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Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit

Plasmid DNA purification from E. coli is a core technique for molecular cloning. Small scale purification (miniprep) from less than 5 ml of bacterial ...

University of California, Irvine (UCI)

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C.&#x7EBF;&#x866B;&#x5357;&#x5B9D;&#x57DF;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; UNC 86 &#x89C4;&#x5B9A;&#x4E86;&#x5177;&#x4F53; serotonergic &#x795E;&#x7ECF;&#x5143; tph 1 &#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7F9F;&#x5316;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x8F74;&#x7A81;&#x4EA7;&#x7269;&#x3002;

A fundamental question in developmental neurobiology is how a common neurotransmitter is specified in different neuronal types?. We describe cell-specific regulation of the serotonergic phenotype by the C. elegans POU-transcription factor UNC-86. We show that unc-86 regulates particular aspects of the terminal neuronal identity in four classes of serotonergic neurons, but that the development of the ADF serotonergic neurons is regulated by an UNC-86-independent program. In the NSM neurons, the role of unc-86 is confined in late differentiation; the neurons are generated but do not express genes necessary for serotonergic neurotransmission. unc-86-null mutations affect the expression in NSM of tph-1, which encodes the serotonin synthetic enzyme tryptophan hydroxylase, and cat-1, which encodes a vesicular transporter that loads serotonin into synaptic vesicles, suggesting that unc-86 coordinately regulates serotonin synthesis and packaging. However, unc-86-null mutations do not impair the ability of NSM to reuptake serotonin released from the ADF serotonergic chemosensory neurons and this serotonin reuptake is sensitive to the serotonin reuptake block drugs imipramine and fluoxetine, demonstrating that serotonin synthesis and reuptake is regulated by distinct factors. The NSM neurons in unc-86-null mutants also display abnormal neurite outgrowth, suggesting a role of unc-86 in regulating this process as well.

The C. elegans POU-domain transcription factor UNC-86 regulates the tph-1 tryptophan hydroxylase gene and neurite outgrowth in specific serotonergic neurons.

Une question fondamentale en neurobiologie du d&eacute;veloppement, c&#39;est comment un neurotransmetteur commun sp&eacute;cifi&eacute; dans diff&eacute;rents types de neurones?. Nous d&eacute;crivons la r&eacute;glementation sp&eacute;cifique des cellules du ph&eacute;notype s&eacute;rotoninergique par le c. elegans, facteur de transcription POU UNC-86. Nous montrons qu&#39;unc-86 r&eacute;glemente les aspects particuliers de l&#39;identit&eacute; neuronale terminale dans quatre classes de neurones s&eacute;rotoninergiques, mais que le d&eacute;veloppement des neurones s&eacute;rotoninergiques ADF est r&eacute;gi par un programme ind&eacute;pendant de la UNC-86. Dans les neurones NSM, le r&ocirc;le de l&#39;unc-86 est confin&eacute; dans la diff&eacute;renciation tardive ; les neurones sont g&eacute;n&eacute;r&eacute;s mais n&#39;expriment pas les g&egrave;nes n&eacute;cessaires &agrave; la neurotransmission s&eacute;rotoninergique. UNC-86-null mutations affectent l&#39;expression NSM de tph-1, qui encode la s&eacute;rotonine synth&eacute;tique enzyme tryptophane hydroxylase, et chat-1, qui code pour un transporteur v&eacute;siculaire qui charge la s&eacute;rotonine dans les v&eacute;sicules synaptiques, sugg&eacute;rant qu&#39;unc-86 coordonn&eacute;e r&eacute;gule la synth&egrave;se de la s&eacute;rotonine et de l&#39;emballage. Cependant, unc-86-null mutations ne nuisent pas &agrave; la capacit&eacute; des NSM de la recapture de la s&eacute;rotonine lib&eacute;r&eacute;e de neurones s&eacute;rotoninergiques chimiosensibles ADF et ce recapture de la s&eacute;rotonine est sensible aux m&eacute;dicaments de bloc du recaptage de la s&eacute;rotonine l&#39;imipramine et fluoxetine, d&eacute;montrant que la synth&egrave;se de la s&eacute;rotonine et la recapture est r&eacute;glement&eacute;e par des facteurs distincts. Les neurones NSM mutants unc-86-null affichent &eacute;galement des neurites anormale, ce qui sugg&egrave;re un r&ocirc;le de l&#39;unc-86 dans la r&eacute;gulation de ce processus ainsi.

Le c. elegans, facteur de transcription POU-domaine UNC-86 r&eacute;glemente le tph-1 tryptophane hydroxylase gene et des neurites excroissance dans les neurones s&eacute;rotoninergiques sp&eacute;cifiques.

Der C. elegans POE-Domain Transkriptionsfaktor UNC-86 reguliert die TPH-1 Gen Tryptophan-Hydroxylase und Neuritenwachstum in bestimmten serotonergen Neuronen.

Una questione fondamentale in neurobiologia dello sviluppo &egrave; come un comune neurotrasmettitore &egrave; specificato in diversi tipi neuronali?. Descriviamo la cellula-specifico regolamento del fenotipo serotoninergici dal c. elegans, fattore di trascrizione POU UNC-86. Mostriamo che unc-86 regola aspetti peculiari dell&#39;identit&agrave; neuronale terminale in quattro classi di neuroni serotoninergici, ma che lo sviluppo dei neuroni serotoninergici ADF &egrave; regolato da un programma di UNC-86-indipendenti. Nei neuroni NSM, il ruolo di unc-86 &egrave; confinato nella differenziazione tardiva; i neuroni sono generati ma non esprimono geni necessari per neurotrasmettitori serotoninergici. UNC-86-null mutazioni possono influenzare l&#39;espressione in NSM di tph-1, che codifica per la serotonina sintetica enzima triptofano idrossilasi, e cat-1, che codifica per un trasportatore vescicolare che carica la serotonina in vescicole sinaptiche, suggerendo che unc-86 coordinately regola la sintesi di serotonina e di confezionamento. Tuttavia, le mutazioni unc-86-null non compromettere la capacit&agrave; di NSM di reuptake della serotonina rilasciata da neuroni chemosensory serotoninergici ADF e della ricaptazione della serotonina &egrave; sensibile alla serotonina reuptake blocco farmaci imipramina e fluoxetina, dimostrando quella sintesi di serotonina e reuptake &egrave; regolato da fattori distinti. I neuroni NSM unc-86-null mutanti anche visualizzare escrescenza anormale dei neuriti, suggerendo un ruolo di unc-86 nel regolare questo processo pure.

Il c. elegans, fattore di trascrizione POU-dominio UNC-86 regola il tph-1 triptofano idrossilasi gene e dei neuriti escrescenza nei neuroni serotoninergici specifici.

&#x767A;&#x9054;&#x795E;&#x7D4C;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x6839;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x8CEA;&#x554F;&#x306F;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3067;&#x306E;&#x5171;&#x901A;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x6307;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x304B;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x7DDA;&#x866B; POU &#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50; UNC 86 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;ADF &#x306E;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;UNC-86-&#x72EC;&#x7ACB;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E; unc 86 &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB;&#x795E;&#x7D4C;&#x500B;&#x6027;&#x306E;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E; 4 &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5C40;&#x9762;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NSM &#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3; unc 86 &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x9045;&#x3044;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306F;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;unc-86-null &#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x6C34;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3001;tph-1 &#x3068;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x305D;&#x306E; unc 86 &#x30EA;&#x30BA;&#x30DF;&#x30AB;&#x30EB; &#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x5305;&#x88C5;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x732B;-1 NSM &#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;unc-86-null &#x5909;&#x7570; NSM &#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x304B;&#x3089; ADF &#x306E;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x518D;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x518D;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306F;&#x3001;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x518D;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x85AC;&#x30A4;&#x30DF;&#x30D7;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30D5;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30BB;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x518D;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x8981;&#x56E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NSM &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3; unc-86-null &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x3001;unc 86 &#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3082;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7DDA;&#x866B; POU &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50; UNC 86 tph 1 &#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x6C34;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x7279;&#x5B9A;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBC1C;&#xB2EC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC740; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC744; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC885;&#xB958;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744;?&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. C. elegans POU &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; UNC-86&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; serotonergic &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC758; &#xC140; &#xAD00;&#xB828; &#xADDC;&#xC815; &#xC124;&#xBA85;. &#xC6B0;&#xB9AC; unc-86 serotonergic &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; 4 &#xAC00;&#xC9C0; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC2E0;&#xACBD; id&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xCE21;&#xBA74;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8; ADF serotonergic &#xB274;&#xB7F0; &#xAC1C;&#xBC1C; UNC 86 &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. NSM &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; unc-86&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xD6C4;&#xBC18; &#xBD84;&#xD654;;&#xC5D0; &#xAD6D;&#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; serotonergic neurotransmission&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. unc 86 null &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC138;&#xB85C;&#xD1A0;&#xB2CC; &#xD569;&#xC131; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; hydroxylase &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD558;&#xB294; tph 1 &#xBC0F; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC;, unc-86 coordinately &#xC138;&#xB85C;&#xD1A0;&#xB2CC; &#xD569;&#xC131; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558; &#xACE0; &#xD3EC;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xC138;&#xB85C;&#xD1A0;&#xB2CC; &#xB85C;&#xB4DC; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xC804;&#xC1A1; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xACE0;&#xC591;&#xC774; 1 NSM&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DD;&#xC744; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; unc 86 null &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC7AC;&#xD761;&#xC218; &#xC138;&#xB85C;&#xD1A0;&#xB2CC; ADF serotonergic chemosensory &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xD45C; &#xD558;&#xB294; NSM&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC190;&#xC0C1; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC774; &#xC138;&#xB85C;&#xD1A0;&#xB2CC; &#xC7AC;&#xD761;&#xC218;&#xB294; &#xC138;&#xB85C;&#xD1A0;&#xB2CC; &#xC7AC;&#xD761;&#xC218; &#xCC28;&#xB2E8; &#xC57D;&#xBB3C; imipramine&#xC640; &#xBD80;&#xC815;&#xB9E5;, &#xADF8; &#xC138;&#xB85C;&#xD1A0;&#xB2CC; &#xD569;&#xC131; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xD761;&#xC218; &#xACE0;&#xC720; &#xC694;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Unc 86 null &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; NSM &#xB274;&#xB7F0; unc-86 &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C;&#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC;&#xD560; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

C. elegans POU &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; UNC-86 &#xD2B9;&#xC815; serotonergic &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; tph 1 &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; hydroxylase &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC744; &#xC870;&#xC808;.

Una pregunta fundamental en Neurobiolog&iacute;a del desarrollo es c&oacute;mo se especifica un neurotransmisor com&uacute;n en diferentes tipos neuronales?. Describimos la regulaci&oacute;n espec&iacute;fica de la c&eacute;lula del fenotipo serotonin&eacute;rgico por el factor de transcripci&oacute;n POU UNC-86 de C. elegans. Mostramos unc-86 regula determinados aspectos de la identidad terminal neuronal en cuatro clases de neuronas serotonin&eacute;rgicas, pero que el desarrollo de las neuronas serotonin&eacute;rgicas ADF est&aacute; regulado por un programa independiente de la UNC-86. En las neuronas NSM, se limita el papel de la unc-86 en diferenciaci&oacute;n final; las neuronas se generan pero no expresan genes necesarios para la neurotransmisi&oacute;n serotonin&eacute;rgico. UNC-86-null mutaciones afectan a la expresi&oacute;n en NSM de tph-1, que codifica la enzima sint&eacute;tica serotonina tript&oacute;fano hidroxilasa, y cat-1, que codifica un transportador vesicular que carga la serotonina en ves&iacute;culas sin&aacute;pticas, sugiriendo que UNC-86 coordinadamente regula la s&iacute;ntesis de la serotonina y empaquetado. Sin embargo, las mutaciones de la unc-86-null no afecten negativamente a la capacidad de NSM recaptaci&oacute;n serotonina liberada de las neuronas serotonin&eacute;rgicas quimiosensoriales de ADF este reuptake del serotonin es sensible a la recaptaci&oacute;n de serotonina bloque drogas imipramina y fluoxetina, demostrando esa s&iacute;ntesis de serotonina y recaptaci&oacute;n est&aacute; regulada por distintos factores. Las neuronas NSM en mutantes nulos unc-86 tambi&eacute;n Mostrar la excrecencia anormal neurita, sugiriendo un papel de unc-86 en la regulaci&oacute;n de este proceso as&iacute;.

El factor de transcripci&oacute;n POU-dominio UNC-86 de C. elegans regula la consecuencia tph-1 tript&oacute;fano hidroxilasa gen y neurita en neuronas serotonin&eacute;rgicas espec&iacute;ficas.

5-&#x7F9F;&#x8272;&#x80FA; (5HT) &#x662F;&#x8C03;&#x8282;&#x5230;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x548C;&#x7269;&#x7406;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x548C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x77AC;&#x65F6;&#x53D7;&#x4F53;&#x6F5C;&#x5728; V (TRPV) &#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7EBF;&#x866B;&#x4E2D;&#x62A5;&#x544A; 5HT &#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x7279;&#x5B9A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8; TRPV &#x57FA;&#x56E0; osm-9 &#x6216; ocr 2 &#x4E2D;&#x663E;&#x8457;&#x4E0B;&#x8C03; 5HT &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7F9F;&#x5316;&#x9176; (tph-1) serotonergic &#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; ADF&#xFF0C;&#x4F46;&#x90FD;&#x6CA1;&#x6709;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E5F;&#x53CC;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x901A;&#x9053;&#x5F71;&#x54CD;&#x5176;&#x4ED6;&#x79CD;&#x7C7B;&#x7684; serotonergic &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;TRPV &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE; ADF &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x5176;&#x5B83; serotonergic &#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;&#x800C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;-&#x81EA;&#x4E3B;&#x8C03;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x884C;&#x4E8B;&#x3002;&#x800C;&#x5728;&#x55C5;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; OSM 9 &#x548C; OCR-2 &#x529F;&#x80FD;&#x5219;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; ODR 3 Galpha&#xFF0C;ODR 3 &#x6216; ADF &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x5176;&#x4ED6; Galpha &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x690D; tph-1 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684; TRPV &#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D7;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;CaMKII UNC 43 &#x589E;&#x76CA;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x7A81;&#x53D8;&#x90E8;&#x5206;&#x53D6;&#x6D88;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684; tph 1 TRPV &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C; CaMKII &#x53EF;&#x80FD;&#x662F; TRPV &#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x6548;&#x5E94;&#x3002;&#x4E2D; TRPV &#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x751F;&#x7A81;&#x53D8;&#x53D1;&#x80B2;&#x8815;&#x866B; Dauer &#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x902E;&#x6355;&#x3002;&#x6B64;&#x53D1;&#x80B2;&#x7F3A;&#x9677;&#x662F; daf-2/&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x4FE1;&#x53F7;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684; 5HT &#x6295;&#x5165;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;

&#x79C0;&#x4E3D;&#x9690;&#x6746;&#x7EBF;&#x866B; TRPV &#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x8C03;&#x8282;&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; 5HT &#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x3002;

Serotonin (5HT) is a pivotal signaling molecule that modulates behavioral and endocrine responses to diverse chemical and physical stimuli. We report cell-specific regulation of 5HT biosynthesis by transient receptor potential V (TRPV) ion channels in C. elegans. Mutations in the TRPV genes osm-9 or ocr-2 dramatically downregulate the expression of the gene encoding the 5HT synthesis enzyme tryptophan hydroxylase (tph-1) in the serotonergic chemosensory neurons ADF, but neither the mutation nor the double mutation of both channel genes affects other types of serotonergic neurons. The TRPV genes are expressed in the ADF neurons but not in other serotonergic neurons, and act cell-autonomously to regulate a neuron-specific transcription program. Whereas in olfactory neurons OSM-9 and OCR-2 function is dependent on ODR-3 Galpha, the activity of ODR-3 or two other Galpha proteins expressed in the ADF neurons is not required for upregulating tph-1 expression, thus the TRPV ion channels in different neurons may be regulated by different mechanisms. A gain-of-function mutation in CaMKII UNC-43 partially suppresses the downregulation of tph-1 in the TRPV mutants, thus CaMKII may be an effector of the TRPV signaling. Mutations in the TRPV genes cause worms developmentally arrest at the Dauer stage. This developmental defect is due in part to reduced 5HT inputs into daf-2/insulin neuroendocrine signaling.

Caenorhabditis elegans TRPV ion channel regulates 5HT biosynthesis in chemosensory neurons.

La s&eacute;rotonine (5HT) est une mol&eacute;cule de signalisation pivotale qui module les r&eacute;ponses comportementales et endocriniens &agrave; divers stimuli chimiques et physiques. Nous rapportons la r&eacute;glementation sp&eacute;cifique des cellules de la biosynth&egrave;se de la 5HT par canaux d&#39;ion V (promenade) potentiel de r&eacute;cepteur transitoire chez c. elegans. Des mutations dans les g&egrave;nes de promenade osm-9 ou ocr-2 consid&eacute;rablement diminuer l&#39;expression du g&egrave;ne codant la 5HT synth&egrave;se enzyme tryptophane hydroxylase (tph-1) dans les neurones s&eacute;rotoninergiques et chimiosensibles ADF, mais ni la mutation ni la double mutation de deux g&egrave;nes de canaux affecte les autres types de neurones s&eacute;rotoninergiques. Les g&egrave;nes de promenade sont exprim&eacute;s dans les neurones de l&#39;ADF, mais pas dans les autres neurones s&eacute;rotoninergiques et agissent cellule autonome pour r&eacute;gler un programme de transcription de neurone-sp&eacute;cifique. Alors que dans les neurones olfactifs, OSM-9 et OCR-2 fonction d&eacute;pend de Galpha ODR-3, l&#39;activit&eacute; des ODR-3 ou deux autres prot&eacute;ines Galpha exprim&eacute;s dans les neurones de l&#39;ADF n&#39;est pas requise pour expression tph-1 r&eacute;gulation positive, donc les canaux ioniques promenade dans diff&eacute;rents neurones pourraient &ecirc;tre r&eacute;glement&eacute;s par des m&eacute;canismes diff&eacute;rents. Une mutation de gain de fonction de CaMKII UNC-43 supprime partiellement la diminution de l&#39;expression de tph-1 chez les mutants de la promenade, CaMKII peut donc &ecirc;tre un effecteur de la signalisation de la promenade. Mutations dans la cause de g&egrave;nes promenade vers leur d&eacute;veloppement arrestation au stade Dauer. Cette anomalie du d&eacute;veloppement est due en partie aux entr&eacute;es de 5HT r&eacute;duite en signalisation neuro-daf-2/insuline.

Canal ionique de Caenorhabditis elegans promenade r&eacute;glemente la biosynth&egrave;se de la 5HT dans les neurones chimiosensibles.

Caenorhabditis elegans TRPV Ionenkanal reguliert 5HT-Biosynthese in chemosensorischen Neuronen.

Serotonina (5HT) &egrave; una molecola di segnalazione cardine che modula le risposte comportamentali ed endocrine a diversi stimoli chimici e fisici. Riportiamo-specifico regolamento della 5HT biosintesi di potenziali canali ionici V (TRV1) transient receptor, in c. elegans. Mutazioni nei geni TRV1 osm-9 o ocr-2 drammaticamente sottoregola l&#39;espressione del gene che codifica la 5HT sintesi enzima triptofano idrossilasi (tph-1) nei neuroni serotoninergici chemosensory ADF, ma n&eacute; la mutazione n&eacute; la doppia mutazione di entrambi i geni canale influisce su altri tipi di neuroni serotoninergici. I geni TRV1 sono espressi nei neuroni ADF, ma non in altri neuroni serotoninergici e agiscono cella-autonomamente per regolare un programma specifico del neurone trascrizione. Considerando che nei neuroni olfattivi OSM-9 e OCR-2 la funzione &egrave; dipendente da ODR-3 Galpha, l&#39;attivit&agrave; di ODR-3 o due altre proteine Galpha espressi nei neuroni ADF non &egrave; richiesto per upregulating tph-1 espressione, cos&igrave; i canali ionici TRV1 nei neuroni differenti potrebbero essere regolamentati da meccanismi differenti. Una mutazione di guadagno di funzione CaMKII UNC-43 parzialmente sopprime la downregulation del tph-1 i mutanti TRV1, CaMKII pu&ograve; quindi essere un effector del segnale TRV1. Mutazioni nella causa di geni TRV1 Worm inerente allo sviluppo arresto nella fase Dauer. Questo difetto dello sviluppo &egrave; dovuto in parte al ridotto 5HT inputs nella segnalazione neuroendocrini daf-2/insulina.

Canale ionico Caenorhabditis elegans TRV1 regola la biosintesi di 5HT nei neuroni chemosensory.

&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3; &#xFF08;5HT&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x884C;&#x52D5;&#x3068;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x6975;&#x3081;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x5206;&#x5B50;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x904E;&#x6E21;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A; V (TRPV) &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x7DDA;&#x866B;&#x3067;&#x306E; 5HT &#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x7D30;&#x80DE;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5909;&#x7570; TRPV &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; osm-9 &#x307E;&#x305F;&#x306F; ocr 2 &#x3067;&#x5287;&#x7684;&#x306B;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3001;5HT &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x6C34;&#x9178;&#x5316; (tph-1) &#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x795E;&#x7D4C; ADF &#x304C;&#x3001;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3082;&#x4E21;&#x65B9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;TRPV &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F; ADF &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x4ED6;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;-&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x8EE2;&#x5199;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x81EA;&#x5F8B;&#x884C;&#x52D5;&#x3002;&#x55C5;&#x899A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E; OSM 9 &#x3068; OCR 2 &#x95A2;&#x6570; ODR 3 Galpha &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;ODR 3 &#x307E;&#x305F;&#x306F; ADF &#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x4ED6;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E; Galpha &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x304C;&#x9AA8;&#x6298; tph 1 &#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066; TRPV &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5229;&#x5F97;&#x95A2;&#x6570;&#x5909;&#x7570; CaMKII UNC 43 &#x3067;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B; tph-1 TRPV &#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066; CaMKII TRPV &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;TRPV &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x539F;&#x56E0;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x30EF;&#x30FC;&#x30E0;&#x767A;&#x9054;&#x671F;&#x9593;&#x76F4;&#x52D5;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x3067;&#x306E;&#x902E;&#x6355;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x306F;&#x3001;daf-2/&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306B;&#x4E00;&#x90E8;&#x524A;&#x6E1B; 5HT &#x5165;&#x529B;&#x3059;&#x308B;&#x4E88;&#x5B9A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x7DDA;&#x866B;&#x306E; elegans TRPV &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; 5HT &#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x5316;&#x5B66;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC138;&#xB85C;&#xD1A0;&#xB2CC; (5HT)&#xC740; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD654;&#xD559;&#xC801;, &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD589;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xB0B4; &#xBD84; &#xBE44; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xBCC0;&#xC870; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xCD94;&#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xD638; &#xBD84;&#xC790; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; V (TRPV) &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; C. elegans&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; 5HT &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xC140; &#xAD00;&#xB828; &#xADDC;&#xC815;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; TRPV &#xC720;&#xC804;&#xC790; osm-9 &#xB610;&#xB294; ocr 2&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; downregulate &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5EC; 5HT &#xD569;&#xC131; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; hydroxylase (tph-1) serotonergic chemosensory &#xC2E0;&#xACBD; ADF&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC2DD;&#xACFC; &#xB450; &#xCC44;&#xB110; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC601;&#xD5A5; serotonergic &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615;. TRPV &#xC720;&#xC804;&#xC790; serotonergic &#xB2E4;&#xB978; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; ADF &#xB274;&#xB7F0;&#xB9CC; &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; &#xC140; &#xC790;&#xC728;&#xC801; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAD00;&#xB828; &#xB179;&#xC74C; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558; &#xD589;&#xB3D9;. &#xD6C4; &#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; OSM 9 &#xBC0F; OCR 2 &#xD568;&#xC218; ODR-3 Galpha&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xBC18;&#xBA74;, &#xB2E4;&#xB978; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; TRPV &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xC218; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; ODR 3 &#xB610;&#xB294; ADF &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; &#xB2E4;&#xB978; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; Galpha &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; upregulating tph 1 &#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. CaMKII UNC-43&#xC5D0;&#xC11C; &#xD568;&#xC218; &#xC774;&#xB4DD; &#xBCC0;&#xC774; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; TRPV &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; tph-1 downregulation, CaMKII TRPV &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. TRPV &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC6D0;&#xC778;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC6DC; &#xBC1C;&#xB2EC; Dauer &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCCB4;&#xD3EC;. &#xC774; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xACB0;&#xD568; daf-2/&#xC778;&#xC290;&#xB9B0; neuroendocrine &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC10;&#xC18C; 5HT &#xC785;&#xB825; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC608;&#xC815; &#xC774;&#xB2E4;.

Caenorhabditis elegans TRPV &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; 5HT chemosensory &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xC870;&#xC808;.

Serotonina (5HT) es una mol&eacute;cula de se&ntilde;alizaci&oacute;n fundamental que modula las respuestas conductuales y endocrinas a diversos est&iacute;mulos f&iacute;sicos y qu&iacute;micos. Divulgamos la regulaci&oacute;n celular espec&iacute;fica de la bios&iacute;ntesis de 5HT por canales de iones V (detectan) potencial receptor transitoria en C. elegans. Las mutaciones en los genes de detectan osm-9 o ocr-2 dram&aacute;ticamente regular a la baja la expresi&oacute;n del gene que codificaba la 5HT s&iacute;ntesis enzima tript&oacute;fano hidroxilasa (tph-1) en las neuronas serotonin&eacute;rgicas quimiosensoriales ADF, pero ni la mutaci&oacute;n ni la doble mutaci&oacute;n de dos genes de canal afecta a otros tipos de neuronas serotonin&eacute;rgicas. Los genes detectan se expresan en las neuronas de la ADF pero no en otras neuronas serotonin&eacute;rgicas y act&uacute;an celular-aut&oacute;nomo para regular un programa enolase transcripci&oacute;n. Mientras que en las neuronas olfativas OSM-9 y OCR-2 funci&oacute;n dependiente de ODR-3 Galpha, la actividad de ODR-3 o dos otras prote&iacute;nas Galpha expresados en las neuronas de la ADF no es necesaria para regular tph-1 expresi&oacute;n, as&iacute; los canales de iones detectan en diferentes neuronas podr&aacute;n estar regulados por diversos mecanismos. Una mutaci&oacute;n de ganancia de funci&oacute;n en la UNC CaMKII-43 suprime parcialmente la regulaci&oacute;n a la baja de tph-1 en los mutantes detectan, as&iacute; CaMKII puede ser un generador de efectos de se&ntilde;alizaci&oacute;n detectan. Las mutaciones en la causa de genes detectan gusanos con detenci&oacute;n en la etapa de Dauer. Este defecto de desarrollo es debido en parte a la reducida 5HT entradas en se&ntilde;alizaci&oacute;n neuroendocrina de daf-2/insulina.

Canal i&oacute;nico de Caenorhabditis elegans detectan regula la bios&iacute;ntesis de 5HT en neuronas quimiosensoriales.

&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425; Ca2 + (SOC) &#x6E20;&#x9053;&#x7BA1;&#x7406;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5206;&#x5B50;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x4E0D;&#x597D;&#x754C;&#x5B9A;&#x3002;&#x5229;&#x7528; RNA &#x5E72;&#x6270; (RNAi)-&#x57FA;&#x4E8E;&#x5C4F;&#x5E55;&#x6539;&#x53D8; thapsigargin (TG) &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;-&#x4F9D;&#x8D56; Ca2 + &#x6761;&#x76EE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4F34;&#x5728; SOC &#x6D8C;&#x5165;&#x9700;&#x8981;&#x548C;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;RNAi &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684;&#x679C;&#x8747; S2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4F34;&#x5927;&#x5927;&#x964D;&#x4F4E; TG &#x4F9D;&#x8D56; Ca2 + &#x7684;&#x6761;&#x76EE;&#x3002;&#x819C;&#x7247;&#x94B3;&#x8BB0;&#x5F55;&#x663E;&#x793A;&#x51E0;&#x4E4E;&#x5B8C;&#x5168;&#x6291;&#x5236;&#x679C;&#x8747; Ca2 + &#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca2 + (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x5F53;&#x524D;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x5177;&#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269; STIM1 &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053; Jurkat T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;RNAi &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684; STIM1 &#x6291;&#x5236; TG &#x6216;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x4F9D;&#x8D56; Ca2 + &#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x6216; SH SY5Y &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x6761;&#x76EE;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; STIM1 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5C0F;&#x5E45;&#x589E;&#x5F3A; TG &#x8BF1;&#x5BFC; Ca2 + &#x8FDB;&#x5165;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; STIM1&#xFF0C;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5230;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE;&#x679C;&#x8747;&#x5B88;&#x6052; SOC &#x6D8C;&#x5165;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x5E38;&#x89C1;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684; SOC &#x548C;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;

STIM1&#xFF0C;&#x57FA;&#x672C;&#x548C;&#x5B88;&#x6052;&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;

Store-operated Ca2+ (SOC) channels regulate many cellular processes, but the underlying molecular components are not well defined. Using an RNA interference (RNAi)-based screen to identify genes that alter thapsigargin (TG)-dependent Ca2+ entry, we discovered a required and conserved role of Stim in SOC influx. RNAi-mediated knockdown of Stim in Drosophila S2 cells significantly reduced TG-dependent Ca2+ entry. Patch-clamp recording revealed nearly complete suppression of the Drosophila Ca2+ release-activated Ca2+ (CRAC) current that has biophysical characteristics similar to CRAC current in human T cells. Similarly, knockdown of the human homologue STIM1 significantly reduced CRAC channel activity in Jurkat T cells. RNAi-mediated knockdown of STIM1 inhibited TG- or agonist-dependent Ca2+ entry in HEK293 or SH-SY5Y cells. Conversely, overexpression of STIM1 in HEK293 cells modestly enhanced TG-induced Ca2+ entry. We propose that STIM1, a ubiquitously expressed protein that is conserved from Drosophila to mammalian cells, plays an essential role in SOC influx and may be a common component of SOC and CRAC channels.

STIM1, an essential and conserved component of store-operated Ca2+ channel function.

Store-exploit&#xE9;s Ca2 + (SOC) canaux r&#xE9;guler de nombreux processus cellulaires, mais les composants mol&#xE9;culaires sous-jacents ne sont pas bien d&#xE9;finis. L&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;un ARN interf&#xE9;rence (ARNi) bas&#xE9; sur l&#x26;#39;&#xE9;cran pour identifier les g&#xE8;nes qui alter thapsigargine (TG)-d&#xE9;pendante entr&#xE9;e de Ca2 +, nous avons d&#xE9;couvert un r&#xF4;le n&#xE9;cessaire et conserv&#xE9;e de Stim dans afflux SOC. ARNi m&#xE9;di&#xE9;e par inactivation de Stim dans les cellules S2 de drosophile consid&#xE9;rablement r&#xE9;duit TG-d&#xE9;pendante entr&#xE9;e de Ca2 +. Patch-clamp a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; la suppression presque compl&#xE8;te de la Ca2 + Drosophila lib&#xE9;ration activ&#xE9; Ca2 + (CRAC) de courant qui a des caract&#xE9;ristiques biophysiques similaires &#xE0; CRAC actuelle dans les cellules T humaines. De m&#xEA;me, knockdown de l&#x26;#39;homologue humain STIM1 consid&#xE9;rablement r&#xE9;duit l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal CRAC dans les cellules T Jurkat. ARNi &#xE0; m&#xE9;diation knockdown de STIM1 inhib&#xE9;e Ca2 TG-ou d&#x26;#39;un agoniste-d&#xE9;pendante + entr&#xE9;e dans HEK293 ou SH-SY5Y. A l&#x26;#39;inverse, la surexpression de STIM1 dans les cellules HEK293 modestement am&#xE9;lior&#xE9;e TG-induite Ca2 + entr&#xE9;e. Nous proposons que STIM1, une prot&#xE9;ine exprim&#xE9;e de mani&#xE8;re ubiquitaire qui est conserv&#xE9;e de la drosophile aux cellules de mammif&#xE8;res, joue un r&#xF4;le essentiel dans l&#x26;#39;afflux SOC et peuvent &#xEA;tre une composante commune des canaux SOC et le CRAC.

STIM1, une composante essentielle et conserv&#xE9;e de magasin fonctionnant Ca2 + Fonction Manche

STIM1, ein wesentlicher Bestandteil des konservierten und Shop-Ca2 +-Kanal-Funktion.

Archivio-operati Ca2 + canali (SOC) regolano molti processi cellulari, ma i componenti molecolari sottostanti non sono ben definiti. Utilizzando un&#39;interferenza del RNA (RNAi) - basato su schermo per identificare i geni che alterano thapsigargin (TG) - voce di Ca2 + dipendenti, abbiamo scoperto un ruolo richiesto e conservato di Stim in afflusso SOC. RNAi-mediata atterramento di Stim in drosofila S2 cellule significativamente ridotta TG-dipendenti Ca2 + voce. Registrazione di patch-clamp ha rivelato quasi completa soppressione del drosofila Ca2 + attivato dal rilascio Ca2 + corrente (CRAC) che ha caratteristiche biofisiche simile al CRAC corrente nelle cellule T umane. Analogamente, atterramento dell&#39;omologo umano STIM1 significativamente ridotta attivit&agrave; del canale CRAC in cellule Jurkat T. RNAi-mediata atterramento di STIM1 inibito TG-agonista-dipendente Ca2 + entrata nelle cellule HEK293 o SH-SY5Y. Al contrario, sovraespressione di STIM1 nelle cellule HEK293 enhanced modestamente TG-induced Ca2 + voce. Proponiamo che STIM1, una proteina ubiquitously espressa che &egrave; conservata da Drosofila in cellule di mammifero, gioca un ruolo essenziale nell&#39;afflusso SOC e pu&ograve; essere un componente comune dei canali SOC e CRAC.

STIM1, un componente essenziale e conservato di archivio gestito di funzione canale Ca2 +.

&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;Ca2 +&#xFF08;SOC&#xFF09;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x6839;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x6210;&#x5206;&#x306F;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30BF;&#x30D7;&#x30B7;&#x30AC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30F3;&#xFF08;TG&#xFF09;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#xFF08;RNAi&#xFF09;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;SOC&#x6D41;&#x5165;&#x306B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;S2&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;RNAi&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;TG-&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x8A18;&#x9332;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;CRAC&#x306B;&#x4F3C;&#x305F;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;Ca2 +&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x307B;&#x307C;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x76F8;&#x540C;&#x4F53;STIM1&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x3001;Jurkat T&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002; STIM1&#x306E;RNAi&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;HEK293&#x307E;&#x305F;&#x306F;SH-SY5Y&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;TG-&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;HEK293&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;STIM1&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x63A7;&#x3048;&#x3081;&#x306B;TG-&#x8A98;&#x767A;&#x6027;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;STIM1&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x304B;&#x3089;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x666E;&#x904D;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;SOC&#x6D41;&#x5165;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;SOC&#x3068;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x69CB;&#x6210;&#x8981;&#x7D20;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x3066;&#x3082;&#x3088;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

STIM1&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x3068;&#x4FDD;&#x5B58;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;

&#xC2A4;&#xD1A0;&#xC5B4; &#xC6B4;&#xC601; Ca2 + (SOC) &#xCC44;&#xB110; &#xADDC;&#xC81C; &#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC798; &#xC815;&#xC758; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. RNA &#xAC04;&#xC12D; (RNAi) thapsigargin (TG)&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAE30;&#xBC18;&#xB41C; &#xD654;&#xBA74;&#xC744;-&#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC885;&#xC18D; Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9;, SOC &#xC720;&#xC785;&#xC5D0; Stim&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xBC0F; &#xBCF4;&#xC874; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Stim &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; S2 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; RNAi &#xC911;&#xC7AC; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xD06C;&#xAC8C; TG &#xC885;&#xC18D; Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9; &#xAC10;&#xC18C;. &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xB179;&#xC74C; &#xACF5;&#xAC1C;&#xB294; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; Ca2 + &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Ca2 +&#xC758; &#xAC70;&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C; (CRAC) &#xC804;&#xB958; &#xD2B9;&#xC131;&#xC774; biophysical CRAC &#xD604;&#xC7AC;&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; homologue stim1&#xC758; &#xCD5C;&#xC800; Jurkat T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC904;&#xC5B4;&#xB4ED;&#xB2C8;&#xB2E4;. Stim1&#xC758; RNAi &#xC911;&#xC7AC; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; TG &#xB610;&#xB294; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D; Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9; SH-SY5Y &#xB610;&#xB294; HEK293 &#xC138;&#xD3EC; &#xC800;&#xD574;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; HEK293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; stim1&#xC758; overexpression&#xB294; &#xACB8;&#xC190; &#xD558; &#xAC8C; TG &#xC720;&#xB3C4; Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; STIM1, &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874; &#xD3B8; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; SOC &#xC720;&#xC785;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4; &#xACE0; SOC &#xBC0F; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xACF5;&#xD1B5; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

STIM1, Ca2 + &#xCC44;&#xB110; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC6B4;&#xC601;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xC874; &#xAD6C;&#xC131;.

Operados por tienda-Ca2 + (SOC) de canales regulan muchos procesos celulares, pero los componentes moleculares subyacentes no est&#xE1;n bien definidos. El uso de un ARN de interferencia (RNAi), con sede en la pantalla para identificar los genes que alteran thapsigargin (TG) dependiente de la entrada de Ca2 +, descubrimos un papel necesario y conservada de Stim en influjo SOC. RNAi mediada desmontables de Stim en c&#xE9;lulas S2 de Drosophila redujo significativamente TG-dependiente de entrada de Ca2 +. Patch-clamp grabaci&#xF3;n revel&#xF3; la supresi&#xF3;n casi completa de la Ca2 + Drosophila versi&#xF3;n activada por Ca2 + (CRAC) de corriente que tiene caracter&#xED;sticas biof&#xED;sicas similares a CRAC actual en las c&#xE9;lulas T humanas. De manera similar, desmontables de la hom&#xF3;logo humano STIM1 redujo significativamente la actividad CRAC canal en c&#xE9;lulas Jurkat T. RNAi mediada desmontables de STIM1 inhibido Ca2 TG-o dependiente-agonista + entrada en HEK293 o c&#xE9;lulas SH-SY5Y. Por el contrario, la sobreexpresi&#xF3;n de STIM1 en c&#xE9;lulas HEK293 mejorado modestamente TG inducida por la entrada de Ca2 +. Proponemos que STIM1, una prote&#xED;na de expresi&#xF3;n ubicua que se conserva de Drosophila en c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros, juega un papel esencial en el influjo SOC y puede ser un componente com&#xFA;n de los canales del SOC y la CRAC.

STIM1, un componente esencial y conservada de la tienda que funciona con Ca2 + Funci&#xF3;n de canal

&#x4F5C;&#x4E3A;&#x552F;&#x4E00; Ca2 + &#x8FDB;&#x5165;&#x673A;&#x5236;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x975E;&#x53EF;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425;&#x9499; (SOC) &#x6D8C;&#x5165;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#x548C;&#x8BB8;&#x591A;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x9499;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x9499; (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x901A;&#x9053;&#x662F; best-characterized SOC &#x6D8C;&#x5165;&#x901A;&#x9053;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x6301;&#x7EED;&#x5F00;&#x5C55;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x53CA;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6E20;&#x9053;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x548C; SOC &#x548C;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6E20;&#x9053;&#x95E8;&#x63A7;&#x673A;&#x5236;&#x4ECD;&#x96BE;&#x4EE5;&#x6349;&#x6478;&#x3002;&#x5148;&#x524D;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4F34;&#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269; STIM1 &#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5728;&#x679C;&#x8747; S2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; EF &#x624B;&#x4F34;&#x6216; STIM1 &#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6E20;&#x9053;&#x4E00;&#x800C;&#x65E0;&#x9700;&#x66F4;&#x6539; Ca2 + &#x5B58;&#x50A8;&#x5185;&#x5BB9;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x6CD5;&#x3001; EM &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x548C;&#x8868;&#x9762;&#x751F;&#x7269;&#x7D20;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; STIM1 &#x4ECE;&#x5185;&#x8D28;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x6837;&#x7AD9;&#x70B9;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684; Ca2 + &#x8017;&#x7AED;&#x540E;&#x5B58;&#x50A8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7F3A;&#x5C11;&#x7684;&#x4E00;&#x73AF;&#x4E4B;&#x95F4; Ca2 + STIM1 &#x51FD;&#x6570;&#x5B58;&#x50A8;&#x6D88;&#x8017;&#x548C; SOC &#x6D8C;&#x5165;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A; translocates &#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x9891;&#x9053;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x540E;&#x7684; Ca2 + &#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x3002;

STIM1 &#x662F; Ca2 + &#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#xFF0C;&#x53EF;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C06;&#x4ECE; Ca2 + &#x5B58;&#x50A8;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x3002;

As the sole Ca2+ entry mechanism in a variety of non-excitable cells, store-operated calcium (SOC) influx is important in Ca2+ signalling and many other cellular processes. A calcium-release-activated calcium (CRAC) channel in T lymphocytes is the best-characterized SOC influx channel and is essential to the immune response, sustained activity of CRAC channels being required for gene expression and proliferation. The molecular identity and the gating mechanism of SOC and CRAC channels have remained elusive. Previously we identified Stim and the mammalian homologue STIM1 as essential components of CRAC channel activation in Drosophila S2 cells and human T lymphocytes. Here we show that the expression of EF-hand mutants of Stim or STIM1 activates CRAC channels constitutively without changing Ca2+ store content. By immunofluorescence, EM localization and surface biotinylation we show that STIM1 migrates from endoplasmic-reticulum-like sites to the plasma membrane upon depletion of the Ca2+ store. We propose that STIM1 functions as the missing link between Ca2+ store depletion and SOC influx, serving as a Ca2+ sensor that translocates upon store depletion to the plasma membrane to activate CRAC channels.

STIM1 is a Ca2+ sensor that activates CRAC channels and migrates from the Ca2+ store to the plasma membrane.

Comme le Ca2 + seul m&#xE9;canisme d&#x26;#39;entr&#xE9;e dans une vari&#xE9;t&#xE9; de cellules non excitables, les magasin exploit&#xE9; de calcium (SOC) est important afflux de Ca2 + de signalisation et beaucoup d&#x26;#39;autres processus cellulaires. Un de calcium-release-actif de calcium (CRAC) de canal dans les lymphocytes T est le canal le mieux caract&#xE9;ris&#xE9; afflux SOC et elle est essentielle &#xE0; la r&#xE9;ponse immunitaire, une activit&#xE9; soutenue des canaux CRAC est requis pour l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes et la prolif&#xE9;ration. L&#x26;#39;identit&#xE9; mol&#xE9;culaire et le m&#xE9;canisme de d&#xE9;clenchement de la SOC et les canaux CRAC sont rest&#xE9;s hors de port&#xE9;e. Auparavant, nous avons identifi&#xE9; Stim et le STIM1 homologue mammif&#xE8;re en tant que composants essentiels de l&#x26;#39;activation du canal CRAC de cellules S2 de drosophile et les lymphocytes T humains. Ici, nous montrons que l&#x26;#39;expression de EF-hand mutants de Stim ou STIM1 active les canaux CRAC constitutivement sans changer Ca2 + contenu magasin. Par immunofluorescence, EM localisation et biotinylation de surface, nous montrons que STIM1 migre de endoplasmique-r&#xE9;ticulum-comme les sites de la membrane plasmique lors de l&#x26;#39;&#xE9;puisement de la Ca2 + magasin. Nous proposons que STIM1 fonctions comme le cha&#xEE;non manquant entre l&#x26;#39;appauvrissement de Ca2 + magasin et l&#x26;#39;afflux SOC, servant de Ca2 + capteur qui se diffuse sur l&#x26;#39;appauvrissement de magasin &#xE0; la membrane plasmique pour activer les canaux CRAC.

STIM1 est un Ca2 + capteur qui active les canaux CRAC et migre &#xE0; partir du Ca2 + magasin &#xE0; la membrane plasmique

Als alleinige Ca2 + Eintrag Mechanismus in einer Vielzahl von nicht-excitable Zellen ist Shop-betrieben Kalzium (SOC) Zustrom in Ca2 + Signal- und viele andere zellulare Prozesse wichtig. Ein Kalzium-Freigabe-aktiviert Kalzium (CRAC) Kanal in T-Lymphozyten ist der best-characterized SOC-Zustrom-Kanal und ist wichtig, die Immunantwort, nachhaltige T&auml;tigkeit des CRAC-Kan&auml;le f&uuml;r die Genexpression und Vermehrung erforderlich. Die molekulare Identit&auml;t und der gating-Mechanismus SOC und CRAC Kan&auml;le sind schwer fassbaren geblieben. Zuvor haben wir Stim und der S&auml;ugetier-Homolog STIM1 als wesentliche Bestandteile des CRAC Kanal Aktivierung in Drosophila S2-Zellen und menschlichen T-Lymphozyten identifiziert. Hier zeigen wir, dass der Ausdruck der EF-Hand-Mutanten Stim oder STIM1 CRAC Kan&auml;le konstitutiv aktiviert ohne Ca2 +-Store-Inhalte. Speichern durch Immunfluoreszenz EM Lokalisierung und Oberfl&auml;che Biotinylierung, die wir zeigen, dass STIM1 von endoplasmic Reticulum-&auml;hnlicher Seiten an die Plasmamembran nach Ersch&ouml;pfung des Ca2 + migriert. Wir schlagen STIM1 Funktionen wie das fehlende Glied zwischen Ca2 + zu speichern, Ersch&ouml;pfung und SOC-Zustrom, als ein Ca2 +-Sensor, der auf Speicher Raubbau an der Plasmamembran, CRAC-Kan&auml;le zu aktivieren zeigten.

STIM1 ist ein Ca2 +-Sensor, der CRAC-Kan&auml;le aktiviert und migriert die Ca2 +-Store in der Plasmamembran.

Come il solo Ca2 + meccanismo di voce in una variet&agrave; di cellule non eccitabili, afflusso di calcio store-operato (SOC) &egrave; importante in Ca2 + segnalazione e molti altri processi cellulari. Un canale di calcio calcio-comunicato-attivato (CRAC) in linfociti T &egrave; il canale di afflusso SOC best-characterized ed &egrave; essenziale per la risposta immunitaria, sostenuta attivit&agrave; di canali CRAC essendo necessaria per la proliferazione e l&#39;espressione genica. L&#39;identit&agrave; molecolare e il meccanismo di controllo dei canali SOC e CRAC sono rimasti sfuggente. In precedenza abbiamo identificato Stim e l&#39;omologo mammifero STIM1 come componenti essenziali di attivazione canale CRAC in drosofila S2 cellule e linfociti T umani. Qui ci mostra che l&#39;espressione dei mutanti di EF-mano di Stim o STIM1 attiva i canali CRAC costitutivamente senza cambiare negozio contenuto di Ca2 +. Immunofluorescenza, localizzazione di EM e superficie biotinylation che mostriamo che STIM1 migra da endoplasmic-reticolo-come siti di membrana del plasma all&#39;esaurimento del Ca2 + store. Proponiamo che STIM1 funzioni come l&#39;anello mancante tra Ca2 + negozio deplezione e SOC afflusso, che serve come un sensore di Ca2 + che trasloca al negozio deplezione di membrana del plasma per attivare canali di CRAC.

STIM1 &egrave; un sensore di Ca2 + che attiva i canali CRAC e migra dal deposito di Ca2 + nella membrana del plasma.

&#x552F;&#x4E00;&#x306E;Ca2 +&#x975E;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#xB7;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;SOC&#xFF09;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6D41;&#x5165;&#x304C;Ca2 +&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3068;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;SOC&#x6D41;&#x5165;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3068;SOC&#x3068;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x958B;&#x9589;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x3001;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;S2&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D2;&#x30C8;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;&#x6210;&#x5206;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;STIM1&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Ca2 +&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x5185;&#x5BB9;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x305B;&#x305A;&#x306B;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;STIM1&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;EF-&#x30CF;&#x30F3;&#x30C9;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x86CD;&#x5149;&#x6CD5;&#x3001;EM&#x5C40;&#x5728;&#x3068;&#x8868;&#x9762;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;STIM1&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53; - &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;Ca2 +&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x6642;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;Ca2&#x9593;&#x306E;&#x30DF;&#x30C3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;STIM1 +&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3068;SOC&#x6D41;&#x5165;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x67AF;&#x6E07;&#x6642;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3057;&#x304C;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;Ca2 +&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

STIM1&#x306F;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3078;&#x306E;Ca 2 +&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x306E;Ca2 +&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xB2E8;&#xB3C5; Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC73C;&#xB85C; &#xACE0;&#xB974;&#xAE30;&#xAC00; &#xC544;&#xB2CC; &#xC140;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9E4;&#xC7A5; &#xC6B4;&#xC601; &#xCE7C;&#xC298; (SOC) &#xC720;&#xC785;&#xC740; Ca2 + &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE7C;&#xC298; &#xBC29;&#xCD9C; &#xD65C;&#xC131; &#xCE7C;&#xC298; (CRAC) &#xCC44;&#xB110; best-characterized SOC &#xC720;&#xC785; &#xCC44;&#xB110; &#xC774;&#xBA70;, &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;, CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xBC0F; &#xD655;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC790; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xACFC; SOC &#xBC0F; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC560;&#xB9E4; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; S2 &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB85C; Stim&#xC640; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; homologue STIM1 &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; Ca2 + &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; Stim &#xB610;&#xB294; stim1&#xC758; EF &#xC190;&#xC744; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC744; constitutively &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xC0AC;, EM &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC0F; &#xD45C;&#xBA74; biotinylation &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; STIM1 Ca2 +&#xC758; &#xACE0;&#xAC08;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; &#xAC19;&#xC740; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC800;&#xC7A5;&#xD560;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; STIM1 &#xAE30;&#xB2A5; Ca2 + &#xC0AC;&#xC774; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC120;&#xC744; &#xACE0;&#xAC08; &#xBC0F; SOC &#xC720;&#xC785; &#xC800;&#xC7A5; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xACE0;&#xAC08; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xB530;&#xB77C; translocates Ca2 + &#xC13C;&#xC11C;&#xB85C; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Stim1&#xC740; Ca2 + &#xC13C;&#xC11C;&#xB294; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9; Ca2 + &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

A medida que el Ca2 + &#xFA;nico mecanismo de entrada en una variedad de no excitables c&#xE9;lulas, tienda de accionamiento de calcio (SOC) de afluencia es importante en Ca2 + se&#xF1;alizaci&#xF3;n y muchos otros procesos celulares. Un comunicado de calcio activados por calcio (CRAC) de canal en los linfocitos T es la mejor caracterizada de canales SOC afluencia y es esencial para la respuesta inmune, la actividad sostenida de los canales CRAC se requiere para la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica y la proliferaci&#xF3;n. La identidad molecular y el mecanismo de apertura del SOC y de los canales CRAC han permanecido esquivo. Anteriormente hemos identificado Stim y el STIM1 hom&#xF3;logo de mam&#xED;feros como componentes esenciales de la activaci&#xF3;n de los canales CRAC en las c&#xE9;lulas S2 de Drosophila y los linfocitos T humanos. Aqu&#xED; nos muestran que la expresi&#xF3;n de mutantes EF-hand de Stim o activa los canales CRAC STIM1 constitutivamente sin cambiar el contenido de Ca2 + tienda. Por inmunofluorescencia, EM localizaci&#xF3;n y superficie de biotinilaci&#xF3;n se muestra que emigra de STIM1 endopl&#xE1;smico-ret&#xED;culo-como los sitios de la membrana plasm&#xE1;tica al agotamiento de la tienda de Ca2 +. Proponemos que STIM1 funciona como el eslab&#xF3;n perdido entre el agotamiento del almac&#xE9;n de Ca2 + y el influjo SOC, que act&#xFA;a como un sensor de Ca2 + que se transloca sobre el agotamiento de la tienda a la membrana plasm&#xE1;tica para activar los canales CRAC.

STIM1 es un Ca2 + sensor que activa los canales CRAC y migra desde el Ca2 + de la tienda a la membrana plasm&#xE1;tica

&#x6700;&#x8FD1;&#x6211;&#x4EEC;&#x7EC4;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x4EBA;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x4F34;&#x5728;&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425;&#x7ECF;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x548C;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF; (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6240;&#x9700;&#x548C;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x5E26;&#x504F;&#x89C1;&#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4E2D;&#x679C;&#x8747; S2 &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x786E;&#x5B9A;&#x5F3A;&#x70C8;&#x6291;&#x5236;&#x7ECF;&#x6D8C;&#x5165;&#x540E;&#x5B58;&#x50A8;&#x6E05;&#x7A7A;&#x7684; thapsigargin &#x7684; 75 &#x547D;&#x4E2D;&#x3002;&#x5F53;&#x4E2D;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x547D;&#x4E2D; 11 &#x9884;&#x6D4B;&#x7684;&#x8DE8;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4F34;&#xFF0C;&#x548C;&#x4E00;&#x3001; olf186-F&#x3001; &#x5BF9; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86;&#x6DF1;&#x523B;&#x51CF;&#x5C11; thapsigargin &#x8BF1;&#x53D1;&#x7ECF;&#x6761;&#x76EE;&#x548C;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5F53;&#x524D;&#xFF0C;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x4E09;&#x6298;&#x6269;&#x589E;&#x540E;&#x3002;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7535;&#x6D41;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x589E;&#x52A0;&#x81F3; 8-fold &#x9AD8;&#x4E8E;&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x66F4;&#x8FC5;&#x901F;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E0E;&#x4F34; cotransfected olf186 F &#x662F;&#x5F53;&#x3002;olf186-F &#x662F;&#x4ECE;&#x6746;&#x7EBF;&#x866B;&#x5BF9;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x540C;&#x6E90;&#x56DB;&#x8DE8;&#x819C;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x5B88;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER) &#x7ECF;&#x6CF5;&#x8428;&#x5C14;-&#x4E0E; ER &#x9499; ATPase &#xFF08;SERCA&#xFF09; &#x548C;&#x5355;&#x8DE8;&#x819C;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N ethylmaleimide &#x654F;&#x611F; &#xFF08;NSF&#xFF09; &#x9644;&#x4EF6; &#xFF08;&#x9677;&#x9631;&#xFF09; &#x53D7;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; Syntaxin5 &#x4E5F;&#x662F;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x5176;&#x4E2D;&#x4F34;&#x611F;&#x5B98;&#x7ECF;&#x6D88;&#x8017;&#x5728;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#x5185;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#xFF0C;translocates &#x548C; olf186-F &#x5230;&#x89E6;&#x53D1;&#x5668;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;

&#x7ECF;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#x6807;&#x8BC6;&#x89C4;&#x8303;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;

Recent studies by our group and others demonstrated a required and conserved role of Stim in store-operated Ca(2+) influx and Ca(2+) release-activated Ca(2+) (CRAC) channel activity. By using an unbiased genome-wide RNA interference screen in Drosophila S2 cells, we now identify 75 hits that strongly inhibited Ca(2+) influx upon store emptying by thapsigargin. Among these hits are 11 predicted transmembrane proteins, including Stim, and one, olf186-F, that upon RNA interference-mediated knockdown exhibited a profound reduction of thapsigargin-evoked Ca(2+) entry and CRAC current, and upon overexpression a 3-fold augmentation of CRAC current. CRAC currents were further increased to 8-fold higher than control and developed more rapidly when olf186-F was cotransfected with Stim. olf186-F is a member of a highly conserved family of four-transmembrane spanning proteins with homologs from Caenorhabditis elegans to human. The endoplasmic reticulum (ER) Ca(2+) pump sarco-/ER calcium ATPase (SERCA) and the single transmembrane-soluble N-ethylmaleimide-sensitive (NSF) attachment receptor (SNARE) protein Syntaxin5 also were required for CRAC channel activity, consistent with a signaling pathway in which Stim senses Ca(2+) depletion within the ER, translocates to the plasma membrane, and interacts with olf186-F to trigger CRAC channel activity.

Genome-wide RNAi screen of Ca(2+) influx identifies genes that regulate Ca(2+) release-activated Ca(2+) channel activity.

Des &#xE9;tudes r&#xE9;centes de notre groupe et d&#x26;#39;autres ont d&#xE9;montr&#xE9; un r&#xF4;le n&#xE9;cessaire et conserv&#xE9;e de Stim en magasin exploit&#xE9; Ca (2 +) et l&#x26;#39;afflux de Ca (2 +) &#xE0; lib&#xE9;ration activ&#xE9; Ca (2 +) l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal (CRAC). En utilisant un impartiale l&#x26;#39;&#xE9;chelle du g&#xE9;nome &#xE9;cran interf&#xE9;rence de l&#x26;#39;ARN dans les cellules S2 de drosophile, nous avons maintenant d&#x26;#39;identifier 75 hits qui a fortement inhib&#xE9; Ca (2 +) sur l&#x26;#39;afflux de vidange magasin par thapsigargine. Parmi ces visites sont des prot&#xE9;ines transmembranaires 11 pr&#xE9;dit, y compris Stim, et un, olf186-F, que lors de l&#x26;#39;interf&#xE9;rence ARN m&#xE9;di&#xE9;e par effet de choc ont pr&#xE9;sent&#xE9; une r&#xE9;duction profonde de thapsigargine-&#xE9;voqu&#xE9; Ca (2 +) entr&#xE9;e et le CRAC actuelle, et la surexpression de 3 - l&#x26;#39;augmentation du courant CRAC fois. Courants ont &#xE9;t&#xE9; CRAC encore augment&#xE9; &#xE0; 8 fois plus &#xE9;lev&#xE9; que le contr&#xF4;le et s&#x26;#39;est d&#xE9;velopp&#xE9; plus rapidement quand olf186-F a &#xE9;t&#xE9; co-transfect&#xE9;es avec Stim. olf186-F est un membre d&#x26;#39;une famille hautement conserv&#xE9;e de quatre-transmembranaire s&#x26;#39;&#xE9;tendant prot&#xE9;ines homologues avec de Caenorhabditis elegans &#xE0; humaine. Le r&#xE9;ticulum endoplasmique (RE) Ca (2 +) pompe &#xE0; calcium ATPase sarco-/ER (SERCA) et le single transmembranaire soluble N-&#xE9;thylmal&#xE9;imide sensible du r&#xE9;cepteur de fixation (NSF) (SNARE) prot&#xE9;ine Syntaxin5 ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; requis pour l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal CRAC, compatible avec une voie de signalisation dans lequel Stim sens Ca (2 +) au sein de l&#x26;#39;appauvrissement de la couche ER, une translocation vers la membrane plasmique, et interagit avec olf186-F pour d&#xE9;clencher l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal CRAC.

L&#x26;#39;&#xE9;chelle du g&#xE9;nome &#xE9;cran ARNi de Ca (2 +) Afflux d&#x26;#39;identifier les g&#xE8;nes qui r&#xE9;gulent Ca (2 +) de sortie activ&#xE9; par Ca (2 +) Activit&#xE9; du Chan

Neue Studien von unserer Fraktion und anderen gezeigt eine erforderliche und konservierte Rolle der Stim im Speicher zu bet&auml;tigende Ca(2+) Zustrom und Ca(2+) Freigabe aktiviert Ca(2+) (CRAC) Channel-Aktivit&auml;ten. Einen unvoreingenommenen genomweiten RNA Interferenz-Bildschirm in Drosophila S2-Zellen verwenden, identifizieren wir jetzt 75 Treffer, die stark Ca(2+) Zustrom auf Speicher leeren von Thapsigargin gehemmt. Unter diese Treffer sind 11 vorhergesagten Transmembranproteine, einschlie&szlig;lich Stim, und eins, olf186-F, dass bei der RNA Interferenz-vermittelte Niederschlag eine profunde Verringerung der Thapsigargin hervorgerufen Ca(2+) Eintrag und CRAC current und auf eine &Uuml;berexpression eines 3-Band Vermehrung des CRAC aktuelle ausgestellt. CRAC Str&ouml;mungen wurden verst&auml;rkt mit 8-fach h&ouml;her als Kontrolle und schneller entwickelt, als olf186-F mit Stim cotransfected war. olf186-F ist Mitglied einer stark konservierten Familie von vier-spannender Transmembranproteine mit UCP1 von Caenorhabditis Elegans zu Human. Dem Endoplasmatischen Retikulum (ER) Ca(2+) pump Sarco- / ER Kalzium ATPase (SERCA) und das einzelne Transmembran-l&ouml;slichen N-Ethylmaleimid-Sensitive (NSF)-Anlage-Rezeptor (SNARE)-Protein Syntaxin5 waren auch erforderlich f&uuml;r CRAC Channel-Aktivit&auml;ten, mit einem Signalweg in dem Sinne Stim Ca(2+) Ersch&ouml;pfung innerhalb der ER auf der Plasmamembran zeigten und mit olf186-F, um Trigger CRAC-Channel-Aktivit&auml;ten interagiert.

Genomweiten RNAi-Bildschirm Ca(2+) Zustrom identifiziert Gene, die Ca(2+) Version aktivierte Ca(2+) Channel-Aktivit&auml;ten zu regulieren.

Recenti studi dal nostro gruppo e altri hanno dimostrato un ruolo richiesto e conservato di Stim nel negozio gestito Ca(2+) afflusso e attivit&agrave; del canale Ca(2+) (CRAC) attivato dal rilascio Ca(2+). Utilizzando un imparziale schermo di interferenza del RNA genome-wide in cellule di Drosophila S2, identifichiamo ora 75 hits che fortemente inibito Ca(2+) afflusso al negozio lo svuotamento da thapsigargin. Tra questi successi sono 11 proteine transmembrana predetta, tra cui Stim e uno, olf186-F, che su RNA interferenza-mediata atterramento esposto una profonda riduzione delle thapsigargin evocato Ca(2+) voce e CRAC corrente e su sovraespressione un triplice aumento del CRAC corrente. CRAC correnti sono state ulteriormente aumentate a ad superiori di controllo e si &egrave; sviluppato pi&ugrave; velocemente quando era cotransfected olf186-F con Stim. olf186-F &egrave; un membro di una famiglia altamente conservata del quattro-transmembrane spanning proteine con omologhi da Caenorhabditis elegans di umani. Il reticolo endoplasmatico (ER) Ca(2+) pompa sarco- / ER Calcio ATPasi (SERCA) e la proteina recettore (rullante) allegato N-ethylmaleimide-sensibili (NSF) transmembrana solubile singola Syntaxin5 inoltre erano necessari per attivit&agrave; del canale CRAC, coerente con una via di segnalazione in cui Stim i sensi Ca(2+) esaurimento entro l&#39;ER, trasloca a membrana del plasma e interagisce con olf186-F a trigger CRAC canale attivit&agrave;.

Genome-wide screen RNAi di afflusso Ca(2+) identifica i geni che regolano l&#39;attivit&agrave; del canale Ca(2+) Ca(2+) attivato dal rilascio.

&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D41;&#x5165;&#x3068;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;S2&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x516C;&#x5E73;&#x306A;&#x30B2;&#x200B;&#x200B;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306A;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ECA;&#x3001;&#x5F37;&#x304F;&#x30BF;&#x30D7;&#x30B7;&#x30AC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7A7A;&#x5E97;&#x8217;&#x306B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x305F;75&#x306E;&#x30D2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; - &#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D2;&#x30C3;&#x30C8;&#x66F2;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B;&#x8CAB;&#x901A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306B;&#x30BF;&#x30D7;&#x30B7;&#x30AC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30F3;&#x8A98;&#x767A;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3068;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x6DF1;&#x9060;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x6642;3 1&#x3064;&#x3001;olf186-F&#x3092;11&#x3068;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x308B;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x500D;&#x306B;&#x5897;&#x5F37;&#x3002; olf186-F&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x3092;&#x30B3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x304C;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5236;&#x5FA1;&#x3088;&#x308A;&#x3082;8&#x500D;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x8FC5;&#x901F;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; olf186-F&#x306F;&#x3001;4&#x3064;&#x306E;&#x8CAB;&#x901A;&#x306F;&#x3001;&#x7DDA;&#x866B;Caenorhabditis elegans&#x304B;&#x3089;&#x30D2;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x4F53;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B9;&#x30D1;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30C4;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#xFF08;ER&#xFF09;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30DD;&#x30F3;&#x30D7;sarco-/ER&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;ATP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;SERCA&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;N-&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30DE;&#x30EC;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C9;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#xFF08;NSF&#xFF09;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;SNARE&#xFF09;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;Syntaxin5&#x3082;&#x3001;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;ER&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x611F;&#x899A;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3078;&#x79FB;&#x884C;&#x3057;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;olf186-F&#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6D41;&#x5165;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;Ca&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306A;RNAi&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;2 +&#xFF09;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xADF8;&#xB8F9; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD5C;&#xADFC; &#xD559;&#xBB38; Ca(2+) &#xC720;&#xC785; &#xB9E4;&#xC7A5; &#xC6B4;&#xC601; &#xBC0F; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131; Ca(2+) (CRAC) &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9; Stim&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xBC0F; &#xBCF4;&#xC874; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; S2 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3B8;&#xACAC;&#xB41C; &#xAC8C;&#xB188; &#xC804;&#xCCB4; RNA &#xAC04;&#xC12D; &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC9C0;&#xAE08; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xBE44;&#xC6B0;&#xAE30; thapsigargin&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB530;&#xB77C; Ca(2+) &#xC720;&#xC785; 75 &#xC548;&#xD0C0;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC870;&#xD68C; &#xC218; &#xC911; Stim, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD558;&#xB098;, olf186 F, RNA&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAC04;&#xC12D; &#xC911;&#xC7AC; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xC804;&#xC2DC; thapsigargin &#xAC16;&#xB294; Ca(2+) &#xD56D;&#xBAA9; &#xBC0F; CRAC &#xC804;&#xB958;, overexpression &#xD604;&#xC7AC; CRAC&#xC758; 35.56 &#xD655;&#xB300;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAE4A;&#xC740; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; 11 &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xB294;. CRAC &#xC804;&#xB958; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBCF4;&#xB2E4; 8-fold &#xB192;&#xC740; &#xCD94;&#xAC00; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC0F; olf186 F Stim&#xC640; cotransfected&#xB294; &#xB54C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC1C;&#xBC1C;. olf186-F &#xC778;&#xAC04; Caenorhabditis elegans&#xC5D0;&#xC11C; homologs&#xC640; &#xD655;&#xC7A5; 4 &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;) Ca(2+) &#xD38C;&#xD504; sarco-/ &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xCE7C;&#xC298; ATPase (SERCA)&#xACFC; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; N ethylmaleimide &#xAD6C;&#xBD84; (NSF) &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C; (&#xC62C; &#xBB34;) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Syntaxin5 &#xB610;&#xD55C; &#xC694;&#xAD6C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; Stim &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;, &#xB0B4; Ca(2+) &#xC18C;&#xBAA8;&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; translocates &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; olf186-F &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294;.

Ca(2+) &#xC720;&#xC785;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; RNAi &#xD654;&#xBA74; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Estudios recientes realizados por nuestro grupo y otros demostraron una funci&#xF3;n necesaria y conservada de Stim en la tienda que funciona con Ca (2 +) y el influjo de Ca (2 +) de liberaci&#xF3;n activados por Ca (2 +) (CRAC) la actividad del canal. Mediante el uso de un imparcial en todo el genoma pantalla de interferencia de ARN en las c&#xE9;lulas S2 de Drosophila, ahora identificamos 75 &#xE9;xitos que intensamente inhibidos Ca (2 +) influjo sobre el vaciamiento tienda por thapsigargin. Entre estos &#xE9;xitos se predijo 11 prote&#xED;nas transmembrana, incluyendo Stim, y uno, olf186-F, que al ARN de interferencia mediada por ca&#xED;da mostraron una reducci&#xF3;n profunda de thapsigargin-evoc&#xF3; Ca (2 +) de entrada y CRAC actual, y sobre la sobreexpresi&#xF3;n de un 3 - El aumento de la corriente veces CRAC. CRAC corrientes se incrementaron en m&#xE1;s de ocho veces mayor que el control y se desarroll&#xF3; m&#xE1;s r&#xE1;pidamente cuando se olf186-F se cotransfectaron con Stim. olf186-F es un miembro de una familia altamente conservada de cuatro prote&#xED;nas transmembrana con hom&#xF3;logos de Caenorhabditis elegans a humano. El ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico (RE) Ca (2 +) de la bomba de calcio ATPasa sarco-/ER (SERCA) y la &#xFA;nica transmembrana soluble N-etilmaleimida sensible (NSF) de los receptores de fijaci&#xF3;n (SNARE) Syntaxin5 prote&#xED;nas tambi&#xE9;n se requiere para la actividad del canal CRAC, coherente con una v&#xED;a de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en la que Stim sentidos Ca (2 +) el agotamiento dentro de la sala de emergencia, se transloca a la membrana plasm&#xE1;tica, e interact&#xFA;a con olf186-F para activar la actividad de los canales CRAC.

Genoma toda la pantalla de RNAi de Ca (2 +) Afluencia identifica los genes que regulan la Ca (2 +) Publicaci&#xF3;n activado por Ca (2 +) la actividad del canal

&#x6700;&#x8FD1;&#x7684; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x5C4F;&#x5E55;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x6D8C;&#x5165;&#x5546;&#x5E97;&#x7ECF;&#x8425; Ca2 + &#x548C; Ca2 + &#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca2 + &#x6240;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4F34; (&#x57FA;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5206;&#x5B50;&#xFF09; &#x548C;&#x53E3;&#x8BED;&#x7684;&#x8DE8;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x4F34;&#x53EF;&#x80FD;&#x5145;&#x5F53;&#x9C81;&#x7C73;&#x90A3; Ca2 + &#x542B;&#x91CF;&#x7684;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x548C;&#x89E6;&#x53D1;&#x540E;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D; Ca2 + &#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6E20;&#x9053;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x819C;&#x3002;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED; (&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A; olf186-F) &#x4E09;&#x79CD;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#xFF0C;12 &#x53F7;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E0A;&#x7684; ORAI1 &#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E25;&#x91CD;&#x8054;&#x5408;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; Orai1 &#x8FD8;&#x539F; Ca2 + &#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x548C;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x75C5;&#x4EBA; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x4F34;&#x548C;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x8868;&#x8FBE;&#x660E;&#x663E;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7535;&#x6D41;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4E0D;&#x5C1A;&#x672A;&#x6E05;&#x695A;&#x4F34;&#x6216;&#x53E3;&#x8BED;&#x5176;&#x5B9E;&#x5F62;&#x6210;&#x5143;&#x4FE1;&#x9053;&#xFF0C;&#x8FD8;&#x662F;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x8868;&#x8FBE;&#x53EA;&#x662F;&#x9650;&#x5236;&#x4E0D;&#x540C;&#x901A;&#x9053;&#x5F62;&#x6210;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x5904;&#x7406; thapsigargin &#x8BF1;&#x4F7F; Ca2 + &#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x540E;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x5F3A;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x4F34;&#x548C;&#x53E3;&#x8BED;&#xFF0C;&#x7531; co-&#x6C89;&#x6DC0;&#xFF0C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x60C5;&#x51B5;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x4ECE;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x5728;&#x53E3;&#x8BED;&#x4E2D;&#x5B88;&#x6052; S1 S2 &#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E; 180 &#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x8F6C;&#x6362;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5F53;&#x524D;&#x6B63;&#x5728; Ca2 + &#x4ECE;&#x79BB;&#x5B50;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5C5E;&#x6027;-&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x4E0E;&#x5916;&#x6765;&#x6821;&#x6B63;&#x88AB;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x5355;&#x4EF7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x548C;&#x5916;&#x5411;&#x6574;&#x6D41;&#x3002;&#x5728;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E; (&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;) &#x4E2D;&#x7535;&#x8377;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x5145;&#x5F53;&#x663E;&#x6027;&#x8D1F;&#x975E;&#x5BFC;&#x7535;&#x4E9A;&#x57FA;&#x3002;&#x5176;&#x4ED6;&#x4E2D;&#x7535;&#x8377;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5728;&#x540C;&#x4E00;&#x73AF;&#x8DEF;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x793A;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x5927;&#x5185;&#x5FC3;&#x6574;&#x6D41;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5F53;&#x524D;&#xFF0C;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C55;&#x54C1;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242; Gd3 + &#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x964D;&#x4F4E;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x53E3;&#x8BED;&#x672C;&#x8EAB;&#x5C31;&#x6784;&#x6210;&#x4E86; Ca2 +-&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x8FC7;&#x6EE4;&#x5668;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7;&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x4E2D;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x9274;&#x5B9A;&#x3002;

Recent RNA interference screens have identified several proteins that are essential for store-operated Ca2+ influx and Ca2+ release-activated Ca2+ (CRAC) channel activity in Drosophila and in mammals, including the transmembrane proteins Stim (stromal interaction molecule) and Orai. Stim probably functions as a sensor of luminal Ca2+ content and triggers activation of CRAC channels in the surface membrane after Ca2+ store depletion. Among three human homologues of Orai (also known as olf186-F), ORAI1 on chromosome 12 was found to be mutated in patients with severe combined immunodeficiency disease, and expression of wild-type Orai1 restored Ca2+ influx and CRAC channel activity in patient T cells. The overexpression of Stim and Orai together markedly increases CRAC current. However, it is not yet clear whether Stim or Orai actually forms the CRAC channel, or whether their expression simply limits CRAC channel activity mediated by a different channel-forming subunit. Here we show that interaction between wild-type Stim and Orai, assessed by co-immunoprecipitation, is greatly enhanced after treatment with thapsigargin to induce Ca2+ store depletion. By site-directed mutagenesis, we show that a point mutation from glutamate to aspartate at position 180 in the conserved S1-S2 loop of Orai transforms the ion selectivity properties of CRAC current from being Ca2+-selective with inward rectification to being selective for monovalent cations and outwardly rectifying. A charge-neutralizing mutation at the same position (glutamate to alanine) acts as a dominant-negative non-conducting subunit. Other charge-neutralizing mutants in the same loop express large inwardly rectifying CRAC current, and two of these exhibit reduced sensitivity to the channel blocker Gd3+. These results indicate that Orai itself forms the Ca2+-selectivity filter of the CRAC channel.

Molecular identification of the CRAC channel by altered ion selectivity in a mutant of Orai.

Derni&#xE8;res &#xE9;crans interf&#xE9;rence ARN ont identifi&#xE9; plusieurs prot&#xE9;ines qui sont essentielles pour le magasin fonctionnant Ca2 + influx et lib&#xE9;ration de Ca2 + activ&#xE9; par Ca 2 + canal activit&#xE9; (CRAC) chez la drosophile et chez les mammif&#xE8;res, y compris le transmembranaire des prot&#xE9;ines Stim (mol&#xE9;cule d&#x26;#39;interaction stroma) et Orai. Stim probablement fonctionne comme un capteur de luminale Ca2 + contenu et d&#xE9;clenche l&#x26;#39;activation des canaux CRAC dans la membrane de surface apr&#xE8;s Ca2 + appauvrissement magasin. Parmi les trois homologues de l&#x26;#39;homme des Orai (&#xE9;galement connu sous le nom olf186-F), ORAI1 sur le chromosome 12 a &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9; &#xE0; &#xEA;tre mut&#xE9; chez les patients souffrant de maladies d&#x26;#39;immunod&#xE9;ficience combin&#xE9;e, et l&#x26;#39;expression de type sauvage Orai1 restaur&#xE9; Ca2 + influx et l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal CRAC dans les lymphocytes T des patients . La surexpression de Stim et Orai ensemble augmente de fa&#xE7;on marqu&#xE9;e en cours CRAC. Toutefois, il n&#x26;#39;est pas encore clair si Stim ou Orai forme effectivement le canal CRAC, ou si leur expression limite simplement l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal CRAC m&#xE9;di&#xE9;e par un autre canal de formation de sous-unit&#xE9;. Ici, nous montrons que l&#x26;#39;interaction entre type sauvage Stim et Orai, &#xE9;valu&#xE9;e par co-immunopr&#xE9;cipitation, est grandement am&#xE9;lior&#xE9;e apr&#xE8;s le traitement avec thapsigargine pour induire Ca2 + appauvrissement magasin. Par mutagen&#xE8;se dirig&#xE9;e, on montre que une mutation ponctuelle &#xE0; partir du glutamate &#xE0; aspartate en position 180 dans la r&#xE9;gion conserv&#xE9;e du S1-S2 boucle de Orai transforme les propri&#xE9;t&#xE9;s de s&#xE9;lectivit&#xE9; ionique de courant CRAC d&#x26;#39;&#xEA;tre Ca 2 +-s&#xE9;lective avec de rectification vers l&#x26;#39;int&#xE9;rieur pour &#xEA;tre s&#xE9;lective pour les cations monovalents et vers l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur de redressement. Une mutation de charge de neutralisation &#xE0; la m&#xEA;me position (glutamate de l&#x26;#39;alanine) agit comme un dominant n&#xE9;gatif non conducteur sous-unit&#xE9;. Autres frais de neutralisation des mutants dans la m&#xEA;me boucle exprimer grande int&#xE9;rieurement redresseur de courant CRAC, et deux de celles-ci pr&#xE9;sentent une sensibilit&#xE9; r&#xE9;duite &#xE0; l&#x26;#39;inhibiteur du canal Gd3 +. Ces r&#xE9;sultats indiquent que Orai se forme la Ca2 +-s&#xE9;lectivit&#xE9; du filtre du canal CRAC.

Identification mol&#xE9;culaire de la Manche par le CRAC s&#xE9;lectivit&#xE9; ionique Altered dans un mutant de Orai

Den letzten RNA-Interferenz-Bildschirme haben verschiedene Proteine, die f&uuml;r Shop-betrieben Ca2 + Zustrom Ca2 + Freigabe aktiviert Ca2 + unverzichtbar sind identifiziert (CRAC) Channel-Aktivit&auml;ten in Drosophila und S&auml;ugetiere, einschlie&szlig;lich die Transmembranproteine Stim (stromal Interaktion Molek&uuml;l) und Orai. STIM wahrscheinlich fungiert als Sensor der luminalen Ca2 + Inhalt und l&ouml;st die Aktivierung des CRAC-Kan&auml;le in der Membran Oberfl&auml;che nach Ca2 +-Speicher Ersch&ouml;pfung. Unter den drei menschlichen Homologen der Orai (auch bekannt als olf186-F) ORAI1 auf Chromosom 12 wurde festgestellt, dass bei Patienten mit schwerem kombiniertem Immundefekt-Erkrankung mutiert sein und Ausdruck der Wildtyp Orai1 wiederhergestellt, Ca2 + Zustrom und CRAC-Channel-Aktivit&auml;ten in Patienten-T-Zellen. Die &Uuml;berexpression von Stim und Orai zusammen erh&ouml;ht deutlich CRAC Strom. Jedoch ist es noch nicht klar ob Stim oder Orai tats&auml;chlich den CRAC-Kanal bildet, oder ob ihren Ausdruck einfach CRAC-Channel-Aktivit&auml;ten durch einen anderen Kanal-bildenden Untereinheit vermittelt beschr&auml;nkt. Hier zeigen wir, dass die Interaktion zwischen Wildtyp Stim und Orai, co-Immunopr&auml;zipitation, beurteilt nach der Behandlung mit Thapsigargin Ca2 +-Speicher Ersch&ouml;pfung veranlassen enorm ist. Site-verwiesene Mutagenese, zeigen wir, dass eine Punktmutation von Glutamat, Aspartat an Position 180 in der konservierten S1-S2-Schleife des Orai verwandelt sich die Ionen Selektivit&auml;t Eigenschaften des CRAC aktuelle von der Ca2 +-selektive mit nach innen Berichtigung selektiv f&uuml;r monovalenten kationen und &auml;u&szlig;erlich zur Berichtigung. Kostenlos-Neutralisierung Mutation an der gleichen Position (Glutamat, Alanin) fungiert als ein Dominant-negativen nichtleitenden Untereinheit. Andere kostenlos-Neutralisierung Mutanten im selben Loop express gro&szlig;e einw&auml;rtsgleichrichtenden CRAC aktuelle und zwei dieser Ausstellung reduziert die Sensibilit&auml;t f&uuml;r die Kanal-Blocker Gd3 +. Diese Ergebnisse zeigen, dass Orai selbst die Ca2 bildet +-Selektivit&auml;t Filter des CRAC Kanals.

Molekulare Identifizierung des CRAC Kanals durch ver&auml;nderte Ion Selektivit&auml;t in eine Mutante von Orai.

Schermi di interferenza RNA recenti hanno identificato diverse proteine che sono essenziali per negozio-operati Ca2 + afflusso e Ca2 + attivato dal rilascio Ca2 + attivit&agrave; del canale (CRAC) in Drosophila e nei mammiferi, tra cui le proteine transmembrane Stim (molecola di interazione stromale) e Orai. Stim probabilmente funziona come un sensore di luminal Ca2 + contenuto e innesca l&#39;attivazione dei canali CRAC nella membrana superficiale dopo il negozio di deplezione di Ca2 +. Tra i tre umani omologhi di Orai (noto anche come olf186-F), ORAI1 sul cromosoma 12 &egrave; stato trovato per essere mutato in pazienti affetti da immunodeficienza combinata grave, ed espressione del selvaggio-tipo Orai1 restaurato Ca2 + afflusso e attivit&agrave; del canale CRAC nel paziente cellule T. La sovraespressione di Stim e Orai insieme aumenta marcatamente CRAC corrente. Tuttavia, non &egrave; ancora chiaro se Stim o Orai in realt&agrave; costituisce il canale CRAC, o se la loro espressione limita semplicemente CRAC canale attivit&agrave; mediata da una subunit&agrave; che formano canali differente. Qui ci mostra che l&#39;interazione tra il selvaggio-tipo Stim e Orai, valutato da co-immunoprecipitazione, &egrave; notevolmente migliorato dopo trattamento con thapsigargin per indurre il negozio deplezione di Ca2 +. Da mutagenesi luogo-diretta, ci mostra che una mutazione puntiforme da glutammato di aspartato nella posizione 180 nel ciclo S1-S2 conservato dell&#39;Orai trasforma le propriet&agrave; di selettivit&agrave; dello ione di corrente da essere Ca2 + CRAC-selettiva con rettificazione interiore ad essere selettivi per cationi monovalenti e rettifica esteriormente. Una carica-neutralizzante mutazione nella stessa posizione (glutammato di alanina) agisce come una subunit&agrave; non conduttore dominante-negativo. Altri mutanti carica-neutralizzante nel ciclo stesso esprimono grandi CRAC interiormente rettifica attuale, e due di questi esposizione ridotta sensibilit&agrave; all&#39;antagonista Gd3 +. Questi risultati indicano che Orai si formi il Ca2 +-filtro di selettivit&agrave; del canale CRAC.

Identificazione molecolare del canale CRAC di selettivit&agrave; dello ione alterato in un mutante di Orai.

&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x3068;Ca2 +&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;+&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#xFF08;&#x9593;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#xFF09;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x5185;&#x8154;&#x306E;Ca2 +&#x542B;&#x91CF;&#x306E;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;Ca2&#x5F8C;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x819C;&#x306E;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;+&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 12&#x756A;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E0A;&#x306E;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x76F8;&#x540C;&#x4F53;&#xFF08;&#x307E;&#x305F;olf186-F&#x3068;&#x3082;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#xFF09;&#x3001;ORAI1&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x91CD;&#x75C7;&#x8907;&#x5408;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x3067;&#x5909;&#x7570;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;Orai1&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Ca 2 +&#x6D41;&#x5165;&#x3068;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x8457;&#x3057;&#x304F;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x3084;&#x5F80;&#x6765;&#x304C;&#x5B9F;&#x969B;&#x306B;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x306B;&#x5225;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x307E;&#x3060;&#x660E;&#x78BA;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5171;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8A55;&#x4FA1;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x3001;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;Ca2 +&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x67AF;&#x6E07;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30D7;&#x30B7;&#x30AC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30F3;&#x3067;&#x51E6;&#x7406;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x306B;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;S1-S2&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;180&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x304B;&#x3089;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x3078;&#x306E;&#x70B9;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x4E00;&#x4FA1;&#x306E;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;&#x3067;&#x306E;Ca2 +&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304B;&#x3089;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x5909;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x5916;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;&#x3002;&#x540C;&#x3058;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x96FB;&#x8377;&#x4E2D;&#x548C;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x306B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#xFF09;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x975E;&#x5C0E;&#x96FB;&#x6027;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x540C;&#x3058;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5185;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x96FB;&#x8377;&#x4E2D;&#x548C;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5C55;&#x793A;&#x306E;2&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AB;&#x30FC;GD3 +&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x5F80;&#x6765;&#x81EA;&#x4F53;&#x306F;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;Ca2 +&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5F80;&#x6765;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6539;&#x5909;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x308B;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x540C;&#x5B9A;

&#xCD5C;&#xADFC; RNA &#xAC04;&#xC12D; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0; &#xB9E4;&#xC7A5; &#xC6B4;&#xC601; Ca2 + &#xC720;&#xC785; &#xBC0F; Ca2 + &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Ca2 +&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4; (CRAC) &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xBC0F; Stim (stromal &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBD84;&#xC790;) &#xBC0F; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;. &#xC544;&#xB9C8; Stim luminal Ca2 + &#xCF58;&#xD150;&#xCE20;&#xC758; &#xC13C;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD558;&#xBA70; Ca2 + &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xACE0;&#xAC08; &#xD6C4; &#xD45C;&#xBA74; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; (olf186 F)&#xC758; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC778;&#xAC04; homologues, &#xAC00;&#xC6B4;&#xB370; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; 12&#xC5D0; ORAI1 &#xC2EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558; &#xACE0; &#xD45C;&#xD604; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; Orai1 &#xBCF5;&#xC6D0; Ca2 + &#xC720;&#xC785; &#xBC0F; &#xD658;&#xC790;&#xC758; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;. Stim&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; overexpression &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xAC8C; CRAC &#xC804;&#xB958; &#xC99D;&#xAC00;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xAC83; &#xC544;&#xC9C1; Stim &#xB610;&#xB294; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xBD80; &#xB610;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC744; &#xB2E8;&#xC21C;&#xD788; &#xB2E4;&#xB978; &#xCC44;&#xB110; &#xD615;&#xC131; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC81C;&#xD55C; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xBA85;&#xD655; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; Stim &#xD560;&#xAE4C;&#xC694;, &#xACF5;&#xB3D9;-immunoprecipitation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3C9;&#xAC00; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; thapsigargin Ca2 + &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC18C;&#xBAA8;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xB41C; mutagenesis&#xB85C; &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; S1 S2 &#xB8E8;&#xD504;&#xC758; &#xC704;&#xCE58; 180&#xC5D0; aspartate&#xC758; &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; CRAC&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xC54A;&#xB3C4;&#xB85D; Ca2 +&#xC758; &#xC774;&#xC628; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xC18D;&#xC131; &#xBCC0;&#xD658; &#xD45C;&#xC2DC;-&#xC5EC;&#xB7EC;&#xCC28;&#xB840; &#xC591;&#xC774;&#xC628;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xB418; &#xACE0; &#xAC89;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; &#xC548;&#xCABD; &#xC815;&#xB958;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;. &#xAC19;&#xC740; &#xC704;&#xCE58; (&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; glutamate)&#xC5D0;&#xC11C; &#xCDA9;&#xC804;&#xC744; &#xC911;&#xD654; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC9C0;&#xBC30; &#xC74C;&#xC218;&#xAC00; &#xC544;&#xB2CC; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC694;&#xAE08;&#xC744; &#xC911;&#xD654; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xD070; &#xC18D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; CRAC &#xC804;&#xB958;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC804;&#xC2DC;&#xC758; &#xB450; &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C; Gd3 +&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBBFC;&#xAC10;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC790;&#xCCB4; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xD615;&#xC131; Ca2 +&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;-CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xD544;&#xD130;.

&#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xC774;&#xC628; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Recientes pantallas de interferencia de ARN se han identificado varias prote&#xED;nas que son esenciales para el almac&#xE9;n operado por influjo de Ca2 + y la liberaci&#xF3;n de Ca2 + activados por Ca2 + (CRAC) la actividad del canal en Drosophila y en mam&#xED;feros, incluida la transmembrana de prote&#xED;nas Stim (mol&#xE9;cula de la interacci&#xF3;n del estroma) y ORAI. Stim probablemente funcione como un sensor de Ca2 + contenido luminal y desencadena la activaci&#xF3;n de los canales CRAC en la membrana de la superficie despu&#xE9;s de Ca2 + el agotamiento de las tiendas. Entre los tres hom&#xF3;logos humanos de ORAI (tambi&#xE9;n conocido como olf186-F), ORAI1 en el cromosoma 12 se encontr&#xF3; que se encuentra mutado en pacientes con inmunodeficiencia combinada grave, y la expresi&#xF3;n de tipo salvaje Orai1 restaurado influjo de Ca2 + y la actividad de los canales CRAC en las c&#xE9;lulas T de pacientes . La sobreexpresi&#xF3;n de Stim y ORAI juntas aumenta notablemente actual CRAC. Sin embargo, no est&#xE1; claro si Stim o ORAI en realidad constituye el canal de CRAC, o si su expresi&#xF3;n, simplemente limita la actividad del canal CRAC mediada por un canal diferente de formaci&#xF3;n de la subunidad. Aqu&#xED; nos muestran que la interacci&#xF3;n entre la naturaleza y tipo de Stim y ORAI, evaluado por la co-inmunoprecipitaci&#xF3;n, es mucho mayor despu&#xE9;s del tratamiento con thapsigargin para inducir depleci&#xF3;n de Ca2 + tienda. Por mutag&#xE9;nesis dirigida al sitio, nos muestran que una mutaci&#xF3;n puntual de glutamato a aspartato en la posici&#xF3;n 180 en la conservadas S1-S2 bucle de ORAI transforma las propiedades de selectividad de iones de CRAC actual de ser Ca2 +-selectiva con rectificaci&#xF3;n hacia adentro para ser selectiva para los cationes monovalentes y exteriormente rectificar. Una mutaci&#xF3;n de carga neutralizante en la misma posici&#xF3;n (glutamato de alanina) act&#xFA;a como un dominante negativo no conductor subunidad. Otros neutralizaci&#xF3;n de carga de los mutantes en el mismo bucle expresar grandes por dentro rectificar CRAC actual, y dos de ellos presentan una menor sensibilidad al bloqueador del canal Gd3 +. Estos resultados indican que ORAI misma forma la Ca2 +-selectividad del filtro del canal CRAC.

Identificaci&#xF3;n molecular del Canal de la CRAC por selectividad i&#xF3;nica alterada en un mutante de ORAI

&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF; (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#xFF0C;&#x6253;&#x5F00;&#x540E;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x7ECF;&#x80DE;&#x5185;&#x5B58;&#x50A8;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x7ECF;&#x5165;&#x5883;&#x548C;&#x6301;&#x7EED; [Ca(2+)](i) &#x4FE1;&#x53F7;&#x8865;&#x5145;&#x7684;&#x5B58;&#x50A8;&#x533A;&#x4E2D;&#x591A;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x7279;&#x522B;&#x91CD;&#x8981;&#x7684; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7F3A;&#x5C11;&#x7684;&#x4E00;&#x73AF;&#xFF0C;&#x7531; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x53C2;&#x4E0E;&#x53D1;&#x8D77;&#x5E76;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x53F6;&#x6805;&#x6539;&#x53D8;&#x6700;&#x7EC8;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x751F;&#x4EA7;&#x4E2D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x3002;&#x8FC7;&#x53BB;&#x4E09;&#x5E74;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8FC7;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x5C4F;&#x5E55;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x89E6;&#x53D1;&#x5206;&#x5B50; &#xFF08;&#x4F34;&#xFF09; &#x94FE;&#x63A5;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x3001; &#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x548C;&#x5B54;&#x4E9A;&#x57FA; (&#x53E3;&#x8BED;) &#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5141;&#x8BB8;&#x7ECF;&#x79BB;&#x5B50;&#x5177;&#x6709;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x8F93;&#x5165;&#x5230;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x3002;

&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;

Ca(2+) release-activated Ca(2+) (CRAC) channels, located in the plasma membrane, are opened upon release of Ca(2+) from intracellular stores, permitting Ca(2+) entry and sustained [Ca(2+)](i) signaling that replenishes the store in numerous cell types. This mechanism is particularly important in T lymphocytes of the immune system, providing the missing link in the signal transduction cascade that is initiated by T cell receptor engagement and leads to altered expression of genes that results ultimately in the production of cytokines and cell proliferation. In the past three years, RNA interference screens together with over-expression and site-directed mutagenesis have identified the triggering molecule (Stim) that links store depletion to CRAC channel-mediated Ca(2+) influx and the pore subunit (Orai) of the CRAC channel that allows highly selective entry of Ca(2+) ions into cells.

Molecular basis of the CRAC channel.

Ca (2 +) &#xE0; lib&#xE9;ration activ&#xE9;s Ca (2 +) (CRAC) des canaux, situ&#xE9;s dans la membrane plasmique, sont ouvertes apr&#xE8;s la lib&#xE9;ration de Ca (2 +) &#xE0; partir des r&#xE9;serves intracellulaires, ce qui permet Ca (2 +) entr&#xE9;e et soutenue [Ca ( 2 +)] (i) de signalisation qui r&#xE9;approvisionne le magasin dans de nombreux types cellulaires. Ce m&#xE9;canisme est particuli&#xE8;rement important dans les lymphocytes T du syst&#xE8;me immunitaire, en fournissant le cha&#xEE;non manquant dans la cascade de transduction du signal qui est initi&#xE9;e par l&#x26;#39;engagement r&#xE9;cepteur de cellules T et conduit &#xE0; l&#x26;#39;expression de g&#xE8;nes modifi&#xE9;s qui aboutit finalement &#xE0; la production de cytokines et la prolif&#xE9;ration cellulaire. Au cours des trois derni&#xE8;res ann&#xE9;es, l&#x26;#39;interf&#xE9;rence ARN &#xE9;crans avec sur-expression et de mutagen&#xE8;se dirig&#xE9;e ont identifi&#xE9; la mol&#xE9;cule d&#xE9;clenchant (Stim) que l&#x26;#39;appauvrissement de stocker des liens vers CRAC canal m&#xE9;diation Ca (2 +) et la sous-unit&#xE9; afflux des pores (Orai) de le canal qui permet l&#x26;#39;entr&#xE9;e du climatiseur hautement s&#xE9;lective de Ca (2 +) d&#x26;#39;ions dans les cellules.

Bases mol&#xE9;culaires de la Manche CRAC

Ca(2+) Freigabe aktiviert Ca(2+) (CRAC) Kan&auml;le, befindet sich in der Plasmamembran werden ge&ouml;ffnet, nach dem Loslassen des Ca(2+) von den intrazellul&auml;ren speichern, sch&ouml;nem Ca(2+) Eintrag und nachhaltige [Ca(2+)](i) signalisieren, die das Gesch&auml;ft in zahlreichen Zelltypen f&uuml;llt. Dieser Mechanismus ist besonders wichtig in T-Lymphozyten des Immunsystems, bietet das fehlende Glied in der Signal-Transduktion-Kaskade, die T-Zell-Rezeptor-Projekts initiiert und f&uuml;hrt zu ver&auml;nderte Expression von Genen, die schlie&szlig;lich f&uuml;hrt in die Produktion von Zytokinen und Cell Proliferation. In den letzten drei Jahren haben RNA-Interferenz-Bildschirme zusammen mit &Uuml;berexpression und Site-verwiesene Mutagenese das ausl&ouml;sende Molek&uuml;l (Stim) identifiziert, dass Links speichern Ersch&ouml;pfung CRAC Kanal-vermittelte Ca(2+) Zustrom und die Pore-Untereinheit (Orai) des CRAC Kanals, die hochselektive Eintrag Ca(2+)-Ionen in die Zellen erm&ouml;glicht.

Molekulare Grundlage des CRAC Kanals.

CA(2+) attivato dal rilascio Ca(2+) (CRAC) canali, che si trova nella membrana del plasma, sono aperti dopo il rilascio di Ca(2+) dai depositi intracellulari, permettendo Ca(2+) voce e sostenuta [Ca(2+)](i) segnalazione che riempie il negozio in numerosi tipi di cellule. Questo meccanismo &egrave; particolarmente importante nei linfociti T del sistema immunitario, che forniscono il collegamento mancante nella cascata di trasduzione del segnale viene avviato dall&#39;impegno del recettore delle cellule T, che conduce alla alterata espressione dei geni che si traduce in definitiva la produzione di citochine e delle cellule di proliferazione. Negli ultimi tre anni, gli schermi di interferenza RNA insieme con sovraespressione e mutagenesi luogo-diretta hanno identificato la molecola scatenante (Stim) che link negozio deplezione di CRAC canale-mediata Ca(2+) afflusso e la subunit&agrave; poro (Orai) del canale CRAC che permette l&#39;ingresso altamente selettivo di ioni Ca(2+) in cellule.

Basi molecolari del canale CRAC.

Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x8A31;&#x53EF;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8CAF;&#x8535;&#x304B;&#x3089;&#x306E;Ca&#x653E;&#x51FA;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306B;&#x958B;&#x304B;&#x308C;&#x305F;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3001;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x3014;Ca&#xFF08; 2 +&#xFF09;]&#xFF08;i&#xFF09;&#x306E;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x306E;&#x5E97;&#x8217;&#x3092;&#x88DC;&#x5145;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x958B;&#x59CB;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3084;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306B;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30DF;&#x30C3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x3067;&#x306F;&#x7279;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x904E;&#x53BB;3&#x5E74;&#x9593;&#x306B;&#x3001;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x6CD5;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306F;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3068;&#x306E;&#x7D30;&#x5B54;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;&#x5F80;&#x6765;&#xFF09;&#x3078;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x67AF;&#x6E07;&#x305D;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x5206;&#x5B50;&#xFF08;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#xFF09;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3078;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3002;

CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x76E4;

Ca(2+) &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD65C;&#xC131; Ca(2+) (CRAC) &#xCC44;&#xB110;, &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; Ca(2+) &#xD56D;&#xBAA9;&#xC640; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; [Ca(2+)](i) &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xBAA8;&#xC544;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC0C1;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; ca(2+)&#xC758; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC5F0;. &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xBCC0;&#xACBD; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xCC38;&#xC5EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DC;&#xC791; &#xB418; &#xACE0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xCE90;&#xC2A4;&#xCF00;&#xC774;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xB204;&#xB77D; &#xB41C; &#xB9C1;&#xD06C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xD2B9;&#xD788; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBA74;&#xC5ED; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; cytokines &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xC9C0;&#xB09C; 3 &#xB144; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0;&#xC11C; over-expression &#xBC0F; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xB41C; mutagenesis RNA &#xAC04;&#xC12D; &#xD654;&#xBA74; &#xB9C1;&#xD06C; &#xC800;&#xC7A5; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xC911;&#xC7AC; Ca(2+) &#xC720;&#xC785; &#xBC0F; &#xC140;&#xC73C;&#xB85C; Ca(2+) &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAE30; &#xACF5; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; (&#xD560;&#xAE4C;&#xC694;)&#xC744; &#xACE0;&#xAC08; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; &#xBD84;&#xC790; (Stim) &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xC900;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ca (2 +) activados por la liberaci&#xF3;n de Ca (2 +) (CRAC), ubicadas en los canales de la membrana plasm&#xE1;tica, se abri&#xF3; tras la liberaci&#xF3;n de Ca (2 +) de los almacenes intracelulares, permitiendo Ca (2 +) de entrada y sostenida [Ca ( 2 +)] (i) de se&#xF1;alizaci&#xF3;n que repone la tienda en numerosos tipos de c&#xE9;lulas. Este mecanismo es particularmente importante en los linfocitos T del sistema inmune, proporcionando el eslab&#xF3;n perdido en la cascada de transducci&#xF3;n de se&#xF1;al que es iniciado por el acoplamiento del receptor de c&#xE9;lulas T y conduce a la expresi&#xF3;n de genes alterados que conduce finalmente a la producci&#xF3;n de citoquinas y la proliferaci&#xF3;n celular. En los &#xFA;ltimos tres a&#xF1;os, la interferencia de ARN pantallas, junto con la sobre-expresi&#xF3;n y la mutag&#xE9;nesis dirigida al sitio se han identificado la mol&#xE9;cula de activaci&#xF3;n (STIM) que une el agotamiento de la tienda para canales CRAC-mediada por Ca (2 +) influjo y la subunidad de los poros (ORAI) de el canal CRAC que permite la entrada altamente selectivo de Ca (2 +) iones en las c&#xE9;lulas.

Bases moleculares del Canal de la CRAC

&#x9AD8;&#x6548;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9700;&#x8981;&#x957F;&#x6548;&#x9499;&#x6D8C;&#x5165;&#x9499;&#x91CA;&#x653E;&#x6D3B;&#x6027;&#x9499; (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x6E20;&#x9053;&#x548C; (IS) &#x4E0E;&#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE; (APC) &#x7A33;&#x5B9A;&#x514D;&#x75AB;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1; RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#x5DF2;&#x67E5;&#x660E;&#x4F34;&#x548C;&#x679C;&#x8747;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x548C;&#x5176;&#x76F8;&#x5E94;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x540C;&#x6E90; STIM1 &#x548C; Orai1 &#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; STIM1 &#x548C; Orai1 &#x88AB;&#x5F81;&#x8058;&#x5230;&#x4E3B;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x81EA;&#x4F53;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7A81;&#x89E6;&#x3002;&#x5728;&#x4F11;&#x606F;&#x6216; super-antigen &#xFF08;SEB&#xFF09; &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x65B9;&#x9762;&#x79EF;&#x7D2F;&#x4E86; STIM1 &#x548C; Orai1-&#x9884;&#x5904;&#x7406; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; SEB &#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5728;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x88AB; colocalized &#x5171;&#x523A;&#x6FC0;&#x5206;&#x5B50;&#x4E0E; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53; (TCR)&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728;&#x6EE1;&#x8F7D; EGTA T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x6210;&#x50CF;&#x5927;&#x5927;&#x900F;&#x9732;&#x9AD8; Ca2 + &#x6D53;&#x5EA6;&#x9644;&#x8FD1;&#x63A5;&#x53E3;&#xFF0C;Ca2 + &#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x503C;&#x6307;&#x793A;&#x5728; T &#x7EC6;&#x80DE;/&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63A5;&#x89E6;&#x9762;&#x79EF;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;Orai1 &#x663E;&#x6027;&#x8D1F;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x963B;&#x6B62; T &#x7EC6;&#x80DE; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5E72;&#x6D89;&#x7684; STIM1&#x3001; Orai1 &#x548C;&#x63A5;&#x89E6;&#x533A; CD3 &#x521D;&#x59CB;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x7206;&#x70B8;&#x9020;&#x6210;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; STIM1 &#x548C;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x79CD;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x4E0A;&#x8C03;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6; Ca2 + &#x901A;&#x8FC7;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6E20;&#x9053;&#x6D41;&#x5165;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x53CD;&#x9988;&#x56DE;&#x8DEF;&#x7684;&#x521D;&#x59CB; TCR &#x4FE1;&#x53F7;&#x770B;&#x597D; STIM1 &#x4E0A;&#x8C03;&#x548C;&#x53E3;&#x8BED;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4F1A;&#x589E;&#x52A0; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x968F;&#x540E;&#x6297;&#x539F;&#x671F;&#x95F4;&#x9047;&#x5230;&#x3002;

Orai1 &#x548C; STIM1 &#x79FB;&#x52A8;&#x5230;&#x514D;&#x75AB;&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#xFF0C;&#x4E0A;&#x8C03;&#x5728; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

For efficient development of an immune response, T lymphocytes require long-lasting calcium influx through calcium release-activated calcium (CRAC) channels and the formation of a stable immunological synapse (IS) with the antigen-presenting cell (APC). Recent RNAi screens have identified Stim and Orai in Drosophila cells, and their corresponding mammalian homologs STIM1 and Orai1 in T cells, as essential for CRAC channel activation. Here, we show that STIM1 and Orai1 are recruited to the immunological synapse between primary human T cells and autologous dendritic cells. Both STIM1 and Orai1 accumulated in the area of contact between either resting or super-antigen (SEB)-pretreated T cells and SEB-pulsed dendritic cells, where they were colocalized with T cell receptor (TCR) and costimulatory molecules. In addition, imaging of intracellular calcium signaling in T cells loaded with EGTA revealed significantly higher Ca2+ concentration near the interface, indicating Ca2+ influx localized at the T cell/dendritic cell contact area. Expression of a dominant-negative Orai1 mutant blocked T cell Ca2+ signaling but did not interfere with the initial accumulation of STIM1, Orai1, and CD3 in the contact zone. In activated T cell blasts, mRNA expression for endogenous STIM1 and all three human homologs of Orai was up-regulated, accompanied by a marked increase in Ca2+ influx through CRAC channels. These results imply a positive feedback loop in which an initial TCR signal favors up-regulation of STIM1 and Orai proteins that would augment Ca2+ signaling during subsequent antigen encounter.

Orai1 and STIM1 move to the immunological synapse and are up-regulated during T cell activation.

Pour un d&#xE9;veloppement efficace d&#x26;#39;une r&#xE9;ponse immunitaire, les lymphocytes T n&#xE9;cessite l&#x26;#39;influx de calcium de longue dur&#xE9;e par le biais de calcium lib&#xE9;ration de calcium activ&#xE9;s (CRAC) des canaux et la formation d&#x26;#39;une synapse immunologique stable (IS) avec la cellule pr&#xE9;sentatrice d&#x26;#39;antig&#xE8;ne (APC). Derni&#xE8;res &#xE9;crans ARNi ont identifi&#xE9; Stim et Orai dans les cellules de drosophile, et leurs correspondants homologues mammif&#xE8;res STIM1 et Orai1 dans les cellules T, comme essentiels pour l&#x26;#39;activation du canal CRAC. Ici, nous montrons que STIM1 et Orai1 sont recrut&#xE9;s &#xE0; la synapse immunologique entre les lymphocytes T primaires humains et des cellules dendritiques autologues. Les deux STIM1 et Orai1 accumul&#xE9;e dans la zone de contact entre deux repos ou super-antig&#xE8;ne (SEB) pr&#xE9;trait&#xE9;s cellules T et SEB-cellules dendritiques puls&#xE9;es, o&#xF9; ils ont &#xE9;t&#xE9; colocalis&#xE9;s avec le r&#xE9;cepteur des cellules T (TCR) et les mol&#xE9;cules co-stimulatrices. En outre, l&#x26;#39;imagerie du calcium intracellulaire de signalisation dans les cellules T charg&#xE9;s de l&#x26;#39;EGTA a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; significativement plus &#xE9;lev&#xE9; Ca2 + de concentration pr&#xE8;s de l&#x26;#39;interface, indiquant Ca2 + influx localis&#xE9;e &#xE0; la cellule T / dendritique zone de contact cellulaire. Expression d&#x26;#39;un mutant dominant n&#xE9;gatif Orai1 bloqu&#xE9; cellules T Ca2 + de signalisation, mais ne pas interf&#xE9;rer avec l&#x26;#39;accumulation initiale de STIM1, Orai1, et CD3 dans la zone de contact. En activ&#xE9;s explosions des cellules T, expression de l&#x26;#39;ARNm pour STIM1 endog&#xE8;ne et tous les trois homologues de l&#x26;#39;homme des Orai &#xE9;tait r&#xE9;gul&#xE9;e &#xE0; la hausse, accompagn&#xE9;e d&#x26;#39;une augmentation marqu&#xE9;e de Ca2 + influx par les canaux CRAC. Ces r&#xE9;sultats impliquent une boucle de r&#xE9;troaction positive dans laquelle un signal initial TCR favorise la r&#xE9;gulation positive des prot&#xE9;ines STIM1 et Orai qui renforceraient Ca2 + de signalisation lors de la rencontre antig&#xE8;ne ult&#xE9;rieure.

Orai1 et STIM1 D&#xE9;placer vers la synapse immunologique et sont r&#xE9;gul&#xE9;s &#xE0; la hausse lors de l&#x26;#39;activation des lymphocytes T

F&uuml;r die effiziente Entwicklung einer Immunantwort erfordern die T-Lymphozyten langlebige Kalzium Zustrom durch Kalzium aktivierte Version Kalzium (CRAC) Kan&auml;le und die Bildung einer stabilen immunologische Synapse (IS) mit der Antigen-pr&auml;sentierenden Zelle (APC). Den letzten RNAi-Bildschirme haben Stim und Orai in Drosophila-Zellen und ihre entsprechenden S&auml;ugetier-UCP1 STIM1 und Orai1 in T-Zellen, als wesentlich f&uuml;r die CRAC Kanal Aktivierung identifiziert. Hier zeigen wir, dass STIM1 und Orai1 f&uuml;r die immunologische Synapse zwischen prim&auml;ren menschlichen T-Zellen und autologen dendritischen Zellen angeworben werden. STIM1 und Orai1 gesammelt im Bereich der Kontakt zwischen Ruhe- oder Super-antigen (SEB)-T-Zellen und SEB-gepulsten dendritischen Zellen, wo sie mit T-Zell-Rezeptor (TCR) und kostimulatorischen Molek&uuml;len colocalized waren vorbehandelt. Dar&uuml;ber hinaus ergab Bildgebung von intrazellul&auml;ren Calcium signalisieren in T-Zellen geladen mit EGTA deutlich h&ouml;herer Ca2 + Konzentration in der N&auml;he der Schnittstelle angibt, Ca2 + Zustrom an die T-Zelle/Dendritische Zelle Kontaktfl&auml;che lokalisiert. Ausdruck der Dominant-negativen Orai1 Mutanten blockiert T-Zelle Ca2 + signalisieren jedoch die erste Ansammlung von STIM1, Orai1 und CD3 in der Kontaktzone nicht st&ouml;ren. Aktivierte T-Zelle Blasten war mRNA Ausdruck f&uuml;r endogene STIM1 und alle drei menschlichen UCP1 von Orai oben-geregelt, begleitet von einem deutlichen Anstieg der Ca2 + Zustrom durch CRAC-Kan&auml;le. Diese Ergebnisse bedeuten eine positive Feedback-Schleife, in der ein Ausgangssignal von TCR bevorzugt bis-Regelung der STIM1 und Orai Proteine, die Ca2 + Signalisierung w&auml;hrend nachfolgende Antigen erg&auml;nzen w&uuml;rde zu begegnen.

Orai1 und STIM1 in der immunologischen Synapse verschieben und w&auml;hrend der T-Zell-Aktivierung sind oben-geregelt.

Per uno sviluppo efficiente di una risposta immunitaria, i linfociti T richiedono duraturo afflusso di calcio attraverso i canali di calcio calcio attivato dal rilascio (CRAC) e la formazione di una sinapsi immunologica stabile (IS) con le cellule presentanti l&#39;antigene (APC). Schermi RNAi recenti hanno identificato Stim e Orai nelle cellule di Drosophila e loro corrispondenti omologhi dei mammiferi STIM1 e Orai1 in cellule T, come essenziale per l&#39;attivazione del canale CRAC. Qui, ci mostra che STIM1 e Orai1 sono reclutati per la sinapsi immunologica tra primarie umane delle cellule T e cellule dendritiche autologhe. STIM1 sia Orai1 accumulato nella zona di contatto tra riposo o super-antigen (SEB)-pretrattati cellule T e cellule dendritiche SEB-pulsato, dove essi erano colocalized con il recettore delle cellule T (TCR) e molecole di costimolazione. Inoltre, imaging del calcio intracellulare segnalazione in cellule T caricate con EGTA ha rivelato significativamente superiore Ca2 + concentrazione vicino l&#39;interfaccia, che indica Ca2 + afflusso localizzata presso l&#39;area di contatto delle cellule dendritiche/T cell. Espressione di un mutante Orai1 dominante-negativo bloccato T cell Ca2 + segnalazione ma non ha interferito con l&#39;accumulazione iniziale di STIM1, Orai1 e CD3 nella zona di Contatta. Nelle cellule T attivate blasti, espressione del mRNA per STIM1 endogeni e tutti i tre umani omologhi di Orai era up-regolato, accompagnato da un marcato aumento nell&#39;afflusso Ca2 + attraverso i canali CRAC. Questi risultati implicano un ciclo di feedback positivo, in cui un segnale iniziale TCR favorisce la up-regulation di STIM1 e Orai proteine che vuoi aumentare Ca2 + segnalazione durante successive antigene incontro.

Orai1 e STIM1 spostare la sinapsi immunologica e sono up-regolate durante l&#39;attivazione delle cellule T.

&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x304C;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;APC&#xFF09;&#x3068;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#xFF08;IS&#xFF09;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;RNAi&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306F;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;STIM1&#x3068;Orai1&#x3092;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;STIM1&#x3068;Orai1&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x30D2;&#x30C8;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x81EA;&#x5DF1;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x52D5;&#x54E1;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; STIM1&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4F11;&#x6B62;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x6297;&#x539F;&#xFF08;SEB&#xFF09;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304C;T&#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;TCR&#xFF09;&#x3068;&#x5171;&#x523A;&#x6FC0;&#x5206;&#x5B50;&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x305F;SEB-&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3068;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x9762;&#x7A4D;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;Orai1&#x4E21;&#x65B9;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;EGTA&#x3092;&#x642D;&#x8F09;&#x3057;&#x305F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;/&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x9762;&#x7A4D;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;Ca2 +&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;Ca2 +&#x306E;&#x754C;&#x9762;&#x8FD1;&#x508D;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;Orai1&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;Ca2 +&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x906E;&#x65AD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x63A5;&#x89E6;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;STIM1&#x3001;Orai1&#x3068;&#x3001;CD3&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;T&#x7D30;&#x80DE;&#x82BD;&#x7403;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;STIM1&#x306E;mRNA&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x76F8;&#x540C;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x306E;&#x8457;&#x3057;&#x3044;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x521D;&#x671F;&#x306E;TCR&#x4FE1;&#x53F7;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x3068;&#x306E;&#x906D;&#x9047;&#x306E;Ca2 +&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x3067;&#x3057;&#x3087;&#x3046;STIM1&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x652F;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x6B63;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Orai1&#x3068;STIM1 T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x79FB;&#x52D5;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;

&#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xCE7C;&#xC298; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131; &#xCE7C;&#xC298; (CRAC) &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC624;&#xB7AB;&#xB3D9;&#xC548; &#xCE7C;&#xC298; &#xC720;&#xC785; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC; (APC)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xBA74;&#xC5ED; &#xB0C5; (IS)&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; RNAi &#xD654;&#xBA74; Stim&#xC640; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD574;&#xB2F9; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; homologs STIM1 &#xBC0F; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; Orai1 CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; stim1&#xC640; orai1&#xB294; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xD5CC; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xB0C5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD734;&#xC2DD; &#xB610;&#xB294; super-antigen (SEB) &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC811;&#xCD09; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD95;&#xC801; &#xB41C; STIM1 &#xBC0F; Orai1-pretreated T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC149; &#xD384;&#xC2A4; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (TCR)&#xC640; costimulatory &#xBD84;&#xC790; colocalized &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; EGTA&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298;&#xC758; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCD09; &#xBA74;&#xC801;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; Ca2 + &#xB18D;&#xB3C4; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xADFC;&#xCC98; Ca2 + &#xC720;&#xC785; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; Orai1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; T &#xC140; Ca2 + &#xC2E0;&#xD638; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; STIM1, Orai1, CD3 &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD3ED;&#xBC1C; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC778;&#xAC04; homologs&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB0B4; STIM1 mRNA &#xC2DD;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4; &#xCD5C;&#xB300; &#xD1B5;&#xC81C; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Ca2 + &#xC720;&#xC785;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD568;&#xAED8;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xCD08;&#xAE30; TCR &#xC2E0;&#xD638; &#xD638;&#xC758; stim1&#xC758; &#xC5C5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; &#xBC0F; &#xD6C4;&#xC18D; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC911; Ca2 + &#xC2E0;&#xD638; &#xBCF4;&#xC644;&#xD560; &#xAC83; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xB8E8;&#xD504;&#xB97C; &#xC758;&#xBBF8;.

Orai1 &#xBC0F; STIM1 &#xBA74;&#xC5ED;&#xD559; &#xB0C5; &#xC774;&#xB3D9;&#xD55C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC704;&#xB85C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Para el desarrollo eficiente de una respuesta inmune, los linfocitos T de larga duraci&#xF3;n requieren la entrada de calcio a trav&#xE9;s de calcio activados por la liberaci&#xF3;n de calcio (CRAC) de canales y la formaci&#xF3;n de la sinapsis inmunol&#xF3;gica estable (IS) con la c&#xE9;lula presentadora de ant&#xED;geno (APC). Recientes pantallas de RNAi han identificado Stim y ORAI en las c&#xE9;lulas de Drosophila, y sus hom&#xF3;logos correspondientes de mam&#xED;feros y STIM1 Orai1 en las c&#xE9;lulas T, como esenciales para la activaci&#xF3;n de canales CRAC. Aqu&#xED;, mostramos que STIM1 y Orai1 son reclutados a la sinapsis inmunol&#xF3;gica entre las c&#xE9;lulas T humanas primarias y c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas aut&#xF3;logas. Tanto STIM1 y Orai1 acumulado en el &#xE1;rea de contacto entre cualquiera de reposo o super ant&#xED;geno-(SEB)-pretratados c&#xE9;lulas T y de SEB-pulsado c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas, donde fueron colocalized con receptor de c&#xE9;lulas T (TCR) y mol&#xE9;culas co-estimuladoras. Adem&#xE1;s, las im&#xE1;genes de calcio intracelular de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas T cargadas con EGTA revel&#xF3; Ca2 + significativamente mayor concentraci&#xF3;n cerca de la interfase, lo que indica Ca2 + afluencia localizada en la c&#xE9;lula T / &#xE1;rea dendr&#xED;tica contacto c&#xE9;lula. Expresi&#xF3;n de un mutante dominante negativo Orai1 bloqueado c&#xE9;lulas T Ca2 + se&#xF1;alizaci&#xF3;n, pero no interfieren con la acumulaci&#xF3;n inicial de STIM1, Orai1, y CD3 en la zona de contacto. En blastos de c&#xE9;lulas T activadas, la expresi&#xF3;n del mRNA de STIM1 end&#xF3;gena y los tres hom&#xF3;logos humanos de ORAI fue hasta reguladas, acompa&#xF1;ado por un marcado aumento en influjo de Ca2 + a trav&#xE9;s de los canales CRAC. Estos resultados implican un bucle de retroalimentaci&#xF3;n positiva en la que una primera se&#xF1;al de TCR favorece la regulaci&#xF3;n de prote&#xED;nas y STIM1 ORAI que aumentan Ca2 + de se&#xF1;alizaci&#xF3;n durante el encuentro de ant&#xED;geno posterior.

Orai1 y STIM1 Mover a la sinapsis inmunol&#xF3;gica y est&#xE1;n regulados durante la activaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T

&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7535;&#x6D41;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x4E0E; STIM1 &#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5F53; co-expressed &#x4E0E; STIM1&#xFF0C;Orai1 &#x611F;&#x5E94;&#x7535;&#x6D41;&#x5927;&#x5185;&#x5FC3;&#x6574;&#x6D41; Ca(2+) &#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x4E0E; Ca(2+) &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6162;&#x706D;&#x6D3B;&#x3002;Orai1 &#x70B9;&#x7A81;&#x53D8; &#xFF08;E106D&#xFF09; &#x6539;&#x53D8;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7ECF; (&#x7CFB;&#x7EDF;)-&#x50CF;&#x540C;&#x65F6;&#x4FDD;&#x7559;&#x5185;&#x5FC3;&#x7EA0;&#x6B63;&#x6211;&#x7684;&#x7535;&#x6D41;-V &#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; STIM1 &#x4E0E; Orai1 &#x7684; C &#x7AEF;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x5C31;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x751F;&#x6210;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5F53;&#x524D;&#x4E0D;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x3002;2 &#x5EFA;&#x4E1A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x76F8;&#x5BF9;&#x975E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5927;&#x7535;&#x6D41;&#x5728; STIM1 &#x548C; Orai3 &#x8F6C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;2 &#x5EFA;&#x4E1A;&#x4E5F;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x7ECF;&#x6D8C;&#x5165; Orai3 &#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x6216; STIM1 &#x7684;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;Orai3 &#x5F53;&#x524D;&#x8BF1;&#x5BFC; 2 &#x5EFA;&#x4E1A;&#x5C55;&#x51FA;&#x5916;&#x5411;&#x6574;&#x6D41;&#x548C;&#x4EE3;&#x8868;&#x6DF7;&#x5408;&#x7684;&#x9499;&#x548C;&#x5355;&#x4EF7;&#x5F53;&#x524D;&#x5916;&#x6765;&#x6210;&#x5206;&#x3002;Orai3 &#x5B54;&#x7A81;&#x53D8;&#x6291;&#x5236;&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425;&#x7ECF;&#x5165;&#x5883;&#x548C;&#x6CA1;&#x6709;&#x54CD;&#x5E94;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x6216;&#x589E;&#x52A0; 2 &#x5EFA;&#x4E1A;&#x643A;&#x5E26;&#x5927;&#x91CF;&#x7535;&#x6D41;&#x3002;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684; Orai1-3 &#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x8D1F;&#x8D23; 2-&#x5EFA;&#x4E1A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5F53;&#x524D;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x4ECE;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x5230;&#x7B2C;&#x4E09;&#x8DE8;&#x819C;&#x6BB5;&#x7684; Orai3 &#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x81F4; 2 &#x5EFA;&#x4E1A; Orai3 &#x5F53;&#x524D;&#x53EF;&#x80FD;&#x53CD;&#x6620;&#x6253;&#x5F00;&#x76F8;&#x5BF9;&#x975E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x5B54;&#x9699;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x5B58;&#x50A8;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

&#x5B58;&#x50A8;&#x4F9D;&#x8D56;&#x548C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x6A21;&#x5F0F;&#x8C03;&#x8282; Ca2 + &#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; Orai1 &#x548C; Orai3&#x3002;

We evaluated currents induced by expression of human homologs of Orai together with STIM1 in human embryonic kidney cells. When co-expressed with STIM1, Orai1 induced a large inwardly rectifying Ca(2+)-selective current with Ca(2+)-induced slow inactivation. A point mutation of Orai1 (E106D) altered the ion selectivity of the induced Ca(2+) release-activated Ca(2+) (CRAC)-like current while retaining an inwardly rectifying I-V characteristic. Expression of the C-terminal portion of STIM1 with Orai1 was sufficient to generate CRAC current without store depletion. 2-APB activated a large relatively nonselective current in STIM1 and Orai3 co-expressing cells. 2-APB also induced Ca(2+) influx in Orai3-expressing cells without store depletion or co-expression of STIM1. The Orai3 current induced by 2-APB exhibited outward rectification and an inward component representing a mixed calcium and monovalent current. A pore mutant of Orai3 inhibited store-operated Ca(2+) entry and did not carry significant current in response to either store depletion or addition of 2-APB. Analysis of a series of Orai1-3 chimeras revealed the structural determinant responsible for 2-APB-induced current within the sequence from the second to third transmembrane segment of Orai3. The Orai3 current induced by 2-APB may reflect a store-independent mode of CRAC channel activation that opens a relatively nonselective cation pore.

Store-dependent and -independent modes regulating Ca2+ release-activated Ca2+ channel activity of human Orai1 and Orai3.

On &#xE9;valu&#xE9;e courants induits par l&#x26;#39;expression d&#x26;#39;homologues humains de Orai avec STIM1 dans cellules r&#xE9;nales embryonnaires humaines. En cas de co-exprim&#xE9; avec STIM1, Orai1 induit une grande Ca vers l&#x26;#39;int&#xE9;rieur de redressement (2 +)-s&#xE9;lective courant avec Ca (2 +)-induite inactivation lente. Un mutation ponctuelle d&#x26;#39;Orai1 (E106D) modifi&#xE9; de la s&#xE9;lectivit&#xE9; ionique de l&#x26;#39;induit Ca (2 +) &#xE0; lib&#xE9;ration activ&#xE9; Ca (2 +) (CRAC) en forme de courant tout en conservant une caract&#xE9;ristique rectification entrante IV. Expression de la partie C-terminale de STIM1 avec Orai1 est suffisante pour g&#xE9;n&#xE9;rer du courant CRAC sans d&#xE9;pl&#xE9;tion magasin. 2-APB a activ&#xE9; un courant relativement important non s&#xE9;lectif dans STIM1 et Orai3 co-exprimant les cellules. 2-APB a &#xE9;galement induit Ca (2 +) dans l&#x26;#39;afflux Orai3 cellules exprimant sans &#xE9;puisement magasin ou co-expression de STIM1. Le courant induit par Orai3 2-APB expos&#xE9; de rectification vers l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur et une composante int&#xE9;rieure repr&#xE9;sentant un mixte de calcium et monovalent actuelle. Un mutant de pores de Orai3 inhib&#xE9;e magasin exploit&#xE9; Ca (2 +) d&#x26;#39;entr&#xE9;e et n&#x26;#39;a pas transporter le courant important dans la r&#xE9;ponse &#xE0; l&#x26;#39;appauvrissement de magasin ou l&#x26;#39;autre ou plus de 2-APB. Analyse d&#x26;#39;une s&#xE9;rie de Orai1-3 chim&#xE8;res r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; l&#x26;#39;d&#xE9;terminant structurel charg&#xE9; de 2-APB-courant induit au sein de la s&#xE9;quence de la deuxi&#xE8;me &#xE0; troisi&#xE8;me segment transmembranaire Orai3. Le courant induit par Orai3 2-APB refl&#xE8;te peut-&#xEA;tre un mode de magasin ind&#xE9;pendant de l&#x26;#39;activation du canal CRAC qui ouvre un pore cation relativement non s&#xE9;lectif.

Modes Store-d&#xE9;pendants et ind&#xE9;pendants de r&#xE9;gulation lib&#xE9;ration de Ca2 + activ&#xE9; par Ca 2 + canaliser l&#x26;#39;activit&#xE9; de l&#x26;#39;homme et Orai1 Orai3

Wir evaluieren Str&ouml;me induziert durch Ausdruck der menschlichen UCP1 von Orai zusammen mit STIM1 in menschlichen embryonalen Nierenzellen. Wenn co-expressed mit STIM1, Orai1 induziert einen gro&szlig;en einw&auml;rtsgleichrichtenden Ca(2+)-selektive Strom mit Ca(2+)-induzierten langsamen Inaktivierung. Der Punkt-Mutation des Orai1 (E106D) ver&auml;ndert die Ion-Selektivit&auml;t des induzierten Ca(2+) aktivierte Version V Ca(2+) (CRAC) - wie aktuell unter Beibehaltung einer Berichtigung ich innerlich - Merkmals. Ausdruck der C-terminalen Teil des STIM1 mit Orai1 war ausreichend, CRAC aktuelle ohne Speicher Ersch&ouml;pfung zu generieren. 2-APB aktiviert einen gro&szlig;en relativ unselektiv Strom in STIM1 und Orai3 co-expressing Zellen. 2-APB auch induzierte Ca(2+) Zustrom in Zellen ohne Speicher Ersch&ouml;pfung oder Koexpression von STIM1 Orai3 zum Ausdruck bringen. Der Orai3 Strom induziert durch 2-APB ausgestellt nach au&szlig;en Berichtigung und eine nach innen-Komponente, eine gemischte Kalzium und monovalenten Strom darstellt. Eine Pore-Mutante der Orai3 gehemmt Speicher zu bet&auml;tigende Ca(2+) Eintrag und nicht mit erheblichen Strom als Reaktion auf Speicher Ersch&ouml;pfung oder Zusatz von 2-APB. Analyse einer Reihe von Orai1-3 Chim&auml;ren offenbart strukturelle Determinanten f&uuml;r 2-APB-induzierte Strom innerhalb der Sequenz aus dem zweiten bis dritten Transmembran-Segment des Orai3 verantwortlich. Der Orai3 Strom induziert durch 2-APB kann einen Shop-unabh&auml;ngigen Modus des CRAC Kanal Aktivierung wider, die eine relativ unselektiv kation Pore &ouml;ffnet.

Shop-abh&auml;ngige und -unabh&auml;ngige-Modi, die Regulierung von Ca2 + Freigabe aktiviert Ca2 + Kanal Aktivit&auml;t des menschlichen Orai1 und Orai3.

Abbiamo valutato le correnti indotte dall&#39;espressione di umane omologhi di Orai insieme STIM1 in cellule renali embrionali umane. Quando co-expressed con STIM1, Orai1 indotta da una grande corrente interiormente rettifica Ca(2+)-selettiva con inattivazione lenta Ca(2+)-indotta. Una mutazione puntiforme del Orai1 (E106D) alterato la selettivit&agrave; dello ione di indotta Ca(2+) attivato dal rilascio caratteristica di Ca(2+) (CRAC) - come corrente mantenendo un interiormente che rettifica I - V. Espressione della porzione C-terminale del STIM1 con Orai1 era sufficiente per generare corrente senza negozio deplezione CRAC. 2-APB attivato una grande corrente relativamente selettivo nelle cellule co-expressing STIM1 e Orai3. 2-APB Ca(2+) afflusso anche indotta in cellule che esprimono Orai3 senza negozio deplezione o co-expression di STIM1. La corrente di Orai3 indotta da 2-APB esposto rettifica verso l&#39;esterno e una componente interiore che rappresenta un misto di calcio e monovalente corrente. Un mutante del poro di Orai3 inibito operati dal negozio Ca(2+) voce e non ha fatto trasportare corrente significativo in risposta a negozio di esaurimento o aggiunta di 2-APB. Analisi di una serie di Orai1-3 chimere rivelato determinante strutturale responsabile della corrente 2-APB-indotta all&#39;interno della sequenza dal secondo al terzo segmento transmembrana di Orai3. La corrente di Orai3 indotta da 2-APB potrebbe riflettere una modalit&agrave; indipendente dal negozio di attivazione canale CRAC che apre un poro cazione relativamente non selettivi.

Modalit&agrave; store-dipendente e - indipendenti che regolano Ca2 + attivato dal rilascio Ca2 + canale attivit&agrave; di Orai1 umano e Orai3.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x80CE;&#x5150;&#x814E;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;STIM1&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x76F8;&#x540C;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002; STIM1&#x3068;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;Orai1&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x9045;&#x3044;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3067;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;&#x6027;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;&#x6027;&#x306E;IV&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;Orai1&#xFF08;E106D&#xFF09;&#x306E;&#x70B9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x304C;&#x8A98;&#x767A;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002; Orai1&#x3068;STIM1&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x90E8;&#x5206;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x67AF;&#x6E07;&#x305B;&#x305A;&#x306B;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; 2-APB&#x306F;&#x3001;STIM1&#x3068;Orai3&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x975E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x96FB;&#x6D41;&#x304C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 2-APB&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x307E;&#x305F;&#x306F;STIM1&#x306E;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;Orai3&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 2-APB&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;Orai3&#x96FB;&#x6D41;&#x306F;&#x5916;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6DF7;&#x5408;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3068;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x4E00;&#x4FA1;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x5185;&#x90E8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Orai3&#x306E;&#x7D30;&#x5B54;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x307E;&#x305F;&#x306F;2-APB&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x904B;&#x3070;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; Orai1-3&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x200B;&#x200B;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;Orai3&#x306E;&#x7B2C;&#x4E09;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;2&#x756A;&#x76EE;&#x304B;&#x3089;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x5185;&#x306E;2-APB-&#x8A98;&#x5C0E;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 2-APB&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;Orai3&#x96FB;&#x6D41;&#x304C;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306B;&#x975E;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x7A7A;&#x5B54;&#x3092;&#x958B;&#x304D;&#x3001;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;Orai1&#x3068;Orai3&#x306E;Ca2 +&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; STIM1 &#xD568;&#xAED8; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xC778;&#xAC04; homologs&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB54C; stim1&#xC640; co-expressed, Orai1 Ca(2+) &#xC720;&#xB3C4; &#xB290;&#xB9B0; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD070; &#xC18D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; Ca(2+) &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xC720;&#xBC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Orai1&#xC758; &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (E106D) &#xBCC0;&#xACBD; &#xC720;&#xB3C4; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131; Ca(2+) (CRAC)-&#xAC19;&#xC740; &#xD55C; &#xB098;&#xB97C; &#xC815;&#xB958; &#xC548;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xC804;&#xB958;-V &#xD2B9;&#xC131;&#xC758; &#xC774;&#xC628; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4;. Orai1&#xC640; stim1&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; CRAC &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xACE0;&#xAC08; &#xC5C6;&#xC774; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD588;&#xB2E4;. 2 &#xC9C0;&#xBA85; STIM1 Orai3 co-expressing &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD070; &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xBE44;&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xD604;&#xC7AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. 2 &#xC9C0;&#xBA85; &#xB610;&#xD55C; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC18C;&#xBAA8; &#xB610;&#xB294; stim1&#xC758; co-expression &#xC5C6;&#xC774; orai3&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xC140;&#xC5D0; Ca(2+) &#xC720;&#xC785;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C;&#xB2E4;. 2 &#xC9C0;&#xBA85;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; Orai3 &#xD604;&#xC7AC; &#xC804;&#xC2DC; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; &#xBC0F; &#xD63C;&#xD569;&#xB41C; &#xCE7C;&#xC298;&#xACFC; &#xC5EC;&#xB7EC;&#xCC28;&#xB840; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC548;&#xCABD; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;. Orai3&#xC758; &#xAE30; &#xACF5; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Ca(2+) &#xD56D;&#xBAA9; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC6B4;&#xC601;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC18C;&#xBAA8; &#xB610;&#xB294; 2 &#xC9C0;&#xBA85;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xD734;&#xB300; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. Orai1 3 &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C;&#xC758; &#xC77C;&#xB828;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xAD6C;&#xC870; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; orai3&#xC758; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC81C; 3 &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; 2 &#xC9C0;&#xBA85; &#xC720;&#xB3C4; &#xC804;&#xB958;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC744; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. 2 &#xC9C0;&#xBA85;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; Orai3 &#xC804;&#xB958;&#xB294; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBE44;&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xAE30; &#xACF5; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xB3C5;&#xB9BD; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xBC18;&#xC601; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC800;&#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F;-&#xB3C5;&#xB9BD; &#xBAA8;&#xB4DC; &#xC870;&#xC808; Ca2 + &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Ca2 + &#xCC44;&#xB110; &#xC778;&#xAC04; Orai1 &#xBC0F; orai3&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;.

Se evaluaron las corrientes inducidas por la expresi&#xF3;n de hom&#xF3;logos humanos de ORAI junto con STIM1 en c&#xE9;lulas renales embrionarias humanas. Cuando se co-expresada con STIM1, Orai1 indujo una gran Ca interiormente rectificar (2 +)-selectiva actual con Ca (2 +) inducida por inactivaci&#xF3;n lenta. Una mutaci&#xF3;n puntual de Orai1 (E106D) modific&#xF3; la selectividad i&#xF3;nica del Ca inducida (2 +) de liberaci&#xF3;n activados por Ca (2 +) (CRAC)-como la actual, mientras que la retenci&#xF3;n de un interior rectificar caracter&#xED;stica IV. Expresi&#xF3;n de la porci&#xF3;n C-terminal de STIM1 con Orai1 era suficiente para generar corriente CRAC sin agotamiento tienda. 2-APB activa una corriente relativamente grande y no selectivo en STIM1 Orai3 compa&#xF1;eros de las c&#xE9;lulas que expresan. 2-APB tambi&#xE9;n indujo Ca (2 +) en el flujo Orai3 c&#xE9;lulas que expresan el agotamiento de la tienda o sin co-expresi&#xF3;n de la STIM1. La corriente Orai3 inducido por 2-APB exhibi&#xF3; rectificaci&#xF3;n hacia afuera y hacia adentro un componente que representa una mixta de calcio y monovalente actual. Un mutante de poro de Orai3 inhibe la tienda que funciona con Ca (2 +) de entrada y no llevan corriente significativa en respuesta al agotamiento del almac&#xE9;n de uno o adici&#xF3;n de 2-APB. El an&#xE1;lisis de una serie de Orai1-3 quimeras revel&#xF3; el determinante estructural responsable de 2-APB-corriente inducida dentro de la secuencia de la segunda a tercera segmento transmembrana de Orai3. La corriente inducida por Orai3 2-APB puede reflejar un modo de tienda independiente de la activaci&#xF3;n de los canales CRAC que se abre un poro de cationes relativamente selectivo.

Modos dependientes de almacenamiento y regulaci&#xF3;n independiente de Ca2 + Lanzamiento activado por Ca2 + actividad en el canal de los Derechos Humanos y Orai1 Orai3

Ca(2+) &#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF; (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x6E20;&#x9053;&#x57FA;&#x7840;&#x6301;&#x7EED;&#x7ECF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E2D;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x65E0;&#x6570;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER) &#x4ECE;&#x89E3;&#x653E;&#x540E;&#x7ECF;&#x3002;RNA &#x5E72;&#x6270;&#x6280;&#x672F;&#x7B5B;&#x9009;&#x65B9;&#x6CD5;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4F34;&#x548C;&#x53E3;&#x8BED;&#xFF0C;&#x5171;&#x540C;&#x5F62;&#x6210;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;&#x4F34;&#x611F;&#x5B98; ER &#x7ECF;&#x5B58;&#x50A8;&#x6D88;&#x8017;&#x548C;&#x7269;&#x7406;&#x65B9;&#x5F0F;&#x5C06;&#x6B64;&#x4FE1;&#x606F;&#x4E2D;&#x7EE7;&#x7531;&#x4ECE;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#x5230;&#x8DEF;&#x53E3;&#x6BD7;&#x90BB;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x3001; &#x8F6C;&#x8FD0;&#x548C;&#x53E3;&#x8BED;&#x4F53;&#x73B0;&#x4E86;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x6BDB;&#x5B54;&#x3002;&#x4F34;&#x548C;&#x53E3;&#x8BED;&#xFF0C;co &#x6C89;&#x6DC0;&#x548C; F&ouml;rster &#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5BC6;&#x5207;&#x4E92;&#x52A8;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7531;&#x53E3;&#x8BED;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x5F00;&#x653E;&#x3002;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x662F;&#x4E32;&#x8054;&#x4F53;&#x7684;&#x5B54;&#x9699;&#x5F62;&#x6210;&#x56F4;&#x7ED5;&#x4E2D;&#x592E;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x5728;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#x4E2D;&#x9884;&#x88C5;&#x548C;&#x8FD0;&#x8F93;&#xFF0C;&#x5176;&#x6700;&#x540E;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x6BD4;&#x5BF9;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x4E9A;&#x57FA;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A;&#x901A;&#x8FC7;&#x4EA4;&#x8054;&#x5728;&#x5B8C;&#x597D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88C2;&#x89E3;&#x540E;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x4E0D;&#x4EA4;&#x8054;&#x3001; &#x53E3;&#x8BED;&#x4E3B;&#x8981;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x5728;&#x9759;&#x606F;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x4F7F;&#x7528;&#x975E;&#x53D8;&#x6027;&#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP)-&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x8868;&#x660E;&#x4E24;&#x6B65;&#x5149;&#x6F02;&#x767D;&#xFF0C;&#x518D;&#x6B21;&#x7B26;&#x5408;&#x4E8C;&#x805A;&#x57FA;&#x5E95;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4F34;&#x80DE;&#x6D46;&#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x53E3;&#x8BED;&#x901A;&#x9053;&#x65E0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x6216;&#x6210; punctae &#x805A;&#x7C7B;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x7684;&#x7FA7;&#x57FA;&#x603B;&#x7AD9;&#x4E0E;&#x5171;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x8868;&#x8FBE;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E86;&#x5927;&#x591A;&#x662F;&#x56DB;&#x6B65;&#x6F02;&#x767D;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408; tetrameric &#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x5B66;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x6D3B;&#x52A8;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x4F34; C &#x603B;&#x7AD9;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4ECE;&#x800C;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x53E3;&#x8BED;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#xFF0C;dimerize&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x56DB;&#x805A;&#x7269;&#x72B6;&#x6001;&#x6784;&#x6210; Ca(2+) &#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x5B54;&#x9699;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5927;&#x4F1A;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x89E6;&#x53D1;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;

&#x5143;&#x4FE1;&#x9053;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4F34;&#x53E3;&#x8BED;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x4E8C;&#x805A;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

Ca(2+)-release-activated Ca(2+) (CRAC) channels underlie sustained Ca(2+) signalling in lymphocytes and numerous other cells after Ca(2+) liberation from the endoplasmic reticulum (ER). RNA interference screening approaches identified two proteins, Stim and Orai, that together form the molecular basis for CRAC channel activity. Stim senses depletion of the ER Ca(2+) store and physically relays this information by translocating from the ER to junctions adjacent to the plasma membrane, and Orai embodies the pore of the plasma membrane calcium channel. A close interaction between Stim and Orai, identified by co-immunoprecipitation and by FÃ¶rster resonance energy transfer, is involved in the opening of the Ca(2+) channel formed by Orai subunits. Most ion channels are multimers of pore-forming subunits surrounding a central channel, which are preassembled in the ER and transported in their final stoichiometry to the plasma membrane. Here we show, by biochemical analysis after cross-linking in cell lysates and intact cells and by using non-denaturing gel electrophoresis without cross-linking, that Orai is predominantly a dimer in the plasma membrane under resting conditions. Moreover, single-molecule imaging of green fluorescent protein (GFP)-tagged Orai expressed in Xenopus oocytes showed predominantly two-step photobleaching, again consistent with a dimeric basal state. In contrast, co-expression of GFP-tagged Orai with the carboxy terminus of Stim as a cytosolic protein to activate the Orai channel without inducing Ca(2+) store depletion or clustering of Orai into punctae yielded mostly four-step photobleaching, consistent with a tetrameric stoichiometry of the active Orai channel. Interaction with the C terminus of Stim thus induces Orai dimers to dimerize, forming tetramers that constitute the Ca(2+)-selective pore. This represents a new mechanism in which assembly and activation of the functional ion channel are mediated by the same triggering molecule.

The CRAC channel consists of a tetramer formed by Stim-induced dimerization of Orai dimers.

Ca (2 +)-release-activated Ca (2 +) (CRAC) des canaux sous-tendent soutenue Ca (2 +) de signalisation dans les lymphocytes et les cellules de nombreux autres, apr&#xE8;s Ca (2 +) la lib&#xE9;ration par le r&#xE9;ticulum endoplasmique (RE). Le d&#xE9;pistage se rapproche de l&#x26;#39;interf&#xE9;rence ARN a identifi&#xE9; deux prot&#xE9;ines, la STIM et Orai, qui, ensemble, forment la base mol&#xE9;culaire de l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal CRAC. Stim sens appauvrissement de la Ca ER (2 +) et des relais magasin physiquement cette information par la translocation du RE vers jonctions adjacentes &#xE0; la membrane plasmique, et Orai incarne le pore du canal &#xE0; plasma de calcium membrane. Une interaction &#xE9;troite entre Stim et Orai, identifi&#xE9;s par co-immunopr&#xE9;cipitation et par le transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance F&#xF6;rster, est impliqu&#xE9; dans l&#x26;#39;ouverture de la Ca (2 +) canal form&#xE9; par les sous-unit&#xE9;s Orai. La plupart des canaux ioniques sont des multim&#xE8;res de porog&#xE8;nes sous-unit&#xE9;s entourant un canal central, qui sont pr&#xE9;-assembl&#xE9;s dans le RE et transport&#xE9;s dans leur stoechiom&#xE9;trie finale &#xE0; la membrane plasmique. Ici, nous montrons, par analyse biochimique apr&#xE8;s r&#xE9;ticulation dans les lysats cellulaires et des cellules intactes et en utilisant l&#x26;#39;&#xE9;lectrophor&#xE8;se sur gel non d&#xE9;naturant sans r&#xE9;ticulation, qui est principalement Orai un dim&#xE8;re dans la membrane plasmique dans des conditions de repos. Par ailleurs, une seule mol&#xE9;cule d&#x26;#39;imagerie de la prot&#xE9;ine fluorescente verte (GFP)-&#xE9;tiquet&#xE9; Orai exprim&#xE9; dans des ovocytes de Xenopus a montr&#xE9; principalement en deux &#xE9;tapes photoblanchiment, encore une fois compatible avec un &#xE9;tat dim&#xE9;rique basale. En revanche, la co-expression de la GFP-tagged Orai avec l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; carboxy de Stim comme une prot&#xE9;ine cytosolique pour activer le canal Orai sans induire Ca (2 +) l&#x26;#39;&#xE9;puisement magasin ou le regroupement des Orai en punctae c&#xE9;d&#xE9; la plupart du temps en quatre &#xE9;tapes photoblanchiment, compatible avec une stoechiom&#xE9;trie t&#xE9;tram&#xE9;rique de la voie active Orai. Interaction avec l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; C-terminale de Stim induit donc les dim&#xE8;res Orai &#xE0; dim&#xE9;riser, des t&#xE9;tram&#xE8;res formant constituant le Ca (2 +)-s&#xE9;lective des pores. Cela repr&#xE9;sente un nouveau m&#xE9;canisme dans lequel l&#x26;#39;assemblage et l&#x26;#39;activation du canal ionique fonctionnelle sont m&#xE9;di&#xE9;s par la m&#xEA;me mol&#xE9;cule de d&#xE9;clenchement.

Le canal CRAC compose d&#x26;#39;un t&#xE9;tram&#xE8;re Form&#xE9; par Stim-induite dim&#xE9;risation des Orai dim&#xE8;res

Ca(2+) Freigabe-aktivierte Ca(2+) (CRAC) Kan&auml;le zugrunde liegen, nachhaltig Ca(2+) Signalisierung in Lymphozyten und zahlreiche andere Zellen nach Ca(2+) Befreiung aus dem Endoplasmatischen Retikulum (ER). RNA-Interferenz screening Ans&auml;tze identifiziert zwei Proteine, Stim und Orai, diese bilden zusammen die molekulare Grundlage f&uuml;r CRAC-Channel-Aktivit&auml;ten. STIM sp&uuml;rt Ersch&ouml;pfung des Speichers ER Ca(2+) und physisch leitet diese Informationen von translocating aus dem ER zu Kreuzungen angrenzend an die Plasmamembran und Orai verk&ouml;rpert die Poren von der Plasmamembran-Kalzium-Kanal. Eine enge Interaktion zwischen Stim und Orai, identifiziert durch co-Immunopr&auml;zipitation und F&ouml;rster-Resonanz-Energie-Transfer, engagiert sich bei der &Ouml;ffnung des Ca(2+) Kanals durch Orai Untereinheiten gebildet. Die meisten Ionenkan&auml;le sind Multimere Pore bilden Untereinheiten, die rund um einen zentralen Kanal, die in der Notaufnahme vormontiert und in ihrer endg&uuml;ltigen St&ouml;chiometrie um die Plasmamembran transportiert. Hier zeigen wir, durch biochemische Analysen nach Vernetzung im Zelllysate und intakten Zellen und mithilfe nicht-Denaturierung Gelelektrophorese ohne Vernetzung, dass Orai &uuml;berwiegend ein Dimer in der Plasmamembran ist unter Ruhe-Bedingungen. Dar&uuml;ber hinaus Einzelmolek&uuml;l-Bildgebung des gr&uuml;n fluoreszierenden Proteins (GFP)-markierte Orai ausgedr&uuml;ckt in Xenopus Oocytes zeigten &uuml;berwiegend zweistufigen Photobleaching, mit einem dimeren basale Zustand wieder konsistent. Im Gegensatz dazu hat Koexpression von GFP-getaggten Orai mit das Carboxy-Terminus der Stim als ein Cytosolisches Protein, Orai-Kanal zu aktivieren, ohne ausl&ouml;sende Ca(2+) Speicher Ersch&ouml;pfung oder clustering von Orai in Punctae meist vier Schritten Photobleaching, mit einem tetrameren St&ouml;chiometrie des aktiven Kanals Orai ergeben. Interaktion mit der Carboxyl-Terminus der Stim induziert somit Orai Dimere zu Mitgliedern bilden, bilden tetrameren, die die Ca(2+)-selektiven Poren bilden. Dies stellt einen neuen Mechanismus, der in dem Versammlung und der Aktivierung der funktionalen Ionenkanal durch das gleiche ausl&ouml;sende Molek&uuml;l vermittelt werden.

Der CRAC-Kanal besteht aus einem Tetramer von Stim-induzierte Dimerisierung des Orai Dimer gebildet.

CA(2+)-rilascio-attivato canali Ca(2+) (CRAC) sottostanno sostenuta Ca(2+) segnalazione nei linfociti e numerose altre cellule dopo la liberazione di Ca(2+) dal reticolo endoplasmatico (ER). RNA interference approcci di screening identificato due proteine, Stim e Orai, che insieme formano la base molecolare per attivit&agrave; del canale CRAC. Stim senses deplezione del negozio ER Ca(2+) e fisicamente inoltra questa informazione da translocating da ER per giunzioni adiacente alla membrana del plasma, e Orai incarna il poro del canale del calcio della membrana plasmatica. Una stretta interazione tra Stim e Orai, identificato da co-immunoprecipitazione e dal trasferimento di energia per risonanza, &egrave; coinvolto nell&#39;apertura del canale Ca(2+) formato da subunit&agrave; Orai. La maggior parte dei canali ionici sono multimeri di poro-formazione delle subunit&agrave; che circondano un canale centrale, che sono preassemblati in ER e trasportati nella loro stechiometria finale alla membrana del plasma. Qui vi mostriamo, da analisi biochimica dopo cross-linking in cellule intatte e lisati cellulari e tramite elettroforesi su gel non denaturante senza cross-linking, che Orai &egrave; principalmente un dimero nella membrana del plasma in condizioni di riposo. Inoltre, imaging di singola molecola della proteina fluorescente verde (GFP)-tagged Orai espressa in ovociti di Xenopus ha mostrato principalmente in due fasi photobleaching, ancora una volta coerente con uno stato basale dimerica. Al contrario, co-expression di Orai GFP-etichettato con il capolinea di carboxy della Stim come una proteina citosolica per attivare il canale Orai senza indurre deplezione negozio Ca(2+) o clustering di Orai in punctae ceduto principalmente quattro fasi photobleaching, coerente con una stechiometria tetramerica del canale attivo Orai. Interazione con il C-terminale di Stim induce cos&igrave; Orai dimeri a dimerize, formando tetrameri che costituiscono il poro Ca(2+)-selettivo. Questo rappresenta un nuovo meccanismo in cui montaggio e attivazione del canale ionico funzionali sono mediati dalla stessa molecola scatenante.

Il canale CRAC &egrave; costituito da un tetramero formato da Stim-indotta di dimerizzazione di dimeri Orai.

&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304C;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x89E3;&#x653E;&#xFF08;ER&#xFF09;&#x306E;&#x5F8C;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x6301;&#x7D9A;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x3002; RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B;2&#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x306B;&#x8FD1;&#x3065;&#x304F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B;&#x63A5;&#x5408;&#x306B;ER&#x304B;&#x3089;&#x8EE2;&#x4F4D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;ER&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x3068;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306B;&#x30EA;&#x30EC;&#x30FC;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x611F;&#x899A;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x306F;&#x3001;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30DD;&#x30A2;&#x3092;&#x4F53;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5171;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x3055;&#x3068;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x958B;&#x53E3;&#x90E8;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x200B;&#x200B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x3067;&#x8F38;&#x9001;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x4E2D;&#x592E;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x3001;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x7D30;&#x5B54;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x591A;&#x91CF;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5F80;&#x6765;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x5B89;&#x9759;&#x6642;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x3001;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x67B6;&#x6A4B;&#x5F8C;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x975E;&#x5909;&#x6027;&#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;1&#x5206;&#x5B50;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;GFP&#xFF09;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x304D;&#x5F80;&#x6765;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x306F;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x518D;&#x3073;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;2&#x3064;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x9000;&#x8272;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;punctae&#x306B;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3084;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x5F80;&#x6765;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30BE;&#x30EB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;GFP&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;4&#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x5149;&#x9000;&#x8272;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x5F80;&#x6765;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x3002;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x5B54;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x3001;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x5F80;&#x6765;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x5F80;&#x6765;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x8A98;&#x8D77;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;

Ca(2+) &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD65C;&#xC131; Ca(2+) (CRAC) &#xCC44;&#xB110; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; Ca(2+) endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;)&#xC5D0;&#xC11C; Ca(2+) &#xD574;&#xBC29; &#xD6C4; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xAE30;&#xBC18;&#xC774; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; RNA &#xAC04;&#xC12D; &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, Stim &#xACE0; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694;, &#xD568;&#xAED8; &#xC591;&#xC2DD; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Stim ER Ca(2+) &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C;&#xC758; &#xC18C;&#xBAA8;&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xD569; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0;&#xC11C; translocating&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC774; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xB9B4;&#xB808;&#xC774; &#xBC0F; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xAD6C;&#xD604; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAE30; &#xACF5;. Stim &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; F&ouml;rster &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC;, &#xACF5;&#xB3D9;-immunoprecipitation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC624;&#xD504;&#xB2DD;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC740; multimers&#xC758; &#xAE30; &#xACF5; &#xD615;&#xC131; subunits &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0;&#xC11C; preassembled&#xC640; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9; stoichiometry&#xC5D0; &#xC774;&#xC1A1; &#xC911;&#xC559; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xB458;&#xB7EC;&#xC2FC;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC140; lysates&#xC640; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD50;&#xCC28; &#xD55C; &#xD6C4; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACE0; &#xAD50;&#xAC00; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694;&#xB294; &#xC8FC;&#xB85C; &#xD734;&#xC2DD; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; dimer &#xC5C6;&#xC774; &#xBE44; &#xBCC0;&#xC131; &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP)&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBD84;&#xC790; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;-&#xD0DC;&#xADF8; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; Xenopus oocytes &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC8FC;&#xB85C; 2 &#xB2E8;&#xACC4; photobleaching &#xB144; &#xB2E4;&#xC2DC; dimeric &#xAE30;&#xC800; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; GFP &#xD0DC;&#xADF8;&#xC758; co-expression Ca(2+) &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC18C;&#xBAA8;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; punctae&#xB85C; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694;&#xC758; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB9C1; &#xC5C6;&#xC774; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; cytosolic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; Stim carboxy &#xC885;&#xC810;&#xC73C;&#xB85C; &#xC8FC;&#xB85C; 4 &#xB2E8;&#xACC4; photobleaching, tetrameric stoichiometry &#xD65C;&#xC131; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC77C;&#xCE58;&#xB97C; &#xC5BB;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; Stim&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; Ca(2+) &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xAE30; &#xACF5;&#xC744; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; tetramers&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4; dimerize&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC640; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC19;&#xC740; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Stim &#xC720;&#xBC1C; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; dimerization&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; tetramer CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;.

Ca (2 +) de liberaci&#xF3;n activados por Ca (2 +) (CRAC) subyacen a los canales de Ca sostenida (2 +) de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en los linfocitos y numerosas otras c&#xE9;lulas despu&#xE9;s de Ca (2 +) la liberaci&#xF3;n desde el ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico (RE). Detecci&#xF3;n se acerca a la interferencia de ARN identificaron dos prote&#xED;nas, Stim y ORAI, que en conjunto forman la base molecular de la actividad del canal CRAC. Stim sentidos agotamiento de la sala de emergencia de Ca (2 +) y la tienda de rel&#xE9;s f&#xED;sicamente esta informaci&#xF3;n por la translocaci&#xF3;n de la sala de emergencia a los cruces adyacentes a la membrana plasm&#xE1;tica, y ORAI encarna el poro del canal de calcio de la membrana plasm&#xE1;tica. Una estrecha interacci&#xF3;n entre Stim y ORAI, identificado por la co-inmunoprecipitaci&#xF3;n y una transferencia de energ&#xED;a de resonancia de F&#xF6;rster, est&#xE1; involucrado en la apertura de la Ca (2 +) de canales formados por las subunidades ORAI. La mayor&#xED;a de los canales i&#xF3;nicos son los mult&#xED;meros de formadores de poros subunidades que rodean un canal central, que se preensamblan en el RE y transportado en su estequiometr&#xED;a final a la membrana plasm&#xE1;tica. Aqu&#xED; nos muestran, por el an&#xE1;lisis bioqu&#xED;mico despu&#xE9;s de la reticulaci&#xF3;n en lisados &#x200B;&#x200B;de c&#xE9;lulas y c&#xE9;lulas intactas y mediante el uso de no desnaturalizaci&#xF3;n electroforesis en gel sin reticulaci&#xF3;n, que es predominantemente ORAI un d&#xED;mero en la membrana plasm&#xE1;tica en condiciones de reposo. Por otra parte, una sola mol&#xE9;cula de im&#xE1;genes de la prote&#xED;na verde fluorescente (GFP)-etiquetados ORAI expresado en ovocitos de Xenopus mostr&#xF3; predominantemente en dos etapas photobleaching, una vez m&#xE1;s coherente con un estado basal dim&#xE9;rica. En contraste, la co-expresi&#xF3;n de GFP-etiquetados ORAI con el extremo carboxi de Stim como una prote&#xED;na citos&#xF3;lica para activar el canal ORAI sin inducir Ca (2 +) agotamiento tienda o agrupaci&#xF3;n de ORAI en punctae producido principalmente de cuatro pasos fotoblanqueo, consistente con una estequiometr&#xED;a tetram&#xE9;rica de la actividad del canal ORAI. La interacci&#xF3;n con el terminal C de Stim tanto induce d&#xED;meros ORAI a tetr&#xE1;meros dimerizarse, formadoras de que constituyen el Ca (2 +)-selectiva de los poros. Esto representa un nuevo mecanismo en el que est&#xE1;n mediadas montaje y la activaci&#xF3;n del canal i&#xF3;nico funcional por la misma mol&#xE9;cula de activaci&#xF3;n.

El canal CRAC Consta de un tetr&#xE1;mero formado por STIM inducida por dimerizaci&#xF3;n de d&#xED;meros ORAI

&#x8FC7;&#x5EA6;&#x6269;&#x6563;&#x7684;&#x80BA;&#x52A8;&#x8109;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x80BA;&#x52A8;&#x8109;) &#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x7279;&#x53D1;&#x6027;&#x80BA;&#x52A8;&#x8109;&#x9AD8;&#x538B; (IPAH) &#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x800C;&#x80DE;&#x6D46; Ca2 + &#x6D53;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x5347;&#x89E6;&#x53D1; PASMC &#x6536;&#x7F29;&#xFF0C;&#x5E76;&#x523A;&#x6FC0; PASMC &#x6269;&#x6563;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E0A;&#x8C03; TRPC6 &#x901A;&#x9053;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E; IPAH &#x4E34;&#x5E8A;&#x5206;&#x79BB;&#x4E0E;&#x80BA;&#x52A8;&#x8109;&#x7684;&#x6269;&#x6563;&#x3002;TRPC6 &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x4E0E; IPAH &#x5173;&#x8054;&#x4E14;&#x5177;&#x6709;&#x529F;&#x80FD;&#x610F;&#x4E49;&#x5728;&#x89C4;&#x7BA1;&#x4E0E;&#x80BA;&#x52A8;&#x8109; TRPC6 &#x6D3B;&#x52A8;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8BD5;&#x56FE;&#x786E;&#x5B9A;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027; (SNPs)&#x3002;

&#x7279;&#x53D1;&#x6027;&#x80BA;&#x52A8;&#x8109;&#x9AD8;&#x538B;&#x4E0E;&#x5173;&#x8054; TRPC6 &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x529F;&#x80FD;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x3002;

Excessive proliferation of pulmonary artery smooth muscle cells (PASMCs) plays an important role in the development of idiopathic pulmonary arterial hypertension (IPAH), whereas a rise in cytosolic Ca2+ concentration triggers PASMC contraction and stimulates PASMC proliferation. Recently, we demonstrated that upregulation of the TRPC6 channel contributes to proliferation of PASMCs isolated from IPAH patients. This study sought to identify single-nucleotide polymorphisms (SNPs) in the TRPC6 gene promoter that are associated with IPAH and have functional significance in regulating TRPC6 activity in PASMCs.

A functional single-nucleotide polymorphism in the TRPC6 gene promoter associated with idiopathic pulmonary arterial hypertension.

Prolif&#xE9;ration excessive des cellules musculaires lisses des art&#xE8;res pulmonaires (CMLAP) joue un r&#xF4;le important dans le d&#xE9;veloppement de l&#x26;#39;hypertension art&#xE9;rielle pulmonaire idiopathique (HTAP), tandis qu&#x26;#39;une augmentation de Ca2 + cytosolique de concentration d&#xE9;clenche la contraction PASMC et stimule la prolif&#xE9;ration PASMC. R&#xE9;cemment, nous avons d&#xE9;montr&#xE9; que la r&#xE9;gulation positive de la cha&#xEE;ne TRPC6 contribue &#xE0; la prolif&#xE9;ration des CMLAP isol&#xE9;es chez des patients HTAP. Cette &#xE9;tude visait &#xE0; identifier les polymorphismes de nucl&#xE9;otides simples (SNP) dans le promoteur du g&#xE8;ne TRPC6 qui sont associ&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;HTAP et ont une importance fonctionnelle dans la r&#xE9;gulation de l&#x26;#39;activit&#xE9; dans TRPC6 CMLAP.

Une fonctionnelle unique nucl&#xE9;otide polymorphisme dans le promoteur d&#x26;#39;un g&#xE8;ne associ&#xE9; avec TRPC6 hypertension art&#xE9;rielle pulmonaire idiopathique

&Uuml;berm&auml;&szlig;ige Vermehrung der Lungenarterie glatten Muskelzellen (PASMCs) spielt eine wichtige Rolle bei der Entwicklung der idiopathische pulmonale arterielle Hypertonie (IPAH), w&auml;hrend ein Anstieg der cytosolic Ca2 + Konzentration PASMC Kontraktion l&ouml;st und stimuliert die PASMC Verbreitung. Vor kurzem zeigten wir dieser Hochregulation von den TRPC6 Kanal zur Verbreitung von PASMCs isoliert von IPAH Patienten beitr&auml;gt. Diese Studie versuchte der TRPC6-gen-Projekttr&auml;ger, die sind verbunden mit IPAH und funktionelle Bedeutung bei der Regulierung TRPC6 Aktivit&auml;t im PASMCs Einzel-Nukleotid-Polymorphismen (SNPs) identifiziert.

Eine funktionale Einzel-Nukleotid Polymorphie in der TRPC6 gen Projekttr&auml;ger idiopathische pulmonale arterielle Hypertonie zugeordnet.

Eccessiva proliferazione di cellule muscolari lisce di arteria polmonare (PASMCs) svolge un ruolo importante nello sviluppo dell&#39;ipertensione arteriosa polmonare idiopatica (IPAH), considerando che un aumento della concentrazione di Ca2 + citosolico attiva contrazione PASMC e stimola la proliferazione PASMC. Recentemente, abbiamo dimostrato che sovraregolazione di TRPC6 canale contribuisce alla proliferazione di PASMCs isolati da pazienti con IPAH. Questo studio ha cercato di identificare i polimorfismi a singolo nucleotide (SNPs) nel promotore del gene TRPC6 che sono associati con IPAH e hanno un significato funzionale nella regolazione della attivit&agrave; TRPC6 in PASMCs.

Un funzionale polimorfismo a singolo nucleotide nel promotore gene TRPC6 associato con ipertensione arteriosa polmonare idiopatica.

&#x80BA;&#x52D5;&#x8108;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x5897;&#x6B96;&#x306F;&#xFF08;PASMCs&#xFF09;&#x3001;&#x7279;&#x767A;&#x6027;&#x80BA;&#x52D5;&#x8108;&#x6027;&#x80BA;&#x9AD8;&#x8840;&#x5727;&#x75C7;&#xFF08;IPAH&#xFF09;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x4E0A;&#x6607;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;+&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304C;PASMC&#x53CE;&#x7E2E;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3068;PASMC&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;TRPC6&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;IPAH&#x60A3;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;PASMCs&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;IPAH&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;TRPC6&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x5185;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x5869;&#x57FA;&#x591A;&#x578B;&#xFF08;SNP&#xFF09;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;PASMCs&#x3067;TRPC6&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x610F;&#x7FA9;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x52AA;&#x3081;&#x305F;&#x3002;

&#x7279;&#x767A;&#x6027;&#x80BA;&#x52D5;&#x8108;&#x6027;&#x80BA;&#x9AD8;&#x8840;&#x5727;&#x75C7;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;TRPC6&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x4E00;&#x5869;&#x57FA;&#x591A;&#x578B;

&#xD3D0; &#xB3D9;&#xB9E5; &#xD3C9;&#xD65C; &#xADFC; &#xC138;&#xD3EC; (PASMCs)&#xC758; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD55C; &#xD655;&#xC0B0; cytosolic Ca2 + &#xB18D;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; PASMC &#xC218;&#xCD95; &#xC720;&#xBC1C; PASMC &#xD655;&#xC0B0;&#xC744; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xD2B9; &#xBC1C;&#xC131; &#xD3D0; &#xB3D9;&#xB9E5; &#xACE0;&#xD608;&#xC555; (IPAH)&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; upregulation TRPC6 IPAH &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; Pasmcs&#xC758; &#xD655;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC2DC;&#xC5F0;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; IPAH &#xBC0F; Pasmcs&#xC5D0;&#xC11C; TRPC6 &#xD65C;&#xB3D9; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC758;&#xBBF8;&#xAC00; TRPC6 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; polymorphisms (Snp)&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB824;&#xACE0; &#xB178;&#xB825; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xD2B9; &#xBC1C;&#xC131; &#xD3D0; &#xB3D9;&#xB9E5; &#xACE0;&#xD608;&#xC555;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; TRPC6 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC5FC;&#xAE30; &#xB2E4;&#xD615;&#xC131;.

La excesiva proliferaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas musculares lisas de la arteria pulmonar (PASMCs) juega un papel importante en el desarrollo de hipertensi&#xF3;n arterial pulmonar idiop&#xE1;tica (HAPI), mientras que un aumento en la concentraci&#xF3;n de Ca2 + citos&#xF3;lico provoca la contracci&#xF3;n PASMC y estimula la proliferaci&#xF3;n PASMC. Recientemente, hemos demostrado que la regulaci&#xF3;n al alza del canal TRPC6 contribuye a la proliferaci&#xF3;n de PASMCs aisladas de pacientes con HAPI. Este estudio busc&#xF3; identificar polimorfismos de nucle&#xF3;tido &#xFA;nico (SNPs) en el promotor del gen TRPC6 que se asocian con HAPI y tienen un significado funcional en la regulaci&#xF3;n de la actividad en TRPC6 PASMCs.

Un funcional de un solo nucle&#xF3;tido polimorfismo en el promotor del gen TRPC6 asociado con hipertensi&#xF3;n arterial pulmonar idiop&#xE1;tica

&#x813E;&#x8FB9;&#x7F18;&#x533A; (MZ) B &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x548C;&#x5355;&#x5143;&#x683C; B1&#xFF0C;&#x88AB;&#x79F0;&#x4E3A;&#x5929;&#x751F;&#x6837; B &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x7531;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x51CF;&#x6BD2;&#x7684;&#x7ECF;&#x52A8;&#x5458;&#x3001; &#x5FEB;&#x901F;&#x6297;&#x4F53;&#x5206;&#x6CCC;&#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x4ECE;&#x6EE4;&#x6CE1; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0D;&#x540C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6700;&#x6E05;&#x695A;&#x6709;&#x4EBA; MZ B &#x548C; B1 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x7684;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x548C; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7279;&#x70B9; Mzb1&#x3002;&#x2477; Mzb1 MZ B &#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x52A0;&#x7ECF;&#x52A8;&#x5458;&#x548C;&#x6838; NFAT &#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#xFF0C;&#x4F46;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6297;&#x4F53;&#x5206;&#x6CCC;&#x548C;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x8354;&#x679D; Mzb1 &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x5916;&#x5468;&#x8840; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F02;&#x4F4D;&#x8868;&#x8FBE;&#x5BFC;&#x81F4;&#x51CF;&#x6BD2;&#x7ECF;&#x8C03;&#x52A8;&#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x5176;&#x4E0E;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x886C;&#x5E95;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3; Grp94 &#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#xFF0C;Mzb1 &#x589E;&#x5F3A;&#x6709;&#x5229;&#x4E8E;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5176;&#x6D3B;&#x6027;&#x6784;&#x8C61;&#x4E2D;&#x7684; ERp57 &#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;Mzb1 &#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x4F7F;&#x5916;&#x5468;&#x8840; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x591A;&#x6837;&#x5316;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282;&#x7ECF;&#x5546;&#x5E97;&#x3001; &#x6297;&#x4F53;&#x5206;&#x6CCC;&#x548C;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;

Mzb1 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8C03;&#x8282;&#x9499;&#x7A33;&#x6001;&#x3001; &#x6297;&#x4F53;&#x5206;&#x6CCC;&#x548C;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x5148;&#x5929;&#x6837; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

Marginal zone (MZ) B cells of the spleen and B1 cells, termed innate-like B cells, differ from follicular B cells by their attenuated Ca(2+) mobilization, fast antibody secretion, and increased cell adhesion. We identified and characterized Mzb1 as an endoplasmic reticulum-localized and B cell-specific protein that was most abundantly expressed in MZ B and B1 cells. Knockdown of Mzb1 in MZ B cells increased Ca(2+) mobilization and nuclear NFAT transcription factor localization, but reduced lipopolysaccharide-induced antibody secretion and integrin-mediated cell adhesion. Conversely, ectopic expression of an Lck-Mzb1 transgene in peripheral TÂ cells resulted in attenuated Ca(2+) mobilization and augmented integrin-mediated cell adhesion. In addition to its interaction with the substrate-specific chaperone Grp94, Mzb1 augmented the function of the oxidoreductase ERp57 in favoring the expression of integrins in their activated conformation. Thus, Mzb1 helps to diversify peripheral B cell functions by regulating Ca(2+) stores, antibody secretion, and integrin activation.

Mzb1 protein regulates calcium homeostasis, antibody secretion, and integrin activation in innate-like B cells.

Zone marginale (MZ) B cellules des cellules de rate et B1, appel&#xE9;s cellules B naturelle de type, se distinguent des cellules B folliculaires par leur att&#xE9;nu&#xE9; Ca (2 +) mobilisation, la s&#xE9;cr&#xE9;tion d&#x26;#39;anticorps rapide, et l&#x26;#39;adh&#xE9;rence cellulaire accrue. Nous avons identifi&#xE9; et caract&#xE9;ris&#xE9; Mzb1 comme un r&#xE9;ticulum endoplasmique-localis&#xE9;e et la cellule B-prot&#xE9;ine sp&#xE9;cifique qui a &#xE9;t&#xE9; le plus abondamment exprim&#xE9; dans les cellules B et MZ B1. Knockdown de Mzb1 dans les cellules B MZ augment&#xE9; Ca (2 +) la mobilisation et la localisation nucl&#xE9;aire de facteur de transcription NFAT, mais r&#xE9;duit la s&#xE9;cr&#xE9;tion d&#x26;#39;anticorps induite par le lipopolysaccharide-et adh&#xE9;sion cellulaire m&#xE9;di&#xE9;e par l&#x26;#39;int&#xE9;grine-. A l&#x26;#39;inverse, l&#x26;#39;expression ectopique d&#x26;#39;un transg&#xE8;ne Lck-Mzb1 dans les cellules T p&#xE9;riph&#xE9;riques entra&#xEE;n&#xE9; att&#xE9;nu&#xE9; Ca (2 +) l&#x26;#39;adh&#xE9;rence de mobilisation et augment&#xE9;e de cellules int&#xE9;grine-m&#xE9;diation. En plus de son interaction avec le chaperon sp&#xE9;cifique du substrat GRP94, Mzb1 augment&#xE9; la fonction de la ERp57 oxydor&#xE9;ductase en favorisant l&#x26;#39;expression des int&#xE9;grines dans leur conformation activ&#xE9;e. Ainsi, Mzb1 contribue &#xE0; diversifier les fonctions des cellules B p&#xE9;riph&#xE9;riques en r&#xE9;gulant Ca (2 +) magasins, la s&#xE9;cr&#xE9;tion d&#x26;#39;anticorps et l&#x26;#39;activation de l&#x26;#39;int&#xE9;grine.

Mzb1 prot&#xE9;ine r&#xE9;gule l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie du calcium, la s&#xE9;cr&#xE9;tion d&#x26;#39;anticorps, et activation de l&#x26;#39;int&#xE9;grine dans les cellules B Innate comme

Marginalzonen (MZ) B-Zellen der Milz und der B1, genannt angeborenen-wie B-Zellen, unterscheiden sich von follikul&auml;ren B-Zellen durch abgeschw&auml;chte Ca(2+) Mobilisierung, schnell Antik&ouml;rper-Sekretion, und erh&ouml;hte Zelladh&auml;sion. Wir identifiziert und charakterisiert Mzb1 als ein Endoplasmatisches Retikulum lokalisierte und B-Zell-spezifische Protein, die am meisten reichlich in MZ-B und B1-Zellen ausgedr&uuml;ckt wurde. Niederschlag von Mzb1 in MZ-B-Zellen erh&ouml;ht Ca(2+) Mobilisierung und nukleare NFAT Transkription Faktor Lokalisierung, sondern reduziert Lipopolysaccharid-induzierte Antik&ouml;rper Sekretion und Integrin-vermittelte Zelladh&auml;sion. Umgekehrt ektopische Expression von einem Lck-Mzb1-Transgen in peripheren T-Zellen resultierte in abgeschw&auml;chter Ca(2+) Mobilisierung und Integrin-vermittelte Zelladh&auml;sion erg&auml;nzt. Neben der Interaktion mit der Substrat-spezifische Chaperon Grp94 erg&auml;nzt Mzb1 die Funktion der Oxidoreduktase ERp57 wohl des Ausdrucks der Integrine in ihrer aktivierten Konformation. Tragen also Mzb1, um peripheren B-Zell-Funktionen zu diversifizieren, indem Ca(2+) L&auml;den, Antik&ouml;rper-Sekretion und Integrin Aktivierung reguliert.

Mzb1 Protein reguliert Kalzium-Hom&ouml;ostase, Antik&ouml;rper-Sekretion und Integrin Aktivierung in angeborenen-wie B-Zellen.

Zona marginale (MZ) B cellule della milza e le cellule B1, definito innata-come le cellule B, differiscono dalle cellule B follicolare da loro mobilitazione Ca(2+) attenuato e secrezione dell&#39;anticorpo veloce adesione aumentata delle cellule. Abbiamo identificato e caratterizzato Mzb1 come una proteina localizzata del reticolo endoplasmatico e specifiche delle cellule di B che &egrave; stato pi&ugrave; abbondantemente espresso nelle cellule MZ B e B1. Atterramento di Mzb1 in cellule B MZ Ca(2+) mobilizzazione e localizzazione di fattore di trascrizione NFAT nucleare &egrave; aumentato, ma ridotta secrezione anticorpale indotta dal lipopolisaccaride e adesione integrina-mediata delle cellule. Al contrario, espressione ectopica di un transgene Lck-Mzb1 a cellule T periferiche portato attenuato Ca(2+) mobilizzazione e aumentata adesione integrina-mediata delle cellule. Oltre alla sua interazione con il substrato specifico chaperone Grp94, Mzb1 aumentata la funzione dell&#39;ossidoriduttasi ERp57 in favorendo l&#39;espressione delle integrine nella loro conformazione attivata. Cos&igrave;, Mzb1 aiuta a diversificare le funzioni delle cellule B periferiche regolando Ca(2+) negozi, secrezione di anticorpi e attivazione di integrina.

Mzb1 proteina regola l&#39;omeostasi del calcio, la secrezione di anticorpi e attivazione di integrina nell&#39;innata-come le cellule B.

&#x8FBA;&#x7E01;&#x5E2F;&#xFF08;MZ&#xFF09;&#x306E;B&#x813E;&#x81D3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;B1&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x5148;&#x5929;&#x6027;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;B&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x52D5;&#x54E1;&#x3001;&#x9AD8;&#x901F;&#x6297;&#x4F53;&#x5206;&#x6CCC;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6FFE;&#x80DE;&#x6027;B&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306B;MZ B&#x3068;B1&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;A&#x3068;B&#x7D30;&#x80DE;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;Mzb1&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3002; MZ B&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;Mzb1&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x52D5;&#x54E1;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6838;NFAT&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x30EA;&#x30DD;&#x591A;&#x7CD6;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x5206;&#x6CCC;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x4ECB;&#x5728;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;&#x672B;&#x68A2;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;Lck&#x304C;&#x3001;Mzb1&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7570;&#x6240;&#x6027;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x6E1B;&#x8870;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x52D5;&#x54E1;&#x3068;&#x62E1;&#x5F35;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x4ECB;&#x5728;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;GRP94&#x3001;Mzb1&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x652F;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;ERp57&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;Mzb1&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3092;&#x683C;&#x7D0D;&#x3057;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x5206;&#x6CCC;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x672B;&#x68A2;B&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x591A;&#x69D8;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3061;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Mzb1&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x7136;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;B&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x5206;&#x6CCC;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

&#xBE44;&#xC7A5;&#xC758; &#xD55C;&#xACC4; &#xC601;&#xC5ED; (MZ) B &#xC140;&#xACFC; B1 &#xC140; &#xB418; &#xB098; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xAC19;&#xC740; B &#xC138;&#xD3EC;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAC10;&#xC1E0; Ca(2+) &#xB3D9;&#xC6D0;, &#xBE60;&#xB978; &#xD56D; &#xCCB4; &#xBD84; &#xBE44;&#xC640; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; follicular B &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; MZ B&#xC640; B1 &#xC140;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD48D;&#xBD80; &#xD558; &#xAC8C; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC0F; B &#xC138;&#xD3EC; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; mzb1&#xB97C; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; MZ B &#xC140;&#xC5D0; mzb1&#xC758; Ca(2+) &#xB3D9;&#xC6D0; &#xBC0F; &#xD575; NFAT &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; lipopolysaccharide &#xC720;&#xBC1C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xBD84; &#xBE44;&#xC640; integrin &#xC911;&#xC7AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xB825; &#xAC10;&#xC18C;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C;, &#xC8FC;&#xBCC0; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; Lck Mzb1 transgene&#xC758; &#xC18C;&#xC131; &#xC2DD; &#xAC10;&#xC1E0; Ca(2+) &#xB3D9;&#xC6D0; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xACE0; integrin &#xC911;&#xC7AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xC99D;&#xAC15;. Grp94 &#xAE30;&#xD310; &#xAD00;&#xB828; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; Mzb1 oxidoreductase ERp57 &#xBB34;&#xAD00; &#xD558; &#xAC8C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xD615;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; integrins&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC99D;&#xAC15;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, Mzb1 Ca(2+) &#xB9E4;&#xC7A5;, &#xD56D; &#xCCB4; &#xBD84; &#xBE44;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; integrin &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xC5EC; &#xC8FC;&#xBCC0; B &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xB2E4;&#xBCC0;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774;.

Mzb1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCE7C;&#xC298; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131;, &#xD56D; &#xCCB4; &#xBD84; &#xBE44;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xAC19;&#xC740; B &#xC140;&#xC5D0; integrin &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC870;&#xC808;.

Zona marginal (MZ) B c&#xE9;lulas de las c&#xE9;lulas de bazo y B1, denominados innata-como las c&#xE9;lulas B, se diferencian de las c&#xE9;lulas B foliculares por su atenuada Ca (2 +) movilizaci&#xF3;n, la secreci&#xF3;n de anticuerpos r&#xE1;pida, y la adhesi&#xF3;n celular aumentada. Hemos identificado y caracterizado Mzb1 como ret&#xED;culo endoplasm&#xE1;tico localizado y B de c&#xE9;lulas espec&#xED;ficas de prote&#xED;na que se expresa abundantemente en la mayor&#xED;a de MZ B y las c&#xE9;lulas B1. Derribo de Mzb1 en las c&#xE9;lulas B MZ aumento del Ca (2 +) la movilizaci&#xF3;n y la localizaci&#xF3;n nuclear de transcripci&#xF3;n NFAT factor, pero la reducci&#xF3;n lipopolisac&#xE1;rido inducida por la secreci&#xF3;n de anticuerpos y mediada por la integrina adhesi&#xF3;n celular. Por el contrario, la expresi&#xF3;n ect&#xF3;pica de un transg&#xE9;n Lck-Mzb1 en c&#xE9;lulas T perif&#xE9;ricas result&#xF3; en atenuada Ca (2 +) movilizaci&#xF3;n y aumentada mediada por la integrina adhesi&#xF3;n celular. Adem&#xE1;s de su interacci&#xF3;n con el sustrato chaperona espec&#xED;fica Grp94, Mzb1 aumentada la funci&#xF3;n de la oxidorreductasa ERp57 en favorecer la expresi&#xF3;n de las integrinas en su conformaci&#xF3;n activado. Por lo tanto, ayuda a diversificar Mzb1 perif&#xE9;ricos funciones de las c&#xE9;lulas B mediante la regulaci&#xF3;n de Ca (2 +) tiendas, la secreci&#xF3;n de anticuerpos y la activaci&#xF3;n de la integrina.

Mzb1 prote&#xED;na regula la homeostasis del calcio, la secreci&#xF3;n de anticuerpos, y la activaci&#xF3;n de las integrinas en las c&#xE9;lulas B innata-como

&#x4F34;&#x548C;&#x53E3;&#x8BED;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5305;&#x62EC;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF; (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x7406;&#x89E3;&#x6D47;&#x6CE8; Orai1 &#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x8DE8;&#x819C;&#x6BB5; (&#x539F;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; 1) &#x4E24;&#x4E2A;&#x5B88;&#x6052;&#x5730;&#x70B9;&#x9009;&#x5B9A;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF1A; &#x7CBE;&#x6C28;&#x9178; 91 &#x4F4D;&#x4E8E;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x539F;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; 1 &#x548C;&#x7518;&#x6C28;&#x9178; 98 &#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x539F;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; 1 &#x4E2D;&#x95F4;&#x6E38;&#x79BB;&#x7ED3;&#x675F;&#x3002;Orai1 R91C&#xFF0C;&#x5F53; coexpressed &#x4E0E; STIM1&#xFF0C;Ca(2+) &#x5B58;&#x50A8;&#x6D88;&#x8017;&#x901A;&#x5E38;&#x88AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x9170;&#x80FA;&#xFF0C;&#x5DEF;&#x57FA;&#x6C27;&#x5316;&#x5242;&#xFF0C;&#x6CBB;&#x7597;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4E2D;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684; Orai1 &#x4E9A;&#x57FA; R91C &#x6B8B;&#x7559;&#x548C;&#x8FC5;&#x901F;&#x963B;&#x6B62; STIM1 &#x7ECF;&#x8425;&#x7ECF;&#x7535;&#x6D41;&#x3002;&#x9170;&#x80FA;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x963B;&#x585E;&#xFF0C;&#x626D;&#x8F6C;&#x4E86;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x503A;&#x5238;&#x51CF;&#x6C34;&#x5242;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; R91 &#x5F88;&#x7A84;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x8FDB;&#x884C;&#x6BDB;&#x5B54;&#x80DE;&#x6D46;&#x4FA7;&#x3002;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x66F4;&#x6362;&#xFF0C;G98 &#x963B;&#x6B62; STIM1 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178; (G98D) &#x6216;&#x812F;&#x6C28;&#x9178; (G98P) &#x7A81;&#x53D8;&#x9020;&#x6210;&#x672C;&#x6784;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B; STIM1 &#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A; Orai1 G98 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x975E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684; Ca(2+) &#x900F;&#x7535;&#x5BFC;&#x662F;&#x76F8;&#x5BF9;&#x6297;&#x7684; Gd(3+) &#x963B;&#x6B62;&#x3002;&#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; R91W/G98D &#x4E5F;&#x662F;&#x4E00;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x514B;&#x670D;&#x7531;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E00;&#x4E9B;&#x60A3;&#x8005;&#x4E25;&#x91CD;&#x8054;&#x5408;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677; (SCID) &#x7684; 91 &#x4F4D;&#x7F6E;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;R91C/G98D &#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x662F;&#x8010;&#x9170;&#x80FA;&#x5757;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x901A;&#x9053;&#x5B54;&#x6269;&#x9614;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; G98 &#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5E72;&#x6270; &alpha; &#x87BA;&#x65CB;&#x7ED3;&#x6784;&#x6539;&#x53D8;&#x79BB;&#x5B50;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x804C;&#x80FD;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E3A; G98 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x6D47;&#x6CE8;&#x94F0;&#x94FE;&#x548C; R91 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x7269;&#x7406;&#x5927;&#x95E8;&#x901A;&#x9053;&#x7A84;&#x53E3;&#x5185;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;

Orai1 &#x8DE8;&#x819C;&#x6BB5; 1 &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684; Orai1 &#x9891;&#x9053;&#x5728;&#x7518;&#x6C28;&#x9178; 98 STIM1 &#x72EC;&#x7ACB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178; 91 &#x5728;&#x660E;&#x6E20;&#x622A;&#x6D41;&#x3002;

Stim and Orai proteins comprise the molecular machinery of Ca(2+) release-activated Ca(2+) (CRAC) channels. As an approach toward understanding the gating of Orai1 channels, we investigated effects of selected mutations at two conserved sites in the first transmembrane segment (TM1): arginine 91 located near the cytosolic end of TM1 and glycine 98 near the middle of TM1. Orai1 R91C, when coexpressed with STIM1, was activated normally by Ca(2+)-store depletion. Treatment with diamide, a thiol-oxidizing agent, induced formation of disulfide bonds between R91C residues in adjacent Orai1 subunits and rapidly blocked STIM1-operated Ca(2+) current. Diamide-induced blocking was reversed by disulfide bond-reducing agents. These results indicate that R91 forms a very narrow part of the conducting pore at the cytosolic side. Alanine replacement at G98 prevented STIM1-induced channel activity. Interestingly, mutation to aspartate (G98D) or proline (G98P) caused constitutive channel activation in a STIM1-independent manner. Both Orai1 G98 mutants formed a nonselective Ca(2+)-permeable conductance that was relatively resistant to block by Gd(3+). The double mutant R91W/G98D was also constitutively active, overcoming the normal inhibition of channel activity by tryptophan at the 91 position found in some patients with severe combined immunodeficiency (SCID), and the double mutant R91C/G98D was resistant to diamide block. These data suggest that the channel pore is widened and ion selectivity is altered by mutations at the G98 site that may perturb Î±-helical structure. We propose distinct functional roles for G98 as a gating hinge and R91 as part of the physical gate at the narrow inner mouth of the channel.

Mutations in Orai1 transmembrane segment 1 cause STIM1-independent activation of Orai1 channels at glycine 98 and channel closure at arginine 91.

Prot&#xE9;ines Stim et Orai comprennent la machinerie mol&#xE9;culaire de Ca (2 +) &#xE0; lib&#xE9;ration activ&#xE9;s Ca (2 +) (CRAC) des canaux. Comme une approche vers la compr&#xE9;hension du d&#xE9;clenchement de Orai1 canaux, on &#xE9;tudi&#xE9; effets des mutations s&#xE9;lectionn&#xE9;es moins deux sites conserv&#xE9;s dans le segment transmembranaire premier (TM1): arginine 91 situ&#xE9;s pr&#xE8;s de l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; cytosolique de TM1 et la glycine 98 pr&#xE8;s du milieu de TM1. Orai1 R91C, lorsque co-exprim&#xE9;es avec STIM1, a &#xE9;t&#xE9; activ&#xE9; normalement par le Ca (2 +) magasin &#xE9;puisement. Traitement avec diamide, un agent thiol-oxydant, la formation de liaisons disulfure induite entre les r&#xE9;sidus adjacents dans R91C Orai1 sous-unit&#xE9;s et rapidement bloqu&#xE9; STIM1 actionn&#xE9; Ca (2 +) de courant. Diamide-induites blocage a &#xE9;t&#xE9; infirm&#xE9;e par liaison disulfure-agents r&#xE9;ducteurs. Ces r&#xE9;sultats indiquent que R91 constitue une partie tr&#xE8;s &#xE9;troite du pore d&#x26;#39;orchestre &#xE0; la face cytosolique. Alanine en remplacement G98 emp&#xEA;ch&#xE9; l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal STIM1-induite. Fait int&#xE9;ressant, la mutation de l&#x26;#39;aspartate (G98D) ou de la proline (G98P) caus&#xE9; l&#x26;#39;activation du canal constitutive d&#x26;#39;une mani&#xE8;re STIM1-ind&#xE9;pendant. Les deux Orai1 G98 mutants form&#xE9; un inhibiteur non s&#xE9;lectif Ca (2 +)-perm&#xE9;able de conductance qui &#xE9;tait relativement r&#xE9;sistant &#xE0; bloquer par D.ieu (3 +). Le mutant double R91W/G98D aussi constitutivement active, en surmontant l&#x26;#39;inhibition de l&#x26;#39;activit&#xE9; normale de canal par le tryptophane &#xE0; la position 91 trouv&#xE9;e chez des patients avec d&#xE9;ficit immunitaire combin&#xE9; s&#xE9;v&#xE8;re (DICS), et le double mutant est r&#xE9;sistant &#xE0; R91C/G98D bloc diamide. Ces donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que le pore du canal est &#xE9;largi et la s&#xE9;lectivit&#xE9; ionique est alt&#xE9;r&#xE9;e par des mutations sur le site G98 qui peuvent perturber &#x3B1;-structure h&#xE9;lico&#xEF;dale. On proposer des r&#xF4;les fonctionnels distincts pour G98 comme une charni&#xE8;re de porte et R91 dans le cadre de la porte physique &#xE0; l&#x26;#39;embouchure int&#xE9;rieure &#xE9;troite du canal.

Des mutations dans Orai1 segment transmembranaire 1 Cause STIM1 ind&#xE9;pendant d&#x26;#39;activation des canaux &#xE0; Orai1 Glycine 98 et fermeture des canaux &#xE0; l&#x26;#39;arginine 91

STIM und Orai Proteine bestehen aus die molekulare Maschinerie der Ca(2+) Freigabe aktiviert Ca(2+) (CRAC) Kan&auml;le. Als Ansatz zum Verst&auml;ndnis der Anspritzung von Orai1 Kan&auml;len, untersuchten wir die Wirkungen von ausgew&auml;hlten Mutationen an zwei konservierte Standorten in das erste Transmembran-Segment (TM1): Arginin 91 befindet sich nahe dem Zytosolische Ende TM1 und Glycin 98 in der Mitte des TM1. Orai1 R91C, wenn coexpressed mit STIM1, wurde durch Ca(2+)-Shop Ersch&ouml;pfung normalerweise aktiviert. Behandlung mit Diamide, ein Agent Thiol oxidierenden induzierte Bildung von Disulfidbr&uuml;cken zwischen R91C R&uuml;ckst&auml;nde in angrenzenden Orai1 Untereinheiten und schnell blockiert STIM1-betrieben Ca(2+) Strom. Diamide-induzierte blockiert wurde von Disulfid Anleihen mindernde Agenten zur&uuml;ckgenommen. Diese Ergebnisse zeigen, dass R91 einen sehr engen Teil der leitenden Pore Zytosolische seitlich bildet. Alanin-Ersatz bei G98 verhindert STIM1-induzierte Channel-Aktivit&auml;ten. Interessanterweise verursachte Mutation zu Aspartat (G98D) oder Prolin (G98P) konstitutive Kanal Aktivierung STIM1-unabh&auml;ngig. Beide Orai1 G98-Mutanten bildeten eine unselektiv Ca(2+)-durchl&auml;ssigen Leitwert, die relativ best&auml;ndig durch Gd(3+) blockiert wurde. Der doppelte Mutant R91W/G98D war auch konstitutiv aktiv, die normale Hemmung der Channel-Aktivit&auml;ten durch Tryptophan an der 91 Position, wurde bei einigen Patienten mit schwerem kombiniertem Immundefekt (SCID) zu &uuml;berwinden und der doppelte Mutant R91C/G98D war resistent gegen Diamide Block. Diese Daten legen nahe, dass die Kanal-Pore verbreitert ist und Ion Selektivit&auml;t wird ver&auml;ndert durch Mutationen bei der G98-Website, die &alpha;-spiralf&ouml;rmige Struktur verl&auml;ngern kann. Wir bieten unterschiedliche Funktionsrollen f&uuml;r G98 als gating Scharnier und R91 als Teil des physischen Tores an der engen inneren M&uuml;ndung des Kanals.

Mutationen im Orai1-Transmembran-Segment 1 verursachen STIM1-unabh&auml;ngige Aktivierung von Orai1 Kan&auml;len bei Glycin 98 und Kanal Schlie&szlig;ung an Arginin 91.

Article	Year
The C. elegans POU-domain transcription factor UNC-86 regulates the tph-1 tryptophan hydroxylase gene and neurite outgrowth in specific serotonergic neurons. Development (Cambridge, England)\| PubMed ID: 12135927	2002
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Shenyuan Zhang

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