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Measuring Plasma Membrane Protein Endocytic Rates by Reversible Biotinylation

Plasma membrane proteins are a large, diverse group of proteins comprised of receptors, ion channels, transporters and pumps.  Activity of these proteins ...

University of Massachusetts Medical School

&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER) &#x86CB;&#x767D; GT1 &#xFF08;UDP-&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#xFF1A; &#x8461;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;) &#x4FEE;&#x6539; N &#x94FE;&#x63A5;&#x78B3;&#x6C34;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x4E2D;&#x592E;&#x9176;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x886C;&#x5E95;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x9AA8;&#x5E72;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;GT1 &#x6DFB;&#x52A0;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x6B8B;&#x7559;&#x8D28;&#x91CF;&#x63A7;&#x5236;&#x6D4B;&#x8BD5;&#xFF0C;&#x5931;&#x8D25;&#x7684; nonglucosylated &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x4F34;&#x4FA3; calnexin &#x548C;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x6C38;&#x4E45;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x901A;&#x8FC7;&#x652F;&#x6301; ER &#x4FDD;&#x7559;&#x3002;&#x5982;&#x4F55; GT1 &#x51FD;&#x6570;&#x5728;&#x5176;&#x672C;&#x673A;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x65E9;&#x719F;&#x7684;&#x886C;&#x5E95;&#x4E0A;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x65E9;&#x719F;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x6D41;&#x611F;&#x8840;&#x51DD;&#x7D20; (HA) &#x5728;&#x5B8C;&#x597D;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; ER reglucosylation&#x3002;GT1 reglucosylated N-&#x805A;&#x7CD6;&#x6162;&#x6298;&#x53E0;&#x5E72;&#x533B;&#x7BA1;&#x5C40;&#x7684;&#x57DF;&#xFF0C;&#x4E00;&#x65E6;&#x5728;&#x65B0;&#x751F;&#x94FE;&#x88AB;&#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x3002;&#x4E2D;&#x65AD;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x6216;&#x9F50;&#x805A;&#x7684;&#x533B;&#x7BA1;&#x5C40;&#x7684;&#x6210;&#x719F;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x8FD8;&#x652F;&#x6301;&#x7531; GT1 &#x7279;&#x5B9A;&#x533A;&#x57DF; reglucosylation&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;GT1 &#x4F5C;&#x4E3A; ER &#x8D28;&#x91CF;&#x63A7;&#x5236;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7531; posttranslationally reglucosylating &#x7CD6;&#x6162;&#x6298;&#x53E0;&#x6216;&#x5916;&#x6765;&#x7684;&#x57DF;&#x62DB;&#x8058;&#x4F34;&#x4FA3;&#x5177;&#x4F53;&#x5230;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x5F02;&#x5E38;&#x533A;&#x57DF;&#x4E0A;&#x3002;

&#x4E00;&#x79CD;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684; reglucosylation &#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6F14;&#x793A;&#x7684; GT1 &#x8D28;&#x91CF;&#x63A7;&#x5236;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x6E10;&#x8D8B;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

The endoplasmic reticulum (ER) protein GT1 (UDP-glucose: glycoprotein glucosyltransferase) is the central enzyme that modifies N-linked carbohydrates based upon the properties of the polypeptide backbone of the maturing substrate. GT1 adds glucose residues to nonglucosylated proteins that fail the quality control test, supporting ER retention through persistent binding to the lectin chaperones calnexin and calreticulin. How GT1 functions in its native environment on a maturing substrate is poorly understood. We analyzed the reglucosylation of a maturing model glycoprotein, influenza hemagglutinin (HA), in the intact mammalian ER. GT1 reglucosylated N-linked glycans in the slow-folding stem domain of HA once the nascent chain was released from the ribosome. Maturation mutants that disrupted the oxidation or oligomerization of HA also supported region-specific reglucosylation by GT1. Therefore, GT1 acts as an ER quality control sensor by posttranslationally reglucosylating glycans on slow-folding or nonnative domains to recruit chaperones specifically to critical aberrant regions.

A cell-based reglucosylation assay demonstrates the role of GT1 in the quality control of a maturing glycoprotein.

Les prot&eacute;ines du r&eacute;ticulum endoplasmique (re) GT1 (UDP-glucose : glycoprot&eacute;ine glucosyltransf&eacute;rase) est l&#39;enzyme central qui modifie les glucides li&eacute;s N bas&eacute;e sur les propri&eacute;t&eacute;s de l&#39;ossature polypeptidique du substrat arrivant &agrave; &eacute;ch&eacute;ance. GT1 ajoute r&eacute;sidus de glucose aux prot&eacute;ines nonglucosylated qui &eacute;chouent au test de contr&ocirc;le de la qualit&eacute;, en soutenant la r&eacute;tention ER par le biais de liaisons permanentes aux lectines chaperonnes calnexine et la calr&eacute;ticuline. Comment les fonctions GT1 dans son environnement natif sur un substrat de maturation est mal comprise. Nous avons analys&eacute; la reglucosylation d&#39;une glycoprot&eacute;ine de mod&egrave;le arrivant &agrave; &eacute;ch&eacute;ance, la h&eacute;magglutinine (HA), de la grippe aux urgences chez les mammif&egrave;res intactes. GT1 reglucosylated N-glycanes dans le lent-pliage tige domaine de HA, une fois la cha&icirc;ne naissante a &eacute;t&eacute; lib&eacute;r&eacute;e le ribosome. Des mutants de maturation qui a perturb&eacute; l&#39;oxydation ou l&#39;oligom&eacute;risation des HA a &eacute;galement pris en charge propres &agrave; la r&eacute;gion reglucosylation de GT1. Par cons&eacute;quent, GT1 agit comme un capteur de contr&ocirc;le de la qualit&eacute; ER en apr&egrave;s reglucosylating glycanes sur domaines rabattable &agrave; ralentir ou non indig&egrave;nes &agrave; recruter des chaperons sp&eacute;cifiquement &agrave; des r&eacute;gions critiques aberrantes.

Un essai sur les cellules reglucosylation illustre le r&ocirc;le de GT1 dans le contr&ocirc;le de la qualit&eacute; d&#39;une glycoprot&eacute;ine de maturation.

Das Endoplasmatisches Reticulum (ER)-Protein GT1 (UDP-Glukose: Glykoprotein-Glucosyltransferase) ist das zentrale Enzym, das N-chromosomale Kohlenhydrate &auml;ndert basierend auf die Eigenschaften der das Polypeptid-R&uuml;ckgrat des reifenden Substrates. GT1 f&uuml;gt Glukose R&uuml;ckst&auml;nde an Nonglucosylated Proteine, die den Qualit&auml;tskontrolle-Test, nicht ER Aufbewahrung durch dauerhaften Bindung der Lektin Chaperone Calnexin und Calreticulin zu unterst&uuml;tzen. Wie die GT1-Funktionen in seiner eigenen Umgebung auf einem reifenden Substrat wird schlecht verstanden. Wir analysierten die Reglucosylation von einer reifenden Modell Glykoprotein, Grippe H&auml;magglutinin (HA), in der intakten S&auml;ugetier-Notaufnahme. GT1 Reglucosylated N-chromosomale Glykane in die langsam-faltbare Vorbau Dom&auml;ne ha, sobald die entstehende Kette aus dem Ribosom freigegeben wurde. Reifung Mutanten, die die Oxidation oder Oligomerisierung ha gest&ouml;rt unterst&uuml;tzt auch regionsspezifische Reglucosylation von GT1. Daher Handlungen GT1 als ER Qualit&auml;tskontrolle Sensor posttranslational Reglucosylating Glykane auf langsam-faltbare oder nicht verwandte Domains Chaperone speziell f&uuml;r kritische aberrante Regionen zu rekrutieren.

Eine Zell-basierte Reglucosylation-Assay zeigt, welche Rolle der GT1 in der Qualit&auml;tskontrolle von einer reifenden Glykoprotein.

La proteina del reticolo endoplasmatico (ER) GT1 (UDP-glucosio: glicoproteina glucosiltransferasi) &egrave; l&#39;enzima centrale che modifica N-linked carboidrati basato su propriet&agrave; della spina dorsale del polipeptide del substrato stagionatura. GT1 aggiunge residui di glucosio alle proteine nonglucosylated che non superano il test di controllo qualit&agrave;, supporto di ritenzione ER tramite l&#39;associazione persistente alla lectina chaperoni calnexin e calreticulin. Come funzioni GT1 nel suo ambiente nativo su un substrato di stagionatura &egrave; poco conosciuta. Abbiamo analizzato il reglucosylation di una glicoproteina modello stagionatura, emoagglutinina influenzale (HA), nel ER mammifero intatto. GT1 reglucosylated N-linked glicani in lento-pieghevole staminali dominio di HA una volta che la catena nascente fu rilasciata dal ribosoma. Mutanti di maturazione che ha sconvolto l&#39;ossidazione o la oligomerizzazione di HA supportato anche specifici per la regione reglucosylation di GT1. Pertanto, GT1 agisce come un sensore di controllo della qualit&agrave; ER posttranslationally reglucosylating glicani su domini pieghevole lento o non nativi di reclutare chaperoni specificamente alle critiche regioni aberrante.

Un dosaggio reglucosylation cell-based viene illustrato il ruolo di GT1 nel controllo di qualit&agrave; di una glicoproteina di stagionatura.

&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53; (ER) &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; GT1 (UDP &#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;: &#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF09; &#x70AD;&#x6C34;&#x5316;&#x7269; N &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x4E2D;&#x592E;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x304C;&#x6210;&#x719F;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DC;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x305F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;GT1 ER &#x4FDD;&#x6301;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x5408;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; &#x30AB;&#x30EB;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30EC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x54C1;&#x8CEA;&#x7BA1;&#x7406;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x305F; nonglucosylated &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x7CD6;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x74B0;&#x5883;&#x6210;&#x719F;&#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; GT1 &#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3088;&#x304F;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x6210;&#x719F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; &#x30D8;&#x30DE;&#x30B0;&#x30EB;&#x30C1;&#x30CB;&#x30F3; (HA) &#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E; ER &#x3067;&#x306E; reglucosylation &#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x9396;&#x304C;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E00;&#x5EA6; GT1 reglucosylated N &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x7CD6;&#x9396;&#x9045;&#x304F;&#x6247;&#x5B50;&#x3067;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; HA &#x306E;&#x5E79;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9178;&#x5316;&#x307E;&#x305F;&#x306F; HA &#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30E1;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4E2D;&#x65AD;&#x6210;&#x719F;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x5730;&#x57DF;&#x56FA;&#x6709; reglucosylation GT1 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3082;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;GT1&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x54C1;&#x8CEA;&#x7BA1;&#x7406;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066; posttranslationally reglucosylating &#x7CD6;&#x9396;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AB;&#x30EB;&#x7570;&#x5E38;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x52DF;&#x96C6;&#x3059;&#x308B;&#x9045;&#x304F;&#x6247;&#x5B50;&#x3084;&#x5916;&#x6765;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x4E0A;&#x3067;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Reglucosylation &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x8A66;&#x91D1;&#x6210;&#x719F;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x54C1;&#x8CEA;&#x7BA1;&#x7406;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; GT1 &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; GT1 (UDP-&#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;: &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; glucosyltransferase) N &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xD0C4;&#xC218;&#xD654;&#xBB3C;&#xC744; &#xC218;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC559; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC131;&#xC219; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; polypeptide &#xB4F1;&#xBF08;&#xC758; &#xC18D;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xBC18; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. GT1 lectin &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; calnexin &#xBC0F; calreticulin&#xC744; &#xC601;&#xAD6C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xBCF4;&#xC874;&#xC744; &#xC9C0; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xD488;&#xC9C8; &#xAD00;&#xB9AC; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC2E4;&#xD328; &#xD558;&#xB294; nonglucosylated &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xCD94;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC131;&#xC219; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xC6D0;&#xB798; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0; GT1 &#xD568;&#xC218; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC774;&#xD574;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC131;&#xC219; &#xBAA8;&#xB378; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; &#xC870;&#xB958; (&#xD558;), &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; reglucosylation&#xB97C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC77C;&#xB2E8; &#xCD08;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC778;&#xC740; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB098;&#xC628; &#xB290;&#xB9B0;-&#xC811;&#xB294;&#xC5D0; GT1 reglucosylated N &#xC5F0;&#xACB0; glycans &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD558;&#xC758; &#xC904;&#xAE30;. &#xC0B0;&#xD654; &#xB610;&#xB294; oligomerization HA&#xC758; &#xC911;&#xB2E8; &#xC131;&#xC219; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; GT1 &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xBCC4; reglucosylation &#xC9C0;&#xC6D0;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, GT1 &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xD488;&#xC9C8; &#xAD00;&#xB9AC; &#xC13C;&#xC11C;&#xB97C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD0C8; &#xC120; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xB290;&#xB9B0; &#xC811;&#xB294; &#xB610;&#xB294; nonnative &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; posttranslationally reglucosylating glycans&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5ED;&#xD560;.

&#xC140; &#xAE30;&#xBC18; reglucosylation &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC131;&#xC219; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD488;&#xC9C8; &#xAD00;&#xB9AC;&#xC5D0; gt1&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La prote&iacute;na GT1 del ret&iacute;culo endopl&aacute;smico (ER) (UDP-glucosa: glicoprote&iacute;na glucosiltransferasa) es la enzima central que modifica N-ligado carbohidratos basada en las propiedades de la columna vertebral del polip&eacute;ptido de la maduraci&oacute;n del sustrato. GT1 agrega residuos de glucosa a las prote&iacute;nas de nonglucosylated que no pasan la prueba de control de calidad, apoyar la retenci&oacute;n de ER mediante el enlace persistente a la lectina acompa&ntilde;antes calnexin y calreticulina. &iquest;C&oacute;mo GT1 funciones en su entorno nativo sobre un sustrato de maduraci&oacute;n es mal entendida. Hemos analizado la reglucosylation de una glicoprote&iacute;na maduraci&oacute;n del modelo, hemaglutinina (HA), de la gripe en el ER mam&iacute;fero intacto. GT1 reglucosylated N-ligado glycans en el lento-plegamiento tallo dominio de HA una vez que la cadena naciente fue liberada del ribosoma. Mutantes de maduraci&oacute;n que alteraron la oxidaci&oacute;n o la Oligomerizaci&oacute;n de HA apoyaron tambi&eacute;n espec&iacute;ficas para la regi&oacute;n reglucosylation por GT1. Por lo tanto, GT1 act&uacute;a como un sensor de control de calidad de ER posttranslationally reglucosylating glicanos en dominios plegable lento o no nativos para reclutar acompa&ntilde;antes espec&iacute;ficamente a regiones cr&iacute;ticas aberrantes.

Un ensayo de reglucosylation basadas en c&eacute;lulas demuestra el papel de GT1 en el control de calidad de una glicoprote&iacute;na de maduraci&oacute;n.

&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x80FD;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x5BFC;&#x548C;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x5BF9;&#x8BB8;&#x591A;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E;&#x75C5;&#x7406;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x8FD0;&#x52A8;&#x3001; &#x8BA4;&#x77E5;&#x3001; &#x548C;&#x6210;&#x763E;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x82EF;&#x4E19;&#x80FA;&#x548C;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x654F;&#x611F;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA; (DA) &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; (DAT) &#x4E25;&#x683C;&#x63A7;&#x5236;&#x80DE;&#x5916; DA &#x6D53;&#x5EA6;&#x548C;&#x534A;&#x8870;&#x671F;&#x3002;DAT &#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0D;&#x662F;&#x9759;&#x6001;&#x7684;&#x4F46;&#x52A8;&#x6001;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x819C;&#x8D29;&#x5356;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86; DAT C &#x603B;&#x7AD9;&#x5BF9;&#x8FD8;&#x53D6;&#x6D88;&#x57FA;&#x5E95; DAT &#x541E;&#x7684; PKC &#x654F;&#x611F;&#x5316;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8FDB;&#x884C;&#x7F16;&#x7801;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7406;&#x4E8B;&#x4F1A;&#x76D1;&#x7BA1; DAT &#x8D29;&#x8FD0;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x673A;&#x5668;&#x4E0D;&#x662F;&#x5B9A;&#x4E49;&#x597D;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x51FA;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684; Ras &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;Rin (&#x4E3A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684; Ras &#x6837;&#xFF09; &#xFF08;Rit2&#xFF09;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;DAT C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x541E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x3001; GST &#x62C9;&#x4E0B;&#x548C;&#x97F3;&#x54C1;&#x7814;&#x7A76;&#x5EFA;&#x7ACB; DAT &#x548C; Rin &#x76F4;&#x63A5;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5171;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7814;&#x7A76;&#x63ED;&#x793A; DAT/Rin &#x534F;&#x4F1A;&#x53D1;&#x751F;&#x4E3B;&#x8981;&#x5728;&#x8102;&#x7B4F;&#x5FAE;&#x533A;&#x3002;Coimmunoprecipitations &#x8868;&#x660E; PKC &#x6D3B;&#x5316;&#x8C03;&#x8282; Rin Rin dat &#x4E2D;&#x6444;&#x52A8;&#x51FD;&#x6570;&#x5173;&#x8054;&#x86CB;&#x767D;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC; shRNA Rin &#x2477; &#x63ED;&#x793A;&#x4E86; Rin PKC &#x4ECB;&#x5BFC; DAT &#x5185;&#x5316;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x4E0B;&#x8C03;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x5EFA;&#x7ACB; Rin &#x662F; DAT &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6240;&#x9700;&#x7684; PKC &#x89C4;&#x8303; DAT &#x8D29;&#x5356;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8868;&#x660E; Rin &#x53C2;&#x52A0;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x76F8;&#x5173; GTPase Rin &#x4E0E;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x5E76;&#x9700;&#x5BF9;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &#x8C03;&#x8282;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x8D29;&#x5356;&#x3002;

Dopaminergic signaling and plasticity are essential to numerous CNS functions and pathologies, including movement, cognition, and addiction. The amphetamine- and cocaine-sensitive dopamine (DA) transporter (DAT) tightly controls extracellular DA concentrations and half-life. DAT function and surface expression are not static but are dynamically modulated by membrane trafficking. We recently demonstrated that the DAT C terminus encodes a PKC-sensitive internalization signal that also suppresses basal DAT endocytosis. However, the cellular machinery governing regulated DAT trafficking is not well defined. In work presented here, we identified the Ras-like GTPase, Rin (for Ras-like in neurons) (Rit2), as a protein that interacts with the DAT C-terminal endocytic signal. Yeast two-hybrid, GST pull down and FRET studies establish that DAT and Rin directly interact, and colocalization studies reveal that DAT/Rin associations occur primarily in lipid raft microdomains. Coimmunoprecipitations demonstrate that PKC activation regulates Rin association with DAT. Perturbation of Rin function with GTPase mutants and shRNA-mediated Rin knockdown reveals that Rin is critical for PKC-mediated DAT internalization and functional downregulation. These results establish that Rin is a DAT-interacting protein that is required for PKC-regulated DAT trafficking. Moreover, this work suggests that Rin participates in regulated endocytosis.

The plasma membrane-associated GTPase Rin interacts with the dopamine transporter and is required for protein kinase C-regulated dopamine transporter trafficking.

Signalisation dopaminergique et la plasticit&#xE9; sont essentielles &#xE0; de nombreuses fonctions du syst&#xE8;me nerveux central et les pathologies, y compris le mouvement, la cognition, et de la toxicomanie. La dopamine amph&#xE9;tamine et de coca&#xEF;ne-sensibles (DA) transporteur (DAT) contr&#xF4;le &#xE9;troitement les concentrations extracellulaires DA et la demi-vie. Fonction de DAT et d&#x26;#39;expression de surface ne sont pas statiques, mais sont dynamiquement modul&#xE9;e par le trafic membranaire. Nous avons r&#xE9;cemment d&#xE9;montr&#xE9; que le terminus DAT C code pour un signal d&#x26;#39;internalisation PKC-sensible qui supprime aussi l&#x26;#39;endocytose DAT basale. Cependant, la machinerie cellulaire qui r&#xE9;git le trafic r&#xE9;glement&#xE9; DAT n&#x26;#39;est pas bien d&#xE9;finie. Dans le travail pr&#xE9;sent&#xE9; ici, nous avons identifi&#xE9; la Ras-GTPase, Rin (pour Ras-like dans les neurones) (Rit2), comme une prot&#xE9;ine qui interagit avec le DAT C-terminale du signal d&#x26;#39;endocytose. Deux hybrides de levure, GST pull vers le bas et &#xE9;tudes FRET &#xE9;tablir que DAT et Rin interagir directement, et les &#xE9;tudes r&#xE9;v&#xE8;lent que de colocalisation DAT / Rin associations se produisent principalement dans des microdomaines radeaux lipidiques. Coimmunoprecipitations d&#xE9;montrer que activation de la PKC r&#xE9;gule Rin association avec DAT. Perturbation de la fonction Rin avec des mutants GTPases et shRNA m&#xE9;diation knockdown Rin r&#xE9;v&#xE8;le que Rin est critique pour l&#x26;#39;internalisation DAT PKC-m&#xE9;diation et de r&#xE9;gulation &#xE0; la baisse fonctionnelle. Ces r&#xE9;sultats &#xE9;tablissent que Rin est une prot&#xE9;ine interagissant avec DAT qui est n&#xE9;cessaire pour la PKC-r&#xE9;glement&#xE9; le trafic DAT. En outre, ce travail sugg&#xE8;re que Rin participe &#xE0; l&#x26;#39;endocytose r&#xE9;glement&#xE9;.

Le plasma associ&#xE9;e &#xE0; la membrane GTPase Rin interagit avec le transporteur de la dopamine et est n&#xE9;cessaire pour la prot&#xE9;ine kinase C-r&#xE9;glement&#xE9; traite Dopamine Transporter

Dopaminergen Signalisierung und Plastizit&auml;t sind wesentlich f&uuml;r zahlreiche CNS-Funktionen und Krankheiten, einschlie&szlig;lich Bewegung, Kognition und sucht. Der Amphetamine und Kokain-Sensitive-Dopamin (DA)-Transporter (DAT) steuert eng extrazellul&auml;ren Konzentrationen in DA und Half-Life. DAT-Funktion und Oberfl&auml;che Ausdruck sind nicht statisch, sondern werden dynamisch durch Membranen moduliert. Wir vor kurzem gezeigt, dass das DAT Carboxyl-Terminus ein PKC-Sensitive Internalisierung Signal codiert, die auch basale DAT Endozytose unterdr&uuml;ckt. Die zellul&auml;re Maschinerie, die EZB geregelten DAT Menschenhandel ist jedoch nicht klar definiert. In der hier vorgestellten Arbeit, wir identifiziert die Ras-&auml;hnlichen GTPase, Rin (f&uuml;r Ras-wie in Neuronen) (Rit2), als ein Protein, das mit dem DAT-C-terminalen endocytic Signal interagiert. Hefe-zwei-Hybrid, GST herunterziehen und FRET Studien nachweisen, dass DAT und Rin direkt interagieren und Kolokalisation Studien zeigen, dass DAT/Rin Verb&auml;nde in erster Linie in Lipid Raft Microdomains auftreten. Coimmunoprecipitations zeigen, dass PKC Aktivierung Rin Verbindung mit DAT. St&ouml;rung von Rin-Funktion mit GTPase Mutanten reguliert und ShRNA-vermittelte Rin Niederschlag zeigt, dass Rin f&uuml;r PKC-vermittelte DAT Internalisierung und funktionale Heraufregulation wichtig ist. Diese Ergebnisse belegen, dass Rin ein DAT-Interaktion-Protein, das ist f&uuml;r DAT PKC geregelten Handels erforderlich ist. Dar&uuml;ber hinaus empfiehlt diese Arbeit Rin an geregelten Endozytose beteiligt ist.

Die Plasmamembran-assoziierten GTPase Rin interagiert mit den Dopamin-Transporter und ist erforderlich f&uuml;r Protein Kinase C geregelten Dopamin-Transporter-Handel.

Segnalazione di dopaminergico e plasticit&agrave; sono essenziali alle numerose funzioni di CNS e patologie, tra cui movimento, cognizione e dipendenza. Il trasportatore della dopamina (DA) anfetamine e cocaina-sensibili (DAT) controlla strettamente Half-Life e concentrazioni extracellulari di DA. Funzione di DAT ed espressione superficiale non sono statici ma dinamicamente sono modulati dal traffico di membrana. Abbiamo recentemente dimostrato che il capolinea DAT C codifica un segnale di interiorizzazione di PKC-sensibili che sopprime anche endocitosi DAT basale. Tuttavia, il macchinario cellulare che regolano il traffico DAT regolamentato non &egrave; ben definito. Nel lavoro qui presentato, abbiamo identificato il simil-Ras GTPasi, Rin (per Ras-come nei neuroni) (Rit2), come una proteina che interagisce con il segnale endocitico DAT C-terminale. Due-ibrido del lievito, GST tirare verso il basso e studi FRET stabiliscono che DAT e Rin interagire direttamente e presenza studi rivelano che le associazioni DAT/Rin si verificano principalmente in microdomains Zattera lipidica. Coimmunoprecipitations dimostrare che attivazione PKC regola Rin associazione con funzione di DAT. perturbazione di Rin con GTPase mutanti e mediata da shRNA Rin atterramento rivela che Rin &egrave; critica per interiorizzazione PKC-mediated DAT e funzionale downregulation. Questi risultati stabiliscono che Rin &egrave; una proteina interagente DAT che &egrave; necessaria per il traffico di DAT PKC-regolato. Inoltre, questo lavoro suggerisce che Rin partecipa endocitosi regolata.

La membrana plasmatica associati GTPase Rin interagisce con il trasportatore della dopamina ed &egrave; necessaria per la proteina chinasi C-regolato dopamina trasportatore traffico.

&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3068;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x304C;&#x904B;&#x52D5;&#x3001;&#x8A8D;&#x77E5;&#x3001;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x75C5;&#x614B;&#x3078;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x3084;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#xFF08;DA&#xFF09;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;DAT&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3063;&#x304B;&#x308A;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;DA&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x534A;&#x6E1B;&#x671F;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; DAT&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x9759;&#x7684;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x819C;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x52D5;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x8ABF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;DAT&#x3001;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x3082;&#x57FA;&#x5E95;DAT&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;PKC-&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30CA;&#x30EA;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x898F;&#x5236;DAT&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;DAT&#x3001;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x200B;&#x200B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;RAS-GTP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x3001;&#x51DB;&#xFF08;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x306E;Ras&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#xFF09;&#xFF08;Rit2&#xFF09;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x30C4;&#x30FC;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;GST&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;DAT&#x3068;Rin&#x304C;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;FRET&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;DAT / RIN&#x5354;&#x4F1A;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x8102;&#x8CEA;&#x30E9;&#x30D5;&#x30C8;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Coimmunoprecipitations&#x306F;&#x3001;PKC&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;DAT&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; GTP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x304A;&#x3088;&#x3073;shRNA&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x308A;&#x3093;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3068;&#x51DB;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;RIN&#x306F;&#x3001;PKC&#x5A92;&#x4ECB;DAT&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;Rin&#x306F;PKC&#x8ABF;&#x7BC0;DAT&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;DAT&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898F;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x304C;&#x898F;&#x5236;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x95A2;&#x9023;GTP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x51DB;&#x306F;&#x3001;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;

Dopaminergic &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC18C;&#xC131; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; CNS &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xBCD1; &#xB9AC;, &#xC6B4;&#xB3D9;, &#xC778;&#xC9C0;, &#xC911;&#xB3C5; &#xB4F1; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC554;&#xD398;&#xD0C0;&#xBBFC;&#xACFC; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; (DA) &#xC804;&#xC1A1; (DAT) &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB2E4; &#xB18D;&#xB3C4; &#xD558;&#xD504; &#xB77C;&#xC774;&#xD504;&#xC5D0; &#xAE34;&#xBC00; &#xD558; &#xAC8C; &#xC81C;&#xC5B4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. DAT &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD; &#xACE0;&#xC815; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xB9C9; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB3D9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xC870; &#xB41C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC; DAT C &#xB9D0;&#xB2E8; &#xAE30;&#xC800; DAT endocytosis &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; PKC &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC2DC;&#xC5F0;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; DAT &#xBC00;&#xB9E4; &#xD1B5;&#xCE58; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xAE30;&#xACC4; &#xC798; &#xC815;&#xC758; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC791;&#xD488;&#xC5D0;&#xC11C; Ras &#xAC19;&#xC740; GTPase &#xB9B0; &#xC2DD;&#xBCC4; (&#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; Ras &#xAC19;&#xC740;) (Rit2), DAT C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; endocytic &#xC2E0;&#xD638; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C;. &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xD558; &#xACE0; GST &#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC218;&#xB9BD; DAT&#xC640; &#xB9B0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;, colocalization &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACF5;&#xAC1C; DAT/&#xB9B0; &#xD611;&#xD68C; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB5CF;&#xBAA9; microdomains&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Coimmunoprecipitations &#xBCF4;&#xC5EC; PKC &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC870;&#xC808; GTPase &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; DAT. &#xB9B0; &#xC12D; &#xB3D9; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xB9B0; &#xD611;&#xD68C; &#xB9B0; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; shRNA &#xC911;&#xC7AC; &#xBC1D;&#xD600; &#xB9B0; PKC &#xC911;&#xC7AC; DAT &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xBC0F; downregulation &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9B0; DAT &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; PKC &#xADDC;&#xC81C; DAT &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;,&#xC774; &#xC791;&#xD488; &#xB9B0; &#xADDC;&#xC81C; endocytosis&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;.

&#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; GTPase &#xB9B0; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C &#xADDC;&#xC81C; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC804;&#xC1A1; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Se&#xF1;alizaci&#xF3;n dopamin&#xE9;rgica y la plasticidad son esenciales para las funciones del sistema nervioso central y patolog&#xED;as m&#xFA;ltiples, incluyendo el movimiento, la cognici&#xF3;n y la adicci&#xF3;n. La dopamina de tipo anfetam&#xED;nico y sensibles a la coca&#xED;na (DA) del transportador (DAT) controla estrechamente las concentraciones extracelulares de DA y la vida media. Funci&#xF3;n de DAT y expresi&#xF3;n en la superficie no son est&#xE1;ticos sino que son modulados por el tr&#xE1;fico de forma din&#xE1;mica de la membrana. Recientemente hemos demostrado que el t&#xE9;rmino DAT C codifica una se&#xF1;al de la internalizaci&#xF3;n de PKC-sensible, que tambi&#xE9;n suprime la endocitosis DAT basal. Sin embargo, la maquinaria celular que rige regulado el tr&#xE1;fico de DAT no est&#xE1; bien definida. En el trabajo que aqu&#xED; se presenta, se identific&#xF3; el barrio de Ras-al igual que GTPasa, Rin (de Ras-al igual que en las neuronas) (Rit2), como una prote&#xED;na que interact&#xFA;a con el DAT C-terminal de la se&#xF1;al endoc&#xED;tica. Levadura de dos h&#xED;bridos, GST tirar hacia abajo y FRET estudios establecen que DAT y Rin interactuar directamente, y los estudios revelan que la colocalizaci&#xF3;n DAT / Rin asociaciones se presentan principalmente en microdominios balsa de l&#xED;pidos. Coimmunoprecipitations demuestran que la activaci&#xF3;n de PKC regula Rin asociaci&#xF3;n con DAT. Perturbaci&#xF3;n de la funci&#xF3;n Rin con mutantes GTPasa y shRNA mediada desmontables Rin Rin revela que es fundamental para la internalizaci&#xF3;n DAT mediada por PKC y la regulaci&#xF3;n a la baja funcional. Estos resultados establecen que Rin es una prote&#xED;na DAT-interacci&#xF3;n que se requiere para la PKC-regulado el tr&#xE1;fico DAT. Por otra parte, este trabajo sugiere que participa en la endocitosis Rin regulado.

La membrana plasm&#xE1;tica asociada GTPasa Rin Interact&#xFA;a con el transportador de dopamina y es necesario para la prote&#xED;na quinasa C-regulado el tr&#xE1;fico transportador de dopamina

Article	Year
A cell-based reglucosylation assay demonstrates the role of GT1 in the quality control of a maturing glycoprotein. The Journal of cell biology\| PubMed ID: 18426978	2008
The plasma membrane-associated GTPase Rin interacts with the dopamine transporter and is required for protein kinase C-regulated dopamine transporter trafficking. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience\| PubMed ID: 21957239	2011

Luke Gabriel

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