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Workflow for High-content, Individual Cell Quantification of Fluorescent Markers from Universal Microscope Data, Supported by Open Source Software

Advances in understanding the control mechanisms governing the behavior of cells in adherent mammalian tissue culture models are becoming increasingly ...

UCL Cancer Institute

Human cancers often contain genetic alterations that disable G1/S checkpoint control and loss of this checkpoint is thought to critically contribute to cancer generation by permitting inappropriate proliferation and distorting fate-driven cell cycle exit. The identification of cell permeable small molecules that activate the G1/S checkpoint may therefore represent a broadly applicable and clinically effective strategy for the treatment of cancer. Here we describe the identification of several novel small molecules that trigger G1/S checkpoint activation and characterise the mechanism of action for one, CCT020312, in detail. Transcriptional profiling by cDNA microarray combined with reverse genetics revealed phosphorylation of the eukaryotic initiation factor 2-alpha (EIF2A) through the eukaryotic translation initiation factor 2-alpha kinase 3 (EIF2AK3/PERK) as the mechanism of action of this compound. While EIF2AK3/PERK activation classically follows endoplasmic reticulum (ER) stress signalling that sets off a range of different cellular responses, CCT020312 does not trigger these other cellular responses but instead selectively elicits EIF2AK3/PERK signalling. Phosphorylation of EIF2A by EIF2A kinases is a known means to block protein translation and hence restriction point transit in G1, but further supports apoptosis in specific contexts. Significantly, EIF2AK3/PERK signalling has previously been linked to the resistance of cancer cells to multiple anticancer chemotherapeutic agents, including drugs that target the ubiquitin/proteasome pathway and taxanes. Consistent with such findings CCT020312 sensitizes cancer cells with defective taxane-induced EIF2A phosphorylation to paclitaxel treatment. Our work therefore identifies CCT020312 as a novel small molecule chemical tool for the selective activation of EIF2A-mediated translation control with utility for proof-of-concept applications in EIF2A-centered therapeutic approaches, and as a chemical starting point for pathway selective agent development. We demonstrate that consistent with its mode of action CCT020312 is capable of delivering potent, and EIF2AK3 selective, proliferation control and can act as a sensitizer to chemotherapy-associated stresses as elicited by taxanes.

Mechanism-based screen for G1/S checkpoint activators identifies a selective activator of EIF2AK3/PERK signalling.

DNA &#x635F;&#x4F24;&#x5C06;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x68C0;&#x67E5;&#x70B9;&#x63A7;&#x5236;&#xFF0C;&#x963B;&#x6B62;&#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x8FC7;&#x53F8;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;&#x51E0;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x70B9;&#x5B58;&#x5728;&#x63A7;&#x5236;&#x8FC7;&#x5883;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x627F;&#x8BA4;&#x662F;&#x4E3A;&#x68C0;&#x67E5;&#x70B9;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x9057;&#x4F20;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x6297;&#x764C;&#x6CBB;&#x7597;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5316;&#x7597;&#x548C;&#x7535;&#x79BB;&#x8F90;&#x5C04;&#x7684;&#x62B5;&#x6297;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x6267;&#x884C;&#x4E0D;&#x540C;&#x635F;&#x4F24;&#x6838;&#x5FC3;&#x5206;&#x5B50;&#x529F;&#x80FD;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5DF2;&#x77E5;&#x68C0;&#x67E5;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x63A7;&#x5236;&#x68C0;&#x67E5;&#x70B9;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x88AB;&#x8FDC;&#x8FDC;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F97;&#x5230;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E;&#x8DE8;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x5C4F;&#x5E55;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x8F90;&#x5C04;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7624;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;G(1) &#x68C0;&#x67E5;&#x7AD9;&#x63A7;&#x5236;&#x516C;&#x8BA4;&#x7684;&#x9057;&#x5631;&#x6267;&#x884C;&#x4EBA;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86; p53 &#x80BF;&#x7624;&#x6291;&#x5236; (TP53) &#x548C;&#x5176;&#x4E0B;&#x6E38;&#x7684;&#x76EE;&#x6807; p21(CIP1/WAF1) &#x7684;&#x53C2;&#x4E0E;&#xFF0C;&#x4F46;&#x63A8;&#x65AD;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x53C2;&#x4E0E;&#x89C4;&#x8303;&#x53CC;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x4E2D;&#x65AD; (DSB) &#x627F;&#x8BA4;&#x5176;&#x5728;&#x6FC0;&#x6D3B; TP53 &#x53D7;&#x635F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x800C;&#x95FB;&#x540D;&#x3002;&#x800C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x9884;&#x6D4B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6D89;&#x53CA;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684; TP53 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6FC0;&#x9176; PRPK/TP53RK &#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176; STK4/MST1 JNK/p38MAPK&#xFF0C;&#x4E24;&#x8005;&#x8FC4;&#x4ECA;&#x56E0;&#x5BF9; DNA &#x635F;&#x4F24; G1 &#x68C0;&#x67E5;&#x70B9;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F5C;&#x51FA;&#x7684;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x9884;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x5373; p21(CIP1/WAF1) &#x611F;&#x5E94;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E76;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x5F15;&#x8D77;&#x68C0;&#x67E5;&#x70B9;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x7F51;&#x7EDC;&#x62D3;&#x6251;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8BB0;&#x5F55;&#x4E2D;&#x63D0;&#x51FA;&#x5176;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#x589E;&#x52A0;&#x8F90;&#x5C04;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8F90;&#x5C04;&#x9632;&#x62A4;&#x6807;&#x8BC6;&#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x673A;&#x5236;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5C4F;&#x5E55;&#x786E;&#x7ACB;&#x4E86; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x76F8;&#x5173; G1 &#x68C0;&#x67E5;&#x70B9;&#x54CD;&#x5E94;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6846;&#x67B6;&#x3002;

DNA damage activates checkpoint controls which block progression of cells through the division cycle. Several different checkpoints exist that control transit at different positions in the cell cycle. A role for checkpoint activation in providing resistance of cells to genotoxic anticancer therapy, including chemotherapy and ionizing radiation, is widely recognized. Although the core molecular functions that execute different damage activated checkpoints are known, the signals that control checkpoint activation are far from understood. We used a kinome-spanning RNA interference screen to delineate signalling required for radiation-mediated retinoblastoma protein activation, the recognized executor of G(1) checkpoint control. Our results corroborate the involvement of the p53 tumour suppressor (TP53) and its downstream targets p21(CIP1/WAF1) but infer lack of involvement of canonical double strand break (DSB) recognition known for its role in activating TP53 in damaged cells. Instead our results predict signalling involving the known TP53 phosphorylating kinase PRPK/TP53RK and the JNK/p38MAPK activating kinase STK4/MST1, both hitherto unrecognised for their contribution to DNA damage G1 checkpoint signalling. Our results further predict a network topology whereby induction of p21(CIP1/WAF1) is required but not sufficient to elicit checkpoint activation. Our experiments document a role of the kinases identified in radiation protection proposing their pharmacological inhibition as a potential strategy to increase radiation sensitivity in proliferating cancer cells.

Mechanism-based screen establishes signalling framework for DNA damage-associated G1 checkpoint response.

Dommages &agrave; l&#39;ADN active des contr&ocirc;les de point de contr&ocirc;le qui bloquent la progression des cellules &agrave; travers le cycle de division. Plusieurs points de contr&ocirc;le diff&eacute;rents existent que contr&ocirc;le le transit &agrave; des endroits diff&eacute;rents du cycle cellulaire. Un r&ocirc;le pour l&#39;activation du point de contr&ocirc;le en fournissant la r&eacute;sistance des cellules &agrave; la th&eacute;rapie anticanc&eacute;reuse g&eacute;notoxique, y compris la chimioth&eacute;rapie et les radiations ionisantes, est largement reconnu. Bien que les fonctions de base mol&eacute;culaire qui ex&eacute;cutent diff&eacute;rents dommages activ&eacute;e points de contr&ocirc;le sont connus, les signaux contr&ocirc;lant l&#39;activation du point de contr&ocirc;le sont loin de comprendre. Nous avons utilis&eacute; un &eacute;cran d&#39;interf&eacute;rence RNA kinome couvrant pour d&eacute;limiter la signalisation requise pour l&#39;activation de la prot&eacute;ine r&eacute;tinoblastome induite par le rayonnement, l&#39;ex&eacute;cuteur reconnue de g (1) point de contr&ocirc;le. Nos r&eacute;sultats confirment l&#39;implication de la suppresseur de tumeur p53 (TP53) et ses objectifs en aval de p21(CIP1/WAF1), mais manque d&#39;implication de la reconnaissance canonique double brin pause (DSB) connue pour son r&ocirc;le dans l&#39;activation de TP53 dans les cellules endommag&eacute;es en d&eacute;duire. Au lieu de cela nos r&eacute;sultats pr&eacute;disent de signalisation impliquant la kinase phosphorylant connue de TP53 PRPK/TP53RK et le p38MAPK/JNK activant la kinase STK4/MST1, tous deux jusqu&#39;ici non reconnus pour leur contribution &agrave; l&#39;ADN dommages G1 signalisation de point de contr&ocirc;le. De plus, nos r&eacute;sultats pr&eacute;disent une topologie de r&eacute;seau par lequel l&#39;induction de p21(CIP1/WAF1) est n&eacute;cessaire mais pas suffisante pour obtenir l&#39;activation du point de contr&ocirc;le. Nos exp&eacute;riences document un r&ocirc;le des kinases identifi&eacute;es en radioprotection proposant leur inhibition pharmacologique comme une strat&eacute;gie possible pour augmenter la sensibilit&eacute; de rayonnement dans la prolif&eacute;ration des cellules canc&eacute;reuses.

M&eacute;canisme d&#39;&eacute;cran &eacute;tablit signalisation cadre de r&eacute;ponse d&#39;ADN associ&eacute;es aux dommages d&#39;un point de contr&ocirc;le G1.

DNA-Sch&auml;den wird die Pr&uuml;fpunkt-Steuerelemente, die Weiterentwicklung der Zellen durch die Abteilung Zyklus blocken aktiviert. Mehreren verschiedene Kontrollpunkten bestehen dieses Steuerelement-Transit an verschiedenen Positionen in den Zellzyklus. Eine Rolle f&uuml;r die Pr&uuml;fpunkt-Aktivierung bei der Bereitstellung von Resistenz der Zellen zu genotoxischen Anti-Krebs-Therapie, einschlie&szlig;lich Chemotherapie und ionisierende Strahlung, ist weithin anerkannt. Obwohl die molekulare Kernfunktionen, die anderen Schaden ausf&uuml;hren aktiviert Pr&uuml;fpunkte sind bekannt, die Signale, die Pr&uuml;fpunkt-Aktivierung Steuern sind weit von verstanden. Wir haben einen Kinome-spanning RNA-Interferenz-Bildschirm abzugrenzen, Signalisierung f&uuml;r Strahlung-vermittelte Retinoblastom-Protein-Aktivierung, der anerkannten Executor G(1) Pr&uuml;fpunkt-Steuerelements erforderlich. Unsere Ergebnisse best&auml;tigen die p53 Tumor-Suppressor (TP53) und seine nachgeordneten Ziele p21(CIP1/WAF1) aber mangelnde Einbeziehung der kanonischen Doppelstrang Pause (DSB) Anerkennung bekannt f&uuml;r seine Rolle bei der Aktivierung TP53 in besch&auml;digten Zellen ableiten. Stattdessen unsere Ergebnisse vorherzusagen signalisieren, an denen das bekannte TP53 phosphorylating Kinase PRPK/TP53RK und der JNK/p38MAPK aktivieren Kinase STK4/MST1, beide bisher erfasste f&uuml;r ihren Beitrag zur DNA Sch&auml;den G1 Kontrollpunkt-Signalisierung. Unsere Ergebnisse weiter Vorhersagen eine Netzwerktopologie, wobei Induktion von p21(CIP1/WAF1) erforderlich, aber nicht ausreichend zu Pr&uuml;fpunkt Aktivierung zu entlocken ist. Unsere Experimente dokumentieren eine Rolle von der Kinasen identifiziert im Strahlenschutz schl&auml;gt ihre pharmakologische Hemmung als m&ouml;gliche Strategie um Strahlung Empfindlichkeit im wuchernden Krebszellen zu erh&ouml;hen.

Wirkmechanismen Bildschirm wird Signalgebung Rahmen f&uuml;r DNA Sch&auml;den-assoziierte G1 Kontrollpunkt Antwort.

Il danno al DNA attiva controlli checkpoint che bloccano la progressione delle cellule attraverso il ciclo di divisione. Parecchi diversi checkpoint esiste tale transito di controllo a diverse posizioni nel ciclo cellulare. Un ruolo per l&#39;attivazione del checkpoint nel fornire la resistenza delle cellule alla terapia antitumorale genotossico, tra cui la chemioterapia e radiazioni ionizzanti, &egrave; ampiamente riconosciuto. Anche se le funzioni di nucleo molecolare che eseguire diversi danni attivati i checkpoint sono noti, i segnali che controllano l&#39;attivazione del punto di arresto sono lontano da capito. Abbiamo utilizzato uno schermo di interferenza del RNA kinome-spanning per delineare segnalazione necessaria per l&#39;attivazione della proteina retinoblastoma mediata da radiazioni, riconosciuto esecutore del controllo checkpoint g (1). I nostri risultati confermano il coinvolgimento del soppressore tumorale p53 (TP53) e la sua p21(CIP1/WAF1) di bersagli a valle ma dedurre mancanza di coinvolgimento del riconoscimento di rottura (DSB) canonico doppio filamento noto per il suo ruolo nell&#39;attivazione di TP53 nelle cellule danneggiate. Invece i nostri risultati prevedono la segnalazione che coinvolge il nota TP53 chinasi phosphorylating PRPK/TP53RK e JNK/p38MAPK attivazione della chinasi STK4/MST1, entrambi finora non riconosciuti per il loro contributo alla segnalazione di DNA danni G1 checkpoint. I nostri risultati ulteriormente prevedono una topologia di rete, per cui l&#39;induzione di p21(CIP1/WAF1) &egrave; necessaria ma non sufficiente a suscitare l&#39;attivazione del punto di arresto. Nostri esperimenti documentano un ruolo della chinasi identificato in radioprotezione proponendo loro inibizione farmacologica come una potenziale strategia per aumentare la sensibilit&agrave; di radiazioni nelle cellule tumorali proliferanti.

Meccanismo basato su schermo stabilisce segnalazione quadro per risposta di DNA danni associati al checkpoint G1.

DNA &#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x308B;&#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8; &#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x305D;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C3;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x5185;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x907A;&#x4F1D;&#x6BD2;&#x6027;&#x6297;&#x304C;&#x3093;&#x5264;&#x7642;&#x6CD5;&#x3001;&#x5316;&#x5B66;&#x7642;&#x6CD5;&#x3084;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA;&#x306A;&#x3069;&#x3078;&#x306E;&#x8010;&#x6027;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3001;&#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x5E83;&#x304F;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5225;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x30B3;&#x30A2;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5316;&#x304C;&#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5236;&#x5FA1;&#x4FE1;&#x53F7;&#x304C;&#x9060;&#x304F;&#x304B;&#x3089;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;G(1) &#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8; &#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30A8;&#x30B0;&#x30BC;&#x30AD;&#x30E5;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x7DB2;&#x819C;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x816B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x63CF;&#x304F;&#x306E;&#x306B;&#x6728;&#x306E;&#x82BD;&#x30B9;&#x30D1;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E; RNA &#x5E72;&#x6E09;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F; &#xFF08;TP53 p53 &#x816B;&#x760D;&#x6291;&#x5236;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x6A19;&#x7684; p21(CIP1/WAF1) &#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3092;&#x78BA;&#x8A3C;&#x304C; TP53 &#x640D;&#x50B7;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6B63;&#x898F;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD; &#xFF08;DSB&#xFF09; &#x8A8D;&#x8B58;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x3092;&#x63A8;&#x6E2C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E; TP53 phosphorylating &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; PRPK/TP53RK &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x3001;STK4/MST1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;JNK/p38MAPK &#x4E21;&#x65B9;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067; DNA &#x640D;&#x50B7; G1 &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x3055;&#x3089;&#x306B; whereby &#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x51FA;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044; p21(CIP1/WAF1) &#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF; &#x30C8;&#x30DD;&#x30ED;&#x30B8;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306F;&#x3001;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6226;&#x7565;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x3066;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA;&#x9632;&#x8B77;&#x3067;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6587;&#x66F8;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x753B;&#x9762;&#x306E; DNA &#x640D;&#x50B7;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F; G1 &#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC9C4;&#xD589;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E4;&#xB978; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810; &#xD574;&#xB2F9; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xAD50;&#xD1B5; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xCC28;&#xC801;&#xC778; &#xD56D; &#xC554; &#xCE58;&#xB8CC;, &#xD654;&#xD559; &#xC694;&#xBC95; &#xBC0F; &#xC804;&#xB9AC; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC140;&#xC758; &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xB113;&#xAC8C; &#xC778;&#xC2DD; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xD53C;&#xD574;&#xB97C; &#xC2E4;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xD575;&#xC2EC; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xBA40;&#xB9AC; &#xC774;&#xD574;. &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; &#xC911;&#xC7AC; retinoblastoma &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, G(1) &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC758; &#xC778;&#xC2DD; &#xB41C; &#xC2E4;&#xD589;&#xC790;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; &#xC724;&#xACFD;&#xC744; &#xADF8;&#xB9AC; &#xB2E4; kinome&#xC5D0; &#xAC78;&#xCE5C; RNA &#xAC04;&#xC12D; &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; p53 &#xC885;&#xC591; &#xC5B5;&#xC81C; (TP53) &#xBC0F; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xB300;&#xC0C1; p21(CIP1/WAF1) &#xADF8;&#xC758; &#xAD00;&#xB828;&#xC744; &#xD655;&#xC99D; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; TP53 &#xC190;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xC815;&#xC2DD; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xBE0C;&#xB808;&#xC774;&#xD06C; (DSB) &#xC778;&#xC2DD;&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC744; &#xC720;&#xCD94; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC2E0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC608;&#xCE21; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; TP53 phosphorylating &#xD0A4; PRPK/tp53rk&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xBC0F; JNK/p38MAPK &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD0A4; STK4/MST1, &#xB458; &#xB2E4; &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; DNA &#xC190;&#xC0C1; G1 &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xAE30;&#xC5EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; unrecognised. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB354;&#xAC00; &#xBA74; p21(cip1/waf1)&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xD1A0;&#xD3F4;&#xB85C;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC608;&#xCE21;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8; kinases &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; &#xBCF4;&#xD638; &#xBC29;&#xC9C0;&#xD560; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; &#xBBFC;&#xAC10;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xB7B5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC57D;&#xB9AC; &#xC800;&#xD574; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBB38;&#xC11C;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB454; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0; DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xAD00;&#xB828; G1 &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810; &#xC751;&#xB2F5; &#xC2E0;&#xD638; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xC124;&#xC815;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Da&ntilde;os en el ADN activa controles de punto de control que bloquean la progresi&oacute;n de las c&eacute;lulas a trav&eacute;s del ciclo de divisi&oacute;n. Varios puestos de control diferentes existen eso control de tr&aacute;nsito en diferentes posiciones en el ciclo celular. Un papel para la activaci&oacute;n del puesto de control en el suministro de resistencia de las c&eacute;lulas a genot&oacute;xicos terapia contra el c&aacute;ncer, incluyendo quimioterapia y radiaciones ionizantes, es ampliamente reconocido. Aunque las funciones de base molecular que ejecutan diferentes da&ntilde;os activan puestos de control son conocidos, lejos de se entienden las se&ntilde;ales que controlan la activaci&oacute;n de checkpoint. Utilizamos una pantalla de interferencia de RNA que abarca kinome para delinear la se&ntilde;alizaci&oacute;n necesaria para la activaci&oacute;n de la prote&iacute;na de retinoblastoma mediada por radiaci&oacute;n, el ejecutor reconocida de control control de g (1). Nuestros resultados corroboran la participaci&oacute;n del supresor de tumor p53 (p53) y sus p21(CIP1/WAF1) aguas abajo objetivos pero infieren la falta de participaci&oacute;n de reconocimiento de rotura (OSD) de filamento doble can&oacute;nica conocida por su papel en la activaci&oacute;n de p53 en c&eacute;lulas da&ntilde;adas. En cambio nuestros resultados pronostican se&ntilde;alizaci&oacute;n que involucra la quinasa phosphorylating conocida de TP53 PRPK/TP53RK y no la JNK/p38MAPK activaci&oacute;n de la cinasa STK4/MST1, ambos hasta ahora reconocido por su contribuci&oacute;n a la se&ntilde;alizaci&oacute;n de control de da&ntilde;os G1 ADN. Nuestros resultados m&aacute;s predicen una topolog&iacute;a de red por el que la inducci&oacute;n de p21(CIP1/WAF1) es necesaria pero no suficiente para provocar la activaci&oacute;n del punto de control. Nuestros experimentos documentan un papel de las quinasas identificados en protecci&oacute;n radiol&oacute;gica, proponiendo su inhibici&oacute;n farmacol&oacute;gica como una estrategia potencial para aumentar la sensibilidad de la radiaci&oacute;n en la proliferaci&oacute;n de las c&eacute;lulas cancerosas.

Article	Year
Mechanism-based screen for G1/S checkpoint activators identifies a selective activator of EIF2AK3/PERK signalling. PloS one\| PubMed ID: 22253692	2012
Mechanism-based screen establishes signalling framework for DNA damage-associated G1 checkpoint response. PloS one\| PubMed ID: 22384045	2012

Simon R. Stockwell

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