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A Restriction Enzyme Based Cloning Method to Assess the <em>In vitro</em> Replication Capacity of HIV-1 Subtype C Gag-MJ4 Chimeric Viruses

The protective effect of many HLA class I alleles on HIV-1 pathogenesis and disease progression is, in part, attributed to their ability to target ...

Emory University

The gp41 component of the Human Immunodeficiency Virus (HIV) envelope glycoprotein (Env) contains a long cytoplasmic domain (CD) with multiple highly conserved tyrosine (Y) and dileucine (LL) motifs. Studies suggest that the motifs distal to major endocytosis motif (Y712HRL), located at residues 712-715 of Env, may contribute to Env functionality in the viral life cycle. In order to examine the biological contribution of these motifs in the biosynthesis, transport, and function of Env, we constructed two panels of mutants in which the conserved Y- and LL-motifs were sequentially substituted by alternative residues, either in the presence or absence of Y712. Additional mutants targeting individual motifs were then constructed.

Mutagenesis of tyrosine and di-leucine motifs in the HIV-1 envelope cytoplasmic domain results in a loss of Env-mediated fusion and infectivity.

HIV-1 attenuation resulting from immune escape mutations selected in Gag may contribute to slower disease progression in HIV-1-infected individuals expressing certain HLA class I alleles. We previously showed that the protective allele HLA-B*81 and the HLA-B*81-selected Gag T186S mutation are strongly associated with a lower viral replication capacity of recombinant viruses encoding Gag-protease derived from individuals chronically infected with HIV-1 subtype C. In the present study, we directly tested the effect of this mutation on viral replication capacity. In addition, we investigated potential compensatory effects of various polymorphisms, including other HLA-B*81-associated mutations that significantly covary with the T186S mutation. Mutations were introduced into a reference subtype B backbone and into patient-derived subtype C sequences in subtype B and C backbones by site-directed mutagenesis. The exponential-phase growth of mutant and wild-type viruses was assayed by flow cytometry of a green fluorescent protein reporter T cell line or by measurement of HIV-1 reverse transcriptase activity in culture supernatants. Engineering of the T186S mutation alone into all patient-derived subtype C sequences failed to yield replication-competent viruses, while in the subtype B sequence, the T186S mutation resulted in impaired replication capacity. Only the T186S mutation in combination with the T190I mutation yielded replication-competent viruses for all virus backbones tested; however, these constructs replicated slower than the wild type, suggesting that only partial compensation is mediated by the T190I mutation. Constructs encoding the T186S mutation in combination with other putative compensatory mutations were attenuated or defective. These results suggest that the T186S mutation is deleterious to HIV-1 subtype C replication and likely requires complex compensatory pathways, which may contribute to the clinical benefit associated with HLA-B*81.

Impact of HLA-B*81-associated mutations in HIV-1 Gag on viral replication capacity.

88 &#x4F20;&#x8F93;&#x5BF9;&#x8D5E;&#x6BD4;&#x4E9A;&#x57C3;&#x9ED8;&#x91CC;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7814;&#x7A76;&#x9879;&#x76EE;&#x961F;&#x5217;&#x4E2D;&#x7684;&#x521D;&#x6B65;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x4F20;&#x64AD; HLA-B &#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x5728;&#x538B;&#x5236;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x566A;&#x97F3;&#xFF0C;&#x6D88;&#x6781;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x70B9;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x91CF; (VL) &#x5728;&#x65B0;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x4F19;&#x4F34;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Gag CTL &#x8F6C;&#x4E49;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x79EF;&#x7D2F;&#x53EF;&#x80FD;&#x51CF;&#x8F7B;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E34;&#x5E8A;&#x6548;&#x76CA;&#x5728;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x514B;&#x9686;&#x5206;&#x79BB;&#x7684; 149 &#x4F8B;&#x6D41;&#x884C;&#x75C5;&#x5B66;&#x8054;&#x7CFB;&#x7684;&#x8D5E;&#x6BD4;&#x4E9A;&#x4F20;&#x8F93;&#x5BF9;&#x6025;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x4ECE;&#x6700;&#x65E9;&#x7684;&#x8840;&#x6E05;&#x8840;&#x6D46;&#x6837;&#x54C1;&#x5230;&#x4E3B;&#x9694;&#x79BB;&#xFF0C;&#x5B50;&#x7C7B;&#x578B; C &#x7EC4;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x77E2;&#x91CF;&#xFF0C;MJ4 gag &#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x611F;&#x67D3; GXR25 &#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x548C;&#x91CF;&#x5316;&#x901A;&#x8FC7;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x9176;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x57F9;&#x517B;&#x4E0A;&#x6E05;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x9897;&#x7C92;&#x751F;&#x4EA7;&#x786E;&#x5B9A;&#x8FD9;&#x4E9B; Gag MJ4 &#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x7E41;&#x6B96;&#x80FD;&#x529B; (RC)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x4E0A;&#x7684;&#x663E;&#x8457;&#x6B63;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x6240;&#x8D4B;&#x4E88;&#x7684;&#x5DF2;&#x4F20;&#x8F93;&#x7684; RC &#x538B;&#x5236;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x4E2D;&#x65B0;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x70B9; VL (p = 0.02&#xFF09;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;RC Gag MJ4 &#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x8FD8;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x6162;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x4F30;&#x8BA1;&#x65E5;&#x671F;&#x9644;&#x8FD1; VL (p = 0.01&#xFF09;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E; VL &#x6025;&#x6027;&#x548C;&#x6162;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x8BE5;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x8FD8;&#x5141;&#x8BB8;&#x4E3A;&#x6F84;&#x6E05;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E2D; Gag &#x5173;&#x8054;&#x7684; RC&#xFF0C;&#x7F55;&#x89C1;&#x7A81;&#x53D8;&#x90A3;&#x91CC;&#x5BF9;&#x5065;&#x8EAB;&#x5F71;&#x54CD;&#x6700;&#x5927;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x6211;&#x4EEC;&#x770B;&#x5230;&#x6709;&#x5229;&#x548C;&#x6709;&#x5BB3;&#x7684;&#x7F55;&#x89C1;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x540E;&#x8005;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6307;&#x5411;&#x6613;&#x53D7;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;RC &#x663E;&#x8457;&#x76F8;&#x5173; &#xFF08;p = 0.029&#xFF09; &#x7684;&#x5934; 3 &#x5E74;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E; VL &#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x611F;&#x67D3; CD4 + T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0B;&#x964D;&#x7387;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;-1 &#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x6700;&#x521D;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x80FD;&#x529B;&#x8D85;&#x8D8A;&#x4EC0;&#x4E48;&#x53EF;&#x80FD;&#x9884;&#x671F;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x57FA;&#x4E8E; VL &#x5355;&#x72EC;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x70B9;&#x3002;

&#x4F20;&#x64AD;&#x7684; Gag CTL &#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x5B9A;&#x4E49;&#x590D;&#x5236;&#x80FD;&#x529B;&#x548C;&#x65E9;&#x671F;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x53D1;&#x75C5;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Initial studies of 88 transmission pairs in the Zambia Emory HIV Research Project cohort demonstrated that the number of transmitted HLA-B associated polymorphisms in Gag, but not Nef, was negatively correlated to set point viral load (VL) in the newly infected partners. These results suggested that accumulation of CTL escape mutations in Gag might attenuate viral replication and provide a clinical benefit during early stages of infection. Using a novel approach, we have cloned gag sequences isolated from the earliest seroconversion plasma sample from the acutely infected recipient of 149 epidemiologically linked Zambian transmission pairs into a primary isolate, subtype C proviral vector, MJ4. We determined the replicative capacity (RC) of these Gag-MJ4 chimeras by infecting the GXR25 cell line and quantifying virion production in supernatants via a radiolabeled reverse transcriptase assay. We observed a statistically significant positive correlation between RC conferred by the transmitted Gag sequence and set point VL in newly infected individuals (pâ€Š=â€Š0.02). Furthermore, the RC of Gag-MJ4 chimeras also correlated with the VL of chronically infected donors near the estimated date of infection (pâ€Š=â€Š0.01), demonstrating that virus replication contributes to VL in both acute and chronic infection. These studies also allowed for the elucidation of novel sites in Gag associated with changes in RC, where rare mutations had the greatest effect on fitness. Although we observed both advantageous and deleterious rare mutations, the latter could point to vulnerable targets in the HIV-1 genome. Importantly, RC correlated significantly (pâ€Š=â€Š0.029) with the rate of CD4+ T cell decline over the first 3 years of infection in a manner that is partially independent of VL, suggesting that the replication capacity of HIV-1 during the earliest stages of infection is a determinant of pathogenesis beyond what might be expected based on set point VL alone.

Role of Transmitted Gag CTL Polymorphisms in Defining Replicative Capacity and Early HIV-1 Pathogenesis.

Des &eacute;tudes initiales de 88 paires de transmission dans la cohorte de Zambie Emory HIV Research Project a d&eacute;montr&eacute; que le nombre de transmission HLA-B associ&eacute; polymorphismes dans Gag, mais pas de Nef, est n&eacute;gativement corr&eacute;l&eacute;e &agrave; la charge virale de point de consigne (VL) chez les partenaires nouvellement infect&eacute;es. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que les accumulation de mutations &eacute;vasion CTL Gag pourrait att&eacute;nuer la r&eacute;plication virale et apporter un b&eacute;n&eacute;fice clinique au cours des premiers stades de l&#39;infection. En utilisant une nouvelle approche, nous avons clon&eacute; b&acirc;illon s&eacute;quences isol&eacute;es de l&#39;&eacute;chantillon de plasma de s&eacute;roconversion plus t&ocirc;t aupr&egrave;s de l&#39;acqu&eacute;reur gravement infect&eacute;e de 149 paires de transmission zambien &eacute;pid&eacute;miologiquement li&eacute; dans un isolat, sous-type C proviral vecteur primaire, MJ4. Nous avons d&eacute;termin&eacute; la capacit&eacute; r&eacute;plicative (RC) de ces chim&egrave;res Gag-MJ4 en infectant la lign&eacute;e cellulaire de GXR25 et de quantifier la production de virions dans les surnageants via un test radioactif de la transcriptase inverse. Nous avons observ&eacute; une corr&eacute;lation positive significative entre RC conf&eacute;r&eacute;e par la transmission de b&acirc;illonner la s&eacute;quence et la valeur de point VL chez les personnes nouvellement infect&eacute;es (p = 0,02). De plus, les chim&egrave;res de la RC de Gag-MJ4 &eacute;galement corr&eacute;l&eacute;e avec le VL de donneurs infect&eacute;s chroniquement pr&egrave;s la date estim&eacute;e de l&#39;infection (p = 0,01), d&eacute;montrant que la r&eacute;plication virus contribue &agrave; VL dans l&#39;infection aigu&euml; et chronique. Ces &eacute;tudes a &eacute;galement permis l&#39;&eacute;lucidation des nouveaux sites en Gag associ&eacute;s aux changements dans les RC, o&ugrave; des mutations rares avaient le plus grand effet sur la condition physique. Bien que nous avons observ&eacute; des mutations rares fois avantageuses et d&eacute;l&eacute;t&egrave;res, ce dernier peut pointer vers des cibles vuln&eacute;rables dans le g&eacute;nome du VIH-1. Ce qui est important, RC en corr&eacute;lation significative (p = 0,029) avec le taux de d&eacute;clin de cellules CD4 + T pendant les 3 premi&egrave;res ann&eacute;es de l&#39;infection d&#39;une mani&egrave;re qui est partiellement ind&eacute;pendante de VL, sugg&eacute;rant que la capacit&eacute; de r&eacute;plication du VIH-1 durant les premiers stades de l&#39;infection est un facteur d&eacute;terminant de la pathog&eacute;n&egrave;se au-del&agrave; de ce qui pouvait s&#39;y attendre bas&eacute; sur le point de consigne VL seul.

R&ocirc;le des polymorphismes CTL Gag diffus&eacute;e en d&eacute;finissant la capacit&eacute; r&eacute;plicative et pathogen&egrave;se pr&eacute;coce de VIH-1.

Erste Studien der 88 Getriebe-Paare in Sambia Emory HIV-Forschungsprojekt Kohorte gezeigt, dass die Anzahl der &uuml;bertragenen HLA-B assoziierten Polymorphismen in Gag, aber nicht Nef, war negativ korreliert mit Sollwert-Viruslast (VL) in der neu infizierten Partner. Diese Ergebnisse erweckten die Anh&auml;ufung von CTL-Escape-Mutationen im Gag k&ouml;nnte Virusreplikation d&auml;mpfen und einen klinischen Nutzen w&auml;hrend der fr&uuml;hen Stadien der Infektion bieten. Mit einem neuartigen Ansatz, haben wir Knebel-Sequenzen, die isoliert von der fr&uuml;hesten Serokonversion Plasma Probe vom akut infizierten Empf&auml;nger von 149 epidemiologisch verkn&uuml;pfte sambischen &Uuml;bertragung-Paaren in einen prim&auml;ren Eingreiftruppe, Subtyp C proviral Vektor, MJ4 geklont. Wir bestimmt die Replikationsf&auml;higkeit (RC) von diesen Gag-MJ4 Chim&auml;ren durch die GXR25-Zelllinie zu infizieren und Quantifizierung Virion Produktion in Supernatants &uuml;ber eine radioaktive Reverse-Transkriptase-Assay. Wir beobachteten eine statistisch signifikante positive Korrelation zwischen RC durch die &uuml;bertragenen verliehenen Gag Sequenz, und legen Sie Punkt VL bei neu infizierten Personen (p = 0,02). Dar&uuml;ber hinaus die RC von Gag-MJ4 Chim&auml;ren korreliert auch mit der VL der chronisch infizierten Spender nahe dem gesch&auml;tzten Zeitpunkt der Infektion (p = 0,01), demonstrieren, dass die Virus-Replikation tr&auml;gt zur VL in akute und chronische Infektion. Diese Studien auch f&uuml;r die Aufkl&auml;rung der neuartige Standorte in Gag verbundenen RC, wo seltene Mutationen die gr&ouml;&szlig;te Wirkung auf Fitness hatte erlaubt. Obwohl wir sowohl g&uuml;nstige als auch sch&auml;dliche seltene Mutationen beobachtet, k&ouml;nnte auf gef&auml;hrdeten Ziele in das Genom von HIV-1 Letztere zeigen. Wichtig ist, RC korreliert signifikant (p = 0,029) mit der CD4 + T-Zelle-R&uuml;ckgang in den ersten 3 Jahren der Infektion in einer Weise, die teilweise unabh&auml;ngig von VL, was darauf hindeutet, dass die Kapazit&auml;t der Replikation von HIV-1 in den fr&uuml;hesten Stadien der Infektion ist eine Determinante der Pathogenese dar&uuml;ber hinaus, was man erwarten k&ouml;nnte basierend auf Sollwert VL allein.

Rolle der &uuml;bertragenen Gag CTL-Polymorphismen Replikationsf&auml;higkeit und fr&uuml;hen HIV-1-Pathogenese zu definieren.

Studi iniziali di 88 coppie di trasmissione nella coorte Zambia Emory HIV Research Project ha dimostrato che il numero di HLA-B trasmesso associati polimorfismi in Gag, ma non Nef, era negativamente correlata alla carica virale di set-point (VL) nel partner infetto appena. Questi risultati ha suggerito che accumulo di mutazioni fuga CTL in Gag potrebbe attenuare la replicazione virale e fornire un beneficio clinico durante le fasi iniziali dell&#39;infezione. Utilizzando un approccio innovativo, noi abbiamo clonato sequenze gag isolati dai primo campione di plasma sieroconversione acutamente infettato destinatario di 149 coppie trasmissione zambiano epidemiologicamente collegati in un primario isolato, sottotipo C proviral vettore, MJ4. Abbiamo determinato la capacit&agrave; replicativa (RC) di queste chimere Gag-MJ4 infettando la linea cellulare GXR25 e quantificare la produzione del virione in supernatanti tramite un dosaggio radioattivo trascrittasi inversa. Abbiamo osservato una correlazione positiva statisticamente significativa tra RC conferiti dalla trasmissione sequenza di Gag e impostare punto VL in soggetti infetti appena (p = 0,02). Inoltre, le chimere di RC di Gag-MJ4 anche correlato con il VL di donatori cronicamente infetti vicino la data stimata di infezione (p = 0.01), dimostrando che la replica virus contribuisce a VL in infezione acuta e cronica. Questi studi ha permesso anche per la delucidazione di nuovi siti in Gag associati a cambiamenti nella RC, dove rare mutazioni ha avuto l&#39;effetto pi&ugrave; grande sul fitness. Anche se abbiamo osservato sia vantaggiose e deleterie mutazioni rare, quest&#39;ultimo potrebbe puntare a obiettivi vulnerabili nel genoma di HIV-1. Soprattutto, RC correlato significativamente (p = 0,029) con il tasso di declino delle cellule T CD4 + sopra i primi 3 anni di infezione in un modo che &egrave; parzialmente indipendente di VL, suggerendo che la capacit&agrave; di replicazione dell&#39;HIV-1 durante le prime fasi dell&#39;infezione &egrave; un fattore determinante della patogenesi di l&agrave; di quello che potrebbe essere previsto sulla base set point VL da solo.

Ruolo dei polimorfismi CTL Gag trasmessa nel definire la capacit&agrave; replicativa e patogenesi precoce di HIV-1.

88 &#x4F1D;&#x9001;&#x30DA;&#x30A2; &#x30B6;&#x30F3;&#x30D3;&#x30A2; &#x30A8;&#x30E2;&#x30EA;&#x30FC; HIV &#x7814;&#x7A76;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8; &#x30B3;&#x30DB;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x30AE;&#x30E3;&#x30B0;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x306A;&#x3044; Nef &#x306E;&#x591A;&#x578B;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8CA0;&#x8377; &#xFF08;VL&#xFF09; &#x65B0;&#x3057;&#x304F;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x306B;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x305F;&#x900F;&#x904E; HLA &#x2010; B &#x306E;&#x6570;&#x3002;&#x30AE;&#x30E3;&#x30B0;&#x306E; CTL &#x30A8;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30D7;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x6E1B;&#x8870;&#x3057;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x6BB5;&#x968E;&#x4E2D;&#x306B;&#x81E8;&#x5E8A;&#x306E;&#x5229;&#x76CA;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x65AC;&#x65B0;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x5206;&#x96E2;&#x3001;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; C &#x30D7;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306B; MJ4 149 &#x75AB;&#x5B66;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF; &#x30B6;&#x30F3;&#x30D3;&#x30A2;&#x4F1D;&#x9001;&#x30DA;&#x30A2;&#x306E;&#x6025;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x65E9;&#x3044;&#x30BB;&#x30ED;&#x30B3;&#x30F3; &#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3; &#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE; &#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30AE;&#x30E3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; GXR25 &#x30BB;&#x30EB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x3066;&#x6E05; radiolabeled &#x9006;&#x8EE2;&#x5199;&#x9175;&#x7D20;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x7D4C;&#x7531;&#x3067;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x30AE;&#x30E3;&#x30B0; MJ4 &#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x80FD;&#x529B; (RC) &#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30AE;&#x30E3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8; VL &#x3067;&#x65B0;&#x3057;&#x304F;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x500B;&#x4EBA;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x306B;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x6B63;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9001;&#x4FE1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6388;&#x4E0E; RC &#x89B3;&#x6E2C; (p = 0.02&#xFF09;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x30AE;&#x30E3;&#x30B0; MJ4 RC &#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x3092;&#x76F8;&#x95A2;&#x6162;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x4E88;&#x5B9A;&#x65E5;&#x8FD1;&#x304F;&#x306E; VL &#x306E; &#xFF08;p = 0.01&#xFF09;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x8CA2;&#x732E; VL &#x306B;&#x6025;&#x6027;&#x3068;&#x6162;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;RC&#x3001;&#x307E;&#x308C;&#x306A;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30B9;&#x306B;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x5834;&#x6240;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30AE;&#x30E3;&#x30B0;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x89E3;&#x660E;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x8A31;&#x53EF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3082;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x6709;&#x5229;&#x3068;&#x5287;&#x7269;&#x306E;&#x307E;&#x308C;&#x306A;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x5F8C;&#x8005;&#x306B;&#x50B7;&#x3064;&#x304D;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x76EE;&#x6A19;&#x306E; HIV-1 &#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3092;&#x6307;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;RC &#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x76F8;&#x95A2; (p = 0.029) VL &#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E; 3 &#x5E74;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E; cd4 &#x967D;&#x6027; T &#x7D30;&#x80DE;&#x6E1B;&#x5C11;&#x7387;&#x3068;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8; VL &#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066; HIV-1 &#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5BB9;&#x91CF;&#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x3066;&#x4F55;&#x304C;&#x671F;&#x5F85;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x75C5;&#x56E0;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x5BB9;&#x91CF;&#x3068;&#x65E9;&#x671F;&#x306E; HIV-1 &#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x900F;&#x904E;&#x30AE;&#x30E3;&#x30B0; CTL &#x306E;&#x591A;&#x578B;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#xC7A0;&#xBE44;&#xC544;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xB9AC; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD504;&#xB85C;&#xC81D;&#xD2B8; &#xCF54; &#xD638;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; 88 &#xC804;&#xC1A1; &#xC30D;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xB294; &#xC804;&#xC1A1; &#xB41C; HLA-B &#xC218; &#xAC1C; &#xADF8;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; Nef polymorphisms &#xAD00;&#xB828;, &#xC0C8;&#xB85C; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xAD00; &#xC124;&#xC815;&#xC810; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBD80;&#xD558; (VL) &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC1C; &#xADF8;&#xC5D0; CTL &#xD0C8;&#xCD9C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xCD95;&#xC801; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xACE0; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC784;&#xC0C1; &#xD61C;&#xD0DD;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC1C; &#xADF8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xAE30;&#xBCF8; &#xACA9;&#xB9AC;, &#xD558;&#xC704; C proviral &#xBCA1;&#xD130;, mj4&#xB85C; 149 epidemiologically &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xC7A0;&#xBE44;&#xC544; &#xC804;&#xC1A1; &#xC30D;&#xC758; &#xC2EC;&#xD558;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD08;&#xAE30; &#xD608; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB41C; &#xBCF5;&#xC81C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; GXR25 &#xC140; &#xB77C;&#xC778; &#xAC10;&#xC5FC; &#xBC0F; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xB41C; &#xC5ED;&#xC804;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD1B5;&#xD574; supernatants&#xC5D0;&#xC11C; virion &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xC77C;&#xCC28; &#xC6A9;&#xB7C9; (RC)&#xC774; &#xAC1C; &#xADF8;-MJ4 &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C;&#xC758; &#xACB0;&#xC815;. &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xAC1C; &#xADF8; &#xD558; &#xACE0; &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8; VL &#xC0C8;&#xB85C; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xAC1C;&#xC778; &#xC124;&#xC815; RC&#xB294; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218; &#xC5EC; &#xC0AC;&#xC774; &#xD1B5;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xAD00;&#xAD00;&#xACC4;&#xAC00; &#xAD00;&#xCC30; (p = 0.02). &#xB610;&#xD55C;, RC&#xC758; &#xAC1C; &#xADF8;-MJ4 &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC608;&#xC0C1;&#xB41C; &#xB0A0;&#xC9DC; &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0; &#xB9CC;&#xC131; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xC758; VL&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; (p = 0.01), &#xAE09;&#xC131; &#xBC0F; &#xB9CC;&#xC131; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; VL&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C;&#xAC00; &#xC2DC;&#xC5F0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654; RC, &#xD76C;&#xADC0; &#xBCC0;&#xC774; &#xD53C;&#xD2B8; &#xB2C8;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD070; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558;&#xB294; &#xC5B4;&#xB514;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAC1C; &#xADF8; &#xC18C;&#xC124; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xD574;&#xBA85;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xBE44;&#xB85D; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC720;&#xC775; &#xD558; &#xACE0; &#xD574;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB4DC;&#xBB38; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAD00;&#xCC30;, &#xD6C4;&#xC790;&#xB97C; &#xAC00;&#xB9AC;&#xD0AC; &#xC218; HIV 1 &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xCDE8;&#xC57D; &#xB300;&#xC0C1;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xD06C;&#xAC8C; &#xC0C1;&#xAD00; RC (p = 0.029) VL&#xC758; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCCAB; 3 &#xB144; &#xB3D9;&#xC548; CD4 + T &#xC138;&#xD3EC; &#xAC10;&#xC18C; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC640; &#xC138;&#xD2B8; &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8; VL &#xD63C;&#xC790;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB3D9;&#xC548; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xAE30;&#xB300;&#xD55C; &#xC218; &#xB118;&#xC5B4; pathogenesis&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xC790;.

&#xC804;&#xC1A1; &#xB41C; &#xAC1C; &#xADF8; CTL Polymorphisms &#xC77C;&#xCC28; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xACFC; &#xCD08;&#xAE30; HIV 1 Pathogenesis &#xC815;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;.

Estudios iniciales de 88 pares de transmisi&oacute;n en la cohorte del proyecto de investigaci&oacute;n de VIH de Emory de Zambia demostraron que el n&uacute;mero de transmisi&oacute;n HLA-B asociado a polimorfismos en Gag, pero no de Nef, se correlacion&oacute; negativamente al punto de ajuste de carga viral (VL) en los socios reci&eacute;n infectados. Estos resultados sugirieron que la acumulaci&oacute;n de mutaciones de escape CTL en Gag podr&iacute;a atenuar la replicaci&oacute;n viral y proporcionar un beneficio cl&iacute;nico durante las etapas tempranas de la infecci&oacute;n. Utilizando un enfoque novedoso, hemos reproducido mordaza secuencias aisladas de la muestra de plasma de seroconversi&oacute;n m&aacute;s temprana del destinatario agudo infectado de 149 pares de transmisi&oacute;n epidemiol&oacute;gicamente ligado de Zambia en un aislante, subtipo C proviral vector primario, MJ4. Determinamos la capacidad replicativa (RC) de estas quimeras Gag-MJ4 por infectar la l&iacute;nea celular de GXR25 y cuantificaci&oacute;n de la producci&oacute;n del viri&oacute;n en sobrenadantes mediante un ensayo de radiactivos de la transcriptasa reversa. Se observ&oacute; una correlaci&oacute;n positiva estad&iacute;sticamente significativa entre RC conferida la transmisi&oacute;n Gag secuencia y punto VL en personas recientemente infectadas (p = 0.02). Adem&aacute;s, las quimeras de RC de Gag-MJ4 tambi&eacute;n se correlacionan con el VL de donantes infectados cr&oacute;nicamente cerca de la fecha estimada de la infecci&oacute;n (p = 0.01), demostrando que la replicaci&oacute;n virus contribuye a VL en infecci&oacute;n aguda y cr&oacute;nica. Estos estudios tambi&eacute;n permitidos para la aclaraci&oacute;n de nuevos sitios en Gag asociados con cambios en RC, donde mutaciones raras tuvieron mayor efecto en el gimnasio. Aunque observamos tanto ventajosas y delet&eacute;reas mutaciones raras, este &uacute;ltimo podr&iacute;a apuntar a objetivos vulnerables en el genoma del VIH-1. Importantemente, RC correlacionada significativa (p = 0,029) con la tasa de disminuci&oacute;n de c&eacute;lulas CD4 + T durante los 3 primeros a&ntilde;os de la infecci&oacute;n de una manera que es parcialmente independiente de VL, sugiriendo que la capacidad de replicaci&oacute;n del VIH-1 durante las primeras etapas de la infecci&oacute;n es un factor determinante de la patogenesia m&aacute;s all&aacute; de lo que podr&iacute;a esperarse basado en set-point VL solo.

Papel de los polimorfismos CTL Gag transmitida en la definici&oacute;n de capacidad replicativa y patog&eacute;nesis temprana de VIH-1.

Heterosexual transmission of HIV-1 typically results in one genetic variant establishing systemic infection. We compared, for 137 linked transmission pairs, the amino acid sequences encoded by non-envelope genes of viruses in both partners and demonstrate a selection bias for transmission of residues that are predicted to confer increased in vivo fitness on viruses in the newly infected, immunologically naïve recipient. Although tempered by transmission risk factors, such as donor viral load, genital inflammation, and recipient gender, this selection bias provides an overall transmission advantage for viral quasispecies that are dominated by viruses with high in vivo fitness. Thus, preventative or therapeutic approaches that even marginally reduce viral fitness may lower the overall transmission rates and offer long-term benefits even upon successful transmission.

Article	Year
Mutagenesis of tyrosine and di-leucine motifs in the HIV-1 envelope cytoplasmic domain results in a loss of Env-mediated fusion and infectivity. Retrovirology\| PubMed ID: 21569545	2011
Impact of HLA-B*81-associated mutations in HIV-1 Gag on viral replication capacity. Journal of virology\| PubMed ID: 22238317	2012
Role of Transmitted Gag CTL Polymorphisms in Defining Replicative Capacity and Early HIV-1 Pathogenesis. PLoS pathogens\| PubMed ID: 23209412	2012
HIV transmission. Selection bias at the heterosexual HIV-1 transmission bottleneck. Science (New York, N.Y.)\| PubMed ID: 25013080	2014

Daniel T. Claiborne

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