Name: الحصول على البيض من الإناث المورق القيطم (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-20T20:12:00.000+00:00
Duration: 4 min 47 s
Description: تعلم كيفية الحصول على البيض من إناث Xenopus laevis وتحضيره للاستخدام التجريبي في دراسات الخلايا والتطور. يوضح هذا البروتوكول خطوات تحفيز وضع البيض وفرزه لضمان الجودة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

بروتوكول النص الكامل لهذا النهج التجريبي هو متاح في <a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">البروتوكولات الحالية في بيولوجيا الخلية</a> .

ليس لدى المؤلفين أي تضارب مصالح للإفصاح عنه.

الحصول على البيض من الإناث المورق القيطم

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

لبيض القيطم المورق سليمة ، lysed ، و / أو مجزأة مفيدة لطائفة واسعة من التجارب. هذا البروتوكول يوضح كيف للحث على وضع البيض ، وجمع وdejelly البيض ، وفرز البيض البيض لإزالة أي تلف.

تعد بيوض ضفدع *Xenopus laevis*، سواء كانت سليمة أو محللة و/أو مجزأة، مفيدة لمجموعة واسعة من التجارب. يوضح هذا البروتوكول كيفية تحفيز وضع البيض، ...

تُعد مستخلصات بيض Xenopus laevis مفيدة كمصادر للمواد السيتوبلازمية ومواد العضيات لإعادة تشكيل الأحداث الخلوية في المختبر، مثل التجميع النووي واستيراد البروتين النووي. وبالطبع، قبل أن تتمكن من استخدام مستخلصات البيض، يتعين عليك أولاً الحصول على البيض من إناث الضفادع. مرحبًا، اسمي ماري كروس، وأنا طالبة دراسات عليا في مختبر الدكتورة مورين باور في قسم بيولوجيا الخلية بجامعة إيموري في أتلانتا، جورجيا.سنوضح لكم اليوم كيفية الحصول على بيوض هلامية من إناث *Xenopus laevis* البالغة. تتضمن هذه العملية الخطوات التالية: تهيئة الضفادع لوضع البيض باستخدام مصل المناسل الحامل، وتحفيز وضع البيض باستخدام موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية، وفرز أي بيوض أو بويضات تالفة. لذا، فلنبدأ.لإنتاج البيض، يتم أولاً تحفيز إناث الضفادع البالغة باستخدام هرمون منشط للجناث من مصل الأفراس الحوامل. لبدء إجراء التحفيز، قم بتجهيز حوض يحتوي على كلوريد الصوديوم بتركيز 100 mM لإيواء الضفادع. بعد الحقن، يجب الاحتفاظ بالضفادع التي تم تحفيزها بكثافة تقريبية تبلغ ضفدع واحد لكل لتر.يتم الحفاظ على الإنتاج الأمثل للبيض عن طريق إيواء الضفادع في درجة حرارة 18 °C. وباستخدام إبرة قياس 27 متصلة بمحقنة سعة 1 ml، يتم حقن الضفدع تحت الجلد في الكيس اللمفاوي الظهري بـ 0.5 ml من هرمون المنشط الموجه للغدد التناسلية المستخلص من مصل الفرس الحامل بتركيز 200 units per ml.أعد الضفادع المجهزة إلى الحوض الذي يحتوي على كلوريد الصوديوم بتركيز 100 millimolar. وبعد مرور يومين إلى ثلاثة أيام، يتم تحفيز وضع البيض عن طريق حقن الضفادع بـ 0.5 mils من هرمون موجّه الغدد التناسلية المشيمائي البشري بتركيز 100 units per mil، حيث يتم الحقن مرة أخرى تحت الجلد في الكيس اللمفاوي الظهري.بعد الحقن، ضع كل ضفدع في خمسة لترات من كلوريد الصوديوم بتركيز 100 millimolar. ويُفضل وضع كل ضفدع في وعاء مستقل نظراً لتفاوت جودة البويضات من ضفدع لآخر. وبعد مرور حوالي 16 إلى 22 ساعة من الحقن بهرمون human chorionic gonadotropin، انقل الضفدع إلى خزان مياه نظيفة واسكب البويضات في بيكر.يُنصح بمراقبة الضفادع لمدة تتراوح بين يوم إلى يومين بحثاً عن علامات العدوى في موقع الحقن. وفي هذه المرحلة، يحيط بكل بيضة غشاء هلامي شفاف يمنع تلامس البيوض مع بعضها البعض؛ ولإزالة الغشاء الهلامي عن البيوض، تُشطف البيوض مرة واحدة بمحلول 2%L cysteine بأس هيدروجيني pH 8، ثم تُستكمل عملية الحضن في مائة مل من محلول 2%L cysteine لكل ضفدعة لمدة خمس دقائق تقريباً. وفي درجة حرارة الغرفة، يتم تدوير البيوض بلطف وبشكل دوري بعد مرور خمس دقائق.قم بسكب محلول السيستين بعيداً عن بيوض deje واغسلها ثلاث مرات في محلول ringer المعدل بتركيز 0.25 x. ولإزالة الشوائب، اسكب البيوض في طبق بتري زجاجي بقطر مئة مليمتر أثناء العمل تحت مجهر تشريحي. ثم قم بإزالة البيوض التالفة من طبق بتري باستخدام ماصة باستور.تتميز بيوض xip الناضجة بوجود نصف علوي داكن التصبغ ونصف سفلي فاتح. يجب أن تكون هناك بقعة بيضاء بحجم رأس الدبوس، تشير إلى نضج الخلية البيضية، مرئية في مركز النصف الداكن من البيضة الناضجة. وتعتبر البيضة جيدة إذا كانت ذات تصبغ منتظم في كل نصف.أي شيء لا يحتوي على هذه البقعة البيضاء هو خلية بيضية (oocyte) ويجب إزالته. كما يجب إزالة أي بيوض تكون بيضاء أو متضخمة أو غير مصبغة بشكل منتظم. ستظهر البيضة التالفة بشكل خاص ككرة بيضاء منتفخة مع طمس الحدود بين نصفي الكرة تماماً. اغسل البيوض التي تم فرزها من مرتين إلى ثلاث مرات عن طريق سكب محلول منظم لتحلل البيض (egg lys buffer) عليها، ثم سكب المحلول المنظم بعناية، مع تقليل عدد البيوض التي قد تنسكب للخارج.يمكن الآن تحلل البويضات وتحضير المستخلصات. لقد أوضحنا لكم للتو كيفية الحصول على البويضات وإزالة الهلام منها من إناث xenopus lavis الناضجة. تأكدوا من مشاهدة فيديوهاتنا الآخرين اللذين يوضحان كيفية تحضير مستخلصات البويضات الخام، بالإضافة إلى كيفية إعادة تشكيل التجميع النووي في المختبر باستخدام مستخلصات البويضات المجزأة.هذا كل شيء. شكراً للمشاهدة وبالتوفيق في تجاربكم.

obtaining-eggs-from-xenopus-laevis-females

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

تسميد البويضات القيطم باستخدام أسلوب نقل المضيف

القيطم ظهائر الجنينية هي نموذج مثالي لنظام دراسة سلوكيات الخلية مثل التنمية وتغير شكل القطبية خلال التشكل الظهارة. ويتزايد الأنسجة التقليدية لعينات محددة يجري استكمالها التصوير الخلية الحية مبائر. هنا نظهر طرق لعزل الأنسجة الضفادع وتصور الخلايا الظهارية العيش والهيكل الخلوي وذلك باستخدام الخلايا الحية المجهري متحد البؤر.

تعيش خلية التصوير والتحليل الكمي من الخلايا الظهارية في الجنينية القيطم المورق</em

القيطم البيض هو نظام استخراج نموذجا مفيدا للتحقيق في نقطة تفتيش الحمض النووي من التلف. هذا البروتوكول هو لإعداد مستخلصات البيض القيطم والكواشف DNA حمل الضرر الحاجز. هذه التقنيات قابلة للتكيف مع مجموعة متنوعة من النهج DNA الضارة في دراسة الحمض النووي مما يشير الى نقطة التفتيش الضرر.

دراسة الحمض النووي حاجز الضرر باستخدام<em&gt; القيطم</emمقتطفات البيض&gt;

إنتاج<em&gt; القيطم مداري</em&gt; البيض مقتطفات من التعرف على الرنا أنيبيب المرتبطة بها

ووصف طريقة لتحليل تدهور البروتين باستخدام رديولبلد والبروتينات luciferase المراسل الانصهار في القيطم استخراج البيض والتكيف من أجل الفرز الفائق الإنتاجية للجهري جزيء صغير من تدهور البروتين.

إعادة تشكيل β-catenin تدهور في<em&gt; القيطم</em&gt; مستخلصات البيض

نصف طرق التلاعب بالبويضات غير الناضجة Xenopus laevis ، والنضج المختبري للبويضات إلى البويضات ، وحقن المنوية داخل الهيولى. يسمح هذا البروتوكول بتدهور بعض بروتينات الأم والإفراط في التعبير عن الجينات ذات الأهمية عند الإخصاب ، وبالتالي فهو ذو قيمة لدراسة أدوار عوامل محددة في التطور الجنيني المبكر.

التلاعب و<em&gt; في المختبر</em&gt; نضوج<em&gt; القيطم المورق</em&gt; البويضات، تلاه سهم داخل الهيولى حقن الحيوانات المنوية، لدراسة التطور الجنيني

يحدث التحكم في تخليق البروتين بشكل أساسي في خطوة بدء الترجمة ، حيث ترتبط أوجه القصور باضطرابات متنوعة. لفهم مسببات أسبابهم بشكل أفضل ، وصفنا هنا بروتوكولا باستخدام بويضات Xenopus laevis لتقييم ترجمة نسخة mos في وجود طفرة لعامل بدء الترجمة eIF4G1.

القيطم المورق نموذجا لتحديد الترجمة انخفاض قيمة

لا تزال آليات التحجيم الخلوي وداخل الخلايا بعيدة المنال. أصبح استخدام مستخلصات جنة Xenopus شائعا بشكل متزايد لتوضيح آليات تنظيم حجم العضية. تصف هذه الطريقة تحضير مستخلص الجنين ومقايسة القياس النووي الجديدة التي يمكن من خلالها تحديد آليات تنظيم الحجم النووي.

فحص خلية مجاني عن طريق<em&gt; القيطم المورق</em&gt; الأجنة مقتطفات لدراسة آليات الحجم رقابة النووية

يوضح هذا البروتوكول طريقة القائم على مضان لتصور الأوعية الدموية وتحديد مدى تعقيدها في القيطم الاستوائية . الأوعية الدموية يمكن تصويرها بعد دقائق من حقن صبغة الفلورسنت في قلب الضرب من الجنين بعد التلاعب الجيني و / أو الدوائية لدراسة التنمية القلب والأوعية الدموية في الجسم الحي .

التصور والتحليل الكمي من الأوعية الدموية الجنينية في<em&gt; زينوبوس تروبيكاليس</em

وصفنا طريقة لإعداد والتصوير الحي للمقتطفات السيتوبلازمية غير المخففة من بيض Xenopus laevis .

زينوبوس لايفيس تحضير مستخلص البيض وطرق التصوير الحية لتصور التنظيم السيتوبلازمي الديناميكي

عند تحويل عامل النمو ß البروتينات السلائف الأسرة يتم التعبير عنها خارج الرحم في الأجنة Laevis Xenopus، فإنها تغمغم، والحصول على مشقوق وتفرز في blastocoele، الذي يبدأ في وقت متأخر blastula إلى مرحلة gastrula في وقت مبكر. نحن نصف طريقة لاستنشق منتجات الانقسام من تجويف الانفجار لتحليل المناعة.

تحليل تحويل عامل النمو ß منتجات الانقسام الأسرة تفرز في Blastocoele من الأجنة Xenopus laevis

تعلم كيفية الحصول على البيض من إناث Xenopus laevis وتحضيره للاستخدام التجريبي في دراسات الخلايا والتطور. يوضح هذا البروتوكول خطوات تحفيز وضع البيض وفرزه لضمان الجودة.

الحصول على البيض من الإناث المورق القيطم

استكشف المزيد من الفيديوهات