the-cell-based-l-glutathione-protection-assays-to-study-endocytosis

The Cell-based L-Glutathione Protection Assays to Study Endocytosis and Recycling of Plasma Membrane Proteins

Membrane trafficking involves transport of proteins from the plasma membrane to the cell interior (i.e. endocytosis) followed by trafficking to lysosomes ...

Children's Hospital of Pittsburgh of UPMC

University of Pittsburgh School of Medicine

CFTR &#x662F;&#x8425;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6C2F;&#x901A;&#x9053;&#x8868;&#x793A;&#x5FC3;&#x5C16;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x6D41;&#x4F53;&#x8F93;&#x9001;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x4E30;&#x5EA6;&#x7684; CFTR &#x7531;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x63A7;&#x5236;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x63A7;&#x5236; CFTR &#x541E;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7F51;&#x7EDC;&#x53EA;&#x6709;&#x90E8;&#x5206;&#x63A2;&#x8BA8;&#x3002;&#x5927;&#x4F1A;&#x591A;&#x80BD; 2 &#x590D;&#x6742; (AP 2&#xFF09; &#x662F;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x541E;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x4F18;&#x5316;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x5927;&#x8863;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;AP 2 &#x8F74;&#x627F; Yxx&Phi; &#x6BCD;&#x9898;&#x7684;&#x8D27;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5F81;&#x8058;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x867D;&#x7136; AP 2 &#x76F4;&#x63A5;&#x4E0E; CFTR &#x4F53;&#x5916;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4FBF;&#x4E8E; CFTR &#x541E;&#x4E2D;&#x67D0;&#x4E9B;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x672A;&#x77E5;&#x662F;&#x5426;&#x4ECD;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x7684; CFTR &#x5438;&#x6536;&#x5230;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x6D82;&#x5C42;&#x56CA;&#x6CE1; (CCVs)&#x3002;&#x5DF2;&#x7981;&#x7528;-2 (Dab2) &#x662F;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x62DB;&#x52DF;&#x3001; &#x6CE1;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x8D27;&#x7269;&#x9009;&#x62E9;&#x7684;&#x6392;&#x5E8F;&#x86CB;&#x767D; (&#x6263;)&#x3002;&#x80A0;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE; Dab2 &#x672A;&#x627E;&#x5230; CFTR &#x541E;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x76F4;&#x63A5;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;AP 2 &#x548C; Dab2 &#x90FD;&#x663E;&#x793A;&#x51FA;&#x4FBF;&#x5229; CFTR &#x541E;&#x4EBA;&#x6C14;&#x9053;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; Dab2 &#x4ECB;&#x5BFC; AP 2 &#x81EA;&#x4E3B;&#x62DB;&#x751F;&#x7684; CFTR &#x5230; CCVs &#x4E2D;&#x6781;&#x5316;&#x4EBA;&#x6C14;&#x9053;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5176;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4FBF;&#x4E8E; CFTR &#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x964D;&#x4F4E; CFTR &#x4E30;&#x5EA6;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6548;&#x679C;&#x88AB;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x6C11;&#x5EFA;&#x8054;&#x540C;&#x6E90;&#x57DF;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B; airwy &#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE; AP 2 &#x4E0D;&#x662F; CCVs CFTR &#x62DB;&#x52DF;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;

DAB2 &#x4FBF;&#x4E8E;&#x4F53;&#x819C;&#x6781;&#x5316;&#x4EBA;&#x6C14;&#x9053;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; CFTR AP 2 &#x72EC;&#x7ACB;&#x62DB;&#x52DF;&#x3002;

CFTR is a cAMP-activated Cl- channel expressed in the apical plasma membrane of fluid-transporting epithelia, where the plasma membrane abundance of CFTR is in part controlled by clathrin-mediated endocytosis. The protein networks that control CFTR endocytosis in epithelial cells have only been partially explored. The assembly polypeptide-2 complex (AP-2) is the prototypical endocytic adaptor critical for optimal clathrin coat formation. AP-2 is essential for recruitment of cargo proteins bearing the YxxÎ¦ motif. While AP-2 interacts directly with CFTR in vitro and facilitates CFTR endocytosis in some cell types, it remains unknown whether it is critical for CFTR uptake into clathrin coated vesicles (CCVs). Disabled-2 (Dab2) is a clathrin associated sorting protein (CLASP) that contributes to clathrin recruitment, vesicle formation, and cargo selection. In intestinal epithelial cells Dab2 was not found to play a direct role in CFTR endocytosis. By contrast, AP-2 and Dab2 were shown to facilitate CFTR endocytosis in human airway epithelial cells although the specific mechanism remains unknown. Our data demonstrate that Dab2 mediates AP-2 independent recruitment of CFTR to CCVs in polarized human airway epithelial cells. As a result, it facilitates CFTR endocytosis, and reduces CFTR abundance and stability in the plasma membrane. These effects are mediated by the DAB homology domain. Moreover, we show that in human airwy epithelial cells AP-2 is not essential for CFTR recruitment to CCVs.

DAB2 facilitates AP-2 independent recruitment of CFTR to endocytic vesicles in polarized human airway epithelial cells.

CFTR est qu&#39;un canal Cl activ&eacute;s par le cAMP exprim&eacute;e dans la membrane plasmique apicale des &eacute;pith&eacute;liums transport de fluide, o&ugrave; l&#39;abondance de la membrane plasmique du CFTR est en partie contr&ocirc;l&eacute;e par endocytose clathrine. Les r&eacute;seaux de prot&eacute;ines qui contr&ocirc;lent l&#39;endocytose CFTR dans les cellules &eacute;pith&eacute;liales ont seulement &eacute;t&eacute; partiellement explor&eacute;es. Le complexe de polypeptide-2 de l&#39;Assembl&eacute;e (AP-2) est l&#39;adaptateur endocytose prototypique critique pour la formation de manteau de clathrine optimale. AP-2 est essentiel pour le recrutement des prot&eacute;ines de cargaison portant le motif Yxx&Phi;. AP-2 interagit directement avec le CFTR in vitro et facilite l&#39;endocytose CFTR dans certains types de cellules, mais demeure inconnu si elle est essentielle pour l&#39;absorption du CFTR dans des v&eacute;sicules de clathrine enduit (CCVs). Personnes handicap&eacute;es-2 (Dab2) est qu&#39;un clathrine associ&eacute;s tri prot&eacute;ine (CLASP) qui contribue au recrutement de clathrine, formation de v&eacute;sicules et la s&eacute;lection de la cargaison. Dans les cellules &eacute;pith&eacute;liales intestinales Dab2 n&#39;a pas &eacute;t&eacute; trouv&eacute;e &agrave; jouer un r&ocirc;le direct dans l&#39;endocytose CFTR. En revanche, AP-2 et Dab2 ont &eacute;t&eacute; montr&eacute; pour faciliter l&#39;endocytose CFTR dans les cellules &eacute;pith&eacute;liales des voies respiratoires humaines bien que le m&eacute;canisme sp&eacute;cifique reste inconnu. Nos r&eacute;sultats d&eacute;montrent que Dab2 m&eacute;die AP-2 recrutement ind&eacute;pendant du CFTR &agrave; VCC dans les cellules &eacute;pith&eacute;liales polaris&eacute;es pulmonaire humain. Ainsi, il facilite l&#39;endocytose CFTR et r&eacute;duit l&#39;abondance CFTR et la stabilit&eacute; dans la membrane plasmique. Ces effets sont m&eacute;di&eacute;s par le domaine d&#39;homologie DAB. En outre, nous montrons que dans les cellules &eacute;pith&eacute;liales humaines airwy AP-2 n&#39;est pas essentiel de recrutement CFTR CCVs.

DAB2 facilite la AP-2 recrutement ind&eacute;pendant du CFTR aux v&eacute;sicules endocytose dans les cellules &eacute;pith&eacute;liales polaris&eacute;es pulmonaire humain.

CFTR ist ein Lager aktivierte Cl-Kanal ausgedr&uuml;ckt in der apikalen Plasmamembran der Fl&uuml;ssigkeit-transportierende Epithelien, wo die Plasmamembran F&uuml;lle von CFTR wird teilweise gesteuert durch Clathrin-vermittelte Endozytose Die Protein-Netzwerke, die CFTR Endozytose Epithelzellen Steuern haben nur teilweise erforscht. Die Versammlung Polypeptid-2 Anlage (AP-2) ist der prototypische endocytic Adapter f&uuml;r optimale Clathrin Mantel Bildung entscheidend. AP-2 ist wesentlich f&uuml;r die Einstellung der Ladung Proteine mit das Yxx&Phi;-Motiv. W&auml;hrend AP-2 direkt mit CFTR in-vitro interagiert- und CFTR Endozytose in einigen Zelltypen erleichtert, ist es unbekannt, ob es f&uuml;r CFTR-Aufnahme in Clathrin-coated Vesikel (CCVs) wichtig ist. Behinderte-2 (Dab2) ist, dass eine Clathrin Sortierung Protein (SPANGE) zugeordnet, die Clathrin-Rekrutierung, Vesikel Bildung und Fracht-Auswahl tr&auml;gt. Intestinale Epithelzellen wurde Dab2 nicht gefunden, eine direkte Rolle im CFTR Endozytose. Im Gegensatz dazu zeigte AP-2 und Dab2 CFTR Endozytose in menschlichen Atemwege Epithelzellen zu erleichtern, obwohl der Mechanismus unbekannt bleibt. Unsere Daten zeigen, dass Dab2 AP-2 unabh&auml;ngige Einstellung von CFTR zu CCVs polarisierten menschlichen Atemwege Epithelzellen vermittelt. Infolgedessen es erleichtert CFTR Endozytose und reduziert CFTR F&uuml;lle und Stabilit&auml;t in der Plasmamembran. Diese Effekte sind durch die DAB-Homologiegebiet vermittelt. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass die AP-2 im menschlichen Airwy Epithelzellen nicht f&uuml;r CFTR Anwerbung f&uuml;r CCVs wichtig.

DAB2 erleichtert die AP-2 unabh&auml;ngige Einstellung von CFTR, endocytic Bl&auml;schen in polarisierten menschlichen Atemwege Epithelzellen.

CFTR &egrave; che un canale di Cl cAMP-attivato espressi nella membrana plasmatica apicale dell&#39;epitelio di trasporto di fluidi, dove l&#39;abbondanza di membrana plasmatica di CFTR &egrave; in parte controllata tramite endocitosi clatrina-mediata. Le reti di proteine che controllano l&#39;endocitosi CFTR nelle cellule epiteliali sono state solo parzialmente esplorate. Il complesso del polipeptide-2 Assemblea (AP-2) &egrave; il prototipo adattatore endocitico critico per la formazione di cappotto clatrina ottimale. AP-2 &egrave; essenziale per l&#39;assunzione di proteine cargo recanti il motivo Yxx&Phi;. Mentre AP-2 interagisce direttamente con CFTR in vitro e facilita l&#39;endocitosi CFTR in alcuni tipi di cellule, rimane sconosciuto se &egrave; fondamentale per la captazione CFTR in vescicole rivestita di clatrina (CCVs). Disabili-2 (Dab2) &egrave; che un clatrina ordinamento proteina (chiusura) che contribuisce alla clatrina reclutamento, formazione di vescicole e selezione carico associata. Nelle cellule epiteliali intestinali Dab2 non &egrave; stato trovato a giocare un ruolo diretto nell&#39;endocitosi CFTR. Al contrario, AP-2 e Dab2 sono stati mostrati per facilitare l&#39;endocitosi CFTR nelle cellule epiteliali delle vie aeree umane anche se il meccanismo specifico rimane sconosciuto. I nostri dati dimostrano che Dab2 da intermediario AP-2 assunzione indipendente di CFTR a CCVs nelle cellule epiteliali polarizzate umano delle vie aeree. Di conseguenza, facilita l&#39;endocitosi CFTR e riduce l&#39;abbondanza CFTR e stabilit&agrave; nella membrana del plasma. Questi effetti sono mediati dal dominio di omologia DAB. Inoltre, ci mostrano che in cellule epiteliali umane airwy AP-2 non &egrave; essenziale per l&#39;assunzione di CFTR a CCVs.

DAB2 facilita il reclutamento indipendente AP-2 di CFTR endocitico vescicole nelle cellule epiteliali polarizzate umano delle vie aeree.

CFTR &#x306F;&#x3001;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7; &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; Cl &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D41;&#x4F53;&#x8F38;&#x9001;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x6839;&#x5C16;&#x90E8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x8868;&#x73FE; CFTR &#x306E;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306E;&#x8C4A;&#x304B;&#x3055;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x90E8;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x4ECB;&#x5728;&#x578B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; CFTR &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x307F;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; 2 &#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#xFF08;ap &#x901A;&#x4FE1;-2) &#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3; &#x30B3;&#x30FC;&#x30C8;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x81E8;&#x754C;&#x539F;&#x578B;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;AP 2 Yxx&Phi; &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x8EF8;&#x53D7;&#x8377;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x52DF;&#x96C6;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;AP 2 CFTR &#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x5916;&#x3067;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3001;CFTR &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x9593;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x5C0F;&#x80DE; (CCVs) &#x306B; CFTR &#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x4E0D;&#x660E;&#x306A;&#x307E;&#x307E;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7121;&#x52B9;-2 (Dab2) &#x306F;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x52DF;&#x96C6;&#x3001;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x8CA8;&#x7269;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x9078;&#x5225;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; &#xFF08;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30D7;&#xFF09; &#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x8178;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; Dab2 CFTR &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x518D;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;AP 2 &#x3068; Dab2 &#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C; CFTR &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3072;&#x3068;&#x6C17;&#x9053;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;Dab2 AP 2 &#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x52DF;&#x96C6; CFTR CCVs &#x504F;&#x5149;&#x3072;&#x3068;&#x6C17;&#x9053;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F; CFTR &#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3001;CFTR &#x306E;&#x8C4A;&#x304B;&#x3055;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;DAB &#x76F8;&#x540C;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593; airwy &#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C; AP 2 CFTR &#x63A1;&#x7528; CCVs &#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

DAB2 AP 2 &#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x52DF;&#x96C6; CFTR &#x306E;&#x504F;&#x5149;&#x3072;&#x3068;&#x6C17;&#x9053;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CFTR&#xC740; &#xCEA0;&#xD504; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl &#xCC44;&#xB110; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xC720;&#xCCB4; &#xC218;&#xC1A1; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC758; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xD48D;&#xC694;&#xC758; CFTR &#xBD80;&#xBD84;&#xC801; endocytosis clathrin &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4;. CFTR endocytosis &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD0D0;&#xD5D8;&#xB9CC; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; polypeptide 2 &#xB2E8;&#xC9C0; (AP 2) &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; clathrin &#xCF54;&#xD2B8; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC6D0;&#xD615; endocytic &#xC5B4;&#xB311;&#xD130;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. AP 2 &#xD654;&#xBB3C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Yxx&Phi; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1;&#xC758; &#xCC44;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. AP 2 CFTR &#xCCB4; &#xC678;&#xC640; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; CFTR endocytosis &#xC77C;&#xBD80; &#xC140; &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xCF54;&#xD305; clathrin &#xC18C;&#xD3EC; (CCVs)&#xB85C; CFTR &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC548; &#xD568;-2 (Dab2)&#xB294; clathrin clathrin &#xBAA8;&#xC9D1; &#xAE30; &#xD615;&#xC131;&#xACFC; &#xD654;&#xBB3C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xC815;&#xB82C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (&#xAC78;&#xC1E0;) &#xAD00;&#xB828;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC7A5;&#xB0B4; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; dab2&#xB294; CFTR endocytosis&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, a P 2&#xC640; Dab2 &#xD2B9;&#xC815; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; CFTR endocytosis &#xCD09;&#xC9C4;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; Dab2 AP 2 &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBAA8;&#xC9D1; CFTR CCVs &#xD3B8;&#xAD11;&#xB41C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xACB0;&#xACFC;, CFTR endocytosis&#xB97C; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558; &#xACE0; CFTR &#xD48D;&#xC694;&#xB85C; &#xC6C0;&#xACFC; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xD0A8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; DAB homology &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; airwy &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; AP 2 &#xC544;&#xB2CC;&#xC9C0; CCVs CFTR &#xCC44;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

DAB2 &#xD3B8;&#xAD11;&#xB41C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; endocytic &#xC18C;&#xD3EC;&#xC5D0; CFTR AP 2 &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBAA8;&#xC9D1;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

CFTR es que un Cl-canal activado campo expresada en la membrana plasm&aacute;tica apical del epitelio transporte l&iacute;quido, donde la abundancia de la membrana plasm&aacute;tica de CFTR es controlada en parte por endocitosis mediada por clatrina. S&oacute;lo se han explorado parcialmente las redes de prote&iacute;nas que controlan la endocitosis CFTR en las c&eacute;lulas epiteliales. El complejo de polip&eacute;ptido-2 Asamblea (AP-2) es el prototipo adaptador endoc&iacute;ticos cr&iacute;tico para la formaci&oacute;n de la capa de clatrina &oacute;ptima. AP-2 es esencial para el reclutamiento de prote&iacute;nas de carga con el motivo de la Yxx&Phi;. AP-2 interact&uacute;a directamente con CFTR in vitro y facilita la endocitosis CFTR en algunos tipos de c&eacute;lulas, desconoce si es fundamental para la absorci&oacute;n CFTR en ves&iacute;culas recubierta de clatrina (CCVs). Discapacitados-2 (Dab2) es que una clatrina asociado prote&iacute;na clasificaci&oacute;n (corchete) que contribuye a la contrataci&oacute;n de clatrina, formaci&oacute;n de la ves&iacute;cula y selecci&oacute;n de la carga. En las c&eacute;lulas epiteliales intestinales Dab2 no se encontr&oacute; a desempe&ntilde;ar un papel directo en la endocitosis CFTR. Por el contrario, AP-2 y Dab2 fueron demostradas para facilitar la endocitosis CFTR en las c&eacute;lulas epiteliales de las v&iacute;as respiratorias humanas aunque se desconoce el mecanismo espec&iacute;fico. Nuestros datos demuestran que Dab2 media AP-2 reclutamiento independiente de CFTR a CCVs en las c&eacute;lulas epiteliales humanos polarizada de las v&iacute;as respiratorias. En consecuencia, facilita la endocitosis CFTR y reduce la abundancia CFTR y estabilidad en la membrana plasm&aacute;tica. Estos efectos son mediados por el dominio de homolog&iacute;a DAB. Por otra parte, demostramos que en las c&eacute;lulas epiteliales humanos airwy AP-2 no es esencial para el reclutamiento de CFTR a CCVs.

DAB2 facilita reclutamiento independiente AP-2 de CFTR ves&iacute;culas endoc&iacute;ticas en c&eacute;lulas epiteliales humanos polarizada de las v&iacute;as respiratorias.

CFTR is an integral transmembrane glycoprotein and a cAMP-activated Cl(-) channel. Mutations in the CFTR gene lead to Cystic Fibrosis (CF)-an autosomal recessive disease with majority of the morbidity and mortality resulting from airway infection, inflammation, and fibrosis. The most common disease-associated mutation in the CFTR gene-deletion of Phe508 (ΔF508) leads to a biosynthetic processing defect of CFTR. Correction of the defect and delivery of ΔF508-CFTR to the cell surface has been highly anticipated as a disease modifying therapy. Compared to promising results in cultured cell this approach was much less effective in CF patients in an early clinical trial. Although the cause of failure to rescue ΔF508-CFTR in the clinical trial has not been determined, presence of factor(s) that interfere with the rescue in vivo could be considered. The cytokine TGF-β1 is frequently elevated in CF patients. TGF-β1 has pleiotropic effects in different disease models and genetic backgrounds and little is known about TGF-β1 effects on CFTR in human airway epithelial cells. Moreover, there are no published studies examining TGF-β1 effects on the functional rescue of ΔF508-CFTR. Here we found that TGF-β1 inhibits CFTR biogenesis by reducing mRNA levels and protein abundance in primary differentiated human bronchial epithelial (HBE) cells from non-CF individuals. TGF-β1 inhibits CFTR biogenesis without compromising the epithelial phenotype or integrity of HBE cells. TGF-β1 also inhibits biogenesis and impairs the functional rescue of ΔF508-CFTR in HBE cells from patients homozygous for the ΔF508 mutation. Our data indicate that activation of TGF-β1 signaling may inhibit CFTR function in non-CF individuals and may interfere with therapies directed at correcting the processing defect of ΔF508-CFTR in CF patients.

Tgf-β1 inhibits Cftr biogenesis and prevents functional rescue of ΔF508-Cftr in primary differentiated human bronchial epithelial cells.

CFTR is a PKA activated Cl(-) channel expressed in the apical membrane of fluid transporting epithelia. We previously demonstrated that c-Cbl decreases CFTR stability in the plasma membrane by facilitating its endocytosis and lysosomal degradation in human airway epithelium. The most common mutation associated with cystic fibrosis, deletion of Phe508 (∆F508), leads to a temperature sensitive biosynthetic processing defect in the CFTR protein. Mature ∆F508-CFTR that has been rescued by low temperature or chemical chaperones is partially functional as a Cl(-) channel but has decreased plasma membrane stability due to altered post-maturational trafficking. Our present data demonstrate that c-Cbl controls the post-maturational trafficking of rescued ∆F508-CFTR. Partial depletion of c-Cbl increased stability of the plasma membrane associated mature ∆F508-CFTR and the ∆F508-CFTR mediated Cl(-) secretion. These data indicate that correcting the post-maturational trafficking of ∆F508-CFTR may represent a therapeutic approach complementary to the biosynthetic rescue. Because c-Cbl functions as an adaptor and scaffolding protein during CFTR endocytosis, we propose that interfering with the c-Cbl mediated endocytic recruitment of ∆F508-CFTR may increase stability of ∆508-CFTR in the plasma membrane after its biosynthetic rescue.

Article	Year
DAB2 facilitates AP-2 independent recruitment of CFTR to endocytic vesicles in polarized human airway epithelial cells. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 22399289	2012
Tgf-β1 inhibits Cftr biogenesis and prevents functional rescue of ΔF508-Cftr in primary differentiated human bronchial epithelial cells. PloS one\| PubMed ID: 23671668	2013
c-Cbl reduces stability of rescued ∆F508-CFTR in human airway epithelial cells: Implications for cystic fibrosis treatment. Communicative & integrative biology\| PubMed ID: 23750297	2013

Kristine M. Cihil

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