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DNA-based Fish Species Identification Protocol

We have developed a fast, simple, and accurate DNA-based screening method to identify the fish species present in fresh and processed seafood samples. ...

Agilent Technologies

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Aip1 &#x548C; cofilin &#x4FC3;&#x8FDB;&#x9175;&#x6BCD;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x548C;&#x7535;&#x7F06;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x66F4;&#x66FF;&#xFF1A; &#x5207;&#x65AD;&#x3001; &#x5C01;&#x53E3;&#x4E1D;&#x7684;&#x534F;&#x8C03;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

Rapid turnover of actin structures is required for dynamic remodeling of the cytoskeleton and cell morphogenesis, but the mechanisms driving actin disassembly are poorly defined. Cofilin plays a central role in promoting actin turnover by severing/depolymerizing filaments. Here, we analyze the in vivo function of a ubiquitous actin-interacting protein, Aip1, suggested to work with cofilin. We provide the first demonstration that Aip1 promotes actin turnover in living cells. Further, we reveal an unanticipated role for Aip1 and cofilin in promoting rapid turnover of yeast actin cables, dynamic structures that are decorated and stabilized by tropomyosin. Through systematic mutagenesis of Aip1 surfaces, we identify two well-separated F-actin-binding sites, one of which contributes to actin filament binding and disassembly specifically in the presence of cofilin. We also observe a close correlation between mutations disrupting capping of severed filaments in vitro and reducing rates of actin turnover in vivo. We propose a model for balanced regulation of actin cable turnover, in which Aip1 and cofilin function together to "prune" tropomyosin-decorated cables along their lengths. Consistent with this model, deletion of AIP1 rescues the temperature-sensitive growth and loss of actin cable defects of tpm1Delta mutants.

Aip1 and cofilin promote rapid turnover of yeast actin patches and cables: a coordinated mechanism for severing and capping filaments.

Rotation rapide des structures de l&#39;actine est requise pour la dynamique de remodelage de la morphog&eacute;n&egrave;se du cytosquelette et de la cellule, mais les m&eacute;canismes conduisant le d&eacute;montage de l&#39;actine sont mal d&eacute;finis. Cofilin joue un r&ocirc;le central dans la promotion du chiffre d&#39;affaires de l&#39;actine par d&eacute;coupage/d&eacute;polym&eacute;risation des filaments. Ici, nous analysons la fonction in vivo d&#39;une prot&eacute;ine ubiquitaire d&#39;interaction actine, Aip1, a propos&eacute; de travailler avec cofilin. Nous fournissons la premi&egrave;re d&eacute;monstration que Aip1 favorise le chiffre d&#39;affaires de l&#39;actine dans les cellules vivantes. En outre, nous r&eacute;v&egrave;lent un r&ocirc;le inattendu pour Aip1 et cofilin en favorisant le renouvellement rapide des c&acirc;bles d&#39;actine de levure, structures dynamiques qui sont d&eacute;cor&eacute;es et stabilis&eacute;es par la tropomyosine. Par mutagen&egrave;se syst&eacute;matique des surfaces Aip1, nous identifions deux sites liant l&#39;actine-F bien s&eacute;par&eacute;es, dont contribue &agrave; la liaison de filaments d&#39;actine et d&eacute;montage sp&eacute;cifiquement en pr&eacute;sence de cofilin. On observe &eacute;galement une corr&eacute;lation &eacute;troite entre les mutations perturbant le bouchage des filaments coup&eacute;es in vitro et de r&eacute;duire le taux de renouvellement d&#39;actine in vivo. Nous proposons un mod&egrave;le de r&eacute;gulation &eacute;quilibr&eacute;e de roulement de c&acirc;ble actine, dans lequel &eacute;voluent les Aip1 et cofilin ensemble de &laquo; tailler &raquo; d&eacute;cor&eacute; &agrave; la tropomyosine des c&acirc;bles le long de leurs longueurs. Conform&eacute;ment &agrave; ce mod&egrave;le, suppression de AIP1 sauve la croissance sensible &agrave; la temp&eacute;rature et la perte des d&eacute;fauts de c&acirc;ble actine de mutants tpm1Delta.

Aip1 et cofilin promeuvent le renouvellement rapide des patchs d&#39;actine levure et c&acirc;bles : un m&eacute;canisme coordonn&eacute; pour s&eacute;parer et bouchage des filaments.

Schnellen Umsatz von Aktin Strukturen ist erforderlich f&uuml;r dynamische Umbau des des Zytoskeletts und Zelle Morphogenese, aber die Mechanismen fahren Aktin Demontage sind schlecht definiert. Cofilin spielt eine zentrale Rolle bei der F&ouml;rderung der Aktin-Umsatz durch Abbruch/depolymerizing-Filamenten. Hier analysieren wir die in-vivo-Funktion eines allgegenw&auml;rtigen Aktin Interaktion Proteins, Aip1, Arbeit mit Cofilin vorgeschlagen. Wir bieten die erste Demonstration, dass Aip1 Aktin-Umsatz in lebenden Zellen f&ouml;rdert. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir eine unerwartete Rolle f&uuml;r Aip1 und Cofilin bei der F&ouml;rderung der schnelle Umsatz von Hefe-Aktin-Kabel, dynamische Strukturen, die geschm&uuml;ckt und von Tropomyosin stabilisiert. Durch systematische Mutagenesis Aip1 Oberfl&auml;chen identifizieren wir zwei sendeten F-Aktin-Bindungsstellen, von denen zum Aktin-Filament-Bindung und Demontage speziell in Anwesenheit von Cofilin beitr&auml;gt. Wir beobachten auch eine enge Korrelation zwischen Mutationen st&ouml;ren Kappung der abgetrennten Filamente in Vitro und Senkung der Aktin-Umsatzes in-vivo. Wir schlagen ein Modell f&uuml;r ausgewogene Regelung Aktin Kabel Umsatzes, in welche Aip1 und Cofilin Funktion zusammen, um &quot;Tropomyosin dekorierte Kabel entlang ihrer L&auml;nge beschneiden&quot;. In &Uuml;bereinstimmung mit diesem Modell, Streichung des AIP1 rettet das temperaturempfindliche Wachstum und Verlust von Aktin Kabel Defekte des tpm1Delta Mutanten.

Aip1 und Cofilin f&ouml;rdern schnelle Umsatz von Hefe-Aktin-Patches und Kabel: einen koordinierten Mechanismus zum Abbruch und capping Filamenten.

Rapido giro d&#39;affari delle strutture dell&#39;actina &egrave; richiesta per rimodellamento dinamico della morfogenesi del citoscheletro e cella, ma i meccanismi di guida smontaggio actina sono mal definiti. Cofilin svolge un ruolo centrale nella promozione di fatturato di actina da filamenti recisione/depolymerizing. Qui, analizziamo la funzione in vivo di un&#39;onnipresente actina-interazione proteina, Aip1, ha suggerita di lavorare con cofilin. Forniamo la prima dimostrazione che Aip1 promuove il fatturato di actina nelle cellule viventi. Ulteriormente, ci rivelano un ruolo imprevisto per Aip1 e cofilin nel promuovere il rapido turnover dei cavi di lievito actina, strutture dinamiche che sono decorate e stabilizzati da tropomiosina. Attraverso mutagenesi sistematica delle superfici Aip1, identifichiamo due siti di F-actina-associazione well-separated, uno dei quali contribuisce all&#39;associazione di filamenti di actina e lo smontaggio in particolare in presenza di cofilin. Osserviamo anche una stretta correlazione tra le mutazioni perturbare la tappatura di filamenti mozzate in vitro e ridurre i tassi di turnover di actina in vivo. Vi proponiamo un modello di regolamento equilibrato del fatturato cavo dell&#39;actina, nel quale funzione Aip1 e cofilin insieme a &quot;potare&quot; tropomiosina-decorato di cavi lungo la loro lunghezza. Coerentemente con questo modello, eliminazione di AIP1 salva la crescita sensibile alla temperatura e perdita di difetti cavo actina di tpm1Delta mutanti.

Aip1 e cofilin promuovere il rapido giro d&#39;affari di lievito actina patch e cavi: un meccanismo coordinato per troncare e tappatura filamenti.

&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x58F2;&#x308A;&#x4E0A;&#x3052;&#x9AD8;&#x306F;&#x52D5;&#x7684;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B;&#x5F62;&#x6210;&#x306F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6539;&#x9020;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x5206;&#x89E3;&#x99C6;&#x52D5;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x56DE;&#x8EE2;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x5207;&#x65AD;&#x91CD;&#x5408;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;in vivo &#x95A2;&#x6570;&#x30B3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x3067;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9; &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E; Aip1&#x3001;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Aip1 &#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x8EE2;&#x63DB;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Aip1 &#x3068;&#x30B3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x9175;&#x6BCD;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30B1;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EB;&#x3001;&#x52D5;&#x7684;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x88C5;&#x98FE;&#x3055;&#x308C;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x58F2;&#x308A;&#x4E0A;&#x3052;&#x9AD8;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x4E88;&#x671F;&#x305B;&#x306C;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Aip1 &#x8868;&#x9762;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x7D44;&#x7E54;&#x7684;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x5FEB;&#x9069;&#x3067;&#x3059; F &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3082; in vitro &#x65AD;&#x7D76;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x56DE;&#x8EE2;&#x7387;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x6599;&#x91D1;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x3068;&#x308C;&#x305F;&#x898F;&#x5236;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30B1;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EB;&#x58F2;&#x308A;&#x4E0A;&#x3052;&#x9AD8;&#x3001;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&quot;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x98FE;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30B1;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EB;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x5207;&#x308A;&#x53D6;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&quot;Aip1 &#x3068;&#x30B3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;AIP1 &#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x3092;&#x6E29;&#x5EA6;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x6210;&#x9577;&#x3068;&#x640D;&#x5931; tpm1Delta &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30B1;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EB;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x306E;&#x6551;&#x52A9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Aip1 &#x3068;&#x30B3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x9175;&#x6BCD;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3068;&#x30B1;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EB;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x58F2;&#x308A;&#x4E0A;&#x3052;&#x9AD8;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;: &#x65AD;&#x7D76;&#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x5354;&#x8ABF;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3002;

&#xB9D0;&#xB77C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xB9E4;&#xCD9C; cytoskeleton &#xBC0F; &#xC140; morphogenesis &#xB3D9;&#xC801; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD574;&#xCCB4; &#xC6B4;&#xC804; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xAC00;&#xB09C; &#xD558; &#xAC8C; &#xC815;&#xC758; &#xB41C;. Cofilin &#xB9D0;&#xB77C; &#xD68C;&#xC804;&#xC728; severing/depolymerizing &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD94;&#xC9C4;&#xC5D0; &#xC911;&#xC2EC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, Aip1, cofilin&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;&#xC758; in vivo &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D;. &#xC6B0;&#xB9AC; Aip1 &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9D0;&#xB77C; &#xB9E4;&#xCD9C; &#xC99D;&#xC9C4; &#xCCAB; &#xB370;&#xBAA8;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Aip1 &#xBC0F; cofilin &#xD6A8; &#xBAA8; &#xB9D0;&#xB77C; &#xCF00;&#xC774;&#xBE14;, &#xC7A5;&#xC2DD; &#xBC0F; tropomyosin &#xD558; &#xC5EC; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC801; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xB9E4;&#xCD9C; &#xC99D;&#xC9C4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xBABB;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Aip1 &#xD45C;&#xBA74;&#xC758; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; mutagenesis &#xD1B5;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; cofilin&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xD2B9;&#xD788; &#xD574;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB294; well-separated F &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC758; &#xB450; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD55C;&#xC640; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD68C;&#xC804;&#xC728; vivo&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC904;&#xC774;&#xB294; &#xBC29;&#xD574; &#xC0AC;&#xC774; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD568;&#xAED8; &quot;&#xAC00;&#xC9C0; &#xCE58;&#xAE30;&quot; tropomyosin &#xC7A5;&#xC2DD; &#xB41C; &#xCF00;&#xC774;&#xBE14;&#xC758; &#xAE38;&#xC774; &#xB530;&#xB77C; &#xD558;&#xB294; Aip1 &#xBC0F; cofilin &#xD568;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9D0;&#xB77C; &#xCF00;&#xC774;&#xBE14; &#xD68C;&#xC804;&#xC728;&#xC758; &#xADE0;&#xD615; &#xC7A1;&#xD78C;&#xB41C; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBAA8;&#xB378; &#xC77C;&#xAD00;&#xC131;, aip1&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C; &#xAD6C;&#xCD9C; &#xC628;&#xB3C4; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC131;&#xC7A5;&#xACFC; tpm1Delta &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xB9D0;&#xB77C; &#xCF00;&#xC774;&#xBE14; &#xACB0;&#xD568;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;.

Aip1 &#xBC0F; cofilin &#xD64D;&#xBCF4; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD328;&#xCE58; &#xBC0F; &#xCF00;&#xC774;&#xBE14;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xB9E4;&#xCD9C;: severing &#xD558; &#xACE0; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xB97C; &#xC0C1;&#xD55C; &#xD558;&#xB294; &#xC870;&#xC815;&#xB41C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;.

Rotaci&oacute;n r&aacute;pida de las estructuras de la actina es necesaria para la din&aacute;mica de remodelaci&oacute;n de la morfog&eacute;nesis del citoesqueleto y de la c&eacute;lula, pero mal se definen los mecanismos de conducci&oacute;n desmontaje de actina. Cofilin juega un papel central en la promoci&oacute;n de facturaci&oacute;n de actina por filamentos cortar/depolymerizing. Aqu&iacute;, se analiza la funci&oacute;n in vivo de una omnipresente interacci&oacute;n actina prote&iacute;na, Aip1, sugerida trabajar con cofilin. Le ofrecemos la primera demostraci&oacute;n que Aip1 promueve la facturaci&oacute;n de la actina en c&eacute;lulas vivas. Adem&aacute;s, revelamos un papel imprevisto para Aip1 y cofilin en la promoci&oacute;n de rotaci&oacute;n r&aacute;pida de cables de la actinia de levadura, estructuras din&aacute;micas que son decoradas y estabilizados por la tropomiosina. Mediante mutag&eacute;nesis sistem&aacute;tica de las superficies Aip1, identificamos dos sitios de uni&oacute;n a actina-F muy separados, uno de los cuales contribuye a la Uni&oacute;n de filamentos de actina y desmontaje espec&iacute;ficamente en presencia de cofilin. Tambi&eacute;n observamos una correlaci&oacute;n estrecha entre mutaciones interrumpir de filamentos cercenadas en vitro y reducir las tasas de rotaci&oacute;n de la actina en vivo. Proponemos un modelo de regulaci&oacute;n equilibrada de facturaci&oacute;n del cable de la actina, en cuya funci&oacute;n Aip1 y cofilin juntos para &quot;podar&quot; decoradas tropomiosina cables a lo largo de su longitud. De acuerdo con este modelo, supresi&oacute;n de AIP1 rescata el crecimiento de sensibles a la temperatura y p&eacute;rdida de los defectos del cable de actina de mutantes tpm1Delta.

Aip1 y cofilin promoci&oacute;n la rotaci&oacute;n r&aacute;pida de levadura actina parches y cables: un mecanismo de coordinaci&oacute;n para cortar y taponado de filamentos.

&#x4E0B;&#x4E00;&#x4EE3; DNA &#x6D4B;&#x5E8F;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6D41;&#x9700;&#x8981;&#x7CBE;&#x786E;&#x7684;&#x91CF;&#x5316;&#x7684; DNA &#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x8FDB;&#x884C;&#x6392;&#x5217;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FBF;&#x786E;&#x4FDD;&#x6700;&#x4F73;&#x6027;&#x80FD;&#x7684;&#x6587;&#x4E66;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BF4;&#x660E;&#x5982;&#x4F55;&#x4F7F;&#x7528; qPCR &#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x4E0B;&#x4E00;&#x4EE3;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684; DNA &#x5E93;&#x3002;&#x53E6;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; qPCR &#x91CF;&#x5316;&#x53EF;&#x80FD;&#x5141;&#x8BB8;&#x6539;&#x8FDB;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x672C;&#x56FD;&#x4E00;&#x822C;&#x4E8B;&#x52A1;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6D41;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x51CF;&#x5C11;&#x5E93; DNA &#x6240;&#x9700;&#xFF0C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x5728;&#x91CF;&#x5316; amplifiable DNA&#xFF0C;&#x51C6;&#x786E;&#x6027;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x51CF;&#x5C11;&#x6216;&#x6D88;&#x9664;&#x9700;&#x8981;&#x653E;&#x5927; DNA &#x6D4B;&#x5E8F;&#x524D;&#x907F;&#x514D;&#x653E;&#x5927;&#x504F;&#x89C1;&#x7684;&#x91CF;&#x3002;

&#x5FEB;&#x901F;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x4E0B;&#x4E00;&#x4EE3;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x7684; DNA &#x5E93;&#x3002;

The next-generation DNA sequencing workflows require an accurate quantification of the DNA molecules to be sequenced which assures optimal performance of the instrument. Here, we demonstrate the use of qPCR for quantification of DNA libraries used in next-generation sequencing. In addition, we find that qPCR quantification may allow improvements to current NGS workflows, including reducing the amount of library DNA required, increasing the accuracy in quantifying amplifiable DNA, and avoiding amplification bias by reducing or eliminating the need to amplify DNA before sequencing.

Rapid quantification of DNA libraries for next-generation sequencing.

Les workflows de s&eacute;quen&ccedil;age de l&#39;ADN nouvelle g&eacute;n&eacute;ration n&eacute;cessitent une quantification pr&eacute;cise des mol&eacute;cules d&#39;ADN &agrave; s&eacute;quencer, qui assure une performance optimale de l&#39;instrument. Ici, nous d&eacute;montrons l&#39;utilisation de qPCR pour la quantification des biblioth&egrave;ques d&#39;ADN utilis&eacute;es dans le s&eacute;quen&ccedil;age de prochaine g&eacute;n&eacute;ration. En outre, on trouve que qPCR quantification peut permettre des am&eacute;liorations &agrave; des workflows NGS actuels, notamment en r&eacute;duisant la quantit&eacute; d&#39;ADN requis, augmentant l&#39;exactitude dans la quantification d&#39;ADN amplifiable et en &eacute;vitant les biais d&#39;amplification en r&eacute;duisant ou en &eacute;liminant la n&eacute;cessit&eacute; d&#39;amplifier l&#39;ADN avant s&eacute;quen&ccedil;age de biblioth&egrave;que.

Quantification rapide des biblioth&egrave;ques d&#39;ADN pour l&#39;ordonnancement de la prochaine g&eacute;n&eacute;ration.

Die n&auml;chste Generation DNA Sequenzierung Workflows erfordern eine genaue Quantifizierung der DNA-Molek&uuml;le zu sequenziert werden die sorgt f&uuml;r eine optimale Leistung des Ger&auml;tes. Hier zeigen wir die Verwendung von qPCR zur Quantifizierung von DNA-Bibliotheken, die in der Sequenzierung der n&auml;chsten Generation verwendet. Au&szlig;erdem finden wir, dass qPCR Quantifizierung Verbesserungen an aktuellen NGS-Workflows, einschlie&szlig;lich der Reduzierung der Bibliothek DNA erforderlich, erh&ouml;hen die Genauigkeit in der amplifiable DNA quantifizieren und Vermeidung von Verst&auml;rkung Voreingenommenheit durch Reduzierung oder Beseitigung der Notwendigkeit zur Verst&auml;rkung von DNA vor der Sequenzierung zulassen kann.

Schnelle Quantifizierung von DNA-Bibliotheken f&uuml;r die Sequenzierung der n&auml;chsten Generation.

Flussi di lavoro di sequenziamento del DNA generazione richiedono un&#39;accurata quantificazione delle molecole di DNA da sequenziare che assicura prestazioni ottimali dello strumento. Qui, ci illustrano l&#39;utilizzo di qPCR per la quantificazione delle librerie di DNA utilizzato nel sequenziamento di nuova generazione. Inoltre, troviamo che la qPCR quantificazione pu&ograve; consentire miglioramenti all&#39;attuale Workflow NGS, compresa la riduzione della quantit&agrave; di libreria DNA necessario, aumentando l&#39;accuratezza nel DNA amplifiable misurando e di evitare bias di amplificazione riducendo o eliminando la necessit&agrave; di amplificare il DNA prima di sequenziamento.

Rapida quantificazione delle librerie del DNA per il sequenziamento di nuova generazione.

&#x6B21;&#x4E16;&#x4EE3; DNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; &#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3059;&#x308B; DNA &#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3068;&#x697D;&#x5668;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x30D1;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x4FDD;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6B21;&#x4E16;&#x4EE3;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B; DNA &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E; qPCR &#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; qPCR &#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA; &#x30C7;&#x30B8;&#x30BF;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EA;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; DNA &#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306E;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x306E;&#x5411;&#x4E0A;&#x3068;&#x524A;&#x6E1B;&#x3084;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x524D;&#x306B; DNA &#x3092;&#x5897;&#x5E45;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x306A;&#x304F;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x5897;&#x5E45;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A; DNA &#x306E;&#x91CF;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x3059;&#x308B;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E; NGS &#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x3078;&#x6539;&#x5584;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6B21;&#x4E16;&#x4EE3;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x7528; DNA &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3002;

&#xB2E4;&#xC74C;-&#xC138;&#xB300; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xC6CC;&#xD06C;&#xD50C;&#xB85C;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xC545;&#xAE30;&#xC758; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xC131;&#xB2A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xBD80; &#xB7C9; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xD560; DNA &#xBD84;&#xC790;&#xC758;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC138;&#xB300; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; DNA &#xB3C4;&#xC11C;&#xAD00;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; Qpcr&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; qPCR &#xC815;&#xB7C9;&#xD654; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; DNA &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xCE21;&#xC815; amplifiable DNA&#xC5D0; &#xC815;&#xD655;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC0F; &#xAC10;&#xC18C; &#xB610;&#xB294; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xD558;&#xAE30; &#xC804;&#xC5D0; DNA&#xB97C; &#xC99D;&#xD3ED; &#xD558;&#xB294; &#xD544;&#xC694;&#xB97C; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558; &#xC5EC; &#xC99D;&#xD3ED; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD53C;&#xD558;&#xACE0; &#xC591;&#xC744; &#xC904;&#xC774;&#xB294; &#xB4F1; &#xD604;&#xC7AC; NGS &#xC6CC;&#xD06C;&#xD50C;&#xB85C; &#xAC1C;&#xC120; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCC28;&#xC138;&#xB300; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; DNA &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;.

Los flujos de trabajo de la secuencia de ADN de pr&oacute;xima generaci&oacute;n requieren una cuantificaci&oacute;n precisa de las mol&eacute;culas de ADN para ser secuenciado que asegura un rendimiento &oacute;ptimo del instrumento. Aqu&iacute;, demostramos que el uso de qPCR para la cuantificaci&oacute;n de las bibliotecas de ADN utilizado en la generaci&oacute;n de la secuencia. Adem&aacute;s, encontramos que la qPCR cuantificaci&oacute;n puede permitir mejoras a los actuales flujos de trabajo NGS, incluyendo la reducci&oacute;n de la biblioteca de ADN necesario, aumentar la precisi&oacute;n en la cuantificaci&oacute;n de ADN amplificable y evitar el sesgo de amplificaci&oacute;n reduciendo o eliminando la necesidad de amplificar ADN antes de la secuencia.

Article	Year
Aip1 and cofilin promote rapid turnover of yeast actin patches and cables: a coordinated mechanism for severing and capping filaments. Molecular biology of the cell\| PubMed ID: 16611742	2006
Rapid quantification of DNA libraries for next-generation sequencing. Methods (San Diego, Calif.)\| PubMed ID: 20215015	2010

Harini Ravi

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