الحصول على البيض من الإناث المورق القيطم

تعتبر مستخلصات بيض Xip Labis مفيدة كمصادر للمواد السيتوبلازمية والعضية لإعادة تكوين الأحداث الخلوية في المختبر مثل التجميع النووي واستيراد البروتين النووي. بالطبع ، قبل أن تتمكن من استخدام مستخلصات البيض ، تحتاج أولا إلى الحصول على البيض من إناث الضفادع. مرحبا ، اسمي ماري كروس وأنا طالبة دراسات عليا في مختبر الدكتورة مورين باور في قسم بيولوجيا الخلية في جامعة إيموري في أتلانتا ، جورجيا.

سنوضح لك اليوم كيفية الحصول على بيض الهلام D من إناث opus lavis الناضجة. يتضمن هذا الإجراء الخطوات التالية ، تحضير الضفادع للبيض ، ووضع المارير الحامل ، وموجهة الغدد التناسلية في الدم التي تحفز البويضة ، ووضع موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية ، وفرز أي بيض أو خلايا سيئة. لذلك دعونا نبدأ.

لإنتاج البيض ، يتم تحضير إناث الضفادع الناضجة أولا باستخدام موجهة الغدد التناسلية لمصل الفرس الحامل. لبدء إجراء التحضير ، قم بإعداد خزان يحتوي على مائة مللي مولر كلوريد الصوديوم لإيواء الضفادع. بعد الحقن ، يجب الاحتفاظ بالضفادع الرئيسية بكثافة ضفدع واحد تقريبا لكل لتر.

يتم الحفاظ على إنتاج البيض الأمثل عن طريق إسكان الضفادع عند 18 درجة مئوية. باستخدام إبرة قياس 27 متصلة بحقنة ميل واحد ، قم بحقن الضفدع تحت الجلد في الكيس الليمفاوي الظهري مع 0.5 مل من 200 وحدة لكل مل. موجهة الغدد التناسلية لمصل الفرس الحامل.

أعد الضفادع الرئيسية إلى الخزان الذي يحتوي على مائة مللي مولر كلوريد الصوديوم. بعد يومين إلى ثلاثة أيام ، قم بتحفيز وضع البيض عن طريق حقن الضفادع ب 0.5 مل من مائة وحدة لكل مل. حقن موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية مرة أخرى تحت الجلد في الكيس الليمفاوي الظهري.

بعد الحقن ، ضع كل ضفدع في خمسة لترات من مائة مللي مولر كلوريد الصوديوم. من الأفضل وضع كل ضفدع في الحاوية الخاصة به لأن جودة البيض تختلف من ضفدع إلى ضفدع. بعد حوالي 16 إلى 22 ساعة من حقن موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية ، قم بإزالة الضفدع إلى خزان مياه نظيف واسكب البيض في دورق

ينصح بمراقبة الضفادع لمدة يوم إلى يومين بحثا عن علامات العدوى في موقع الحقن. في هذه المرحلة ، يحيط معطف جيلي شفاف بكل بيضة ، مما يمنعهم من لمس بعضهم البعض ل de هلام البيض ، وشطف البيض مرة واحدة و 2٪ L سيستين الرقم الهيدروجيني H ثمانية ، ثم استمر في احتضان مائة فاتورة من محلول السيستين 2٪ L لكل ضفدع لمدة خمس دقائق تقريبا. في درجة حرارة الغرفة ، حرك البيض برفق بشكل دوري بعد خمس دقائق.

صب محلول السيستين من بيض ديجي واغسله ثلاث مرات في محلول رنين معدل 0.25 ×. لإزالة الحطام ، صب البيض في طبق بتري زجاجي مائة ملم يعمل تحت مجهر تشريح. قم بإزالة البيض الفاسد من طبق بتري بماصة المراعي.

بيض xip الناضج على نصف مصطبغ غامق في الأعلى ونصف خفيف في الأسفل. يجب أن تكون بقعة بيضاء بحجم دقيق تشير إلى نضوج البويضة مرئية في وسط نصف الكرة الأرضية الداكن من البويضة الناضجة. البيضة الجيدة هي البيضة التي تحتوي على تصبغ على غرار على غرار النموذج.

أي شيء بدون هذه البقعة البيضاء هو بويضة ويجب إزالتها. يجب أيضا إزالة أي بيض أبيض متضخم أو غير مصطبغ بشكل موحد. ستظهر البيضة السيئة بشكل خاص على شكل كرة بيضاء منتفخة مع حدود بين نصفي الكرة الأرضية المحجوبة تماما ، تغسل البيض المصنف مرتين إلى ثلاث مرات عن طريق سكب عازلة البيض عليها ، ثم صب المخزن المؤقت بعناية ، مما يقلل من عدد البيض الذي ينسكب.

الآن يمكن تحلل البيض وتحضير المستخلصات. لقد أوضحنا لك للتو كيفية الحصول على بيض الهلام من إناث xenopus lavis الناضجة. تأكد من إطلاعك على مقطعي الفيديو الآخرين اللذين يوضحان لك كيفية تحضير مستخلصات البيض الخام بالإضافة إلى كيفية إعادة التجميع النووي في المختبر باستخدام مستخلصات البيض المجزأة.

هذا كل شيء. شكرا على المشاهدة ونتمنى لك السعادة في تجاربك.