوجة بالقرب من بعضها البعض. فإذا مر الزوجان عبر المادة نفسها في العينة، فإنهما عند إعادة دمجهما بواسطة المنشور الثاني، لا يتداخلان مع بعضهما البعض وبالتالي يظهران باللون الرمادي. ومع ذلك، عند حافة هيكل ما، تمر إحدى حزم الزوج عبر مادة مختلفة عن شريكتها فتتعرض للتغيير.عندما يتم دمج هذه الحزم مرة أخرى بواسطة المنشور الثاني، فإنها ستتداخل إما تداخلاً بناءً مما ينتج بقعة مضيئة، أو تداخلاً هداماً مما ينتج بقعة مظلمة. إليكم نظرة على الدياتومات تحت تباين DIC. ستلاحظون أن التفاصيل الدقيقة لبنية الدياتومات تظهر بوضوح.ومع ذلك، عند إزالة بصريات DIC، تختفي هذه التفاصيل. ويصبح التباين عبر العينة ساطعاً في جانب ومظلماً في الجانب الآخر. وهذا يعطي انطباعاً بوجود تضاريس، ولكنه في الواقع مجرد وهم بصري.يمكن عكس اتجاه تأثير الظل الملقى عن طريق تدوير المستقطب عبر نقطة التقاطع إلى التباين المعاكس. لقد راجعنا للتو الأوضاع البصرية لكل من تباين الطور وتباين التداخل التفاضلي (DIC). وللتذكير فقط، فإن إزالة تباين الطور تعمل على تعزيز العينات المتباينة من اللون الأسود إلى الأبيض، وهي مفيدة لفحص العينات التي تكون عديمة اللون وشفافة في آن واحد.كما يعمل مجهر تباين التداخل التفاضلي (DIC) على توليد تباين في العينة، ويتم ذلك من خلال إنشاء صورة عالية الدقة لمقطع بصري رقيق. وهذا كل شيء.شكراً للمشاهدة، ونتمنى لكم التوفيق في دراساتكم المجهرية.

phase-contrast-and-differential-interference-contrast-dic-microscopy

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

يمكن النيسرية السحائية (نيوتن متر) ، وهي سلبية غرام الممرض التنفسي للإنسان على وجه التحديد ، ربط الإنسان actinin - α. هنا نقدم بروتوكول للتصور colocalisation للبكتيريا مع الخلايا α - actinin بعد دخول البكتيريا إلى خلايا الاوعية الدموية الدقيقة في الدماغ البطانية (HBMECs).

التخيل والكمي لالتفاعلات داخل الخلايا النيسرية السحائية والإنسان α - actinin بواسطة التصوير متحد البؤر

&lt; p class = "jove_content"&gt; نوضح استخدام الفحص المجهري لتوطين التنشيط الضوئي الفلوري (FPALM) لتصوير أنواع متعددة من الجزيئات المصنفة بالفلورسنت داخل الخلايا في وقت واحد. تنتج التقنيات الموصوفة توطين الآلاف إلى مئات الآلاف من البروتينات الفردية المسماة بالفلورسنت ، بدقة عشرات النانومتر داخل الخلايا المفردة.

في وقت واحد متعدد الألوان التصوير من الهياكل البيولوجية مع الإسفار تنشيط ضوئي توطين المجهر

نصف استخدام المجهر البصري القياسي لإجراء قياسات كمية للكتلة الخلوية والحجم والكثافة من خلال مزيج من صور تباين المجال الساطع والتداخل التفاضلي.

المجهر الضوئي الكمية: قياس الخلوية البيوفيزيائية الميزات مع مجهر بصري قياسي

ويستخدم المجهر متحد البؤر لصورة مخاليط البوليمر الغروانية هادئة وتتدفق، والتي يتم دراستها كما نظم نموذج للمعلقات جذابة. وتستخدم خوارزميات تحليل الصور لحساب المقاييس الهيكلية وديناميكية للالجسيمات الغروية التي تقيس التغيرات بسبب الحبس هندسية.

التصوير متحد البؤر المحصورة من هادئة ويتدفق مخاليط البوليمر المادة الغروية

نقدم هنا دليلاً عمليا لبناء نظام متكامل الفحص المجهري، والذي يدمج التقليدية برنامج التحصين الموسع-فلوري التصوير، وتصوير فائقة جزيء واحد القرار القائم على الكشف، والكشف عن جزيء واحد متعدد الألوان، بما في ذلك نقل الطاقة صدى الأسفار جزيء واحد التصوير، إلى إنشاء واحدة بطريقة فعالة من حيث تكلفة.

إجراء وسائط تصوير متعددة مع واحد Fluorescence المجهر

والهدف من هذا البروتوكول هو التفصيل نهج ثبت لاعداد عينات جسيمات متناهي plasmonic ولأداء الطيفية الجسيمات واحد عليها مع تباين التداخل التفاضلي (DIC) المجهر.

أداء الطيفي علي جسيمات نانويه Plasmonic مع القائم علي انتقال Nomarski نوع التداخل التفاضلي التباين المجهر

تصف هذه المخطوطة طريقة لاستخدام المجهر الفلوري أحادي الخلية لتصور المنافسة البكتيرية في الزراعة المشتركة وتحديدها كميا.

القياس الكمي للمنافسة بين البكتيريا باستخدام التصوير الفلوري أحادي الخلية

يجمع الفحص المجهري الديناميكي التفاضلي (DDM) بين ميزات تشتت الضوء الديناميكي والفحص المجهري. هنا ، يتم عرض عملية استخدام DDM لتوصيف شبكات الهيكل الخلوي المعاد تشكيلها عن طريق تحديد الديناميكيات تحت الانتشار والمحبوسة للجسيمات في شبكات vimentin والحركة الباليستية لمركبات الأكتين - microtubule النشطة التي يحركها الميوسين.

تحديد ديناميكيات الهيكل الخلوي باستخدام المجهر الديناميكي التفاضلي

يوضح هذا البروتوكول تطبيقات التصوير المتقدمة وإدارة الموارد المشتركة لنظام المجهر الكونفوكالي بالليزر المدمج مع كاشف مصفوفة متعدد الدقة للتصوير الخلوي وتحت الخلوي. يتيح سير العمل التصوير متعدد الوسائط من الدقة الكونفوكية إلى فائقة الدقة (~120 نانومتر) ضمن منصة واحدة، مما يجعل التصور على نطاق النانو أكثر سهولة.

التصوير عالي الدقة والإدارة المشتركة: بروتوكول للمجهر الكونفوكلي مع اكتشاف التعدد

لتقييم علاجات جديدة من الخلايا الجذعية من المهم جراحية غير المسار حقن الخلايا في الجسم الحي. هذا الفيديو سوف تظهر لك كيفية تسمية الخلايا الجذعية البشرية الجنينية والوسيطة مع وكلاء النقيض من أكسيد الحديد الموجودة في الجسم الحي عن التصوير بالرنين المغناطيسي لاحق في الجسم الحي.

ووضع العلامات hESCs hMSCs مع أوكسيد الحديد النانوية لعدم الغازية في تعقب المجراة مع التصوير بالرنين المغناطيسي

تعلم تقنيات مجهر التباين الطوري والتداخل التفاضلي المجهري لتحسين رؤية العينات البيولوجية الشفافة. هذه الطرق تكشف التفاصيل الدقيقة للهياكل الخلوية بدقة عالية.

وعلى النقيض من مرحلة التدخل التفاضلية المجهري التباين (DIC)

استكشف المزيد من الفيديوهات