بروتوكولات العدوى عن طريق الفم من اليرقات Lepidopteran مع الفيروسة العصوية

في هذا الفيديو ، ونظهر العدوى عن طريق الفم تقنيات اليرقات lepidopteran مع الفيروسة العصوية من أجل تحديد كفاءة الحشرات.

يشيع استخدام فيروس Vao كناقل للحمض النووي يستخدم مع خطوط خلايا الحشرات للتعبير عن البروتين. ومع ذلك ، فإن حقيقة أن هذا الفيروس يصيب الحشرات بكفاءة مع عواقب مميتة تجعله أيضا عاملا فعالا للمبيدات الحشرية. في البرازيل ، على سبيل المثال ، يتم تطبيق فيروس البالو من النوع البري على أكثر من مليون هكتار من محاصيل فول الصويا سنويا للسيطرة على كاتربيلر الفاصوليا المخملية لتعزيز فعاليتها في المبيدات الحشرية ، وقد تم هندسة فيروسات بالو وراثيا باستخدام جينات تشفر السموم الخاصة بالحشرات النشطة داخل HemosIL للحشرة.

في هذا الفيديو ، نوضح طرق العدوى الفموية ليرقات حرشفيات الأجنحة بفيروس باكاو من أجل تحليل فعالية المبيدات الحشرية. مرحبا ، أنا من مختبر العظام العمياء في قسم طب العيون وجامعة ولاية أيوا ، وأنا ويندي سباركس أيضا من مختبر العظام. سنعرض لك اليوم إجراءين لعدوى فيروس VA في اليرقات واليرقات.

أولا ، سيوضح لك harran كيفية إصابة يرقات حديثي الولادة باستخدام الاختبار الحيوي لتغذية القطيرات. وبعد ذلك سأوضح لك كيفية إصابة يرقات الطور المتوسط إلى المتأخر باستخدام مقايسة حيوية للدم في النظام الغذائي. لذلك دعونا نبدأ.

يمكن استخدام المقايسات الحيوية لتغذية القطرات لتحديد الجرعة المميتة من الأباكافير والبقاء على قيد الحياة. وقت اليرقات المصابة بفيروس البالو. تستخدم يرقات الطور المبكر أو يرقات حديثي الولادة بشكل عام لهذا الفحص.

قبل البدء ، تأكد من أن لديك أكواب النظام الغذائي مع النظام الغذائي المناسب في متناول اليد. أيضا ، قم بإعداد الفيروس المناسب تشمل التخفيفات صبغة تلوين الطعام الخضراء بتركيز 4٪ من حيث الحجم. من أجل تحديد تركيز الفيروس القاتل ، يجب أن يعطي التخفيف نطاقا من الوفيات بين واحد إلى 99٪ قد تكون هناك حاجة إلى فحوصات حيوية أولية لتحديد نطاق مناسب من تركيزات الفيروس بعد دوامة الأنبوب لمنع استقرار متعدد الوجوه ، وقم بعمل دائرتين متحدتين المركز من قطرات صغيرة من محلول الفيروس في طبق بتري 60 ملم.

لكل تركيز من الفيروس المستخدم ، تذكر أيضا إعداد عدوى وهمية للتحكم السلبي. العلاج بعد ذلك، نقل 25 إلى 30 يرقة حديثي الولادة إلى منتصف الدوائر متحدة المركز باستخدام فرشاة رسم معقمة. ضع الغطاء على الطبق وأغلقه بالشكلي لمنع اليرقات من الهروب.

من الناحية المثالية ، استخدم فرش رسم مختلفة للنقل إلى كل نوع من أنواع الفيروسات لمنع التلوث بين العلاجات. اترك الطبق يقف في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 إلى 15 دقيقة وخلال هذه الفترة تشرب اليرقات. يمكن التعرف على يرقات المحلول التي تم تغذيتها من خلال اللون الأخضر للأمعاء الأمامية الناتجة عن صبغة تلوين الطعام الخضراء التي تنقل فقط تلك اليرقات التي تغذت على أكواب بلاستيكية بوزن أونصة واحدة ، والتي تحتوي على يرقات واحدة لكل كوب.

بعد نقل اليرقات ، قم بتغطية الأكواب بأغطية واحتضان 28 درجة مئوية بعد 24 ساعة من الإصابة. تخلص من أي أكواب تحتوي على يرقات ميتة. من المحتمل أن تكون هذه الوفيات المبكرة ناتجة عن التعامل مع الإصابة.

عند استخدام هذا الاختبار الحيوي لتحديد الجرعة المميتة ، يجب فحص اليرقات كل يومين إلى ثلاثة أيام حتى يتم تنقية اليرقات المصابة الوهمية وأي يرقات معالجة بفيروس على قيد الحياة أو تبدأ في الاقتراض من أجل تشرنق اليرقات المصابة بالفيروس ، وستبقى على قمة الطعام ثم تموت بعد بضعة أيام. في بعض الأحيان ، تتحول اليرقات السوداء التي تموت من العدوى إلى أكياس متعددة الوجوه ، والتي ستذوب تماما. إذا كنت مضطربا ميكانيكيا في هذا الوقت ، فقم بتسجيل معدل وفيات اليرقات في كل علاج.

يجب تكرار المقايسات الحيوية للتركيز المميت ثلاث أو أربع مرات في مناسبات منفصلة. استخدم 30 فردا لكل جرعة لكل فيروس أو علاج مكافح. استخدم برنامجا مناسبا لتحليل الوصايا مثل البولو أو SAS لحساب قيم lc 50 وفترات الثقة 95٪ والإحصاءات المناسبة.

يمكن أيضا استخدام مقايسة تغذية القطرات هذه لتحديد قيم وقت البقاء ST 50. في هذه الحالة ، يتم تسجيل وفيات اليرقات كل أربع إلى ثماني ساعات مع ملاحظات أكثر تكرارا. إذا كان معدل الوفيات مرتفعا ، يتم إجراء المقايسات الحيوية في وقت البقاء على قيد الحياة باستخدام جرعة lc 99 من متوسط أوقات بقاء الفيروس ويتم حساب حدود الثقة بنسبة 95٪ باستخدام مقدر كابلان ماير باستخدام برنامج s plus أو SAS.

الآن بعد أن أظهر لك Harang المقايسة الحيوية لتغذية القطرات ، سأريكم الاختبار الحيوي لقابس النظام الغذائي في المقايسة الحيوية لقابس النظام الغذائي. يتم تغذية يرقات العصر المتوسط إلى المتأخر على سدادة حمية معالجة بجرعة معروفة من الفيروس لتحديد الجرعة المميتة أو LD 50 في اليوم السابق لإجراء هذا الفحص. قم بإزالة النظام الغذائي من الكوب لتجويع اليرقات طوال الليل.

ستزيد هذه الخطوة من السرعة التي تستهلك بها اليرقات للفيروس. مكعب النظام الغذائي الملقح في اليوم التالي ، قم بإعداد النظام الغذائي عن طريق تقطيعه إلى مكعبات صغيرة حوالي ملليمترين مكعبين. إذا كانت مكعبات النظام الغذائي صغيرة جدا ، فسوف تجف.

إذا كانت مكعبات النظام الغذائي كبيرة جدا ، فلن تتمكن اليرقات من استهلاك مكعب النظام الغذائي بالكامل بين عشية وضحاها. أضف الآن ميكرولتر إلى ميكرولتر من معلق متعدد الوجوه إلى كل مكعب حمية. يحتوي التعليق على 4٪ من حيث الحجم صبغة تلوين الطعام.

دع المعلق ينقع في النظام الغذائي لمدة خمس إلى 15 دقيقة. تذكر أيضا تحضير مكعب نظام غذائي معالج بالفيروسات الوهمية كعنصر تحكم سلبي. بعد ذلك ، انقل مكعبا واحدا من النظام الغذائي إلى كل يرقات الطور الرابع في كل كوب.

ثم ضع الأكواب في الحاضنة طوال الليل عند 28 درجة مئوية في اليوم التالي ، وتخلص من أي يرقات لم تأكل مكعب النظام الغذائي بالكامل. ثم أضف قطعة كبيرة من النظام الغذائي إلى كل كوب لليرقات المتبقية. حافظ على اليرقات عند 28 درجة مئوية ، مع إضافة نظام غذائي إضافي حسب الضرورة حتى تصبح اليرقات المصابة الوهمية واليرقات المصابة بالفيروس الباقية أو تبدأ في التشرنق.

في هذا الوقت ، سجل أعداد الحشرات الميتة والباقية. سنعرض لك فقط طريقتين لإصابة الحشرات بفيروس الظهر ، والنزيف ، وخزعة التغذية ، وخزعة البلاك الغذائي. عند القيام بهذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر أن الجثث التي قتلها فيروس الفاو عادة ما تكون هشة ويمكن أن تتمزق بسهولة إطلاق الفيروس.

لذلك تعقيم أسطح العمل والتخلص من القفازات الملوثة والمواد التي تستخدم لمرة واحدة بطريقة مناسبة لمنع التلوث. هذا كل شيء. شكرا على المشاهدة ونتمنى لك السعادة في تجاربك.