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A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells <em>In Vivo</em>

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

Brown University

&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x957F;&#x671F;&#x95EE;&#x9898;&#x4E86;&#x89E3;&#x6682;&#x6001;&#x8868;&#x8FBE;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5982;&#x4F55;&#x5BF9;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x89E3;&#x5256;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7ED3;&#x6784;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x5728;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x66F4;&#x9AD8;&#x5C42;&#x6B21;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#x4EA7;&#x751F;&#x65F6;&#x8003;&#x8651;&#x5982;&#x4F55;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x8C31;&#x7CFB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x5173;&#x65B0;&#x6210;&#x7ACB;&#x795E;&#x7ECF;&#x7535;&#x8DEF;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x89E3;&#x51B3;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E24;&#x8005;&#x7D2F;&#x8BA1;&#x6807;&#x5FD7; Cre/loxp &#x5E8F;&#x5217;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4E0E;&#x9057;&#x4F20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x547D;&#x8FD0;&#x6620;&#x5C04; &#xFF08;GIFM&#xFF09;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6C38;&#x4E45;&#x548C; heritably &#x4F7F;&#x7528; CreER/loxp &#x5E8F;&#x5217;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x7CBE;&#x7EC6;&#x65F6;&#x7A7A;&#x63A7;&#x5236;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x540E;&#x88D4;&#x4EBA;&#x53E3;&#x5C11;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x662F;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x6709;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684;&#x9707;&#x64BC;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x4F46;&#x7531;&#x4E8E;&#x4E00;&#x4E2A; loxp &#x5E8F;&#x5217;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4E24;&#x4FA7;&#x7AD9;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x4E4B;&#x524D;&#x8BB0;&#x8005;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x662F;&#x9759;&#x6B62;&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x9707;&#x64BC;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x662F; &#39;&#x6253;&#x5F00;&#39;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x4E00;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8BB0;&#x8005;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x771F;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x8C31;&#x7CFB;&#x793A;&#x8E2A;&#x5242;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x76EE;&#x524D;&#x6709;&#x7684;&#x8BB0;&#x8005;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x6548;&#x7387;&#x4F7F;&#x7528;&#x6570;&#x7EC4;&#x548C;&#x4E0D;&#x5F7B;&#x5E95;&#x63CF;&#x8FF0;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x8BC4;&#x4F30;&#x91CD;&#x7EC4;/&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x8BB0;&#x8005;&#x4EEC;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528; CreER(T) Wnt1 &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x4E4B;&#x4E0B; &#xFF08;Wnt1-CreER(T))&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7D2F;&#x79EF;&#x3001; &#x975E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x578B; En1(Cre) &#x6572;&#x5165;&#x7EBF;&#x7ED3;&#x5408;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x8BB0;&#x8005;&#xFF1A; R26R &#xFF08;LacZ &#x8BB0;&#x8005;&#xFF09;&#xFF0C;Z EG &#xFF08;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8BB0;&#x8005;&#xFF09; &#x548C; Tau-Lox-STOP-Lox-mGFP-IRES-NLS-LacZ &#xFF08;&#x9488;&#x5BF9;&#x819C;&#x7684; GFP/&#x6838; LacZ &#x8BB0;&#x8005;&#xFF09;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7EAA;&#x5FF5; Wnt1 &#x6CBF;&#x88AD;&#x4F7F;&#x7528;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x7684; 3 &#x4F4D;&#x8BB0;&#x8005;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x5929; (E) 8.5 &#x8DDF;&#x5728; E10.0&#xFF0C;E12.5&#xFF0C;&#x548C;&#x6210;&#x4EBA;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x6BD4;&#x8F83;&#x7D2F;&#x8BA1;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5177;&#x6709; En1 &#x8868;&#x8FBE;&#x540C;&#x4E00;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x5386;&#x53F2;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x957F;&#x5904;&#x548C;&#x77ED;&#x5904;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x8BB0;&#x8005;&#xFF0C;&#x5E76;&#x7531;&#x6574;&#x4E2A;&#x88C5;&#x8F7D;&#x548C;&#x79D1;&#x5206;&#x6790;&#x8BC4;&#x4F30;&#x8BB0;&#x8005;&#x3002;&#x8BB0;&#x8005;&#x6F84;&#x6E05;&#x4ED6;&#x590D;&#x6742;&#x7684; Wnt1 &#x548C; En1 &#x8840;&#x7EDF;&#x5982;&#x4F55;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x80DA;&#x80CE;&#x548C;&#x6765;&#x81EA;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8C31;&#x7CFB;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8F74;&#x7A81;&#x6295;&#x5F71;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x548C;&#x80DA;&#x80CE;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6761;&#x4EF6;&#x8BB0;&#x8005;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

A long-standing problem in development is understanding how progenitor cells transiently expressing genes contribute to complex anatomical and functional structures. In the developing nervous system an additional level of complexity arises when considering how cells of distinct lineages relate to newly established neural circuits. To address these problems, we used both cumulative marking with Cre/loxP and Genetic Inducible Fate Mapping (GIFM), which permanently and heritably marks small populations of progenitors and their descendants with fine temporal control using CreER/loxP. A key component used in both approaches is a conditional phenotyping allele that has the potential to be expressed in all cell types, but is quiescent because of a loxP flanked Stop sequence, which precedes a reporter allele. Upon recombination, the resulting phenotyping allele is 'turned on' and then constitutively expressed. Thus, the reporter functions as a high fidelity genetic lineage tracer in vivo. Currently there is an array of reporter alleles that can be used in marking strategies, but their recombination efficiency and applicability to a wide array of tissues has not been thoroughly described. To assess the recombination/marking potential of the reporters, we utilized CreER(T) under the control of a Wnt1 transgene (Wnt1-CreER(T)) as well as a cumulative, non-inducible En1(Cre) knock-in line in combination with three different reporters: R26R (LacZ reporter), Z/EG (EGFP reporter), and Tau-Lox-STOP-Lox-mGFP-IRES-NLS-LacZ (membrane-targeted GFP/nuclear LacZ reporter). We marked the Wnt1 lineage using each of the three reporters at embryonic day (E) 8.5 followed by analysis at E10.0, E12.5, and in the adult. We also compared cumulative marking of cells with a history of En1 expression at the same stages. We evaluated the reporters by whole-mount and section analysis and ascertained the strengths and weaknesses of each of the reporters. Comparative analysis with the reporters elucidated complexities of how the Wnt1 and En1 lineages contribute to developing embryos and to axonal projection patterns of neurons derived from these lineages.

Comparative analysis of conditional reporter alleles in the developing embryo and embryonic nervous system.

Un probl&#xE8;me de longue date dans le d&#xE9;veloppement est de comprendre comment les cellules prog&#xE9;nitrices de mani&#xE8;re transitoire des g&#xE8;nes exprimant contribuer &#xE0; des structures anatomiques complexes et fonctionnel. Dans le syst&#xE8;me nerveux en d&#xE9;veloppement un niveau suppl&#xE9;mentaire de complexit&#xE9; se pose lorsque l&#x26;#39;on consid&#xE8;re comment les cellules de lign&#xE9;es distinctes se rapportent &#xE0; nouvellement cr&#xE9;&#xE9;es circuits neuronaux. Pour r&#xE9;soudre ces probl&#xE8;mes, nous avons utilis&#xE9; &#xE0; la fois cumulatif marquage avec Cre / loxP et cartographie g&#xE9;n&#xE9;tique destin inductible (GIFM), qui marque de fa&#xE7;on permanente et heritably de petites populations de prog&#xE9;niteurs et de leurs descendants avec un contr&#xF4;le temporel pr&#xE9;cis avec CREER / loxP. Un &#xE9;l&#xE9;ment cl&#xE9; utilis&#xE9; dans les deux approches est un all&#xE8;le ph&#xE9;notypage conditionnelle qui a le potentiel pour &#xEA;tre exprim&#xE9; dans tous les types de cellules, mais est au repos en raison d&#x26;#39;une s&#xE9;quence loxP flanqu&#xE9;e d&#x26;#39;arr&#xEA;t, qui pr&#xE9;c&#xE8;de un all&#xE8;le journaliste. Sur la recombinaison, l&#x26;#39;all&#xE8;le ph&#xE9;notypage qui en r&#xE9;sulte est &#xAB;allum&#xE9;&#xBB; et ensuite exprim&#xE9; de fa&#xE7;on constitutive. Ainsi, les fonctions journaliste comme un traceur haute fid&#xE9;lit&#xE9; lign&#xE9;e g&#xE9;n&#xE9;tique in vivo. Actuellement, il ya un tableau des all&#xE8;les journaliste qui peuvent &#xEA;tre utilis&#xE9;s dans le marquage des strat&#xE9;gies, mais leur efficacit&#xE9; de recombinaison et de l&#x26;#39;applicabilit&#xE9; &#xE0; un large &#xE9;ventail de tissus n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;crites en d&#xE9;tail. Pour &#xE9;valuer la recombinaison / marquage potentiel des journalistes, nous avons utilis&#xE9; CREER (T) sous le contr&#xF4;le d&#x26;#39;un transg&#xE8;ne Wnt1 (Wnt1-CREER (T)) ainsi que d&#x26;#39;un cumul et non inductible En1 (Cre) knock-in en ligne en combinaison avec trois journalistes diff&#xE9;rents: R26R (LacZ journaliste), Z / EG (rapporteur de l&#x26;#39;EGFP), et Tau-Lox-STOP-Lox-mGFP-IRES-NLS-LacZ (membrane-GFP cibl&#xE9;e / nucl&#xE9;aire rapporteur LacZ). Nous avons marqu&#xE9; la lign&#xE9;e Wnt1 en utilisant chacun des trois journalistes &#xE0; jour embryonnaire (E) 8,5 suivie d&#x26;#39;une analyse &#xE0; E10.0, E12.5, et chez l&#x26;#39;adulte. Nous avons &#xE9;galement compar&#xE9; cumulatif marquage des cellules avec une histoire de En1 expression aux m&#xEA;mes &#xE9;tapes. Nous avons &#xE9;valu&#xE9; les journalistes par l&#x26;#39;ensemble du montage et l&#x26;#39;analyse de l&#x26;#39;article et v&#xE9;rifi&#xE9; les points forts et les faiblesses de chacun des journalistes. Analyse comparative avec les journalistes &#xE9;lucid&#xE9; la complexit&#xE9; de la fa&#xE7;on dont les Wnt1 et En1 lign&#xE9;es de contribuer &#xE0; des embryons en d&#xE9;veloppement et aux mod&#xE8;les de projection axonales des neurones issus de ces lign&#xE9;es.

Analyse comparative des all&#xE8;les Reporter conditionnelles dans le d&#xE9;veloppement de l&#x26;#39;embryon et embryonnaire du syst&#xE8;me nerveux

Ein anhaltendes Problem in der Entwicklung ist verstehen, wie Vorl&auml;uferzellen, die vor&uuml;bergehend Ausdr&uuml;cken Gene zu komplexen anatomischen und funktionalen Strukturen beitragen. In das sich entwickelnde Nervensystem entsteht ein zus&auml;tzliches Ma&szlig; an Komplexit&auml;t, wenn unter Ber&uuml;cksichtigung der Zellen unterschiedliche Linien neu Beziehung zu neuronale Schaltkreise gegr&uuml;ndet. Um diese Probleme zu beheben, haben wir beide kumulative Kennzeichnung mit Cre/LoxP und genetische Inducible Schicksal Mapping (GIFM), die dauerhaft und heritably kleine Populationen der Vorfahren und ihre Nachkommen mit feinen zeitliche Steuerung mit CreER/LoxP Marken verwendet. Eine Schl&uuml;sselkomponente in beide Ans&auml;tze verwendet ist eine bedingte pathologies-Allel, die das Potenzial hat, alle Zelltypen ausgedr&uuml;ckt werden, aber ruhige aufgrund einer LoxP flankiert Stop-Sequenz, die ein Reporter-Allel vorausgeht. Bei der Rekombination ist die resultierende pathologies Allel &#39;eingeschaltet&#39; und dann konstitutiv ausgedr&uuml;ckt. So funktioniert die Reporter als ein High-Fidelity-genetische Abstammung-Tracer, der in-vivo. Derzeit gibt es eine Reihe von Reporter-Allele, die in der Kennzeichnung, Strategien, sondern deren Rekombination Effizienz verwendet werden kann und Anwendbarkeit auf einer Vielzahl von Geweben nicht ausf&uuml;hrlich beschrieben. Um das Rekombination/Kennzeichnung der Reporter bewerten, haben wir CreER(T) unter der Kontrolle einer Wnt1 Transgene genutzt (Wnt1-CreER(T)) sowie eine kumulative-inducible En1(Cre) Knock-in Linie in Kombination mit drei verschiedenen Reportern: R26R (LacZ Reporter), Z/EG (EGFP Reporter) und Tau-Lox-STOP-Lox-mGFP-IRES-NLS-LacZ (Membran-bezogene GFP/nuklearen LacZ Reporter). Hier markieren wir die Wnt1-Linie, die mit den einzelnen der drei Reporter bei embryonalen Tag (E) 8.5 mit anschlie&szlig;ender Analyse auf E10.0, E12.5, und in den Erwachsenen. Wir verglichen auch kumulative Markierung von Zellen mit einer Geschichte von En1 Ausdruck in den gleichen Phasen. Wir die Reporter von ganz-Mount und Abschnitt Analyse ausgewertet und festgestellt, die St&auml;rken und Schw&auml;chen der einzelnen Reportern. Vergleichende Analyse mit den Reportern verdeutlicht die Komplexit&auml;t wie die Wnt1 und En1 &Uuml;bertragungslinien Embryonen und dem axonale Projektion Muster von Neuronen abgeleitet von diesen Linien beitragen.

Vergleichende Analyse der bedingten Reporter Allele in der entwickelnden Embryo und embryonalen Nervensystems.

Un annoso problema in via di sviluppo &egrave; capire come le cellule progenitrici transitoriamente espressione dei geni contribuiscono a complesse strutture anatomiche e funzionali. Nel sistema nervoso in via di sviluppo un ulteriore livello di complessit&agrave; si pone quando considerando come cellule di distinti lignaggi riguardano appena stabilito circuiti neurali. Per risolvere questi problemi, abbiamo usato sia cumulativo marcatura con Cre/loxP e genetica inducibile destino Mapping (GIFM), che contrassegna permanentemente e heritably piccole popolazioni di progenitori e dei loro discendenti con controllo temporale fine utilizzando CreER/loxP. Un componente chiave utilizzati in entrambi gli approcci &egrave; un allele fenotipi condizionale che ha il potenziale per essere espresso in tutti i tipi di cellule, ma &egrave; tranquillo a causa di una sequenza di Stop loxP affiancato, che precede un allele reporter. Ricombinazione, l&#39;allele di fenotipi risultante &egrave; &#39;acceso&#39; e quindi costitutivamente espresso. Cos&igrave;, il reporter funziona come un tracciante del lignaggio genetico ad alta fedelt&agrave; in vivo. Attualmente c&#39;&egrave; una matrice di alleli reporter che pu&ograve; essere utilizzato in marcatura strategie, ma la loro efficienza di ricombinazione e applicabilit&agrave; di una vasta gamma di tessuti non &egrave; stato accuratamente descritto. Per valutare il potenziale di ricombinazione/marcatura dei reporter, abbiamo utilizzato il CreER(T) sotto il controllo di un transgene Wnt1 (Wnt1-CreER(T)), nonch&eacute; una cumulativa, non-inducibile En1(Cre) knock-in linea in combinazione con tre differenti reporter: R26R (reporter LacZ), Z/EG (reporter EGFP) e Tau-Lox-STOP-Lox-mGFP-IRES-NLS-LacZ (membrana mirati reporter LacZ GFP/nucleare). Abbiamo segnato il lignaggio di Wnt1 con ciascuno dei tre giornalisti a giorno embrionale (E) 8.5 seguita da analisi a E10.0, E12.5 e nell&#39;adulto. Abbiamo confrontato anche cumulativo marcatura delle cellule con una storia di En1 espressione presso le stesse fasi. Abbiamo valutato i reporter dall&#39;intero-monta e sezione analisi e accertata la forza e debolezza di ciascuno dei giornalisti. Analisi comparativa con la complessit&agrave; chiarito ai giornalisti di come i lignaggi Wnt1 ed En1 contribuiscono allo sviluppo di embrioni e di modelli di proiezione assonali dei neuroni derivati da questi lignaggi.

Analisi comparativa degli alleli condizionali reporter nell&#39;embrione in via di sviluppo e del sistema nervoso embrionale.

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&#x26;#39;&#x30AA;&#x30F3;&#x26;#39;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x9AD8;&#x5FE0;&#x5B9F;&#x5EA6;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x6226;&#x7565;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x5E45;&#x5E83;&#x3044;&#x3078;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x6027;&#x3068;&#x9069;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x5FB9;&#x5E95;&#x7684;&#x306B;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8A18;&#x8005;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;/&#x30DE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;Wnt1&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#xFF08;Wnt1-CreER&#xFF08;T&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0B;CreER&#xFF08;T&#xFF09;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x7D2F;&#x7A4D;&#x3001;&#x975E;&#x8A98;&#x5C0E;EN1&#xFF08;CRE&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A4;&#x30F3;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;R26R&#xFF08;LacZ&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF09;&#x3001;Z / EG&#xFF08;EGFP&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Tau-LOX-STOP-LOX-mGFP-IRES-NLS-LacZ&#x3092;&#xFF08;&#x819C;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x305F;GFP /&#x6838;LacZ&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF09;&#xFF1A;&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;E12.5&#x3001;E10.0&#x3067;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x80DA;&#x65E5;&#xFF08;E&#xFF09;8.5&#x3067;&#x3001;3&#x8A18;&#x8005;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;Wnt1&#x7CFB;&#x7D71;&#x3092;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3057;&#x3001;&#x5927;&#x4EBA;&#x3067;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x3067;EN1&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x6B74;&#x53F2;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7D2F;&#x7A4D;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;&#x8A18;&#x8005;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x78BA;&#x8A8D;&#x306E;&#x9577;&#x6240;&#x3068;&#x77ED;&#x6240;&#x3067;&#x8A18;&#x8005;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8A18;&#x8005;&#x3068;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;Wnt1&#x3068;EN1&#x7CFB;&#x7D71;&#x304C;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x80DA;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x6295;&#x5C04;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x767A;&#x751F;&#x4E2D;&#x306E;&#x80DA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x80DA;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4ED8;&#x304D;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x89E3;&#x6790;

&#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC624;&#xB79C; &#xBB38;&#xC81C; transiently &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC; &#xC870; &#xC140; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD574;&#xBD80;&#xD559; &#xC801; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;. &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD68C;&#xB85C; &#xC124;&#xB9BD; &#xC140; &#xACE0;&#xC720; &#xD608;&#xD1B5;&#xC758; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC0C8;&#xB85C; &#xACE0;&#xB824; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131; &#xCD94;&#xAC00; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xB204;&#xC801; Cre/Loxp&#xC640; &#xC720;&#xC804; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC6B4;&#xBA85; &#xB9E4;&#xD551; (GIFM), &#xC601;&#xAD6C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC0F; heritably &#xD45C;&#xC2DC; &#xD568; CreER/loxP &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAD1C; &#xCC2E; &#xC544; &#xC694; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xACFC; progenitors &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC790;&#xC190;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC778;&#xAD6C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBAA8;&#xB450; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xD575;&#xC2EC; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC140; &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB420; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; &#xD615;&#xC9C8; allele &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC55E;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC790; &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790; loxP &#xCE21;&#xBA74; &#xC911;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBB34;&#xBD80;&#xD558;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;, &#xB530;&#xB77C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB300;&#xB9BD; &#xD615;&#xC9C8; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#39;&#xCF1C;&#39; &#xC774;&#xBA70; constitutively &#xD45C;&#xD604;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xAE30;&#xC790; &#xACE0;&#xD654;&#xC9C8; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xACC4;&#xBCF4; &#xCD94;&#xC801; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC804;&#xB7B5;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC7AC;&#xACB0;&#xD569; &#xD6A8;&#xC728; &#xD45C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAE30;&#xC790; &#xB300;&#xB9BD; &#xC774;&#xBA70; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xCCA0;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xC9C0;. &#xAE30;&#xC790; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;/&#xB9C8;&#xD0B9; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Wnt1 transgene&#xC758; &#xD1B5;&#xC81C; Creer(t)&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9; (&#xB204;&#xC801;, &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBE44; En1(Cre) &#xB178;&#xD06C;&#xC5D0; &#xC904; 3 &#xBA85;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xC790;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; Wnt1-CreER(T)): R26R (LacZ &#xAE30;&#xC790;) Z/EG (EGFP &#xAE30;&#xC790;) &#xBC0F; Tau-Lox-STOP-Lox-mGFP-IRES-NLS-LacZ (GFP/&#xD575; LacZ &#xAE30;&#xC790; &#xB9C9; &#xB300;&#xC0C1;). &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xB0A0; (E) &#xB4A4;&#xC5D0; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; E10.0, E12.5, 8.5 &#xC138; &#xAE30;&#xC790; &#xB4E4;&#xC758; &#xAC01;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; Wnt1 &#xD608;&#xD1B5; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; En1 &#xC2DD;&#xC758; &#xC5ED;&#xC0AC;&#xB97C; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC140;&#xC758; &#xB204;&#xC801; &#xB9C8;&#xD0B9; &#xBE44;&#xAD50;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC804;&#xCCB4; &#xC0B0;&#xACFC; &#xC139;&#xC158; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xC790; &#xB4E4;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xAE30;&#xC790; &#xB4E4;&#xC758; &#xAC01;&#xAC01;&#xC758; &#xC7A5;&#xB2E8;&#xC810;&#xC744; &#xD655;&#xC778;. &#xAE30;&#xC790; &#xD574;&#xBA85; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131; &#xBC30;&#xC544;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACC4;&#xBCF4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; axonal &#xD504;&#xB85C;&#xC81D;&#xC158; &#xD328;&#xD134; Wnt1 &#xBC0F; En1 &#xACC4;&#xBCF4; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50; &#xBD84;&#xC11D;.

&#xC870;&#xAC74;&#xBD80; &#xAE30;&#xC790; &#xB300;&#xB9BD; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC30;&#xC544; &#xBC0F; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50; &#xBD84;&#xC11D;.

Un problema de larga data en el desarrollo es entender c&#xF3;mo las c&#xE9;lulas progenitoras de los genes que expresan transitoriamente contribuir a complejas estructuras anat&#xF3;micas y funcionales. En el sistema nervioso en desarrollo de un nivel adicional de complejidad surge cuando se considera c&#xF3;mo las c&#xE9;lulas de diferentes linajes se refieren a los reci&#xE9;n establecidos los circuitos neuronales. Para solucionar estos problemas, hemos utilizado tanto acumulado marcado con el Cre / loxP y mapeo gen&#xE9;tico inducible Destino (GIFM), que marca de forma permanente y heritably peque&#xF1;as poblaciones de progenitores y sus descendientes, con un control preciso temporal usando CREER / loxP. Un componente clave utilizada en ambos enfoques es un alelo fenotipado condicional que tiene el potencial de ser expresado en todos los tipos celulares, pero est&#xE1; en reposo a causa de un loxP flanqueado secuencia de parada, que precede a un alelo reportero. Despu&#xE9;s de la recombinaci&#xF3;n, el alelo fenotipo resultante es &#x26;quot;encendido&#x26;quot; y luego expresa constitutivamente. As&#xED;, las funciones reportero como un trazador linaje de alta fidelidad gen&#xE9;tica in vivo. Actualmente existe una gran variedad de alelos reportero que pueden ser utilizados en el marcado de las estrategias, pero su eficacia recombinaci&#xF3;n y la aplicabilidad a una amplia gama de tejidos no se ha descrito a fondo. Para evaluar la recombinaci&#xF3;n / marcado potencial de los reporteros, hemos utilizado CREER (T) bajo el control de un transg&#xE9;n Wnt1 (Wnt1-CREER (T)), as&#xED; como un acumulativo, no inducible En1 (Cre) en cadena en l&#xED;nea en combinaci&#xF3;n con tres reporteros diferentes: R26R (lacZ reportero), Z / EG (EGFP reportero), y Tau-Lox-STOP-Lox-mGFP-IRES-NLS-LacZ (membrana orientada GFP / nuclear reportero LacZ). Se marc&#xF3; el linaje Wnt1 utilizando cada uno de los tres reporteros en d&#xED;a embrionario (E) 8,5 seguido por an&#xE1;lisis en E10.0, E12.5, y en el adulto. Asimismo, en comparaci&#xF3;n acumulada marcado de las c&#xE9;lulas con una historia de En1 expresi&#xF3;n en las mismas etapas. Se evalu&#xF3; a los periodistas por todo el montaje y el an&#xE1;lisis de la secci&#xF3;n y comprobar las fortalezas y debilidades de cada uno de los periodistas. El an&#xE1;lisis comparativo con los periodistas dilucidado complejidades de c&#xF3;mo los Wnt1 y en1 linajes contribuir a los embriones en desarrollo y los patrones de proyecci&#xF3;n axonal de las neuronas derivadas de estos linajes.

An&#xE1;lisis comparativo de los alelos del reportero de condicionales en el embri&#xF3;n en desarrollo y sistema nervioso embrionario

(Cb) &#x5C0F;&#x8111;&#x63A7;&#x5236;&#x8FD0;&#x52A8;&#x76F8;&#x5173;&#x751F;&#x7406;&#x4F7F;&#x7528;&#x591A;&#x79CD;&#x591A;&#x6837;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;&#x5728;&#x5F00;&#x53D1;&#x671F;&#x95F4;&#xFF0C;Cb &#x88AB;&#x6765;&#x81EA; rhombomere 1 (r1) &#x56FE;&#x6848;&#x7531;&#x5CE1;&#x90E8;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x8005;&#x88AB;&#x79F0;&#x4E3A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x80DA;&#x80CE;&#x8F66;&#x53A2;&#x3002;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; WNT1 &#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x4E2D;&#x8111;&#x539F;&#x57FA; (&#x4E2D;&#x8111;&#x3001; mes) &#x548C;&#x540E; mes &#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x3002;WNT1 &#x53D1;&#x6325;&#x4E86;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x7EF4;&#x62A4;&#x5730;&#x5CE1;&#x4E3B;&#x529E;&#x5355;&#x4F4D;&#x548C; Wnt1 &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E25;&#x91CD;&#x7684; Cb &#x7F3A;&#x9677;&#xFF0C;&#x4E00;&#x822C;&#x90FD;&#x5F52;&#x56E0;&#x4E8E;&#x5F02;&#x5E38;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x8005;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;Wnt1 &#x8FD8;&#x8868;&#x793A;&#x540E;&#x6700;&#x6781;&#x9650;&#x7684;&#x80CC; r1&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A;&#x83F1;&#x5F62;&#x4E0A;&#x5507; (URL) &#x7684;&#x5730;&#x533A;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#x7684;&#x5206;&#x5E03;&#x548C; Wnt1 &#x8868;&#x793A;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5B50;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x4ED4;&#x7EC6;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684; r1&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E; Wnt1 &#x91D1;&#x661F;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x751F;&#x6210; Wnt1 &#x8868;&#x793A;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x597D;&#x7279;&#x8272; Cb &#x751F;&#x7269;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x5982; MATH1 &#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5B50;&#x5730;&#x56FE; (ATOH1) LMX1a &#x548C; OTX2&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x9A8C;&#x8BC1; URL Wnt1 &#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E; r1 &#x63ED;&#x793A;&#x5206;&#x5B50;&#x5B9A;&#x4E49;&#x53D1;&#x5C55;&#x533A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7136;&#x540E;&#x7528;&#x4E8E;&#x57FA;&#x56E0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x547D;&#x8FD0;&#x6620;&#x5C04; (GIFM) &#x94FE;&#x63A5;&#x5728; r1 &#x7684;&#x77AC;&#x65F6; Wnt1 &#x8868;&#x8FBE;&#x5230;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547D;&#x8FD0;&#x4E2D;&#x6210;&#x719F;&#x7684; Cb&#x3002; Wnt1 &#x8868;&#x793A;&#x4E3B;&#x8981;&#x8D21;&#x732E;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x6DF1;&#x5C0F;&#x8111;&#x3001; &#x9897;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5355;&#x6781;&#x5237;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4F46;&#x76F8;&#x4E92;&#x91CD;&#x53E0;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x7A97;&#x53E3;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x70DF;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x6291;&#x5236;&#x6027;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x80F6;&#x8D28;&#x8D1D;&#x683C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8BC1;&#x660E; Wnt1 &#x6CBF;&#x88AD;&#x5E76;&#x4E0D;&#x80FD;&#x80DC;&#x4EFB;&#x80FD;&#x529B;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x9010;&#x6B65;&#x6CBF;&#x88AD;&#x9650;&#x5236;&#x751F;&#x6210; Cb &#x6216;&#x529F;&#x80FD;&#x76F8;&#x5173;&#x7684; precerebellar &#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x542F;&#x52A8; Wnt1 &#x8868;&#x8FBE;&#x4ECE;&#x5934;&#x6765;&#x5F15;&#x8D77;&#x6BCF;&#x4E2A; Cb &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x548C; precerebellar &#x539F;&#x5B50;&#x6838;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x7528; GIFM &#x6765;&#x786E;&#x5B9A;&#x65F6;&#x95F4;&#x63A7;&#x5236; Wnt1 &#x8868;&#x8FBE;&#x6709;&#x5173;&#x5206;&#x5B50;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5728; Cb &#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5982;&#x4F55;&#x6CBF;&#x88AD;&#x548C;&#x65F6;&#x673A;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5728; Cb &#x4F53;&#x7CFB;&#x5185;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;

Wnt1 &#x8868;&#x8FBE;&#x6682;&#x65F6;&#x5206;&#x914D;&#x83F1;&#x5F62;&#x4E0A;&#x5507;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5B9A;&#x4E49;&#x5176;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547D;&#x8FD0;&#x5728;&#x5C0F;&#x8111;&#x4E2D;&#x3002;

The cerebellum (Cb) controls movement related physiology using a diverse array of morphologically and biochemically distinct neurons. During development, the Cb is derived from rhombomere 1 (r1), an embryonic compartment patterned by a signaling center referred to as the isthmus organizer. The secreted glycoprotein WNT1 is expressed in the midbrain primordia (mesencephalon, mes) and at the posterior limit of the mes. WNT1 plays a pivotal role in maintaining the isthmus organizer and mutations in Wnt1 produce severe Cb defects that are generally attributed to aberrant organizer activity. Interestingly, Wnt1 is also expressed at the most posterior limit of dorsal r1, in a region known as the upper rhombic lip (URL). However, the distribution and molecular identity of Wnt1 expressing progenitors have not been carefully described in r1. We used Wnt1-Venus transgenic mice to generate a molecular map of Wnt1 expressing progenitors in relation to other well characterized Cb biomarkers such as MATH1 (ATOH1), LMX1a and OTX2. Our analysis validated Wnt1 expression in the URL and revealed molecularly-defined developmental zones in r1. We then used genetic inducible fate mapping (GIFM) to link transient Wnt1 expression in r1 to terminal cell fates in the mature Cb. Wnt1 expressing progenitors primarily contributed to neurons in deep cerebellar nuclei, granule cells, and unipolar brush cells in distinct but overlapping temporal windows and sparsely contributed to inhibitory neurons and Bergmann glia. We further demonstrate that the Wnt1 lineage does not follow a competency model of progressive lineage restriction to generate the Cb or the functionally related precerebellar system. Instead, progenitors initiate Wnt1 expression de novo to give rise to each Cb cell type and precerebellar nuclei. We also used GIFM to determine how the temporal control of Wnt1 expression is related to molecular identity and cell migration in Cb development. Our findings provide new insight into how lineage and timing establish cell diversity within the Cb system.

Wnt1 expression temporally allocates upper rhombic lip progenitors and defines their terminal cell fate in the cerebellum.

Le cervelet (Cb) contr&#xF4;le la physiologie mouvement li&#xE9; en utilisant un large &#xE9;ventail d&#x26;#39;morphologiquement et biochimiquement neurones distincts. Au cours du d&#xE9;veloppement, la Cb est d&#xE9;riv&#xE9; d&#x26;#39;une rhombom&#xE8;re (r1), un compartiment embryonnaire motif par un centre de signalisation d&#xE9;nomm&#xE9; l&#x26;#39;organisateur isthme. Le Wnt1 glycoprot&#xE9;ine s&#xE9;cr&#xE9;t&#xE9;e est exprim&#xE9; dans le m&#xE9;senc&#xE9;phale (m&#xE9;senc&#xE9;phale, mes) primordia et &#xE0; la limite post&#xE9;rieure de la MES. Wnt1 joue un r&#xF4;le essentiel dans le maintien de l&#x26;#39;organisateur isthme et des mutations dans Wnt1 entra&#xEE;ner de graves d&#xE9;fauts Cb qui sont g&#xE9;n&#xE9;ralement attribu&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;activit&#xE9; aberrante organisateur. Fait int&#xE9;ressant, Wnt1 est &#xE9;galement exprim&#xE9;e &#xE0; la limite la plus post&#xE9;rieure de la dorsale r1, dans une r&#xE9;gion connue sous le nom de la l&#xE8;vre sup&#xE9;rieure rhombique (URL). Cependant, la distribution et l&#x26;#39;identit&#xE9; mol&#xE9;culaire de Wnt1 prog&#xE9;niteurs exprimant n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; soigneusement d&#xE9;crit dans r1. Nous avons utilis&#xE9; Wnt1-Venus des souris transg&#xE9;niques pour produire une carte mol&#xE9;culaire de Wnt1 prog&#xE9;niteurs exprimant par rapport &#xE0; d&#x26;#39;autres bien caract&#xE9;ris&#xE9;s biomarqueurs Cb comme Math1 (ATOH1), LMX1a et OTX2. Notre analyse valid&#xE9;e Wnt1 expression dans l&#x26;#39;URL et r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; mol&#xE9;culairement d&#xE9;finis les zones de d&#xE9;veloppement dans r1. Nous avons ensuite utilis&#xE9; cartographie g&#xE9;n&#xE9;tique sort inductible (GIFM) pour relier l&#x26;#39;expression transitoire de la Wnt1 r1 &#xE0; le destin des cellules terminales de la maturit&#xE9; Cb. Wnt1 prog&#xE9;niteurs exprimant principalement contribu&#xE9; &#xE0; neurones dans les noyaux c&#xE9;r&#xE9;belleux profonds, les cellules granulaires et des cellules de brosse unipolaires dans distincts mais qui se chevauchent fen&#xEA;tres temporelles et peu contribu&#xE9; &#xE0; neurones inhibiteurs et de la glie de Bergmann. Nous avons en outre d&#xE9;montrer que la lign&#xE9;e Wnt1 ne suit pas un mod&#xE8;le de comp&#xE9;tences de restriction progressive lign&#xE9;e de g&#xE9;n&#xE9;rer la CB ou la fonctionnellement syst&#xE8;me connexe pr&#xE9;c&#xE9;r&#xE9;belleux. Au lieu de cela, les prog&#xE9;niteurs engager Wnt1 expression de novo de donner lieu &#xE0; chaque type de cellule Cb et noyaux pr&#xE9;c&#xE9;r&#xE9;belleux. Nous avons &#xE9;galement utilis&#xE9; GIFM pour d&#xE9;terminer comment le contr&#xF4;le temporel de Wnt1 expression est li&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;identit&#xE9; mol&#xE9;culaire et la migration des cellules dans le d&#xE9;veloppement Cb. Nos r&#xE9;sultats fournissent un nouvel &#xE9;clairage sur la fa&#xE7;on dont la lign&#xE9;e et le calendrier &#xE0; &#xE9;tablir la diversit&#xE9; des cellules au sein du syst&#xE8;me CB.

Wnt1 Expression Alloue temporellement Upper Lip prog&#xE9;niteurs rhombiques et d&#xE9;finit leur destin cellulaire Terminal dans le cervelet

Die Kleinhirn (Cb)-Steuerelemente-Bewegung im Zusammenhang mit Physiologie, die mit eine Vielzahl an morphologisch und biochemisch unterschiedlichen Neuronen. W&auml;hrend der Entwicklung wird das Cb von RH2 1 (r1), eine embryonale Fach gemustert von einem signalisierende Zentrum als Organisator der Landenge genannten abgeleitet. Das sezernierte Glykoprotein WNT1 ist in das Mittelhirn Primordia (Zwischenhirn, Mes) und an der hinteren Grenze der das Mes angegeben. WNT1 spielt eine zentrale Rolle bei der Aufrechterhaltung des Landenge-Veranstalters und Mutationen im Wnt1 produzieren schwere Cb-defekten, die im allgemeinen aberrante Veranstalter Aktivit&auml;t zugeschrieben werden. Interessanterweise wird Wnt1 auch am meisten posterior Limit des dorsalen r1, in einer Region bekannt als die rhombische Oberlippe (URL) ausgedr&uuml;ckt. Jedoch haben die Verteilung und Molekulare Identit&auml;t Wnt1 Vorl&auml;uferzellen Ausdr&uuml;cken nicht sorgf&auml;ltig im r1 beschrieben. Wir Wnt1-Venus transgene M&auml;use verwendet, um eine molekulare Karte von Wnt1 Ausdr&uuml;cken Vorl&auml;uferzellen in Bezug auf andere gut gekennzeichnete Cb-Biomarker wie MATH1 generieren (ATOH1), LMX1a und OTX2. Unsere Analyse &uuml;berpr&uuml;ft Wnt1 Ausdruck in der URL und offenbarten molekular-definierten Entwicklungs Zonen in r1. Wir dann verwendet genetische durch Induktion Schicksal Zuordnung (GIFM) transient Wnt1 Ausdruck in r1 auf terminal Zelle Schicksale in der Reife Cb. Wnt1 Ausdr&uuml;cken Vorl&auml;uferzellen, die in erster Linie trug zu Neuronen verlinken in tief zerebell&auml;re Kerne, Granulat-Zellen und unipolaren B&uuml;rste Zellen in unterschiedlichen, aber sich &uuml;berlappenden zeitlichen Windows und d&uuml;nn zu hemmenden Neuronen und Bergmann Glia beigetragen. Weiter zeigen wir, dass Wnt1 Linie nicht folgt ein Kompetenzmodell progressive Linie Beschr&auml;nkung der Cb oder verwandeten precerebellar System zu generieren. Statt dessen initiieren Vorfahre Wnt1 Ausdruck de Novo um jeden Zelltyp Cb und precerebellar Kerne hervorrufen. Wir haben auch GIFM bestimmen, wie die zeitliche Kontrolle der Wnt1 Ausdruck mit molekularen Identit&auml;t und Zellmigration in Cb Entwicklung zusammenh&auml;ngt. Unsere Erkenntnisse einen neuen Einblick in wie Abstammung und Timing Zelle Vielfalt innerhalb der Cb-System herstellen.

Wnt1 Ausdruck zeitlich reserviert rhombische Oberlippe Vorl&auml;uferzellen und definiert ihr terminal Zelle Schicksal im Kleinhirn.

Il cervelletto (Cb) controlli movimento correlati a fisiologia utilizzando una gamma diversificata di neuroni morfologicamente e biochimicamente distinte. Durante lo sviluppo, il Cb &egrave; derivato da rhombomere 1 (r1), un vano embrionale modellato da un centro di segnalazione indicato come l&#39;organizzatore dell&#39;istmo. La glicoproteina secreta WNT1 &egrave; espresso nella primordia mesencefalo (mesencefalo, mes) e al limite posteriore del mes. WNT1 gioca un ruolo fondamentale nel mantenere l&#39;Organizzatore istmo e mutazioni in Wnt1 producono gravi difetti di Cb che sono generalmente attribuiti all&#39;attivit&agrave; di Organizzatore aberrante. &Egrave; interessante notare che, Wnt1 &egrave; anche espressa al limite pi&ugrave; posteriore della dorsale r1, in una regione conosciuta come il labbro superiore rombico (URL). Tuttavia, la distribuzione e l&#39;identit&agrave; molecolare di Wnt1 esprimendo progenitori non sono stati accuratamente descritti in r1. Abbiamo utilizzato topi transgenici Wnt1-Venus per generare una mappa molecolare di Wnt1 esprimendo progenitori rispetto altri biomarcatori Cb ben caratterizzati come MATH1 (ATOH1), LMX1a e OTX2. La nostra analisi convalidati Wnt1 espressione nell&#39;URL e rivelate molecolarmente definite zone dello sviluppo in r1. Abbiamo poi utilizzato mappatura genetica destino inducibile (GIFM) linkare transitoria Wnt1 espressione in r1 destini della cellula terminale, nel maturo Cb. Wnt1, esprimendo progenitori principalmente contribuiti ai neuroni in nuclei profondi cerebellari, granulo e cellule unipolari pennello in finestre temporali distinte ma sovrapposte e scarsamente contribuito all&#39;inibitori dei neuroni e glia di Bergmann. Noi dimostrare ulteriormente che la discendenza di Wnt1 non segue un modello delle competenze di restrizione progressiva lignaggio per generare il Cb o il sistema precerebellar funzionalmente correlato. Invece, progenitori avviano Wnt1 espressione de novo per dare origine a ogni tipo di cellula Cb e nuclei precerebellar. Abbiamo anche utilizzato GIFM per determinare come il controllo temporale dell&#39;espressione Wnt1 &egrave; legato all&#39;identit&agrave; molecolare e migrazione delle cellule in sviluppo Cb. I nostri risultati forniscono nuova intuizione come lignaggio e temporizzazione stabilire diversit&agrave; delle cellule all&#39;interno del sistema di Cb.

Wnt1 espressione temporaneamente alloca progenitori labbro rombico superiore e definisce il loro destino cellula terminale nel cervelletto.

&#x5C0F;&#x8133;&#xFF08;CB&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x7406;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x958B;&#x767A;&#x6642;&#x306B;&#x3001;Cb&#x306F;rhombomere 1&#xFF08;R1&#xFF09;&#x3001;&#x5CE1;&#x90E8;&#x30AA;&#x30FC;&#x30AC;&#x30CA;&#x30A4;&#x30B6;&#x30FC;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3067;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x80DA;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x7531;&#x6765;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x6CCC;&#x6027;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;WNT1&#x306F;&#x3001;&#x8133;&#x539F;&#x57FA;&#xFF08;&#x4E2D;&#x8133;&#x3001;MES&#xFF09;&#x3084;MES&#x306E;&#x5F8C;&#x90E8;&#x9650;&#x754C;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; WNT1&#x306F;Wnt1&#x306E;&#x5CE1;&#x90E8;&#x30AA;&#x30FC;&#x30AC;&#x30CA;&#x30A4;&#x30B6;&#x30FC;&#x3068;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x4E3B;&#x50AC;&#x8005;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;Cb&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x6975;&#x3081;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;Wnt1&#x306F;&#x3001;&#x4E0A;&#x90E8;&#x306E;&#x83F1;&#x5F62;&#x306E;&#x5507;&#xFF08;URL&#xFF09;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5730;&#x57DF;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x80CC;&#x5074;R1&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x5F8C;&#x65B9;&#x9650;&#x754C;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;Wnt1&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x3068;&#x5206;&#x5B50;&#x8B58;&#x5225;&#x306F;&#x614E;&#x91CD;&#x306B;r1&#x306B;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;MATH1&#xFF08;ATOH1&#xFF09;&#x3001;LMX1a&#x3068;OTX2&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x4ED6;&#x306E;&#x3088;&#x304F;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;Cb&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3067;Wnt1&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;Wnt1-&#x30F4;&#x30A3;&#x30FC;&#x30CA;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;URL&#x306B;Wnt1&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;R1&#x306B;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x767A;&#x9054;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6B21;&#x306B;&#x3001;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;CB&#x306E;&#x7AEF;&#x672B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x306B;R1&#x306E;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;Wnt1&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x8A98;&#x5C0E;&#x904B;&#x547D;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;GIFM&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Wnt1&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x304C;&#x91CD;&#x306A;&#x308A;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x30A6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30A6;&#x5185;&#x306E;&#x6DF1;&#x90E8;&#x5C0F;&#x8133;&#x6838;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3001;&#x9846;&#x7C92;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E6;&#x30CB;&#x30DD;&#x30FC;&#x30E9;&#x30D6;&#x30E9;&#x30B7;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x3070;&#x3089;&#x306B;&#x6291;&#x5236;&#x6027;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B0;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30A2;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;Wnt1&#x7CFB;&#x7D71;&#x306F;Cb&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;precerebellar&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9032;&#x6B69;&#x7684;&#x306A;&#x8840;&#x7D71;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D4;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30FC;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x5F93;&#x308F;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;Cb&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x3068;precerebellar&#x6838;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;de novo Wnt1&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;Wnt1&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x5236;&#x5FA1;&#x304C;Cb&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x8B58;&#x5225;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;GIFM&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3068;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;Cb&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x200B;&#x200B;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Wnt1&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x306B;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D1;&#x30FC;&#x83F1;&#x5F62;&#x30EA;&#x30C3;&#x30D7;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3092;&#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x3066;&#x3001;&#x5C0F;&#x8133;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC18C; &#xB1CC; (Cb) &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBC0F; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD00;&#xB828;. &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;&#xC740; Cb rhombomere 1 (r1), &#xC2E0;&#xD638; &#xC13C;&#xD130; &#xC9C0;&#xD611; &#xC8FC;&#xCD5C;&#xC790; &#xB77C;&#xACE0; &#xAF43;&#xBB34;&#xB2AC; &#xBC30;&#xC544; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; WNT1 midbrain primordia (mesencephalon, mes)&#xC640; mes&#xC758; &#xD6C4;&#xBD80;&#xB3C4; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C;&#xB2E4;. WNT1 &#xC9C0;&#xD611; &#xC8FC;&#xCD5C;&#xC790; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC911;&#xCD94;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB2F4;&#xB2F9; &#xD558; &#xACE0; wnt1&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC131; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD0C8; &#xC120; &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; Cb &#xACB0;&#xD568;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, wnt1&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xB9C8;&#xB984;&#xBAA8;&#xAF34; &#xC717;&#xC785;&#xC220; (URL)&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0; r 1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD6C4;&#xBD80;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC720;&#xD1B5; &#xBC0F; wnt1&#xC758; &#xBD84;&#xC790; id progenitors&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; r1&#xC5D0; &#xC2E0;&#xC911; &#xD558; &#xAC8C; &#xC124;&#xBA85;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Wnt1 &#xBE44;&#xB108;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC950;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD45C;&#xD604; MATH1 &#xAC19;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774; &#xC798; Cb biomarkers&#xC5D0; &#xAD00;&#xD558;&#xC5EC; progenitors wnt1&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xC0DD;&#xC131; (ATOH1) LMX1a &#xBC0F; OTX2. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xD655;&#xC778; URL&#xC5D0; Wnt1 &#xC2DD; r 1&#xC5D0;&#xC11C; &#xB4DC;&#xB7EC;&#xB09C;&#xB41C; &#xBD84;&#xC790;&#xB85C; &#xC815;&#xC758; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC601;&#xC5ED;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB2E4;&#xC74C; &#xAE4A;&#xC740; &#xC18C; &#xB1CC; &#xD575;&#xACFC; &#xB9BD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xACB9;&#xCE58;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC708;&#xB3C4;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720; &#xB2C8; &#xD3F4;&#xB77C; &#xBE0C;&#xB7EC;&#xC2DC; &#xC140; r 1 &#xACFC;&#xB3C4; Wnt1 &#xC2DD; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC140; &#xC6B4;&#xBA85;&#xC744; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; Cb. wnt1&#xC5D0;&#xC11C; progenitors &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0;&#xD560; &#xC720;&#xC804; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC6B4;&#xBA85; &#xB9E4;&#xD551; (GIFM)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB274;&#xB7F0; Bergmann &#xBA85;&#xACFC; &#xB744;&#xC5C4;&#xB744;&#xC5C4; &#xAE30;&#xC5EC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB354; Wnt1 &#xACC4;&#xBCF4;&#xB97C; Cb &#xB610;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; precerebellar &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xC9C4;&#xBCF4;&#xC801;&#xC778; &#xD608;&#xD1B5; &#xC81C;&#xD55C;&#xC758; &#xC5ED;&#xB7C9; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xB530;&#xB974;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC2E0;, progenitors Wnt1 &#xC2DD; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xAC01; Cb &#xC140; &#xD615;&#xC2DD; &#xBC0F; precerebellar &#xD575;&#xC744;&#xB97C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; GIFM&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; Wnt1 &#xC2DD;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBD84;&#xC790; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xACFC; Cb &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xAD00;&#xB828;&#xC740; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD608;&#xD1B5;&#xACFC; &#xD0C0;&#xC774;&#xBC0D; &#xC140; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131; Cb &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Wnt1 &#xC2DD; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xB9C8;&#xB984;&#xBAA8;&#xAF34; &#xC717;&#xC785;&#xC220; progenitors&#xB97C; &#xD560;&#xB2F9; &#xD558; &#xACE0; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC140; &#xC6B4;&#xBA85; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC18C; &#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xC758; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El cerebelo (Cb) controla el movimiento de la fisiolog&#xED;a relacionado con una gran variedad de neuronas morfol&#xF3;gicamente y bioqu&#xED;micamente diferentes. Durante el desarrollo, la Cb se deriva de rhombomere 1 (R1), un compartimiento embrionario modelada por un centro de se&#xF1;alizaci&#xF3;n referido como el organizador istmo. El Wnt1 glicoprote&#xED;na secretada se expresa en el cerebro medio primordios (mesenc&#xE9;falo, MES) y en el l&#xED;mite posterior del mensaje. Wnt1 juega un papel fundamental en el mantenimiento del organizador del istmo y las mutaciones en Wnt1 producir graves defectos de Cb que son generalmente atribuidos a la actividad organizadora aberrante. Curiosamente, Wnt1 se expresa tambi&#xE9;n en el l&#xED;mite m&#xE1;s posterior de r1 dorsal, en una regi&#xF3;n conocida como el labio superior romboidal (URL). Sin embargo, la distribuci&#xF3;n y la identidad molecular de Wnt1 progenitores expresan que no han sido cuidadosamente descrito en el R1. Se utiliz&#xF3; Wnt1-Venus ratones transg&#xE9;nicos para generar un mapa molecular de Wnt1 progenitores expresan en relaci&#xF3;n con otros marcadores biol&#xF3;gicos bien caracterizados Cb como Math1 (Atoh1), LMX1a y OTX2. Nuestro an&#xE1;lisis validado Wnt1 expresi&#xF3;n en la direcci&#xF3;n y revel&#xF3; molecularmente definidos por zonas de desarrollo en r1. A continuaci&#xF3;n, utiliza el mapeo gen&#xE9;tico destino inducible (GIFM) para vincular la expresi&#xF3;n transitoria en Wnt1 R1 a destinos celulares terminales en la madurez Cb. Wnt1 progenitores expresan principalmente contribuy&#xF3; a las neuronas de los n&#xFA;cleos profundos del cerebelo, las c&#xE9;lulas granulares y las c&#xE9;lulas unipolares pincel en ventanas temporales distintas pero superpuestas y poco contribuyeron a las neuronas inhibidoras y gl&#xED;a de Bergmann. Adem&#xE1;s, demuestran que el linaje Wnt1 no sigue un modelo de competencias de la restricci&#xF3;n de linaje progresiva para generar el Cb o el sistema de precerebellar funcionalmente relacionados. En su lugar, progenitores iniciar Wnt1 expresi&#xF3;n de novo para dar lugar a cada tipo de c&#xE9;lula Cb y n&#xFA;cleos precerebellar. Tambi&#xE9;n se utilizaron GIFM para determinar c&#xF3;mo el control temporal de la Wnt1 expresi&#xF3;n se relaciona con la identidad molecular y la migraci&#xF3;n celular en el desarrollo de Cb. Nuestros resultados proporcionan nuevos conocimientos sobre c&#xF3;mo el linaje y el calendario que establezca la diversidad celular dentro del sistema CB.

Article	Year
Comparative analysis of conditional reporter alleles in the developing embryo and embryonic nervous system. Gene expression patterns : GEP\| PubMed ID: 19616131	2009
Wnt1 expression temporally allocates upper rhombic lip progenitors and defines their terminal cell fate in the cerebellum. Molecular and cellular neurosciences\| PubMed ID: 22173107	2012

Nellwyn Hagan

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