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DNA-based Fish Species Identification Protocol

We have developed a fast, simple, and accurate DNA-based screening method to identify the fish species present in fresh and processed seafood samples. ...

Agilent Technologies

&#x5E03;&#x9C81;&#x6C0F;&#x83CC;&#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x75C5;&#x539F;&#xFF0C;&#x80FD;&#x591F;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4F7F;&#x4EBA;&#x8870;&#x5F31;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E2D;&#x53CD;&#x590D;&#x51FA;&#x73B0;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x9AD8;&#x751F;&#x7269;&#x6218;&#x5242;&#x7684;&#x540D;&#x5355;&#x4E0A;&#x3002;&#x4ECE; &gamma; &#x8F90;&#x7167; B.melitensis &#x5E94;&#x53D8; 16 M &#x514D;&#x75AB;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x6784;&#x9020;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5E93;&#xFF0C;&#x5B83;&#x901A;&#x8FC7;&#x5BF9;&#x540C;&#x6837;&#x51C6;&#x5907;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x5C55;&#x793A;&#x653E;&#x6620;&#x4E86;&#x3002;&#x6240;&#x9009;&#x7684;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x7C92;&#x5B50;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5BF9;&#x4F3D;&#x739B;&#x8F90;&#x7167; B.melitensis &#x7EC6;&#x80DE;&#x5F3A;&#x9176;&#x8054;&#x6CD5; (ELISA) &#x68C0;&#x6D4B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5728;&#x8868;&#x5355;&#x4E2D;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x8868;&#x8FBE;&#x5404;&#x81EA;&#x7684;&#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#x53EF;&#x53D8;&#x533A;&#x7247;&#x6BB5; (&#x6297;&#x4F53;) &#x7684;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x52AA;&#x529B;&#x5931;&#x8D25;&#xFF0C;&#x539F;&#x56E0;&#x662F;&#xFF1A; (i) &#x5DEE;&#x6EB6;&#x89E3;&#x5EA6;&#x53CA; (ii) &#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x964D;&#x89E3;&#x7684; c-myc &#x6807;&#x7B7E;&#x7528;&#x4E8E;&#x91CD;&#x7EC4;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x95EE;&#x9898;&#xFF1A; (i) &#x878D;&#x5408;&#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#x751F;&#x6210;&#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#x7247;&#x6BB5; (&#x9ED1;&#x661F;) &#x6297;&#x4F53;&#x7247;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x5E76; (ii) &#x7531;&#x5468;&#x8D28;&#x7684;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x53D7;&#x547D; Skp &#x5230;&#x4EBA;&#x7C7B; kappa &#x8F7B;&#x94FE;&#x5E38;&#x91CF;&#x57DF; (Ck) &#x94FE;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x5F0F;&#x4EA7;&#x751F;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x3001; &#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x663E;&#x793A; scFvs &#x6216;&#x75C2;&#x4ECD;&#x53D1;&#x73B0;&#x514D;&#x75AB;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E; anti-phage &#x6297;&#x4F53;&#x6240;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x5927;&#x4FE1;&#x53F7;&#x653E;&#x5927;&#x4F18;&#x8D8A;&#x9176;&#x8054;&#x514D;&#x75AB;&#x5438;&#x9644;&#x6CD5;&#x8BD5;&#x5242;&#x3002;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x6297;&#x4F53;&#x8BC1;&#x660E;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x5177;&#x4F53;&#x7684; B.melitensis &#x5E76;&#x4E0D;&#x627F;&#x8BA4;&#x4E0E;&#x73B0;&#x6709;&#x8BCA;&#x65AD;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x4EBF;&#x987A;&#x901A; 9.2.1 &#x8036;&#x5C14;&#x68EE;&#x6C0F;&#x83CC;&#x5047;&#x7ED3;&#x6838;&#x83CC;&#x3002;

&#x5206;&#x79BB;&#x4E0E;&#x91CD;&#x7EC4;&#x6297;&#x4F53;&#x7247;&#x6BB5;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6218;&#x75C5;&#x539F;&#x5E03;&#x6C0F;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

Brucella melitensis is a highly infectious animal pathogen able to cause a recurring debilitating disease in humans and is therefore high on the list of biological warfare agents. Immunoglobulin genes from mice immunized with gamma-irradiated B. melitensis strain 16M were used to construct a library that was screened by phage display against similarly prepared bacteria. The selected phage particles afforded a strong enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) signal against gamma-irradiated B. melitensis cells. However, extensive efforts to express the respective single chain antibody variable region fragment (scFv) in soluble form failed due to: (i) poor solubility and (ii) in vivo degradation of the c-myc tag used for the detection of the recombinant antibodies. Both problems could be addressed by: (i) fusing a human kappa light chain constant domain (Ck) chain to the scFv to generate single chain antibody fragment (scAb) antibody fragments and (ii) by co-expression of the periplasmic chaperone Skp. While soluble, functional antibodies could be produced in this manner, phage-displaying scFvs or scAbs were still found to be superior ELISA reagents for immunoassays, due to the large signal amplification afforded by anti-phage antibodies. The isolated phage antibodies were shown to be highly specific to B. melitensis and did not recognize Yersinia pseudotuberculosis in contrast to the existing diagnostic monoclonal YST 9.2.1.

Isolation and expression of recombinant antibody fragments to the biological warfare pathogen Brucella melitensis.

Brucella melitensis est un pathog&egrave;ne animal hautement infectieux capable de provoquer un r&eacute;currents d&eacute;bilitants de la maladie chez les humains et est par cons&eacute;quent &eacute;lev&eacute; sur la liste des agents de guerre biologique. G&egrave;nes des immunoglobulines de souris immunis&eacute;es avec la souche irradi&eacute;s aux rayons gamma b. melitensis 16 M ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s pour construire une biblioth&egrave;que qui a &eacute;t&eacute; pr&eacute;s&eacute;lectionn&eacute;e par le phage display contre les bact&eacute;ries de m&ecirc;me pr&eacute;par&eacute;es. Les particules phagiques s&eacute;lectionn&eacute;s a donn&eacute; un signal de test ELISA forte enzyme-linked Immunosorbent Assay contre les cellules de b. melitensis d&#39;irradi&eacute;s aux rayons gamma. Toutefois, des efforts consid&eacute;rables pour exprimer le fragment de r&eacute;gion variable d&#39;anticorps cha&icirc;ne unique respectifs (scFv) sous forme soluble &eacute;chec d&ucirc; &agrave;: (i) faible solubilit&eacute; et la d&eacute;gradation (ii) in vivo de la balise de c-myc, utilis&eacute;e pour la d&eacute;tection de l&#39;anticorps recombinants. Ces deux probl&egrave;mes pourraient &ecirc;tre trait&eacute;s par: (i) une cha&icirc;ne de domaine constant (Ck) de cha&icirc;ne l&eacute;g&egrave;re kappa humaine &agrave; la scFv pour g&eacute;n&eacute;rer des fragments d&#39;anticorps cha&icirc;ne unique anticorps fragment (gale) et (ii) par la co-expression de la p&eacute;riplasmique chaperonner Skp de fusion. Tandis que les anticorps solubles, fonctionnels pourraient &ecirc;tre produits de cette mani&egrave;re, scFvs phage-affichage ou cro&ucirc;tes encore constituaient des r&eacute;actifs ELISA sup&eacute;rieurs pour les &eacute;tudes immunologiques, en raison de l&#39;amplification du signal grande conf&eacute;r&eacute;e par des anticorps anti-phage. Les anticorps bact&eacute;riophages isol&eacute;s se sont av&eacute;r&eacute;es &ecirc;tre tr&egrave;s sp&eacute;cifique &agrave; b. melitensis et n&#39;ont pas reconnu de Yersinia pseudotuberculosis contraste avec l&#39;existant YST monoclonaux diagnostique 9.2.1.

Isolement et l&#39;expression de fragments d&#39;anticorps recombinants pour la guerre biologique pathog&egrave;ne Brucella melitensis.

Isolierung und Expression von rekombinanten Antik&#xF6;rperfragmente an der biologischen Kriegsf&#xFC;hrung Pathogen Brucella melitensis.

Brucella melitensis &egrave; un patogeno animale altamente infettivo in grado di causare un ricorrenti debilitante malattia negli esseri umani e quindi &egrave; alta sulla lista degli agenti di guerra biologica. Geni per l&#39;immunoglobulina da topi immunizzati con gamma-irradiati b. melitensis strain 16 M sono stati utilizzati per costruire una biblioteca che &egrave; stata proiettata da phage display contro batteri preparati allo stesso modo. Le particelle dei fagi selezionati offerto un segnale di forte enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) contro le cellule irradiate gamma b. melitensis. Tuttavia, notevoli sforzi per esprimere il frammento di regione variabile dell&#39;anticorpo rispettivo singola catena (scFv) in forma solubile non riuscirono a causa di: (i) scarsa solubilit&agrave; e degradazione (ii) in vivo del c-myc tag utilizzato per la rilevazione degli anticorpi ricombinanti. Entrambi i problemi potrebbero essere affrontati da: (i) fondendo una catena umana kappa catena leggera costante dominio (Ck) il scFv per generare frammenti di anticorpo di una singola catena anticorpo frammento (ticchiolatura) e (ii) di co-expression del periplasmico accompagnatore Skp. Mentre gli anticorpi solubili, funzionali potrebbero essere prodotta in questo modo, visualizzazione dei fagi scFvs o croste trovate ancora essere superiori reagenti ELISA per immunodosaggi, dovuto l&#39;amplificazione del segnale grandi offerte dagli anticorpi anti-phage. Gli anticorpi dei fagi isolato hanno dimostrati di essere altamente specifici per b. melitensis e non riconobbe pseudotuberculosis Yersinia in contrasto con l&#39;esistente YST monoclonali diagnostici 9.2.1.

Isolamento e espressione di frammenti di anticorpi ricombinanti per la guerra biologica patogeno Brucella melitensis.

&#x30D6;&#x30EB;&#x30BB;&#x30E9; &#x30E1;&#x30EA;&#x30C6;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x3081;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x52D5;&#x7269;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x5B9A;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x8870;&#x5F31;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x75C5;&#x6C17;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x7269;&#x5264;&#x306E;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30AC;&#x30F3;&#x30DE;&#x7DDA;&#x7167;&#x5C04; B. &#x30E1;&#x30EA;&#x30C6;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x3081;&#x3072;&#x305A;&#x307F; 16 M &#x514D;&#x75AB;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x8868;&#x793A;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x6E96;&#x5099;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x83CC;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E0A;&#x6620;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x7C92;&#x5B50;&#x306F;&#x30AC;&#x30F3;&#x30DE;&#x7DDA;&#x7167;&#x5C04; B. &#x30E1;&#x30EA;&#x30C6;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x3081;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5F37;&#x3044;&#x9175;&#x7D20;&#x6297;&#x4F53;&#x6CD5; (elisa) &#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x6297;&#x4F53;&#x53EF;&#x5909;&#x9818;&#x57DF;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &#xFF08;&#x7121;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF09; &#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x306E;&#x5F62;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x52AA;&#x529B;&#x539F;&#x56E0;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;: (i) &#x8CA7;&#x3057;&#x3044;&#x6EB6;&#x89E3;&#x5EA6;&#x3068; (ii) in vivo &#x52A3;&#x5316;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528; c &#x2010; myc &#x30BF;&#x30B0;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;: (i) &#x4EBA;&#x9593;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D1;&#x8EFD;&#x9396;&#x5B9A;&#x6570;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (Ck) &#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x6297;&#x4F53;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &#xFF08;&#x304B;&#x3055;&#x3076;&#x305F;&#xFF09; &#x6297;&#x4F53;&#x65AD;&#x7247;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x3001;(ii) &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x30DA;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; Skp &#x7121;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;, &#x6A5F;&#x80FD;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x4F5C;&#x308A;&#x51FA;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x9593;&#x3001;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x8868;&#x793A; scFvs &#x3084;&#x304B;&#x3055;&#x3076;&#x305F;&#x307E;&#x3060;&#x512A;&#x308C;&#x305F; ELISA &#x8A66;&#x85AC;&#x3082;&#x6297;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x5927;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5897;&#x5E45;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x691C;&#x67FB;&#x7528;&#x306B;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x306F; B. &#x30E1;&#x30EA;&#x30C6;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x3081;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x7279;&#x5B9A;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x4EEE;&#x6027;&#x7D50;&#x6838;&#x65E2;&#x5B58;&#x8A3A;&#x65AD;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB; YST 9.2.1 &#x5BFE;&#x7167;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x5206;&#x96E2;&#x3068;&#x751F;&#x7269;&#x5175;&#x5668;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x30D6;&#x30EB;&#x30BB;&#x30E9; &#x30E1;&#x30EA;&#x30C6;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x3081;&#x306B;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x6297;&#x4F53;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x3002;

Brucella melitensis &#xB3D9;&#xBB3C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC804;&#xC5FC; &#xC131; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xB418;&#xD480;&#xC774; &#xC778; &#xAC04;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xC1E0; &#xC57D;&#xD558;&#xAC8C; &#xB420; &#xC218; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xC804; &#xC694;&#xC6D0;&#xC758; &#xBAA9;&#xB85D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB192;&#xC740; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. B. melitensis &#xAC10;&#xB9C8; &#xBC18;&#xAD6C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; 16m &#xC811;&#xC885; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xC900;&#xBE44; &#xB41C; &#xC138;&#xADE0;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0C1;&#xC601; &#xD558;&#xB294; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xC785;&#xC790; &#xAC10;&#xB9C8; &#xBC18;&#xAD6C; B. melitensis &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; immunosorbent &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; (ELISA) &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xBC1B;&#xC73C;&#xBA74;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAC01;&#xAC01; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCCB4;&#xC778; &#xD56D; &#xCCB4; &#xAC00;&#xBCC0; &#xC601;&#xC5ED; &#xC870;&#xAC01; (scFv) &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xB178;&#xB825;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC2E4;&#xD328;: (i) &#xBD88; &#xC30D; &#xD55C; &#xC6A9; &#xD574;&#xB3C4; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; c-myc &#xD0DC;&#xADF8; (2) &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC800;&#xD558;. &#xB450; &#xBB38;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD574;&#xACB0; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;: (i) &#xB2E8;&#xC77C; &#xCCB4;&#xC778; &#xD56D; &#xCCB4; &#xB2E8;&#xD3B8; (&#xB531;&#xC9C0;) &#xD56D; &#xCCB4; &#xB2E8;&#xD3B8;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; (ii)&#xB294; periplasmic&#xC758; co-expression&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Skp &#xBCF4;&#xD638;&#xC790;&#xB97C; scFv &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xCE74;&#xD30C; &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (Ck) &#xCCB4;&#xC778; &#xC735;&#xD569;. &#xC218;&#xC6A9; &#xC131;, &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB294;&#xC774; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294;, &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xD45C;&#xC2DC; scFvs &#xB610;&#xB294; scAbs &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xC218; immunoassays anti-phage &#xD56D; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xD615; &#xC2E0;&#xD638; &#xC99D;&#xD3ED; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; ELISA &#xC2DC; &#xC57D;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACE0;&#xB9BD; &#xB41C; &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xD56D; &#xCCB4; B. melitensis&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xAE30;&#xC874; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB85C; &#xB110; YST 9.2.1 &#xB2EC;&#xB9AC; &#xD398;&#xC2A4;&#xD2B8; pseudotuberculosis&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC808;&#xC5F0; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC804;&#xC7C1; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; Brucella melitensis &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD56D; &#xCCB4; &#xB2E8;&#xD3B8;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;.

Brucella melitensis es un pat&oacute;geno animal altamente infeccioso capaz de provocar una recurrente debilitante enfermedad en los seres humanos y por lo tanto es una prioridad en la lista de agentes de guerra biol&oacute;gica. Genes de inmunoglobulina de ratones inmunizados con una cepa de gamma irradiadas B. melitensis 16 M fueron utilizados para construir una biblioteca que fue defendida por phage display contra bacterias semejantemente preparadas. Las part&iacute;culas de fagos seleccionados que brinda una se&ntilde;al de fuerte enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) contra las c&eacute;lulas irradiadas gamma B. melitensis. Sin embargo, grandes esfuerzos para expresar el fragmento de regi&oacute;n variable de cadena &uacute;nica respectivos anticuerpo (scFv) en forma soluble no pudieron debido a: (i) pobre solubilidad y la degradaci&oacute;n (ii) in vivo de la etiqueta de c-myc, utilizada para la detecci&oacute;n de los anticuerpos recombinantes. Ambos problemas pod&iacute;an ser abordados por: (i) una cadena de dominio constante (Ck) de cadena ligera kappa humana a los fragmentos para generar fragmentos de anticuerpos de una sola cadena anticuerpo fragmento (Sarna) y (ii) por la coexpresi&oacute;n de la periplasmic acompa&ntilde;ante Skp de fusi&oacute;n. Mientras que podr&iacute;an producirse anticuerpos solubles, funcionales de esta manera, scFvs o costras Fago-mostrando todav&iacute;a fueron encontrados para ser superiores reactivos de ELISA para inmunoensayos, debido a la amplificaci&oacute;n de la se&ntilde;al grande por anticuerpos anti-phage. Los anticuerpos de Fago aislados fueron demostrados para ser altamente espec&iacute;ficos de B. melitensis y no reconoci&oacute; la Yersinia pseudotuberculosis en contraste con el actual diagn&oacute;stico YST monoclonal 9.2.1.

Aislamiento y expresi&oacute;n de fragmentos de anticuerpos recombinantes para el pat&oacute;geno de la guerra biol&oacute;gica Brucella melitensis.

&#x8981;&#x5145;&#x5206;&#x5229;&#x7528;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5F53;&#x524D;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5FC5;&#x987B;&#x4E30;&#x5BCC;&#x4E3A;&#x4ECE;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x70B9;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x5728;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x6355;&#x83B7;&#x63A2;&#x9488;&#x6765;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7EA6; 3.9 mb &#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x76EE;&#x6807;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6742;&#x4EA4;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x5E73;&#x94FA;&#x63A2;&#x5934;&#x9891;&#x7387;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x751F;&#x6210;&#x5E8F;&#x5217;&#x6570;&#x636E;&#x9AD8;&#x5747;&#x5300;&#x8986;&#x76D6;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x83B7;&#x5F97; 93%&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#xFF0C;&#x8C03;&#x7528;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x5927;&#x4E8E; 99%&#x3002;

&#x4ECE;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x6742;&#x4EA4;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x5BCC;&#x96C6;&#x3002;

To exploit fully the potential of current sequencing technologies for population-based studies, one must enrich for loci from the human genome. Here we evaluate the hybridization-based approach by using oligonucleotide capture probes in solution to enrich for approximately 3.9 Mb of sequence target. We demonstrate that the tiling probe frequency is important for generating sequence data with high uniform coverage of targets. We obtained 93% sensitivity to detect SNPs, with a calling accuracy greater than 99%.

Enrichment of sequencing targets from the human genome by solution hybridization.

Pour exploiter pleinement le potentiel des technologies de s&eacute;quen&ccedil;age actuelles pour &eacute;tudes populationnelles, on doit enrichir pour locus dans le g&eacute;nome humain. Ici, nous &eacute;valuons l&#39;approche ax&eacute;e sur l&#39;hybridation &agrave; l&#39;aide des sondes oligonucl&eacute;otidiques capture en solution d&#39;enrichir &agrave; environ 3,9 Mo de cible de la s&eacute;quence. Nous d&eacute;montrons que la fr&eacute;quence de sonde de carrelage est importante pour g&eacute;n&eacute;rer des donn&eacute;es de s&eacute;quence avec une couverture uniforme &eacute;lev&eacute;e des cibles. Nous avons obtenu 93 % sensibilit&eacute; pour d&eacute;tecter des SNP, avec une pr&eacute;cision d&#39;appel sup&eacute;rieure &agrave; 99 %.

Enrichissement des cibles de s&eacute;quen&ccedil;age du g&eacute;nome humain par hybridation de la solution.

Um das Potenzial der aktuellen Technologien f&uuml;r bev&ouml;lkerungsbezogenen Studien vollst&auml;ndig zu nutzen, muss man f&uuml;r Loci von menschlichen Genoms anzureichern. Hier bewerten wir den Hybridisierung-Ansatz mit Oligonucleotide Erfassung Sonden in L&ouml;sung f&uuml;r ca. 3,9 Mb Sequenz Target zu bereichern. Wir zeigen, dass die Fliesen Sonde Frequenz wichtig zur Erzeugung von Sequenzdaten mit hohen gleichm&auml;&szlig;ige Abdeckung der Ziele ist. Wir erhalten 93 % Empfindlichkeit um SNPs, mit einer aufrufenden gr&ouml;&szlig;er als 99 % Genauigkeit zu erkennen.

Bereicherung der Sequenzierung Ziele von menschlichen Genoms von L&ouml;sung Hybridisierung.

Per sfruttare appieno le potenzialit&agrave; delle attuali tecnologie di sequenziamento per studi basati sulla popolazione, uno deve arricchire per loci dal genoma umano. Qui valutiamo l&#39;approccio basato su ibridazione tramite le sonde del oligonucleotide cattura in soluzione per arricchire per circa 3,9 Mb di destinazione sequenza. Dimostriamo che la frequenza della sonda la piastrellatura &egrave; importante per la generazione di dati di sequenza con alta copertura uniforme degli obiettivi. Abbiamo ottenuto il 93% di sensibilit&agrave; per rilevare SNPs, con una chiamata accuratezza superiore al 99%.

Arricchimento di obiettivi sequenziamento del genoma umano tramite l&#39;ibridazione di soluzione.

&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; &#x30C6;&#x30AF;&#x30CE;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x4EBA;&#x53E3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x60AA;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;1 &#x3064;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x3092;&#x8C4A;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D04; 3.9 Mb &#x3092;&#x8C4A;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x4EA4;&#x914D;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x304C;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x5747;&#x4E00;&#x306A;&#x30AB;&#x30D0;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B8;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SNPs&#x3001;99% &#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x3092;&#x547C;&#x3073;&#x51FA;&#x3057;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x611F;&#x5EA6;&#x306E; 93% &#x3092;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3002;

&#xC778;&#xAD6C; &#xAE30;&#xBC18; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD604;&#xC7AC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xAE30;&#xC220;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC545;&#xC6A9; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xD558;&#xB098; &#xC778;&#xAC04; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0;&#xC11C; loci&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD48D;&#xBD80; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xC57D; 3.9 Mb&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD48D;&#xBD80; &#xD558; &#xAC8C; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; oligonucleotide &#xCEA1;&#xCC98; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD50; &#xC7A1; &#xAE30;&#xBC18; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAE30;&#xC640; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xB294; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xADE0;&#xC77C; &#xD55C; &#xBC94;&#xC704;&#xC640; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xBCF4;&#xC5EC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD638;&#xCD9C; &#xC815;&#xD655;&#xB3C4; 99% &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD070; Snp, &#xAC10;&#xC9C0; &#xAC10;&#xB3C4; 93% &#xD68D;&#xB4DD;

&#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xAD50; &#xC7A1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xAC04; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xB300;&#xC0C1; &#xB18D;&#xCD95;.

Para aprovechar plenamente el potencial de las tecnolog&iacute;as actuales de la secuencia para estudios de base poblacional, uno debe enriquecer para loci del genoma humano. Aqu&iacute; evaluamos el enfoque de hibridaci&oacute;n utilizando sondas de oligonucle&oacute;tidos captura en soluci&oacute;n para enriquecer por aproximadamente 3,9 Mb de destino de la secuencia. Demostramos que la frecuencia de la sonda de mosaico es importante para la generaci&oacute;n de datos de la secuencia con alta cobertura uniforme de objetivos. Obtuvimos el 93% de sensibilidad para detectar SNPs, con una llamada exactitud superior al 99%.

Enriquecimiento de los objetivos de la secuenciaci&oacute;n del genoma humano por hibridaci&oacute;n de la soluci&oacute;n.

&#x4E0B;&#x4E00;&#x4EE3; DNA &#x6D4B;&#x5E8F;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6D41;&#x9700;&#x8981;&#x7CBE;&#x786E;&#x7684;&#x91CF;&#x5316;&#x7684; DNA &#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x8FDB;&#x884C;&#x6392;&#x5217;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FBF;&#x786E;&#x4FDD;&#x6700;&#x4F73;&#x6027;&#x80FD;&#x7684;&#x6587;&#x4E66;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BF4;&#x660E;&#x5982;&#x4F55;&#x4F7F;&#x7528; qPCR &#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x4E0B;&#x4E00;&#x4EE3;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684; DNA &#x5E93;&#x3002;&#x53E6;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; qPCR &#x91CF;&#x5316;&#x53EF;&#x80FD;&#x5141;&#x8BB8;&#x6539;&#x8FDB;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x672C;&#x56FD;&#x4E00;&#x822C;&#x4E8B;&#x52A1;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6D41;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x51CF;&#x5C11;&#x5E93; DNA &#x6240;&#x9700;&#xFF0C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x5728;&#x91CF;&#x5316; amplifiable DNA&#xFF0C;&#x51C6;&#x786E;&#x6027;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x51CF;&#x5C11;&#x6216;&#x6D88;&#x9664;&#x9700;&#x8981;&#x653E;&#x5927; DNA &#x6D4B;&#x5E8F;&#x524D;&#x907F;&#x514D;&#x653E;&#x5927;&#x504F;&#x89C1;&#x7684;&#x91CF;&#x3002;

&#x5FEB;&#x901F;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x4E0B;&#x4E00;&#x4EE3;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x7684; DNA &#x5E93;&#x3002;

The next-generation DNA sequencing workflows require an accurate quantification of the DNA molecules to be sequenced which assures optimal performance of the instrument. Here, we demonstrate the use of qPCR for quantification of DNA libraries used in next-generation sequencing. In addition, we find that qPCR quantification may allow improvements to current NGS workflows, including reducing the amount of library DNA required, increasing the accuracy in quantifying amplifiable DNA, and avoiding amplification bias by reducing or eliminating the need to amplify DNA before sequencing.

Rapid quantification of DNA libraries for next-generation sequencing.

Les workflows de s&eacute;quen&ccedil;age de l&#39;ADN nouvelle g&eacute;n&eacute;ration n&eacute;cessitent une quantification pr&eacute;cise des mol&eacute;cules d&#39;ADN &agrave; s&eacute;quencer, qui assure une performance optimale de l&#39;instrument. Ici, nous d&eacute;montrons l&#39;utilisation de qPCR pour la quantification des biblioth&egrave;ques d&#39;ADN utilis&eacute;es dans le s&eacute;quen&ccedil;age de prochaine g&eacute;n&eacute;ration. En outre, on trouve que qPCR quantification peut permettre des am&eacute;liorations &agrave; des workflows NGS actuels, notamment en r&eacute;duisant la quantit&eacute; d&#39;ADN requis, augmentant l&#39;exactitude dans la quantification d&#39;ADN amplifiable et en &eacute;vitant les biais d&#39;amplification en r&eacute;duisant ou en &eacute;liminant la n&eacute;cessit&eacute; d&#39;amplifier l&#39;ADN avant s&eacute;quen&ccedil;age de biblioth&egrave;que.

Quantification rapide des biblioth&egrave;ques d&#39;ADN pour l&#39;ordonnancement de la prochaine g&eacute;n&eacute;ration.

Die n&auml;chste Generation DNA Sequenzierung Workflows erfordern eine genaue Quantifizierung der DNA-Molek&uuml;le zu sequenziert werden die sorgt f&uuml;r eine optimale Leistung des Ger&auml;tes. Hier zeigen wir die Verwendung von qPCR zur Quantifizierung von DNA-Bibliotheken, die in der Sequenzierung der n&auml;chsten Generation verwendet. Au&szlig;erdem finden wir, dass qPCR Quantifizierung Verbesserungen an aktuellen NGS-Workflows, einschlie&szlig;lich der Reduzierung der Bibliothek DNA erforderlich, erh&ouml;hen die Genauigkeit in der amplifiable DNA quantifizieren und Vermeidung von Verst&auml;rkung Voreingenommenheit durch Reduzierung oder Beseitigung der Notwendigkeit zur Verst&auml;rkung von DNA vor der Sequenzierung zulassen kann.

Schnelle Quantifizierung von DNA-Bibliotheken f&uuml;r die Sequenzierung der n&auml;chsten Generation.

Flussi di lavoro di sequenziamento del DNA generazione richiedono un&#39;accurata quantificazione delle molecole di DNA da sequenziare che assicura prestazioni ottimali dello strumento. Qui, ci illustrano l&#39;utilizzo di qPCR per la quantificazione delle librerie di DNA utilizzato nel sequenziamento di nuova generazione. Inoltre, troviamo che la qPCR quantificazione pu&ograve; consentire miglioramenti all&#39;attuale Workflow NGS, compresa la riduzione della quantit&agrave; di libreria DNA necessario, aumentando l&#39;accuratezza nel DNA amplifiable misurando e di evitare bias di amplificazione riducendo o eliminando la necessit&agrave; di amplificare il DNA prima di sequenziamento.

Rapida quantificazione delle librerie del DNA per il sequenziamento di nuova generazione.

&#x6B21;&#x4E16;&#x4EE3; DNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; &#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3059;&#x308B; DNA &#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3068;&#x697D;&#x5668;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x30D1;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x4FDD;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6B21;&#x4E16;&#x4EE3;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B; DNA &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E; qPCR &#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; qPCR &#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA; &#x30C7;&#x30B8;&#x30BF;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EA;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; DNA &#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306E;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x306E;&#x5411;&#x4E0A;&#x3068;&#x524A;&#x6E1B;&#x3084;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x524D;&#x306B; DNA &#x3092;&#x5897;&#x5E45;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x306A;&#x304F;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x5897;&#x5E45;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A; DNA &#x306E;&#x91CF;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x3059;&#x308B;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E; NGS &#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x3078;&#x6539;&#x5584;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6B21;&#x4E16;&#x4EE3;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x7528; DNA &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3002;

&#xB2E4;&#xC74C;-&#xC138;&#xB300; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xC6CC;&#xD06C;&#xD50C;&#xB85C;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xC545;&#xAE30;&#xC758; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xC131;&#xB2A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xBD80; &#xB7C9; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xD560; DNA &#xBD84;&#xC790;&#xC758;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC138;&#xB300; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; DNA &#xB3C4;&#xC11C;&#xAD00;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; Qpcr&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; qPCR &#xC815;&#xB7C9;&#xD654; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; DNA &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xCE21;&#xC815; amplifiable DNA&#xC5D0; &#xC815;&#xD655;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC0F; &#xAC10;&#xC18C; &#xB610;&#xB294; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xD558;&#xAE30; &#xC804;&#xC5D0; DNA&#xB97C; &#xC99D;&#xD3ED; &#xD558;&#xB294; &#xD544;&#xC694;&#xB97C; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558; &#xC5EC; &#xC99D;&#xD3ED; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD53C;&#xD558;&#xACE0; &#xC591;&#xC744; &#xC904;&#xC774;&#xB294; &#xB4F1; &#xD604;&#xC7AC; NGS &#xC6CC;&#xD06C;&#xD50C;&#xB85C; &#xAC1C;&#xC120; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCC28;&#xC138;&#xB300; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; DNA &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;.

Los flujos de trabajo de la secuencia de ADN de pr&oacute;xima generaci&oacute;n requieren una cuantificaci&oacute;n precisa de las mol&eacute;culas de ADN para ser secuenciado que asegura un rendimiento &oacute;ptimo del instrumento. Aqu&iacute;, demostramos que el uso de qPCR para la cuantificaci&oacute;n de las bibliotecas de ADN utilizado en la generaci&oacute;n de la secuencia. Adem&aacute;s, encontramos que la qPCR cuantificaci&oacute;n puede permitir mejoras a los actuales flujos de trabajo NGS, incluyendo la reducci&oacute;n de la biblioteca de ADN necesario, aumentar la precisi&oacute;n en la cuantificaci&oacute;n de ADN amplificable y evitar el sesgo de amplificaci&oacute;n reduciendo o eliminando la necesidad de amplificar ADN antes de la secuencia.

Article	Year
Isolation and expression of recombinant antibody fragments to the biological warfare pathogen Brucella melitensis. Journal of immunological methods\| PubMed ID: 12738372	2003
Enrichment of sequencing targets from the human genome by solution hybridization. Genome biology\| PubMed ID: 19835619	2009
Rapid quantification of DNA libraries for next-generation sequencing. Methods (San Diego, Calif.)\| PubMed ID: 20215015	2010

Scott Happe

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