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PAR-CliP - A Method to Identify Transcriptome-wide the Binding Sites of RNA Binding Proteins

RNA transcripts are subjected to post-transcriptional gene regulation by interacting with hundreds of RNA-binding proteins (RBPs) and microRNA-containing ...

Rockefeller University

&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x86CB;&#x767D; hedgehog (Hh) &#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x683C;&#x5C40;&#x4E2D;&#x5177;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#xFF0C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x6E38;&#x79BB;&#x4E0D;&#x80B2;&#x75C7;&#x51FA;&#x73B0; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x4FE1;&#x53F7;&#x590D;&#x6742; (HSC) &#x6700;&#x521D;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x5E76;&#x63CF;&#x8FF0;&#x6B64; Hh &#x7EC4;&#x4EF6;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5176;&#x9057;&#x4F20;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0E; hh&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5F7C;&#x6B64;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x5B83;&#x53EA;&#x662F;&#x5728;&#x8FD1;&#x51E0;&#x5E74;&#x6765;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x529F;&#x80FD;&#x5DF2;&#x5F00;&#x59CB;&#x88AB;&#x89E3;&#x5F00;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86;&#x957F;&#x8005;&#x4F4F;&#x5C4B;&#xFF0C;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (&#x798F;) &#x7194;&#x878D;&#x548C;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D; Costal2 (Cos2) &#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x91CD;&#x65B0;&#x7EC4;&#x5EFA;&#x5BCC;&#x534E;/Cos2 &#x590D;&#x6742;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x6240;&#x793A;&#xFF0C;&#x5BCC;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x76F4;&#x63A5;&#x5173;&#x8054;&#x5230; Cos2&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x4E00;&#x79CD;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5927;&#x5C0F;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x524D;&#x9762;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x679C;&#x8747;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x63D0;&#x53D6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x51B3;&#x5B9A;&#x5BCC;&#x7684;&#x7FA7;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x548C;&#x8DB3;&#x591F;&#x7528;&#x4E8E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x798F;&#xFF0C;&#x5230; Cos2&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x610F;&#x4E49;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5916;&#x57DF;&#x798F;&#x5728;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x82CD;&#x8747;&#x7684;&#x7FA7;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x7684;&#x57DF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x82CD;&#x8747;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x770B;&#x5230;&#x5085;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x548C;&#x7B26;&#x5408; hh &#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x5BCC;&#x7684;&#x7FA7;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x80FD;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D88;&#x6781;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x9632;&#x6B62;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Cos2 &#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x5BCC;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x9488;&#x5BF9;&#x4E2D;&#x65AD;&#x7684; HSC &#x6CC4;&#x9732;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;

&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x7FA7;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x523A;&#x732C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

The secreted protein hedgehog (Hh) plays a critical role in the developmental patterning of multiple tissues. In Drosophila melanogaster, a cytosolic multiprotein signaling complex appears necessary for Hh signaling. Genes that encode components of this Hh signaling complex (HSC) were originally identified and characterized based on their genetic interactions with hh, as well as with each other. It is only in recent years that the mechanistic functions of these components have begun to be unraveled. Here, we have investigated the relationship between two components of the HSC, the serine/threonine protein kinase Fused (Fu) and the kinesin-related protein Costal2 (Cos2). We have reconstituted a Fu/Cos2 complex in vitro and shown that Fu is able to directly associate with Cos2, forming a complex whose molecular size is similar to a previously described complex found in Drosophila cell extracts. We have also determined that the carboxyl-terminal domain of Fu is necessary and sufficient for the direct binding of Fu to Cos2. To validate the physiological relevance of this interaction, we overexpressed the carboxyl-terminal domain of Fu in wild-type flies. These flies exhibit a phenotype similar to that seen in fu mutants and consistent with an hh loss-of-function phenotype. We conclude that the carboxyl-terminal domain of Fu can function in a dominant negative manner, by preventing endogenous Fu from binding to Cos2. Thus, we provide the first evidence that Hh signaling can be compromised by targeting the HSC for disruption.

The carboxyl-terminal domain of the protein kinase fused can function as a dominant inhibitor of hedgehog signaling.

Le h&eacute;risson de prot&eacute;ine s&eacute;cr&eacute;t&eacute;e (Hh) joue un r&ocirc;le essentiel dans la structuration du d&eacute;veloppement de plusieurs tissus. Chez Drosophila melanogaster, un cytosolique multiprotein complexes de signalisation s&#39;av&egrave;re n&eacute;cessaire pour la signalisation de Hh. Les g&egrave;nes qui codent pour les composants de ce Hh signalisation complexe (HSC) ont &eacute;t&eacute; initialement identifi&eacute; et caract&eacute;ris&eacute; bas&eacute; sur leurs interactions g&eacute;n&eacute;tiques avec hh, ainsi qu&#39;avec l&#39;autre. C&#39;est seulement dans ces derni&egrave;res ann&eacute;es que les fonctions m&eacute;caniques de ces composantes ont commenc&eacute; &agrave; &ecirc;tre d&eacute;m&ecirc;l&eacute;. Ici, nous avons &eacute;tudi&eacute; la relation entre les deux composantes du CSS, la s&eacute;rine/thr&eacute;onine kinase fondue (Fu) et la prot&eacute;ine kin&eacute;sine Costal2 (Cos2). Nous avons reconstitu&eacute; un Fu/Cos2 complex qu&#39;in vitro et indiqu&eacute; que Fu est en mesure d&#39;associer directement &agrave; Cos2, formant un complexe mol&eacute;culaire dont la taille est similaire &agrave; une drosophile dans complexe d&eacute;crite pr&eacute;c&eacute;demment, extraits cellulaires. Nous avons &eacute;galement d&eacute;termin&eacute; que le domaine c-terminal de Fu est n&eacute;cessaire et suffisant pour la liaison directe de Fu &agrave; Cos2. Pour valider la pertinence physiologique de cette interaction, nous surexprim&eacute;s le domaine c-terminal de Fu chez les mouches de type sauvage. Ces mouches pr&eacute;sentent un ph&eacute;notype similaire &agrave; celle observ&eacute;e chez les mutants fu et compatible avec un ph&eacute;notype de perte de fonction de hh. Nous concluons que le domaine c-terminal de Fu peut fonctionner d&#39;une mani&egrave;re n&eacute;gative dominante, en emp&ecirc;chant les Fu endog&egrave;ne de liaison &agrave; Cos2. Ainsi, nous fournissent la premi&egrave;re preuve que la signalisation de Hh peut &ecirc;tre compromise en ciblant le HSC de perturbation.

Le domaine c-terminal de la prot&eacute;ine kinase fusionn&eacute; peut fonctionner comme un inhibiteur de la dominant de la signalisation de h&eacute;risson.

Die Carboxyl-terminalen Dom&#xE4;ne der Proteinkinase fusioniert ist, kann als dominanter Inhibitor der Hedgehog-Signalisieren funktionieren zu k&#xF6;nnen.

Il riccio di proteine secrete (Hh) svolge un ruolo critico nel patterning dello sviluppo dei tessuti multipli. In Drosophila melanogaster, un multiprotein citosolico segnalazione complesso appare necessaria per la segnalazione di Hh. Geni che codificano le componenti di questo Hh segnalazione complesso (HSC) originalmente sono stati identificati e caratterizzati basati sulle loro interazioni genetiche con hh, nonch&eacute; con ogni altro. &Egrave; solo negli ultimi anni che le funzioni meccanicistiche di questi componenti hanno cominciato ad essere svelati. Qui, abbiamo studiato la relazione tra i due componenti di HSC, la serina/treonina chinasi di proteina (Fu) con fusibile e la chinesina-related protein Costal2 (Cos2). Noi abbiamo ricostituito un Fu/Cos2 complessi in vitro e mostrato che Fu &egrave; in grado di associare direttamente a Cos2, formando un complesso cui dimensione molecolare &egrave; simile a una drosofila trovata nel complessa descritta precedentemente estratti delle cellule. Abbiamo anche determinato che il dominio carbossi-terminale di Fu &egrave; necessaria e sufficiente per il binding diretto di Fu a Cos2. Per convalidare la rilevanza fisiologica di questa interazione, noi overexpressed il dominio carbossi-terminale del Fu nel selvaggio-tipo mosche. Queste mosche mostrano un fenotipo simile a quello visto in fu mutanti e coerente con un fenotipo di perdita di funzione di hh. Possiamo concludere che il dominio carbossi-terminale del Fu pu&ograve; funzionare in un modo negativo dominante, impedendo endogeno Fu associazione a Cos2. Cos&igrave;, ci forniscono la prima prova che Hh segnalazione pu&ograve; essere compromessa da HSC per turbativa di targeting.

Il dominio carbossi-terminale della proteina chinasi fuse di pu&ograve; funzionare come un inibitore dominante del hedgehog signaling.

&#x5206;&#x6CCC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0; (Hh) &#x306F;&#x8907;&#x6570;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x3067;&#x306F;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AD;&#x30A4;&#x30ED;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x69CB;&#x6210; Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9; &#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53; (HSC) &#x3044;&#x305F;&#x3082;&#x3068;&#x3082;&#x3068;&#x8B58;&#x5225;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7279;&#x5FB4;&#x3053;&#x306E; Hh &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F; hh&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x89E3;&#x304B;&#x308C;&#x308B;&#x3057;&#x59CB;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6700;&#x8FD1;&#x5E74;&#x9593;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8; (Cos2) HSC&#x3001;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6EB6;&#x878D; &#xFF08;&#x30D5;&#x30FC;&#xFF09; &#x3068;&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; Costal2 &#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;Fu/Cos2 &#x306E; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x793A;&#x3059;&#x305D;&#x306E; Fu Cos2&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x304C;&#x30BB;&#x30EB;&#x62BD;&#x51FA;&#x306F;&#x524D;&#x8FF0;&#x3057;&#x305F;&#x8907;&#x96D1;&#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3067;&#x3059;&#x8907;&#x96D1;&#x3092;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3082; Fu &#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; Cos2 &#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304B;&#x3064;&#x5341;&#x5206;&#x306A; Fu &#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x59A5;&#x5F53;&#x6027;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;Fu &#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30CF;&#x30A8;&#x3092;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30CF;&#x30A8;&#x306F;&#x3001;&#x8868;&#x73FE;&#x578B; fu &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3068;&#x640D;&#x5931;&#x95A2;&#x6570;&#x306B;&#x8868;&#x73FE;&#x306F; hh &#x306E;&#x578B;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x898B;&#x3066;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Cos2 &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; Fu &#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; Fu &#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x5426;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054; HSC &#x6DF7;&#x4E71;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4FB5;&#x5BB3;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBE44; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; (Hh) &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD328;&#xD134;&#xD654;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. Drosophila melanogaster&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; cytosolic multiprotein Hh &#xC2E0;&#xD638; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1; &#xBCF5;&#xC7A1; (HSC)&#xC740; &#xC6D0;&#xB798; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774; Hh&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; hh, &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xAC01;&#xAC01; &#xB2E4;&#xB978; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD80;&#xD488;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4; &#xAE30;&#xB2A5; raveled &#xB418;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC2DC;&#xC791; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCD5C;&#xADFC; &#xBA87; &#xB144; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0; &#xB9CC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB450; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; HSC &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC8FC;&#xC785; (&#xD478;)&#xC640; kinesin &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; costal2&#xC758; (Cos2) &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD478;/Cos2 &#xADF8; &#xD478;&#xAC00; Cos2, &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xD06C;&#xAE30;&#xC758; &#xC55E;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xBA85;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCFC;&#xB41C; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xC140; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC5F0;&#xACB0;&#xD560; &#xC218; &#xCCB4; &#xC678;&#xC640; &#xAC19;&#xC774; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD478; carboxyl &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD544;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xD478;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; Cos2 &#xD558;&#xB294; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801;&#xC778; &#xAD00;&#xB828;&#xC131;&#xC758; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC; overexpressed &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xD30C;&#xB9AC; &#xD478; carboxyl &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;. &#xC774; &#xD30C;&#xB9AC; &#xD478; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; hh &#xAE30;&#xB2A5; &#xC190;&#xC2E4; phenotype&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58; &#xBCF8; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD478; carboxyl &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0DD; &#xD478; Cos2 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB418;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD558;&#xAC8C; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xACB0;&#xB860; &#xC9C0;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Hh &#xC2E0;&#xD638; &#xC911;&#xB2E8;&#xC5D0; HSC&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xC5EC; &#xD6FC;&#xC190; &#xC218;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Carboxyl &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544;&#xC758; &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El erizo de prote&iacute;na secretada (Hh) desempe&ntilde;a un papel cr&iacute;tico en el patr&oacute;n de desarrollo de tejidos m&uacute;ltiples. En Drosophila melanogaster, un proteico citos&oacute;lica se&ntilde;alizaci&oacute;n complejo parece necesario para se&ntilde;alizaci&oacute;n Hh. Genes que codifican los componentes de este Hh se&ntilde;alizaci&oacute;n complejo (HSC) fueron originalmente identificado y caracterizado basan en sus interacciones gen&eacute;ticas con hh, as&iacute; como con los dem&aacute;s. Es s&oacute;lo en los &uacute;ltimos a&ntilde;os que las funciones mec&aacute;nicas de estos componentes han comenzado a ser revelados. Aqu&iacute;, hemos investigado la relaci&oacute;n entre los dos componentes del HSC, la quinasa serina/treonina fundida (Fu) y la prote&iacute;na relacionada con la quinesina Costal2 (Cos2). Nos hemos reconstituido un Fu/Cos2 complejo que in vitro y se muestra eso Fu es capaz de asociar directamente con Cos2, formando un complejo cuyo tama&ntilde;o molecular es similar a una Drosophila en complejo descrita extractos celulares. Tambi&eacute;n hemos determinado que el dominio carboxilo-terminal de Fu es necesario y suficiente para el enlace directo de Fu Cos2. Para validar la relevancia fisiol&oacute;gica de esta interacci&oacute;n, sobreexpresa el dominio carboxilo-terminal de Fu en moscas de tipo salvaje. Las moscas presentan un fenotipo similar a la observada en mutantes de fu y consistente con un fenotipo de p&eacute;rdida de funci&oacute;n de hh. Concluimos que el dominio carboxilo-terminal de Fu puede funcionar de una manera negativa dominante, impidiendo que Fu end&oacute;geno vinculante a Cos2. As&iacute;, nos proporcionan la primera evidencia que se puede comprometer se&ntilde;alizaci&oacute;n Hh apuntando a la HSC para la interrupci&oacute;n.

El dominio carboxilo terminal de la prote&iacute;na quinasa fundido puede funcionar como un inhibidor dominante de la se&ntilde;alizaci&oacute;n de erizo.

&#x523A;&#x732C; (Hh) &#x7684; morphogens &#x5BB6;&#x5EAD;&#x5728;&#x4F17;&#x591A;&#x540E;&#x751F;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6307;&#x5BFC;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528; Hh &#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x53D1;&#x6325;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547D;&#x8FD0;&#x51B3;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5F02;&#x5E38; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x65E0;&#x6570;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75BE;&#x75C5;&#x4E2D;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x88AB;&#x542F;&#x52A8;&#x65F6; Hh &#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5176; Patched (Ptc) &#x6FC0;&#x6D3B; Smoothened (Smo) &#x7684;&#x8DE8;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;Smo &#x4F20;&#x8F93;&#x5230;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x76F8;&#x5173;&#x523A;&#x732C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x590D;&#x6742; (HSC) &#x5176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x81F3;&#x5C11;&#xFF0C;HSC &#x7531;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D; Costal2 (Cos2) &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (&#x798F;) &#x7194;&#x878D;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x4F53;&#x5916;&#x5C04;&#x7CBE;&#x6CD5;&#x8098; (Ci)&#x3002;HSC &#x6D3B;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x6539;&#x53D8;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x548C;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x8BCD;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x6BD4;&#x4F8B;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x5404;&#x79CD; Hh &#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x6D4B;&#x7ED8;&#x5904;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E0E; hsc &#x4FE1;&#x53F7;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D9;&#x8FF0;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x529F;&#x80FD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x6D4B;&#x7ED8;&#x5904;&#x548C; Cos2&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x76F4;&#x63A5;&#x548C;&#x5141;&#x8BB8;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; Ci Hh &#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E86;&#x89E3; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E2D;&#x7684;&#x6700;&#x540E;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x5DEE;&#x8DDD;&#x5728;&#x586B;&#x5145;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x6CA1;&#x6709;&#x4E2D;&#x95F4;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x9700;&#x8981;&#x8FDE;&#x63A5;&#x5230; HSC &#x7684;&#x6D4B;&#x7ED8;&#x5904;&#x3002;

&#x8DE8;&#x819C;&#x86CB;&#x767D; Smoothened &#x548C; Costal2 &#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

The hedgehog (Hh) family of morphogens plays important instructional roles in the development of numerous metazoan structures. Consistent with the role Hh homologs play in cell fate determination, aberrant Hh signaling results in numerous human pathologies. Hh signal transduction is initiated when Hh binds to its receptor Patched (Ptc), activating the transmembrane protein Smoothened (Smo). Smo transmits its activation signal to a microtubule-associated Hedgehog signaling complex (HSC). At a minimum, the HSC consists of the Kinesin-related protein Costal2 (Cos2), the protein kinase Fused (Fu), and the transcription factor Cubitus interruptus (Ci). In response to HSC activation, the ratio between repressor and activator forms of Ci is altered, determining the expression levels of various Hh target genes. The steps between Smo activation and signaling to the HSC have not been described. Here, we describe a functional interaction between Smo and Cos2, which is necessary for Hh signaling. We propose that this interaction is direct and allows for activation of Ci in response to Hh. This work fills in the last major gap in our understanding of the Hh signal transduction pathway by suggesting that no intermediate signal is required to connect Smo to the HSC.

Identification of a functional interaction between the transmembrane protein Smoothened and the kinesin-related protein Costal2.

La famille hedgehog (Hh) des morphog&egrave;nes joue un r&ocirc;le p&eacute;dagogique important dans l&#39;&eacute;laboration de nombreuses structures de m&eacute;tazoaires. Conforme au r&ocirc;le Hh homologues jouent dans la d&eacute;termination du destin cellulaire, Hh aberrant, signalisation des r&eacute;sultats dans nombreuses pathologies humaines. Transduction du signal de hh Hh se lie &agrave; son r&eacute;cepteur Patched (Ptc), activation de la prot&eacute;ine transmembranaire Smoothened (Smo) s&#39;amorce. Smo transmet son signal d&#39;activation &agrave; un associ&eacute;es aux microtubules h&eacute;risson de signalisation complexes (HSC). &Agrave; tout le moins, le HSC est constitu&eacute; de la prot&eacute;ine li&eacute;e &agrave; la kin&eacute;sine Costal2 (Cos2), la prot&eacute;ine kinase fondue (Fu) et le facteur de transcription Cubitus interruptus (Ci). En r&eacute;ponse &agrave; l&#39;activation de l&#39;HSC, le rapport entre les formes r&eacute;presseur et activateur de Ci est alt&eacute;r&eacute;, d&eacute;terminer les niveaux d&#39;expression des diff&eacute;rents g&egrave;nes cibles de Hh. Les &eacute;tapes entre l&#39;activation Smo et signalisation de la HSC n&#39;ont pas &eacute;t&eacute; d&eacute;crites. Nous d&eacute;crivons ici une interaction fonctionnelle entre Smo et Cos2, qui est n&eacute;cessaire pour la signalisation de Hh. Nous proposons que cette interaction est directe et permet l&#39;activation de l&#39;IC en r&eacute;ponse &agrave; Hh. Ce travail remplit la derni&egrave;re lacune importante dans notre compr&eacute;hension de la voie de transduction de signal Hh en sugg&eacute;rant qu&#39;aucun signal interm&eacute;diaire n&#39;est n&eacute;cessaire pour connecter le HSC de Smo.

Identification d&#39;une interaction fonctionnelle entre la prot&eacute;ine transmembranaire Smoothened et la prot&eacute;ine apparent&eacute;e &agrave; la kin&eacute;sine Costal2.

Identifizierung eines funktionellen Wechselwirkung zwischen dem Transmembranprotein Smoothened und der Kinesin-related protein Costal2.

La famiglia hedgehog (Hh) dei morfogeni svolge importanti ruoli educativi nello sviluppo di numerose strutture di metazoi. Coerente con il ruolo di Hh omologhi giocano nella determinazione di destino delle cellule, aberrante Hh segnalazione risultati in numerose patologie umane. Trasduzione del segnale di HH &egrave; iniziata quando Hh si lega al suo recettore patch (Ptc), attivando la proteina transmembrana lisciato (Smo). Smo trasmette il segnale di attivazione a un microtubule-associated Hedgehog signaling complex (HSC). Come minimo, le HSC consiste la chinesina-related protein Costal2 (Cos2), la chinasi di proteina (Fu) con fusibile e il fattore di trascrizione Cubitus interruptus (Ci). In risposta all&#39;attivazione di HSC, &egrave; alterato il rapporto tra forme repressor e attivatore di Ci, determinare i livelli di espressione di diversi geni bersaglio di Hh. Non sono stati descritti i passaggi tra attivazione Smo e segnalazione per l&#39;HSC. Qui, descriviamo un&#39;interazione funzionale tra Smo e Cos2, che &egrave; necessaria per la segnalazione di Hh. Noi proponiamo che questa interazione &egrave; diretta e permette per l&#39;attivazione di Ci in risposta a Hh. Questo lavoro riempie l&#39;ultimo gap principali nella nostra comprensione della via di trasduzione del segnale Hh suggerendo che nessun segnale intermedio &egrave; necessaria per collegare OMU all&#39;HSC.

Identificazione di un&#39;interazione funzionale tra la proteina transmembrana lisciato e la chinesina-related protein Costal2.

&#x30E2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A9;&#x30B2;&#x30F3; &#x30CF;&#x30EA;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF; (Hh) &#x5BB6;&#x65CF;&#x6559;&#x80B2;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3067;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x5F8C;&#x751F;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4; Hh &#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x904B;&#x547D;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3001;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x75C5;&#x614B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x7570;&#x5E38; Hh &#x3067;&#x518D;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Hh &#x305D;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x6ED1;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F; (Smo) &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x9069;&#x7528; (Ptc) &#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3068; Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x304C;&#x958B;&#x59CB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Smo &#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x30CF;&#x30EA;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF; (HSC) &#x306B;&#x9001;&#x4FE1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x4F4E;&#x3067;&#x3082;&#x3001;HSC &#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; Costal2 &#x306E;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059; (Cos2) &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6EB6;&#x878D; &#xFF08;&#x30D5;&#x30FC;&#xFF09; &#x3068;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x8098;&#x81A3;&#x5916;&#x5C04;&#x7CBE; (Ci)&#x3002;HSC &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5404;&#x7A2E;&#x306E; Hh &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; Ci &#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x6BD4;&#x7387;&#x304C;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Smo &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B; HSC &#x3068;&#x624B;&#x9806;&#x304C;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x306E;&#x3042;&#x308B; Smo &#x3068; Cos2&#x3001;&#x9593;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x76F4;&#x63A5;&#x3067;&#x3042;&#x308B; Ci Hh &#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.&#x3053;&#x306E;&#x4ED5;&#x4E8B;&#x306F; Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306B;&#x6700;&#x5F8C;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x30AE;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067; Smo HSC &#x306B;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3059;&#x308B;&#x4E2D;&#x9593;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5857;&#x308A;&#x3064;&#x3076;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6ED1;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; Costal2 &#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3002;

Morphogens&#xC758; &#xD5E4; &#xC9C0; &#xD638; &#xADF8; (Hh) &#xAC00;&#xC871; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; metazoan &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC9C0;&#xCE68; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC; &#xC6B4;&#xBA85; &#xACB0;&#xC815;, &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBCD1; &#xB9AC; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2E0;&#xD638; &#xD0C8; &#xC120; Hh&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; Hh homologs &#xD50C;&#xB808;&#xC774; &#xC5ED;&#xD560;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58;. Hh &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658; Hh &#xAE30; &#xC6CC; &#xC9C4; (Ptc), Smoothened (Smo) &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xBB36;&#xC744; &#xB54C; &#xC2DC;&#xC791; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Smo microtubule &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; (HSC)&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC804;&#xC1A1;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. HSC Kinesin &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Costal2 &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C; (Cos2) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC8FC;&#xC785; (&#xD478;) &#xBC0F; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; Cubitus interruptus (Ci). HSC &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;, Ci&#xC758; &#xC9C4;&#xC555; &#xBC0F; &#xD65C;&#xC131; &#xC81C; &#xD615;&#xD0DC; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBE44;&#xC728; &#xBCC0;&#xACBD;, &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; Hh &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900; &#xACB0;&#xC815;. Smo &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; HSC&#xB97C; &#xC0AC;&#xC774; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB294; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; Hh &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; Smo &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xAE30;&#xB2A5; Cos2, &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC9C1;&#xC811; &#xC774;&#xBA70; Hh&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; Ci&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xACE0;&#xB824;&#xD55C; &#xC81C;&#xC548;. &#xC774; &#xC791;&#xD488; &#xC911;&#xAC04; &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; HSC&#xC5D0; Smo &#xC5F0;&#xACB0; &#xD544;&#xC694;&#xAC00; &#xC81C;&#xC548; &#xD558; &#xC5EC; Hh &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xACBD;&#xB85C; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC8FC;&#xC694; &#xACA9;&#xCC28;&#xC5D0; &#xCC44;&#xC6C1;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Smoothened &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xAE30;&#xB2A5; kinesin &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; costal2&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;.

La familia de hedgehog (Hh) de morf&oacute;genos juega un papel importante de instrucci&oacute;n en el desarrollo de numerosas estructuras metazoarios. Consistente con el papel Hh hom&oacute;logos juegan en determinaci&oacute;n de destino celular, Hh aberrante se&ntilde;alizaci&oacute;n resultados en numerosas patolog&iacute;as humanas. HH transduction de la se&ntilde;al se inicia cuando el Hh se une a su receptor parcheado (Ptc), activaci&oacute;n de la prote&iacute;na transmembrana alisado (Smo). SMO transmite su se&ntilde;al de activaci&oacute;n a un asociada a microt&uacute;bulos erizo se&ntilde;alizaci&oacute;n complejas (HSC). Como m&iacute;nimo, el HSC consiste en la prote&iacute;na relacionada con la quinesina Costal2 (Cos2), la prote&iacute;na quinasa fundida (Fu) y el factor de transcripci&oacute;n Cubitus interruptus (Ci). En respuesta a la activaci&oacute;n de HSC, se altera la relaci&oacute;n entre formas de represor y activador de Ci, determinar los niveles de expresi&oacute;n de varios genes diana de Hh. No se han descrito los pasos entre la activaci&oacute;n de la Smo y se&ntilde;alizaci&oacute;n para la HSC. Aqu&iacute;, describimos una interacci&oacute;n funcional entre Smo y Cos2, que es necesario para la se&ntilde;alizaci&oacute;n de Hh. Proponemos que esta interacci&oacute;n es directa y permite la activaci&oacute;n de Ci en respuesta a Hh. Este trabajo rellena la &uacute;ltima brecha considerable en nuestra comprensi&oacute;n de la v&iacute;a de transducci&oacute;n de la se&ntilde;al de Hh sugiriendo que no hay se&ntilde;al intermedia es necesaria para conectarse Smo HSC.

Identificaci&oacute;n de una interacci&oacute;n funcional entre la prote&iacute;na transmembrana alisado y la prote&iacute;na relacionada con la quinesina Costal2.

&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x8BC1;&#x660E; Hedgehog (Hh) &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x9700;&#x8981;&#x4E00;&#x4E2A; multiprotein &#x590D;&#x6742; &#xFF08;Hedgehog &#x4FE1;&#x53F7;&#x590D;&#x6742; (HSC))&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D; Costal2 (Cos2) &#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (&#x798F;) &#x7194;&#x878D;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x4F53;&#x5916;&#x5C04;&#x7CBE;&#x6CD5;&#x8098; (Ci)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x65F6;&#x957F;&#x8005;&#x4F4F;&#x5C4B;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6709;&#x5173;&#x5206;&#x6570;&#x5728;&#x8702;&#x7A9D;&#x819C;&#x534F;&#x4F1A;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E; Cos2 &#x5C31;&#x80FD;&#x591F;&#x4E2D;&#x7EE7;&#x5230;&#x6C34;&#x6CE1;&#x819C;&#x5916;&#x6E90;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x819C; Cos2 &#x534F;&#x4F1A;&#x662F; Hh &#x654F;&#x611F;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5C55;&#x793A; Cos2 &#x5173;&#x8054;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x8DE8;&#x819C;&#x86CB;&#x767D; Smoothened (Smo) &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x819C;&#x901A;&#x8FC7; Cos2 &#x6709;&#x522B;&#x4E8E;&#x5176;&#x6700;&#x8FD1;&#x4E3A;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x6D4B;&#x7ED8;&#x5904;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x57DF;&#x7684;&#x57DF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7ED3;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027; Cos2 Hh &#x8C03;&#x8282;&#x819C;&#x662F;&#x5176;&#x4E2D; Cos2 &#x6709;&#x52A9;&#x4E8E; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5728;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x661F;&#x4E0E;&#x79BB;&#x6563;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x548C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6A21;&#x578B;&#xFF1A; &#x5176;&#x4E2D;&#x4E00;&#x4E2A;&#x662F; endosome &#x5173;&#x8054;&#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684; Ci (HSC-R)&#xFF0C;&#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x662F; Smo &#x5173;&#x8054;&#x5E76;&#x4FC3;&#x8FDB; Ci &#x6FC0;&#x6D3B; (HSC-A)&#x3002;&#x54CD;&#x5E94; Hh &#x5E76;&#x901A;&#x8FC7; Cos2 &#x4E0E;&#x4E92;&#x52A8;&#xFF0C;&#x6D4B;&#x7ED8;&#x5904;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x65E2; endosome &#x5173;&#x8054; HSC-R &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; HSC A &#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x3002;

&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D; Costal2 &#x5C06;&#x4E0E;&#x819C;&#x7684;&#x523A;&#x732C;&#x654F; Smoothened &#x65E0;&#x5173;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

In Drosophila, Hedgehog (Hh) signal transduction has been shown to require a multiprotein complex (Hedgehog signaling complex (HSC)), which includes the Kinesin-related protein Costal2 (Cos2), the serine/threonine protein kinase Fused (Fu), and the transcription factor Cubitus interruptus (Ci). We present evidence that a biologically relevant fraction of the HSC is found in association with cellular membranes. We demonstrate that Cos2 is capable of tethering an exogenous protein to vesicular membranes and that Cos2 association with membranes is Hh-sensitive. In addition, we demonstrate that Cos2 associates with membranes in cells that lack the transmembrane protein Smoothened (Smo) through a domain of Cos2 distinct from its recently characterized Smo binding domain. We suggest that an Hh-regulated membrane binding activity of Cos2 is part of the mechanism by which Cos2 contributes to Hh signaling. We propose a model in which there are two distinct HSCs with discrete subcellular localizations and activities: one is endosome-associated and facilitates production of a repressor form of Ci (HSC-R), and one is Smo-associated and promotes Ci activation (HSC-A). In response to Hh and through interaction with Cos2, Smo mediates both inhibition of the endosome-associated HSC-R and activation of HSC-A at the plasma membrane.

The Kinesin-related protein Costal2 associates with membranes in a Hedgehog-sensitive, Smoothened-independent manner.

Chez la drosophile, transduction de signal Hedgehog (Hh) s&#39;est av&eacute;r&eacute;e n&eacute;cessitent un complexe multiprot&eacute;ique (h&eacute;risson de signalisation complexes (HSC)), qui comprend la kin&eacute;sine-prot&eacute;ine Costal2 (Cos2), la s&eacute;rine/thr&eacute;onine kinase fondue (Fu) et le facteur de transcription Cubitus interruptus (Ci). Nous d&eacute;montrons qu&#39;une fraction biologiquement pertinente de la HSC est trouv&eacute;e en association avec les membranes cellulaires. Nous d&eacute;montrons que Cos2 est capable d&#39;attacher une prot&eacute;ine exog&egrave;ne aux membranes v&eacute;siculaires et que l&#39;association Cos2 avec membranes est d&eacute;pendante de Hh. De plus, nous d&eacute;montrons que Cos2 associe aux membranes des cellules qui n&#39;ont pas la prot&eacute;ine transmembranaire Smoothened (Smo) dans un domaine de Cos2 distincte de son domaine de liaison &agrave; Smo r&eacute;cemment caract&eacute;ris&eacute;e. Nous sugg&eacute;rons qu&#39;une activit&eacute; de Cos2 de liaison &agrave; la membrane Hh r&eacute;glement&eacute;s fait partie du m&eacute;canisme par lequel Cos2 contribue pour la signalisation de Hh. Nous proposons un mod&egrave;le dans lequel il y a deux CHS distinctes avec localisation subcellulaire discr&egrave;tes et activit&eacute;s : un endosome-associ&eacute;s et facilite la production d&#39;une forme de r&eacute;presseur ci (HSC-R), et est associ&eacute;e &agrave; Smo et favorise l&#39;activation Ci (HSC-A). En r&eacute;ponse &agrave; Hh et par interaction avec Cos2, Smo intervient dans les deux l&#39;inhibition de l&#39;endosome associ&eacute;s &agrave; HSC-R et l&#39;activation de HSC-A &agrave; la membrane plasmique.

La prot&eacute;ine li&eacute;e &agrave; la kin&eacute;sine Costal2 associe &agrave; membranes dans un h&eacute;risson sensible, Smoothened ind&eacute;pendamment.

Die Kinesin-related protein Costal2 assoziiert mit Membranen in einem Hedgehog-und Kleinschreibung, geschliffen-unabh&#xE4;ngige Weise.

In drosofila, trasduzione del segnale Hedgehog (Hh) ha dimostrato di richiedere un complessi multiproteici (Hedgehog signaling complex (HSC)), che comprende la chinesina-related protein Costal2 (Cos2), la serina/treonina chinasi di proteina (Fu) con fusibile e il fattore di trascrizione Cubitus interruptus (Ci). Vi presentiamo la prova che una frazione biologicamente rilevante dell&#39;HSC &egrave; trovata in associazione con le membrane cellulari. Dimostriamo che Cos2 &egrave; in grado di legare una proteina esogena a membrane vescicolari e che Cos2 associazione con membrane &egrave; Hh-sensibili. Inoltre, dimostriamo che Cos2 associa con membrane nelle cellule che la mancanza della proteina transmembrana lisciato (Smo) attraverso un dominio di Cos2 distinto dal suo dominio Smo associazione recentemente caratterizzato. Consigliamo che una membrana Hh-regolata associazione attivit&agrave; di Cos2 &egrave; parte del meccanismo che contribuisce alla segnalazione Hh Cos2. Vi proponiamo un modello in cui ci sono due distinte HSCs con discrete localizzazione sottocellulare e attivit&agrave;: uno &egrave; associato al endosoma facilita la produzione di una forma di repressore di Ci (HSC-R) e uno &egrave; OMU-associati e promuove l&#39;attivazione di Ci (HSC-A). In risposta a Hh e attraverso l&#39;interazione con Cos2, Smo media sia inibizione dell&#39;endosoma associati HSC-R e l&#39;attivazione delle HSC-alla membrana del plasma.

La chinesina-related protein Costal2 associates con membrane in un riccio-sensibile, modo indipendente dal lisciato.

&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0; &#xFF08;Hh&#xFF09; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; Costal2 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53; &#xFF08;&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0; (HSC)&#xFF09;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; (Cos2) &#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6EB6;&#x878D; &#xFF08;&#x30D5;&#x30FC;&#xFF09; &#x3068;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x8098;&#x81A3;&#x5916;&#x5C04;&#x7CBE; (Ci)&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;HSC &#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x5272;&#x5408;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; Cos2 &#x306F;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3042;&#x308A; Cos2 &#x5354;&#x4F1A;&#x3068;&#x819C; Hh &#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; Cos2 &#x306F;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x578B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6ED1;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F; &#xFF08;Smo&#xFF09; &#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x819C;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059; Cos2 &#x305D;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E; Smo &#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x5225;&#x500B;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x7D50;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027; Cos2 &#x306E; Hh &#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x819C; Cos2 Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B; HSCs &#x96E2;&#x6563;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3084;&#x6D3B;&#x52D5;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;: 1 &#x3064;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3067;&#x3059;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x5F62;&#x5F0F;&#x306E; Ci &#xFF08;HSC-R&#xFF09; &#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B; 1 &#x3064; Smo &#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x306F; Ci &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B; (HSC A)&#x3002;Hh &#x3068; Cos2 &#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Smo &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x95A2;&#x9023; HSC R &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3068; HSC-A&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; Costal2 &#x30CF;&#x30EA;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x6ED1;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x819C;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xD5E4; &#xC9C0; &#xD638; &#xADF8; (Hh) &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; Kinesin &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; costal2&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; multiprotein &#xBCF5;&#xD569; (&#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; (HSC))&#xC744; &#xC694;&#xAD6C; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; (Cos2), &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC8FC;&#xC785; (&#xD478;) &#xBC0F; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; Cubitus interruptus (Ci). &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; HSC&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xAD00;&#xB828; &#xBD84;&#xC218; &#xC5F0;&#xAD00; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xB294; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; Cos2 &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xB9C9; exogenous &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBC27;&#xC904;&#xB85C; &#xB9E4;&#xB97C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xACFC; Cos2 &#xD611;&#xD68C;&#xB294; Hh &#xAD6C;&#xBD84;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Cos2 &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774; Smo &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Cos2 Smoothened (Smo) &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD80;&#xC871; &#xC140;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xACFC; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;. Cos2&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB294; Hh &#xADDC;&#xC81C; &#xB9C9; Cos2 Hh &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; HSCs &#xC774;&#xC0B0; subcellular &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC0F; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBAA8;&#xB378; &#xC81C;&#xC548;: &#xD558;&#xB098; endosome &#xAD00;&#xB828; &#xACE0; &#xC9C4;&#xC555; &#xD615;&#xD0DC; Ci (HSC-R)&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558; &#xACE0; &#xD558;&#xB098; Smo &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; Ci &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xCD94;&#xC9C4; &#xD558; &#xACE0; (HSC-A). &#xC751;&#xB2F5; Hh&#xC640; cos2&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574;, Smo &#xBAA8;&#xB450; endosome &#xAD00;&#xB828; HSC-R&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xBC0F; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; HSC-A&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC;.

Kinesin &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Costal2 &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; &#xAD6C;&#xBD84;, Smoothened &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

En Drosophila, la transducci&oacute;n de la se&ntilde;al de Hedgehog (Hh) se ha demostrado que requieren un complejo multiprote&iacute;nas (erizo se&ntilde;alizaci&oacute;n complejas (HSC)), que incluye la prote&iacute;na relacionada con la quinesina Costal2 (Cos2), la quinasa serina/treonina fundida (Fu) y el factor de transcripci&oacute;n Cubitus interruptus (Ci). Presentamos evidencia que una fracci&oacute;n biol&oacute;gicamente relevante del HSC se encuentra asociada a las membranas celulares. Demostramos que Cos2 es capaz de atar una prote&iacute;na ex&oacute;gena a membranas vesiculares y que Cos2 asociaci&oacute;n con membranas es Hh-sensible. Adem&aacute;s, demostramos que Cos2 se asocia con las membranas de las c&eacute;lulas que carecen de la prote&iacute;na transmembrana alisado (Smo) a trav&eacute;s de un dominio de Cos2 distinto de su dominio recientemente caracterizado de la Smo obligatorio. Sugerimos que una membrana Hh regulados vinculante actividad de Cos2 es parte del mecanismo por el cual Cos2 contribuye a Hh se&ntilde;alizaci&oacute;n. Se propone un modelo en el que hay dos distintas HSCs con localizaciones subcelulares discretas y actividades: uno es endosome-asociados y facilita la producci&oacute;n de una forma de represor de Ci (HSC-R), y est&aacute; asociada a Smo y promueva la activaci&oacute;n de Ci (HSC-A). En respuesta a Hh y a trav&eacute;s de la interacci&oacute;n con Cos2, Smo media tanto inhibici&oacute;n del HSC-R endosome-asociados y activaci&oacute;n de HSC-A en la membrana plasm&aacute;tica.

La prote&iacute;na relacionada con la quinesina Costal2 se asocia con membranas en un erizo-sensible, manera de alisado-independiente.

&#x523A;&#x732C; (Hh) &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x5728;&#x5F00;&#x53D1;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4E86;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x6307;&#x5BFC;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x8F93;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x4F1A;&#x53D1;&#x5C55;&#x6210;&#x591A;&#x79CD;&#x80BF;&#x7624;&#x7C7B;&#x578B;&#x548C;&#x6563;&#x53D1;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x8303;&#x56F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x673A;&#x5173;&#x4E2D;&#x770B;&#x5230;&#x4E86;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6A21;&#x5F0F;&#x751F;&#x7269;&#x679C;&#x8747;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x65B9;&#x9762;&#x53D6;&#x5F97;&#x4E86;&#x591A;&#x4E2A;&#x6D1E;&#x5BDF; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#x4E2D;&#x8C03;&#x8282;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x4F53;&#x5916;&#x5C04;&#x7CBE;&#x6CD5;&#x8098; (Ci) &#x662F; Hh &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6700;&#x7EC8;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;Ci &#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x6C9F;&#x901A; Patched (Ptc) &#x548C; Smoothened (Smo) &#x5230;&#x80DE;&#x5185;&#x523A;&#x732C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x590D;&#x6742; (HSC) &#x56DE;&#x5E94; Hh &#x914D;&#x4F53;&#x68AF;&#x5EA6;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;HSC &#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; Costal2 (Cos2) &#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;-&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x3002;&#x7535;&#x7194; (&#x798F;) &#x548C;&#x8BCD;&#x3002;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709; Hh &#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;HSC &#x53C2;&#x4E0E; Ci &#x7684;&#x622A;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x52A0;&#x5DE5;&#x3002;&#x5728;&#x4E0E; Hh &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Ptc &#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x963B;&#x6B62; Ci &#x7684;&#x5904;&#x7406;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FBF;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684;&#x5168;&#x957F; Ci &#x6D3B;&#x5316;&#x5242; protein(s)&#x3002;Hh &#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x5FAE;&#x5206;&#x6D53;&#x5EA6;&#x523A;&#x6FC0;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684; Ci &#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E0D;&#x540C;&#x5F3A;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x9776;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x5B50;&#x96C6;&#x3002;&#x5176;&#x4E2D; Ptc &#x548C;&#x6D4B;&#x7ED8;&#x5904;&#x6C9F;&#x901A;&#x4EE5;&#x89C4;&#x7BA1; Ci &#x51FD;&#x6570;&#x5FAE;&#x5206;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x6D53;&#x5EA6;&#x54CD;&#x5E94; HSC &#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x4E0D;&#x5C1A;&#x672A;&#x5B8C;&#x5168;&#x9610;&#x660E;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x68C0;&#x8BA8;&#x6240;&#x77E5;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3001; &#x4E13;&#x6CE8;&#x4E8E;&#x5176;&#x4E2D; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7; hsc Smo &#x4F20;&#x64AD;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

Hedgehog &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x8C03;&#x63A7;&#xFF1A; &#x4E00;&#x4E2A;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x6545;&#x4E8B;&#x3002;

The Hedgehog (Hh) signal transduction pathway plays critical instructional roles during development. Activating mutations in human Hh signaling components predispose to a variety of tumor types, and have been observed in sporadic tumors occurring in a wide range of organs. Multiple insights into the regulation of Hh signaling have been achieved through studies using Drosophila melanogaster as a model organism. In Drosophila, regulation of the transcription factor Cubitus interruptus (Ci) is the ultimate target of the Hh pathway. Ci is regulated through communication of the membrane proteins Patched (Ptc) and Smoothened (Smo) to the intracellular Hedgehog Signaling Complex (HSC) in response to a graded concentration of Hh ligand. The HSC consists of the Kinesin Related Protein, Costal2 (Cos2), the serine-threonine protein kinase. Fused (Fu) and Ci. In the absence of Hh stimulation, the HSC is involved in processing of Ci to a truncated repressor protein. In response to Hh binding to Ptc, processing of Ci is blocked to allow for accumulation of full-length Ci activator protein(s). Differential concentrations of Hh ligand stimulate production of Ci transcriptional activators of varying strength, which facilitate activation of distinct subsets of target genes. The mechanism(s) by which Ptc and Smo communicate with the HSC in response to differential ligand concentrations to regulate Ci function are not yet fully elucidated. Here, we review what is known about regulation of individual Hh signaling components, concentrating on the mechanisms by which the Hh signal is propagated through Smo to the HSC.

Regulation of Hedgehog signaling: a complex story.

La voie de transduction de signal Hedgehog (Hh) joue un r&ocirc;le p&eacute;dagogique essentiel au cours du d&eacute;veloppement. Activation des mutations humaine Hh composants pr&eacute;disposent &agrave; une vari&eacute;t&eacute; de types de tumeurs et ont &eacute;t&eacute; observ&eacute;es dans les tumeurs sporadiques survenant dans une vaste gamme d&#39;organes de signalisation. Plusieurs aper&ccedil;us de la r&eacute;gulation de la signalisation de Hh ont &eacute;t&eacute; obtenus par des &eacute;tudes &agrave; l&#39;aide de Drosophila melanogaster comme organisme mod&egrave;le. Chez la drosophile, le r&egrave;glement du facteur de transcription Cubitus interruptus (Ci) est l&#39;objectif ultime de la voie de Hh. Ci est r&eacute;glement&eacute;e par la communication des prot&eacute;ines membranaires Patched (Ptc) et Smoothened (Smo) &agrave; l&#39;intracellulaire h&eacute;risson de signalisation complexes (HSC) en r&eacute;ponse &agrave; une concentration gradu&eacute;e du ligand de Hh. L&#39;HSC se compose de la kin&eacute;sine Related prot&eacute;ine, Costal2 (Cos2), la s&eacute;rine-thr&eacute;onine kinase. Fusible (Fu) et Ci. En l&#39;absence de stimulation de l&#39;Hh, le HSC est impliqu&eacute; dans le traitement de l&#39;IC &agrave; une prot&eacute;ine tronqu&eacute;e r&eacute;presseur. En r&eacute;ponse &agrave; la liaison Hh &agrave; Ptc, traitement de l&#39;IC est bloqu&eacute; pour permettre une accumulation de pleine longueur Ci activateur ou des prot&eacute;ines. Concentration diff&eacute;rentielle du ligand Hh stimule la production d&#39;activateurs transcriptional Ci de force variable, qui facilitent l&#39;activation des sous-ensembles distincts de g&egrave;nes cibles. L&#39;ou les m&eacute;canismes par lesquels Ptc et Smo communiquent avec le CSS en r&eacute;ponse &agrave; des concentrations de ligand diff&eacute;rentielle &agrave; r&eacute;guler la fonction Ci ne sont pas encore compl&egrave;tement &eacute;lucid&eacute;. Nous r&eacute;sumons ici, que sait-on des R&egrave;glement de Hh individuel, &eacute;l&eacute;ments de signalisation, se concentrant sur les m&eacute;canismes par lesquels le signal de Hh est propag&eacute; par Smo au HSC.

R&eacute;gulation de la signalisation de h&eacute;risson : une histoire complexe.

Verordnung des Hedgehog-Signalgebung eine komplexe Geschichte.

Il pathway di trasduzione del segnale Hedgehog (Hh) svolge ruoli didattici critici durante lo sviluppo. Attivando le mutazioni umane Hh componenti predispongono ad una variet&agrave; di tipi di tumore e sono state osservate in tumori sporadici che si verificano in una vasta gamma di organi di segnalazione. Intuizioni pi&ugrave; il regolamento di Hh segnalazione sono stati raggiunti attraverso studi utilizzando melanogaster della drosofila come organismo modello. In drosofila, regolazione del fattore di trascrizione Cubitus interruptus (Ci) &egrave; l&#39;obiettivo finale del percorso Hh. Ci &egrave; regolato attraverso la comunicazione delle proteine di membrana patch (Ptc) e lisciato (Smo) all&#39;intracellulare Hedgehog Signaling Complex (HSC) in risposta ad una concentrazione del ligando Hh graduata. L&#39;HSC &egrave; costituito da proteine correlate la chinesina, Costal2 (Cos2), la chinasi di proteina serina-treonina. Fuso (Fu) e Ci. In assenza di stimolazione Hh, l&#39;HSC &egrave; coinvolto nell&#39;elaborazione di Ci di una proteina repressore troncato. In risposta a Hh associazione di Ptc, elaborazione di Ci &egrave; bloccato per consentire l&#39;accumulo di proteine di attivatore Ci full-length. Differenziale concentrazioni di ligando Hh stimolano la produzione di Ci Attivatori trascrizionali di forza variabile, che facilitano l&#39;attivazione dei distinti sottoinsiemi dei geni bersaglio. I meccanismi comprendono che Ptc e Smo comunicano con l&#39;HSC in risposta alle concentrazioni di ligando differenziale per regolare la funzione Ci non sono ancora completamente chiariti. Qui, passiamo in rassegna ci&ograve; che &egrave; noto circa regolamento di Hh singoli componenti di segnalazione, concentrandosi sui meccanismi con cui il segnale Hh viene propagato tramite Smo per l&#39;HSC.

Regolamento del Hedgehog signaling: una storia complessa.

&#x30CF;&#x30EA;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF; &#xFF08;Hh&#xFF09; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x6A5F;&#x69CB;&#x6559;&#x80B2;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x958B;&#x767A;&#x6642;&#x306B;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593; Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306B;&#x3057;&#x5411;&#x3051;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x81D3;&#x5668;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x6563;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x816B;&#x760D;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8907;&#x6570;&#x6D1E;&#x5BDF; Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306F;&#x3001;&#x30AD;&#x30A4;&#x30ED;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x3001;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x751F;&#x7269;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x8098;&#x81A3;&#x5916;&#x5C04;&#x7CBE; (Ci) &#x306E;&#x898F;&#x5236; Hh &#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x7A76;&#x6975;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Ci &#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x9069;&#x7528; &#xFF08;Ptc&#xFF09; &#x3068;&#x6ED1;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F; (Smo) &#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x8907;&#x96D1; (HSC) Hh &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x50BE;&#x659C;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x306E;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30CB;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; Costal2 &#x306E; HSC &#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308A;&#x307E;&#x3059; (Cos2) &#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;-&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3002;&#x878D;&#x5408; &#xFF08;&#x30D5;&#x30FC;&#xFF09; &#x3068; Ci&#x3002;Hh &#x523A;&#x6FC0;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;Ci &#x306E;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x51E6;&#x7406;&#x3001;HSC &#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Hh &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B; Ptc &#x306B;&#x5FDC;&#x3048;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E; Ci &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B; Ci &#x306E;&#x51E6;&#x7406;&#x304C;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Hh &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x5DEE;&#x52D5;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B; Ci &#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x5F37;&#x3055;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x306B;&#x3088;&#x308A; Ptc &#x3068; Smo Ci &#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3068; HSC &#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x5DEE;&#x52D5;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304C;&#x901A;&#x4FE1;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x89E3;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3001;HSC &#x306B; Smo &#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x4F1D;&#x9054;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x96C6;&#x4E2D;&#x3057;&#x3066;&#x500B;&#x3005; &#x306E; Hh &#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x4E8B;&#x67C4;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;

&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;: &#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x7269;&#x8A9E;&#x3002;

&#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; (Hh) &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658; &#xD1B5;&#xB85C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC9C0;&#xCE68; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Hh predispose &#xC885;&#xC591; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xCEF4;&#xD3EC;&#xB10C;&#xD2B8;&#xC640; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAE30;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC0B0;&#xBC1C;&#xC801; &#xC778; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hh &#xC2E0;&#xD638; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825; Drosophila melanogaster &#xBAA8;&#xB378; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB2EC;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;, &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; Cubitus interruptus (Ci)&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; Hh &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xBAA9;&#xD45C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ci&#xB294; &#xAE30; &#xC6CC; &#xC9C4; (Ptc) &#xBC0F; Smoothened (Smo) &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; (HSC) Hh &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;&#xC758; &#xB4F1;&#xAE09;&#xB41C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC758;&#xC0AC; &#xC18C;&#xD1B5;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;. HSC Kinesin &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; costal2&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; (Cos2), &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C;. &#xD4E8;&#xC988; (&#xD478;) &#xBC0F; Ci&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hh &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xB294; HSC &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xC9C4;&#xC555; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; Ci&#xC758; &#xCC98;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC;. Ptc&#xC5D0; Hh &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC751;&#xB2F5;, Ci&#xC758; &#xCC98;&#xB9AC; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; Ci &#xD65C;&#xC131; &#xC81C; protein(s)&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hh &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;&#xC758; &#xCC28;&#xB3D9; &#xB18D;&#xB3C4; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xACE0;&#xC720; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAC15;&#xB3C4;&#xC758; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xC5D0; Ci&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC790;&#xADF9;. Ptc&#xC640; Smo Ci &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xCC28;&#xB3D9; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5; HSC&#xC640; &#xD1B5;&#xC2E0; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xB9C8;&#xB354;&#xBCF4;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC544;&#xC9C1; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xD574;&#xBA85;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC2E0;&#xD638;, Hh &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; HSC&#xC5D0; Smo&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xD30C; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC9D1;&#xC911; &#xD558; &#xACE0; &#xAC1C;&#xBCC4; Hh&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xAC80;&#xD1A0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; &#xADDC;&#xC815;: &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC774;&#xC57C;&#xAE30;.

La v&iacute;a de transducci&oacute;n de la se&ntilde;al de Hedgehog (Hh) juega un papel cr&iacute;tico de instrucci&oacute;n durante el desarrollo. Activaci&oacute;n de mutaciones en componentes de se&ntilde;alizaci&oacute;n Hh humanos predisponen a una variedad de tipos de tumores y se han observado en tumores espor&aacute;dicos que ocurren en una amplia gama de &oacute;rganos. Penetraciones m&uacute;ltiples en la regulaci&oacute;n de la se&ntilde;alizaci&oacute;n Hh se han logrado a trav&eacute;s de estudios utilizando Drosophila melanogaster como un organismo modelo. En Drosophila, regulaci&oacute;n del factor de transcripci&oacute;n Cubitus interruptus (Ci) es el objetivo final de la v&iacute;a de Hh. CI se regula a trav&eacute;s de la comunicaci&oacute;n de las prote&iacute;nas de membrana parcheado (Ptc) y alisado (Smo) a la intracelular Hedgehog se&ntilde;alizaci&oacute;n complejas (HSC) en respuesta a una concentraci&oacute;n gradual de Hh ligando. El HSC consiste en la prote&iacute;na relacionada Kinesin, Costal2 (Cos2), el kinase de prote&iacute;na serina-treonina. Fundido (Fu) y Ci. En ausencia de estimulaci&oacute;n de Hh, HSC participa en el proceso de Ci a una prote&iacute;na truncada represor. En respuesta a la Uni&oacute;n de Hh a Ptc, procesamiento de Ci se bloquea para permitir la acumulaci&oacute;n de cuerpo entero Ci activador igual. Diferenciales concentraciones de ligando Hh estimulan la producci&oacute;n de Ci de activadores transcripcionales de fuerza variable, que facilitan la activaci&oacute;n de distintos subconjuntos de genes diana. Los mecanismos por los cuales Ptc y Smo comunican con HSC en respuesta a las concentraciones de ligando diferencial regulan la funci&oacute;n de Ci son todav&iacute;a no completamente aclados. Aqu&iacute;, repasamos lo que se conoce sobre la regulaci&oacute;n de Hh individual componentes de se&ntilde;alizaci&oacute;n, concentr&aacute;ndose en los mecanismos por el cual la se&ntilde;al de Hh se propaga a trav&eacute;s de Smo a HSC.

Regulaci&oacute;n de la se&ntilde;alizaci&oacute;n del erizo: una historia compleja.

&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7194;&#x878D; (&#x798F;) &#x662F;&#x6574;&#x578B;&#x6210;&#x5458; Hedgehog (Hh) &#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x9057;&#x4F20;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x5BCC;&#x662F; Hh &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x5B83;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x4F5C;&#x7528;&#x4F9D;&#x7136;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x4E0D;&#x660E;&#x3002;&#x9274;&#x4E8E;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E3A;&#x5BCC;&#x53D1;&#x5C55;&#x4F53;&#x5916;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7684;&#x56F0;&#x96BE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A8;&#x60F3;&#x5BCC;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x53EF;&#x80FD;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E25;&#x683C;&#x76D1;&#x7BA1;&#x3002;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#x8C03;&#x8282;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x81EA;&#x7F14;&#x5408;&#x5185;-&#x6216;&#x5206;&#x5B50;&#x95F4;&#x7684;&#x65F6;&#x5C1A;&#x4E2D;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B; Hh &#x8C03;&#x8282;&#x5BCC;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x5176;&#x6FC0;&#x9176;&#x57DF; (DeltaFu) &#x548C;&#x5176;&#x7FA7;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x57DF; (&#x5085; tail) &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; DeltaFu &#x548C;&#x798F;&#x5C3E;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x6A2A;&#x8D2F;&#xFF0C;&#x6709;&#x65E0;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#x808B; 2 (Cos2) &#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x591A;&#x6570;&#x5BCC;&#x627E;&#x5230;&#x5173;&#x8054; Cos2 &#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x8FD9;&#x5BCC;&#x5C3E;&#x5DF4;&#xFF0C;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A; Cos2&#xFF0C;&#x5C06;&#x80FD;&#x591F;&#x6302;&#x5230; Cos2 DeltaFu&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E; DeltaFu colocalizes &#x4E0E; Cos2 &#x798F;&#x5C3E;&#x4E0B;&#x548C;&#x6B64;&#x5171;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x819C;&#x56CA;&#x6CE1;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x8868;&#x793A;&#x53EA;&#x6709;&#x6FC0;&#x9176;&#x57DF;&#x7684;&#x5085;&#x7A81;&#x53D8;&#x82CD;&#x8747;&#x798F;&#x5C3E;&#x8868;&#x8FBE;&#x8425;&#x6551;&#x5085;&#x8363;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x91CD;&#x5851;&#x5BCC;&#x4E2D;&#x8DE8;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57DF;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x662F;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x6062;&#x590D; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x4EE5;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6211;&#x4EEC;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5047;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5BCC; self-associates &#x548C; Hh &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x5728;&#x6B63;&#x5E38;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD9;&#x91CC;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x52A0;&#x6DF1;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E3A;&#x7279;&#x5F81;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;

&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7194;&#x878D;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57DF;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x523A;&#x732C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

The protein kinase Fused (Fu) is an integral member of the Hedgehog (Hh) signaling pathway. Although genetic studies demonstrate that Fu is required for the regulation of the Hh pathway, the mechanistic role that it plays remains largely unknown. Given our difficulty in developing an in vitro kinase assay for Fu, we reasoned that the catalytic activity of Fu might be highly regulated. Several mechanisms are known to regulate protein kinases, including self-association in either an intra- or an intermolecular fashion. Here, we provide evidence that Hh regulates Fu through intramolecular association between its kinase domain (DeltaFu) and its carboxyl-terminal domain (Fu-tail). We show that DeltaFu and Fu-tail can interact in trans, with or without the kinesin-related protein Costal 2 (Cos2). However, since the majority of Fu is found associated with Cos2 in vivo, we hypothesized that Fu-tail, which binds Cos2 directly, would be able to tether DeltaFu to Cos2. We demonstrate that DeltaFu colocalizes with Cos2 in the presence of Fu-tail and that this colocalization occurs on a subset of membrane vesicles previously characterized to be important for Hh signal transduction. Additionally, expression of Fu-tail in fu mutant flies that normally express only the kinase domain rescues the fu wing phenotype. Therefore, reestablishing the association between these two domains of Fu in trans is sufficient to restore Hh signal transduction in vivo. In such a manner we validate our hypothesis, demonstrating that Fu self-associates and is functional in an Hh-dependent manner. Our results here enhance our understanding of one of the least characterized, yet critical, components of Hh signal transduction.

An intramolecular association between two domains of the protein kinase Fused is necessary for Hedgehog signaling.

La prot&eacute;ine kinase fondue (Fu) est membre &agrave; part enti&egrave;re du h&eacute;risson (Hh) voie de signalisation. Bien que les &eacute;tudes g&eacute;n&eacute;tiques montrent que Fu est requise pour la r&eacute;gulation de la voie de Hh, le m&eacute;caniste r&ocirc;le qu&#39;elle joue reste largement inconnu. Compte tenu de notre difficult&eacute; &agrave; d&eacute;velopper une analyse de la kinase in vitro pour Fu, nous avons pens&eacute; que l&#39;activit&eacute; catalytique de Fu pourrait &ecirc;tre fortement r&eacute;glement&eacute;e. Plusieurs m&eacute;canismes sont connus pour r&eacute;guler les prot&eacute;ines kinases, incluant autoassociation dans un intra - ou fa&ccedil;on intermol&eacute;culaire. Ici, nous d&eacute;montrons que Hh r&eacute;gule Fu &agrave; travers une association intramol&eacute;culaire entre son domaine kinase (DeltaFu) et son domaine carboxyl-terminal (Fu-queue). Nous montrons que les DeltaFu et Fu-queue peuvent interagir en trans, avec ou sans la prot&eacute;ine kin&eacute;sine 2 costaux (Cos2). Toutefois, &eacute;tant donn&eacute; que la majorit&eacute; des Fu se trouve associ&eacute; &agrave; Cos2 in vivo, nous avons suppos&eacute; que Fu-queue, qui lie directement les Cos2, serait en mesure d&#39;attacher DeltaFu &agrave; Cos2. Nous d&eacute;montrons que DeltaFu log&eacute;e avec Cos2 en pr&eacute;sence de Fu-queue et que cette colocalisation se produit sur un sous-ensemble des v&eacute;sicules membranaires pr&eacute;c&eacute;demment caract&eacute;ris&eacute;es pour &ecirc;tre importants pour la transduction du signal de Hh. En outre, expression de Fu-queue chez les mouches mutantes fu qui expriment normalement seulement le domaine kinase sauve le ph&eacute;notype de fu. R&eacute;tablir le lien entre ces deux domaines du Fu dans trans est donc suffisant pour restaurer la transduction du signal Hh in vivo. De mani&egrave;re nous validons notre hypoth&egrave;se, en d&eacute;montrant que Fu self-associates et est fonctionnel en une fonction de Hh. Nos r&eacute;sultats ici am&eacute;liorer notre compr&eacute;hension de l&#39;un des composants moins caract&eacute;ris&eacute;s, pourtant essentielles, de transduction du signal de Hh.

Une association intramol&eacute;culaire entre deux domaines de la prot&eacute;ine kinase fondue est n&eacute;cessaire pour la signalisation de h&eacute;risson.

Eine intramolekulare Assoziation zwischen zwei Dom&#xE4;nen des Protein-Kinase Fused ist, die f&#xFC;r Hedgehog-Signalisierung.

La chinasi di proteina Fused (Fu) &egrave; un membro integrante della the Hedgehog (Hh) signaling pathway. Sebbene gli studi genetici dimostrano che Fu &egrave; necessaria per la regolazione del percorso Hh, meccanicistico ruolo che essa svolge rimane in gran parte sconosciuto. Abbiamo dato la nostra difficolt&agrave; a sviluppare un&#39;analisi in vitro della chinasi per Fu, motivato che l&#39;attivit&agrave; catalitica del Fu potrebbe essere fortemente regolamentato. Diversi meccanismi sono noti per regolare chinasi, tra cui moltiplicava in un intra - o una moda intermolecolare. Qui, ci forniscono prove che Hh regola Fu attraverso associazione intramolecolare tra il suo dominio chinasi (DeltaFu) e il relativo dominio carbossi-terminale (Fu-coda). Mostriamo che DeltaFu e Fu-coda possono interagire in trans, con o senza la chinesina-related protein 2 costale (Cos2). Tuttavia, poich&eacute; la maggior parte di Fu &egrave; trovata collegato con Cos2 in vivo, abbiamo ipotizzato che Fu-la coda, che si lega Cos2 direttamente, sarebbe in grado di legare il DeltaFu a Cos2. Dimostriamo che DeltaFu colocalizza con Cos2 in presenza di Fu-coda e che questa presenza si verifica su un sottoinsieme delle vescicole di membrana precedentemente caratterizzato per essere importante per la trasduzione del segnale di Hh. Inoltre, espressione di Fu-coda in mosche mutanti fu che normalmente esprimono solo il dominio della chinasi salv&ograve; il fenotipo ala fu. Pertanto, ristabilendo l&#39;associazione tra questi due domini di Fu in trans &egrave; sufficiente a ripristinare la trasduzione del segnale Hh in vivo. In tal modo noi convalidare la nostra ipotesi, dimostrando che Fu self-associates e funzionale in un modo Hh-dipendente. Nostri risultati qui migliorano la nostra comprensione di uno dei componenti meno caratterizzate, ancora critiche, della trasduzione del segnale di Hh.

Un&#39;associazione tra due domini della proteina chinasi Fused intramolecolare &egrave; necessaria Hedgehog signaling.

&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6EB6;&#x878D; &#xFF08;&#x30D5;&#x30FC;&#xFF09; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x30FB; &#x30B6; &#x30FB; &#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0; (Hh) &#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66; Fu &#x304C; Hh &#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;In vitro &#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x8A66;&#x91D1;&#x30D5;&#x30FC;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x96E3;&#x3057;&#x3055;&#x3092;&#x8003;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x3001;Fu &#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x63A8;&#x8AD6;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9; - &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5206;&#x5B50;&#x9593;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x81EA;&#x5DF1;&#x4F1A;&#x5408;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Hh Fu &#x305D;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (DeltaFu) &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#xFF08;Fu &#x5C3E;&#xFF09; &#x9593;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DeltaFu &#x3068; Fu &#x5C3E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3001;&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x808B; 2 (Cos2) &#x306E;&#x6709;&#x7121;&#x3067;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30D5;&#x30FC;-&#x5C3E;&#x3001;Cos2 &#x76F4;&#x63A5;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;DeltaFu Cos2 &#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304E;&#x7E04;&#x3067;&#x3064;&#x306A;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3068;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3001;Cos2 &#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F; Fu &#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x3067;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;DeltaFu &#x304C; Cos2 Fu &#x30C6;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067; colocalizes&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D; Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x819C;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Fu &#x5C3E;&#x306E;&#x5F0F;&#x666E;&#x901A;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x307F;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30B9; &#x30FB; &#x30D5;&#x30FC;&#x5909;&#x7570;&#x30CF;&#x30A8;&#x3067;&#x30D5;&#x30FC;&#x7FFC;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x6551;&#x52A9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30D5;&#x30FC; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x518D;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B; in vivo Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067; Fu self-associates &#x3057;&#x3001;&#x306F; Hh &#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x91CD;&#x8981;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306E;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6EB6;&#x878D;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x30A2;&#x30BD;&#x30B7;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC8FC;&#xC785; (&#xD478;)&#xC740; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C; &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; (Hh)&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xBA64;&#xBC84;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xD478; Hh &#xD1B5;&#xB85C; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C;, &#xBE44;&#xB85D; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xAE30;&#xACC4; &#xC5ED;&#xD560; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD478;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCCB4; &#xC678; &#xB2C8; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6C0;&#xC744; &#xAC10;&#xC548;&#xD560; &#xB54C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD478;&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xB192;&#xC740; &#xADDC;&#xC81C; &#xB420; &#xC218;&#xB3C4; &#xAD8C;&#xC720;. &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC870;&#xC808; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases, &#xB0B4;&#xBD80;-&#xB610;&#xB294; intermolecular &#xD328;&#xC158; self-association &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; Hh&#xB294; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (DeltaFu)&#xC640; carboxyl &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (&#xD478;-&#xAF2C;&#xB9AC;) &#xADF8; &#xC0AC;&#xC774; intramolecular &#xD611;&#xD68C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD478;&#xB97C; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Deltafu&#xC640; &#xD478; &#xAF2C;&#xB9AC; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;, &#xB291; &#xACE8; 2 (Cos2) kinesin &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC720;&#xBB34;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, vivo&#xC5D0;&#xC11C; cos2&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xD478;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC; &#xC774;&#xD6C4; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD478; &#xAF2C;&#xB9AC;, cos2&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;, DeltaFu Cos2 &#xBC27;&#xC904;&#xB85C; &#xB9EC; &#xC218; &#xC788;&#xC744; &#xAC83; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xD558;&#xB294; &#xAC00;&#xC124;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; DeltaFu &#xD478; &#xAF2C;&#xB9AC;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB294; cos2&#xC640; colocalizes&#xC774; colocalization &#xB9C9; &#xC18C;&#xD3EC; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; Hh &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC774; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xD478; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD30C;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD478; &#xAF2C;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2DD; &#xD478; &#xB0A0;&#xAC1C; &#xD615; &#xAD6C;&#xCD9C;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xD478;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB450; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAC04;&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC740; Hh &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD478; self-associates&#xC640; Hh &#xC758;&#xC874; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xAC00;&#xC124; &#xD655;&#xC778;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; Hh &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xC18C; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774;, &#xC544;&#xC9C1; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC911; &#xD558;&#xB098; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAD11;&#xD559;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544;&#xC758; &#xB450; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAC04;&#xC5D0; intramolecular &#xD611;&#xD68C;&#xB294; &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La prote&iacute;na quinasa fundida (Fu) es un miembro integral del Hedgehog (Hh) v&iacute;a de se&ntilde;alizaci&oacute;n. Aunque los estudios gen&eacute;ticos demuestran que Fu se requiere para la regulaci&oacute;n de la v&iacute;a de Hh, el papel mecanicista que juega sigue siendo desconocido. Dada nuestra dificultad en el desarrollo de un ensayo in vitro de la quinasa de Fu, razonamos que la actividad catal&iacute;tica de Fu podr&iacute;a ser altamente regulada. Se conocen varios mecanismos regular kinases de prote&iacute;na, incluyendo autoasociaci&oacute;n en un intra - o una manera intermolecular. Aqu&iacute; proporcionamos evidencia que Hh regula Fu a trav&eacute;s de la Asociaci&oacute;n intramolecular entre su dominio de la cinasa (DeltaFu) y su dominio carboxilo terminal (Fu-cola). Mostramos que DeltaFu y Fu-cola pueden interactuar en el transporte, con o sin la prote&iacute;na relacionada con la quinesina 2 Costal (Cos2). Sin embargo, ya que la mayor&iacute;a de Fu se encuentra asociado con Cos2 in vivo, presumimos Fu-cola, que se une Cos2 directamente, ser&iacute;an capaces de atar DeltaFu a Cos2. Demostramos que DeltaFu colocalizes con Cos2 en presencia de Fu-cola y que esta colocalizaci&oacute;n ocurre en un subconjunto de ves&iacute;culas de membrana que previamente se caracteriza por ser importante para la transducci&oacute;n de la se&ntilde;al de Hh. Adem&aacute;s, la expresi&oacute;n de Fu-cola en fu moscas mutantes que expresan normalmente s&oacute;lo el dominio de la cinasa rescata el fenotipo de ala de fu. Por lo tanto, restablecer la asociaci&oacute;n entre estos dos dominios de Fu en trans es suficiente para restablecer el Hh transduction de la se&ntilde;al en vivo. De tal manera validamos nuestra hip&oacute;tesis, demostrando que Fu self-associates y funciona de una manera Hh-dependiente. Nuestros resultados aqu&iacute; mejoran nuestra comprensi&oacute;n de uno de los componentes menos caracterizados, pero cr&iacute;ticos, de Hh transduction de la se&ntilde;al.

Una asociaci&oacute;n intramolecular entre dos dominios de la prote&iacute;na quinasa fundida es necesaria para la se&ntilde;alizaci&oacute;n de erizo.

&#x523A;&#x732C; (Hh) &#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x5177;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x540E;&#x751F;&#x53D1;&#x5C55;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8BB8;&#x591A;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80BF;&#x7624;&#x5B58;&#x6D3B;&#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E03;&#x8DE8;&#x819C;&#x86CB;&#x767D; Smoothened (Smo)&#xFF0C;&#x5B83;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x5C06; Gli &#x5BB6;&#x65CF;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55; repressors &#x4ECE;&#x8F6C;&#x6362;&#x4E3A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6240;&#x5F97;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x65F6;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6D4B;&#x7ED8;&#x5904;&#x81F3; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D; Costal2 (Cos2) &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (&#x798F;) &#x7194;&#x878D;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x5C04;&#x7CBE;&#x679C;&#x8747; Gli &#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x8098;&#x6CD5; (Ci)&#xFF0C;&#x5728;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x4E4B;&#x540E; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x5E38;&#x89C1;&#x5206;&#x5B50;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x4E0D;&#x4EE5;&#x7EBF;&#x6027;&#x65B9;&#x5F0F;&#x4F20;&#x8F93;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53CD;&#x800C;&#x88AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5728;&#x6D4B;&#x7ED8;&#x5904;&#x72EC;&#x7ACB;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684; Ci &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242;&#x548C;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x6C60;&#x5206;&#x53C9;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x3002;

&#x7406;&#x987A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242;&#x548C;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x523A;&#x732C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x673A;&#x5236;&#x4F5C;&#x51FA;&#x4E86;&#x89C4;&#x5B9A;&#x3002;

The secreted protein Hedgehog (Hh) plays an important role in metazoan development and as a survival factor for many human tumors. In both cases, Hh signaling proceeds through the activation of the seven-transmembrane protein Smoothened (Smo), which is thought to convert the Gli family of transcription factors from transcriptional repressors to transcriptional activators. Here, we provide evidence that Smo signals to the Hh signaling complex, which consists of the kinesin-related protein Costal2 (Cos2), the protein kinase Fused (Fu), and the Drosophila Gli homolog cubitus interruptus (Ci), in two distinct manners. We show that many of the commonly observed molecular events following Hh signaling are not transmitted in a linear fashion but instead are activated through two signals that bifurcate at Smo to independently affect activator and repressor pools of Ci.

Smoothened regulates activator and repressor functions of Hedgehog signaling via two distinct mechanisms.

La prot&eacute;ine s&eacute;cr&eacute;t&eacute;e Hedgehog (Hh) joue un r&ocirc;le important dans le d&eacute;veloppement de m&eacute;tazoaires et comme un facteur de survie pour beaucoup de tumeurs humaines. Dans les deux cas, la signalisation de Hh produit par le biais de l&#39;activation de la prot&eacute;ine sept domaines transmembranaire Smoothened (Smo), qui est pens&eacute; pour convertir la famille Gli de facteurs de transcription de r&eacute;presseurs transcriptionnels activateurs de la transcriptionnelles. Ici, nous d&eacute;montrons que signaux de Smo pour la signalisation de Hh complexe, qui se compose de la prot&eacute;ine apparent&eacute;e au kinesin Costal2 (Cos2), la prot&eacute;ine kinase fondue (Fu) et la drosophile Gli homologue cubitus interruptus (Ci), de deux mani&egrave;res distinctes. Nous montrons que bon nombre des &eacute;v&eacute;nements mol&eacute;culaires couramment observ&eacute;s apr&egrave;s la signalisation de Hh ne sont pas transmises de fa&ccedil;on lin&eacute;aire, mais au contraire sont activ&eacute;s par le biais de deux signaux qui bifurquent &agrave; Smo affecter ind&eacute;pendamment des piscines activateur et r&eacute;presseur ci.

Liss&eacute; r&eacute;gule les fonctions activator et r&eacute;presseur de la signalisation de h&eacute;risson via deux m&eacute;canismes distincts.

Die sekretierten Proteine Igel (Hh) Rolle eine wichtige, indem Entwicklung und als &uuml;berleben Faktor bei vielen menschlichen Tumoren. In beiden F&auml;llen geht die Hh Signalisierung durch die Aktivierung der sieben Transmembraneprotein gegl&auml;ttet (Smo), dem angenommen wird, die Gli-Familie von Transkriptionsfaktoren transcriptional Aktivatoren von transkriptionelle Repressoren konvertieren. Hier wir nachweisen, dass Smo-Signale an die Hh-Signalisierung-Komplex, bestehend aus dem Protein Kinesin-&auml;hnliche Costal2 (Cos2), die Proteinkinase Fused (Fu) und der Taufliege Gli Homolog Cubitus Interruptus (Ci), auf zwei unterschiedliche Arten. Wir zeigen, dass viele der h&auml;ufig beobachteten molekularen Ereignisse nach Hh Signalisierung nicht auf lineare Weise &uuml;bermittelt, sondern werden stattdessen durch zwei Signale, die auf Smo unabh&auml;ngig Aktivator und Hemmer-Pools CI beeinflussen Gabeln aktiviert.

Gegl&auml;ttet Aktivator und Hemmer Funktionen der Igel Signalisierung &uuml;ber zwei verschiedene Mechanismen reguliert.

La proteina secreta Hedgehog (Hh) svolge un ruolo importante nello sviluppo dei metazoi e come un fattore di sopravvivenza per molti tumori umani. In entrambi i casi, Hh segnalazione procede attraverso l&#39;attivazione della proteina del transmembrane sette lisciato (Smo), che &egrave; pensato per convertire Gli famiglia di fattori di trascrizione da repressori trascrizionali di Attivatori trascrizionali. Qui, siamo di fornire prove che segnali Smo per l&#39;Hh segnalazione complesso, che consiste la chinesina-related protein Costal2 (Cos2), la chinasi di proteina (Fu) con fusibile e Gli drosofila omologo cubitus interruptus (Ci), in due maniere distinte. Mostriamo che molti degli eventi molecolari comunemente osservati dopo segnalazione Hh non vengono trasmessi in modo lineare, ma invece vengono attivati attraverso due segnali che biforcate presso Smo di influenzare in modo indipendente piscine attivatore e repressore ci.

Lisciato regola le funzioni di attivatore e repressore del Hedgehog signaling attraverso due meccanismi distinti.

&#x5206;&#x6CCC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0; (Hh) &#x5F8C;&#x751F;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x3072;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054; Gli &#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x5909;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6ED1;&#x3089;&#x304B; (Smo) &#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F; 7 &#x56DE;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x578B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; Costal2 &#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B; Hh &#x8907;&#x96D1;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x305D;&#x306E; Smo &#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B; (Cos2) &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6EB6;&#x878D; &#xFF08;&#x30D5;&#x30FC;&#xFF09; &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8; Gli &#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x8098;&#x5C04;&#x7CBE; (Ci)&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x660E;&#x77AD;&#x306A;&#x30DE;&#x30CA;&#x30FC;&#x3067;&#x3002;Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x6B21;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306F;&#x76F4;&#x7DDA;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x9001;&#x4FE1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B; Ci &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC; &#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B; Smo &#x3067;&#x5206;&#x5C90;&#x3059;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6ED1;&#x3089;&#x304B;&#x306E;&#x30CF;&#x30EA;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA; &#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; 2 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBE44; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; (Hh) metazoan &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xB9CE;&#xC740; &#xC778;&#xAC04; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874; &#xC694;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB450; &#xACBD;&#xC6B0; &#xBAA8;&#xB450;, Hh &#xC2E0;&#xD638; transcriptional repressors &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; Gli &#xC81C;&#xD488;&#xAD70; transcriptional &#xD65C;&#xC131; &#xC81C; &#xBCC0;&#xD658;&#xD560; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB41C;&#xB2E4; Smoothened (Smo), 7 &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC9C4;&#xD589; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; kinesin &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; costal2&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C;&#xB294; Smo &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; Hh &#xC2E0;&#xD638; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0;, &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; (Cos2) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC8FC;&#xC785; (&#xD478;), &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; Gli &#xCCB4; cubitus interruptus (Ci), &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC608; &#xC808;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xB9CE;&#xC740; Hh &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xBD84;&#xC790; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xC120;&#xD615; &#xD328;&#xC158;&#xC5D0; &#xC804;&#xC1A1; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB300;&#xC2E0; Ci&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xAE30;&#xC640; &#xC9C4;&#xC555; &#xC6C5;&#xB369;&#xC774; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; Smo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xAE30; &#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD750;&#xB824;&#xC838; &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xAE30;&#xC640; &#xC9C4;&#xC555; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808;.

La prote&iacute;na secretada Hedgehog (Hh) desempe&ntilde;a un papel importante en el desarrollo de metazoarios y como factor de supervivencia para muchos tumores humanos. En ambos casos, se&ntilde;alizaci&oacute;n Hh procede a trav&eacute;s de la activaci&oacute;n de la prote&iacute;na transmembrana de siete alisado (Smo), que se piensa para convertir a la familia Gli de factores de transcripci&oacute;n de represores transcripcionales a activadores transcripcionales. Aqu&iacute; proporcionamos evidencia que se&ntilde;ales de Smo para la se&ntilde;alizaci&oacute;n de Hh complejo, que consiste en la prote&iacute;na relacionada con la quinesina Costal2 (Cos2), la prote&iacute;na quinasa fundida (Fu) y la Drosophila Gli hom&oacute;logo cubitus interruptus (Ci), de dos maneras distintas. Mostramos que muchos de los eventos moleculares com&uacute;nmente observados despu&eacute;s de se&ntilde;alizaci&oacute;n Hh no se transmiten en forma lineal, pero en cambio se activan a trav&eacute;s de dos se&ntilde;ales que se bifurcan en Smo para afectar independientemente piscinas activador y represor de Ci.

Alisado regula funciones activador y represor de erizo de se&ntilde;alizaci&oacute;n a trav&eacute;s de dos mecanismos distintos.

&#x523A;&#x732C; (Hh) &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x542F;&#x52A8;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x9002;&#x5F53;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC4;&#x7EC7; [1] &#x683C;&#x5C40;&#x8FDB;&#x5316;&#x4FDD;&#x6301;&#x53D1;&#x5C55;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;&#x867D;&#x7136; Costal2 (Cos2) &#x662F; Hh &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5FC5;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x5176;&#x673A;&#x68B0;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0D;&#x5F88;&#x4E86;&#x89E3;&#x3002;&#x5176;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A; Cos2 &#x6700;&#x521D;&#x9884;&#x6D4B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x6837;&#x86CB;&#x767D; [2]&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8BC1;&#x636E;&#x663E;&#x793A; Cos2 &#x51FD;&#x6570;&#x53EF;&#x80FD;&#x9700;&#x8981;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x6837;&#x5C5E;&#x6027;&#x4E00;&#x76F4;&#x7F3A;&#x4E4F; [2-6]&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5728;&#x8BE5;&#x5B57;&#x6BB5;&#x4E2D;&#x666E;&#x904D;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x6559;&#x6761;&#x662F; Cos2 &#x4EC5;&#x7528;&#x4F5C;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x86CB;&#x767D; [7&#xFF0C;8]&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; Cos2 &#x52A8;&#x529B;&#x662F;&#x5176;&#x751F;&#x7269;&#x529F;&#x80FD;&#x9700;&#x8981;&#x4E0E;&#x6B64;&#x52A8;&#x529B;&#x53EF;&#x80FD; Hh &#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; Cos2 &#x52A8;&#x529B;&#x9700;&#x8981;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x7535;&#x673A;&#x57DF;&#x3001; &#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x548C;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;Cos2 &#x65B0;&#x5175;&#x548C;&#x8FD0;&#x8F93; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x4F53;&#x5916;&#x5C04;&#x7CBE;&#x6CD5;&#x8098; (Ci) &#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;&#x679C;&#x8747;&#x8868;&#x793A;&#x7684; cos2 &#x7F16;&#x7801;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x52A8;&#x529B;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5728;&#x89C4;&#x7BA1; Ci &#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x5C55;&#x793A;&#x7B26;&#x5408;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x5F31;&#x6BD2;&#x75AB;&#x82D7;&#x51CF;&#x6BD2; Cos2 &#x51FD;&#x6570; [9]&#x3002;&#x7ED3;&#x5408;&#x8D77;&#x6765;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Cos2 &#x52A8;&#x529B;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x6570;&#x989D;&#x53CA;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; Ci&#xFF0C;&#x5B83;&#x6700;&#x7EC8;&#x89E3;&#x91CA;&#x7684; Hh &#x7EC6;&#x80DE;&#x906D;&#x53D7;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;

&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x6837;&#x86CB;&#x767D; hedgehog &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E2D;&#x7684; Costal2 &#x51FD;&#x6570;&#x3002;

The Hedgehog (Hh) signaling pathway initiates an evolutionarily conserved developmental program required for the proper patterning of many tissues [1]. Although Costal2 (Cos2) is a requisite component of the Hh pathway, its mechanistic role is not well understood. Because of its primary sequence, Cos2 was initially predicted to function as a kinesin-like protein [2]. However, evidence showing that Cos2 function might require kinesin-like properties has been lacking [2-6]. Thus, the prevailing dogma in the field is that Cos2 functions solely as a scaffolding protein [7, 8]. Here, we show that Cos2 motility is required for its biological function and that this motility may be Hh regulated. We show that Cos2 motility requires an active motor domain, ATP, and microtubules. Additionally, Cos2 recruits and transports other components of the Hh signaling pathway, including the transcription factor Cubitus interruptus (Ci). Drosophila expressing cos2 mutations that encode proteins that lack motility are attenuated in their ability to regulate Ci activity and exhibit phenotypes consistent with attenuated Cos2 function [9]. Combined, these results demonstrate that Cos2 motility plays an important role in its function, regulating the amounts and activity of Ci that ultimately interpret the level of Hh to which cells are exposed.

Costal2 functions as a kinesin-like protein in the hedgehog signal transduction pathway.

La voie de signalisation Hedgehog (Hh) lance un programme de perfectionnement &eacute;volutivement conserv&eacute; requis pour la bonne structuration de nombreux tissus [1]. Bien que Costal2 (Cos2) est une composante n&eacute;cessaire de la voie de l&#39;Hh, son r&ocirc;le m&eacute;caniste n&#39;est pas bien comprise. En raison de sa s&eacute;quence primaire, Cos2 &eacute;tait initialement pr&eacute;vu pour fonctionner comme une prot&eacute;ine kin&eacute;sine [2]. Cependant, montrant preuve que fonction Cos2 peut n&eacute;cessiter la kin&eacute;sine-comme des propri&eacute;t&eacute;s a fait d&eacute;faut [2-6]. Ainsi, le dogme qui pr&eacute;vaut sur le terrain est que Cos2 fonctionne uniquement comme une prot&eacute;ine d&#39;&eacute;chafaudage [7, 8]. Ici, nous montrons que la motilit&eacute; Cos2 est requise pour sa fonction biologique et que cette motilit&eacute; peut &ecirc;tre r&eacute;gul&eacute;e de Hh. Nous montrons que la motilit&eacute; Cos2 n&eacute;cessite un domaine actif de moteur, l&#39;ATP et les microtubules. En outre, Cos2 recrute et transporte les autres composantes de l&#39;Hh, signalisation, y compris le facteur de transcription Cubitus interruptus (Ci). Drosophile exprimant cos2 mutations qui codent pour des prot&eacute;ines qui n&#39;ont pas la motilit&eacute; sont att&eacute;nu&eacute;es dans leur capacit&eacute; &agrave; r&eacute;guler l&#39;activit&eacute; de la Ci et pr&eacute;sentent des ph&eacute;notypes conformes a att&eacute;nu&eacute; fonction Cos2 [9]. Combin&eacute;s, ces r&eacute;sultats d&eacute;montrent que la motilit&eacute; Cos2 joue un r&ocirc;le important dans sa fonction, r&eacute;glementant l&#39;activit&eacute; de Ci qui interpr&egrave;tent en fin de compte le niveau de Hh auxquels sont expos&eacute;s les cellules et de montants.

Costal2 fonctionne comme une prot&eacute;ine de kin&eacute;sine-comme dans la voie de transduction de signal de h&eacute;risson.

Der Igel (Hh)-signalisieren Signalweg initiiert eine evolution&auml;r konservierte Entwicklungs Programm erforderlich f&uuml;r die ordnungsgem&auml;&szlig;e Musterung von vielen Geweben [1]. Obwohl Costal2 (Cos2) ist eine erforderliche Komponente des Hh, seine mechanistische Rolle ist nicht gut verstanden. Wegen seiner prim&auml;ren Sequenz wurde Cos2 zun&auml;chst vorhergesagt, Funktion als ein Kinesin-&auml;hnliche Proteine [2]. Jedoch hat Beweise zeigen, da&szlig; Cos2 Funktion Kinesin-&auml;hnliche Eigenschaften erfordern [2-6] gefehlt. Das vorherrschende Dogma im Feld ist also, dass, Cos2 ausschlie&szlig;lich als Ger&uuml;st Protein [7, 8 Funktionen]. Hier zeigen wir, dass Cos2 Motilit&auml;t f&uuml;r seine biologische Funktion erforderlich ist und dass diese Motilit&auml;t Hh geregelt werden kann. Wir zeigen, dass Cos2 Motilit&auml;t einer active-motor-Dom&auml;ne, ATP und Mikrotubuli erfordert. Zus&auml;tzlich Cos2 rekrutiert und anderen Komponenten von der Hh Signalisierung Pfades, einschlie&szlig;lich den Transkriptionsfaktor Cubitus Interruptus (Ci) transportiert. Taufliege Ausdr&uuml;cken cos2, die Mutationen, die Proteine codieren, die Motilit&auml;t fehlen, in ihrer F&auml;higkeit abgeschw&auml;cht werden, Ci-Aktivit&auml;t zu regulieren und ausstellen Ph&auml;notypen mit abgeschw&auml;cht Cos2-Funktion [9]. Kombiniert werden, zeigen diese Ergebnisse, dass Cos2 Motilit&auml;t spielt eine wichtige Rolle in ihrer Funktion, Regelung der Betr&auml;ge und die Aktivit&auml;t des Ci, die letztlich die H&ouml;he der Hh interpretieren, die Zellen ausgesetzt sind.

Costal2 Funktionen als Protein Kinesin-&auml;hnliche in der Igel-Signal-Transduktion-Pathway.

The Hedgehog (Hh) signaling pathway avvia un programma di sviluppo evolutionarily conserved necessario per il corretto patterning di molti tessuti [1]. Anche se Costal2 (Cos2) &egrave; una componente necessaria del percorso Hh, suo ruolo meccanicistica non &egrave; ben compreso. A causa della sua sequenza primaria, Cos2 era inizialmente previsto per funzionare come una proteina simile chinesina [2]. Tuttavia, mostrando prove che Cos2 funzione potrebbe richiedere una propriet&agrave; chinesina-come &egrave; stato carente [2-6]. Cos&igrave;, il dogma prevalente nel campo &egrave; che Cos2 funzioni unicamente come una proteina di ponteggi [7, 8]. Qui, vi mostriamo che Cos2 motilit&agrave; &egrave; necessaria per la sua funzione biologica e che questa motilit&agrave; possono essere regolati Hh. Mostriamo che la motilit&agrave; Cos2 richiede un dominio motore attivo, ATP e microtubuli. Inoltre, Cos2 reclute e trasporta le altre componenti di Hh signaling pathway, compreso il fattore di trascrizione Cubitus interruptus (Ci). Drosofila esprimendo cos2 mutazioni che codificano proteine che la mancanza di motilit&agrave; sono attenuate nella loro capacit&agrave; di regolare attivit&agrave; Ci e presentano fenotipi coerenti con attenuato Cos2 funzione [9]. Combinati, questi risultati dimostrano che la motilit&agrave; Cos2 svolge un ruolo importante nella sua funzione, che regolano la quantit&agrave; e l&#39;attivit&agrave; di Ci che in definitiva interpretare il livello di Hh a cui sono esposte le cellule.

Costal2 funziona come una proteina chinesina-come il pathway di trasduzione del segnale hedgehog.

&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF; (Hh) &#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5; [1] &#x306E;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x9032;&#x5316;&#x7684;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x767A;&#x9054;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Costal2 (Cos2) Hh &#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x304C;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x305F;&#x3081;&#x306E; Cos2 &#x306F;&#x5F53;&#x521D;&#x3001;&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x69D8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; [2] &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x4E88;&#x60F3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;Cos2 &#x95A2;&#x6570;&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x69D8;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3067;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x307E;&#x3067;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x3066; [2-6] &#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x73FE;&#x884C;&#x306E;&#x6559;&#x7FA9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9; Cos2 &#x3082;&#x3063;&#x3071;&#x3089;&#x8DB3;&#x5834;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066; [7, 8] &#x3092;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Cos2 &#x904B;&#x52D5;&#x304C;&#x305D;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x898F;&#x5236; Hh &#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Cos2 &#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x306B;&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;ATP&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;.&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Cos2 &#x52DF;&#x96C6;&#x3057;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x8098;&#x81A3;&#x5916;&#x5C04;&#x7CBE; (Ci) &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;Hh &#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8EE2;&#x9001;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x904B;&#x52D5;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x7B26;&#x53F7;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x5909;&#x7570;&#x80FD;&#x529B;&#x3092; Ci &#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x306B;&#x6E1B;&#x8870;&#x306F; cos2 &#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8; Cos2 &#x95A2;&#x6570; [9] &#x6E1B;&#x8870;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;Cos2 &#x904B;&#x52D5;&#x91CF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x66DD;&#x3055;&#x308C;&#x308B; Hh &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x89E3;&#x91C8;&#x3059;&#x308B; Ci &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Costal2 &#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x69D8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; (Hh) &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C; &#xB9CE;&#xC740; &#xC870;&#xC9C1; [1]&#xC758; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xD328;&#xD130; &#xB2DD;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC9C4;&#xD654; &#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xB85D; Costal2 (Cos2) Hh &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;, &#xAE30;&#xACC4; &#xB860;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; Cos2 &#xCD08;&#xAE30; kinesin &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; [2]&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC608;&#xCE21; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; Cos2 &#xD568;&#xC218; kinesin &#xAC19;&#xC740; &#xC18D;&#xC131;&#xC774; &#xD544;&#xC694;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC99D;&#xAC70;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; [2-6] &#xBD80;&#xC871; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD544;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xB110;&#xB9AC; &#xC815;&#xC124; Cos2 [7, 8] &#xBE44; &#xACC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C;&#xB9CC; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; Cos2 &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xBA70;&#xC774; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; Hh &#xADDC;&#xC81C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; cos2&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xD65C;&#xC131; &#xBAA8;&#xD130; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;, ATP, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; microtubules &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Cos2 &#xC2E0;&#xBCD1; &#xACE0; Hh &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C;, &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; Cubitus interruptus (Ci) &#xB4F1;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC804;&#xC1A1;. Cos2 &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBD80;&#xD638;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; Ci &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xACE0;&#xAE30;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xC804;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC1E0; &#xD45C;&#xD604; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xAC10;&#xC1E0; Cos2 &#xAE30;&#xB2A5; [9]. &#xACB0;&#xD569;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC785;&#xC99D; Cos2 &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xAE08;&#xC561; &#xBC0F; &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; Hh &#xC140; &#xB178;&#xCD9C; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xD574;&#xC11D; &#xD558;&#xB294; Ci&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; kinesin &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; Costal2 &#xAE30;&#xB2A5;.

The Hedgehog (Hh) v&iacute;a de se&ntilde;alizaci&oacute;n inicia un programa de desarrollo evolutivamente conservado para el patr&oacute;n correcto de muchos tejidos [1]. Aunque Costal2 (Cos2) es un componente necesario de la v&iacute;a de Hh, su papel mecanicista no se entiende bien. Debido a su secuencia primaria, Cos2 inicialmente fue predicho para funcionar como una prote&iacute;na kinesin [2]. Sin embargo, mostrando evidencia que Cos2 funci&oacute;n requiera propiedades similares kinesin ha faltado [2-6]. As&iacute;, el dogma prevaleciente en el campo es que Cos2 funciona &uacute;nicamente como una prote&iacute;na de andamiaje [7, 8]. A continuaci&oacute;n, os mostramos que Cos2 motilidad es necesaria para su funci&oacute;n biol&oacute;gica y que esta movilidad puede ser Hh regulado. Mostramos que Cos2 motilidad requiere un dominio motor activo, ATP y los microt&uacute;bulos. Adicionalmente, Cos2 recluta y transporta a otros componentes del v&iacute;a, incluyendo el factor de transcripci&oacute;n Cubitus interruptus (Ci) de se&ntilde;alizaci&oacute;n de Hh. Drosophila expresando cos2 mutaciones que codifican prote&iacute;nas que carecen de movilidad se aten&uacute;an en su capacidad para regular la actividad de Ci y exhiben fenotipos consistentes con atenuada Cos2 funci&oacute;n [9]. Combinados, estos resultados demuestran que la motilidad Cos2 desempe&ntilde;a un papel importante en su funci&oacute;n, regulaci&oacute;n de las cantidades y la actividad de Ci que interpretar en &uacute;ltima instancia el nivel de Hh a que est&aacute;n expuestas las c&eacute;lulas.

Costal2 funciona como una prote&iacute;na kinesin-como en la v&iacute;a de transducci&oacute;n de la se&ntilde;al de erizo.

&#x523A;&#x732C; (Hh) &#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x540E;&#x751F;&#x7684;&#x5F00;&#x53D1;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4E86;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6559;&#x5B66;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E00;&#x5957;&#x7684;&#x5B88;&#x6052;&#x3001; &#x4E0B;&#x6E38;&#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8FDB;&#x884C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x548C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x548C;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x8098;&#x4F53;&#x5916;&#x5C04;&#x7CBE;&#x6CD5;&#x89E3;&#x91CA; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x96C6;&#x6210;&#x9057;&#x4F20;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57FA;&#x672C;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x4FE1;&#x606F;&#x5DF2;&#x63D0;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x89E3;&#x91CA;&#x5982;&#x4F55;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x8F93;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x76F8;&#x5173;&#x5230;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x5E74;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x6469;&#x5C14;&#x6BD4;&#x76F8;&#x5F53;&#x4E0D;&#x540C;&#xFF0C;&#x76AE;&#x4E0B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x5143;&#x4EF6;&#x7684;&#x6BD4;&#x7387;&#x53EF;&#x4EE5;&#x533A;&#x5206;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5904;&#x7406;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x5957;&#x7EAF;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6807;&#x51C6;&#x4E3A;&#x4E0B;&#x6E38;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x6267;&#x884C;&#x7684;&#x679C;&#x8747;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88C2;&#x89E3;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x7ED9;&#x5B9A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5185;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x7A33;&#x6001;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x4E0D;&#x540C;&#x591A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6570;&#x91CF;&#x7EA7;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6BD4;&#x7387;&#x5B88;&#x6052;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x6469;&#x5C14;&#x6BD4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x8DE8;&#x819C;&#x86CB;&#x767D; Smoothened&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x662F;&#x76EE;&#x524D;&#x5728;&#x9650;&#x5236;&#x91D1;&#x989D;&#xFF0C;&#x800C;&#x6D88;&#x6781;&#x901A;&#x8DEF;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#xFF0C;&#x6291;&#x764C;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#xFF0C;&#x662F;&#x76EE;&#x524D;&#x5E7F;&#x5927;&#x78E8;&#x7259;&#x8FC7;&#x5269;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5728;&#x7A33;&#x6001;&#x6BD4;&#x7387;&#x7684;&#x5DE8;&#x5927;&#x5DEE;&#x5F02;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x4E0B;&#x6E38;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x7B49;&#x6469;&#x5C14;&#x7684;&#x819C;&#x76F8;&#x5173;&#x590D;&#x6742;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7ED3;&#x679C;&#x6765;&#x91CD;&#x65B0;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x673A;&#x578B; Hh &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x73B0;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5360;&#x53D1;&#x73B0;&#x5404;&#x79CD; Hh &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x5143;&#x4EF6;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x5DEE;&#x5F02;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x5143;&#x4EF6;&#x7684;&#x91CF;&#x5316;&#x652F;&#x6301; Hedgehog &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

The secreted protein Hedgehog (Hh) plays a critical instructional role during metazoan development. In Drosophila, Hh signaling is interpreted by a set of conserved, downstream effectors that differentially localize and interact to regulate the stability and activity of the transcription factor Cubitus interruptus. Two essential models that integrate genetic, cell biological, and biochemical information have been proposed to explain how these signaling components relate to one another within the cellular context. As the molar ratios of the signaling effectors required in each of these models are quite different, quantitating the cellular ratio of pathway components could distinguish these two models. Here, we address this important question using a set of purified protein standards to perform a quantitative analysis of Drosophila cell lysates for each downstream pathway component. We determine each component's steady-state concentration within a given cell, demonstrate the molar ratio of Hh signaling effectors differs more than two orders of magnitude and that this ratio is conserved in vivo. We find that the G-protein-coupled transmembrane protein Smoothened, an activating component, is present in limiting amounts, while a negative pathway regulator, Suppressor of Fused, is present in vast molar excess. Interestingly, despite large differences in the steady-state ratio, all downstream signaling components exist in an equimolar membrane-associated complex. We use these quantitative results to re-evaluate the current models of Hh signaling and now propose a novel model of signaling that accounts for the stoichiometric differences observed between various Hh pathway components.

A quantification of pathway components supports a novel model of Hedgehog signal transduction.

La prot&eacute;ine s&eacute;cr&eacute;t&eacute;e Hedgehog (Hh) joue un r&ocirc;le p&eacute;dagogique essentiel au cours du d&eacute;veloppement de m&eacute;tazoaires. Chez la drosophile, la signalisation de Hh est interpr&eacute;t&eacute;e par un ensemble de conserv&eacute;, en aval des effecteurs diff&eacute;rentiellement localiser et interagir pour r&eacute;gler la stabilit&eacute; et l&#39;activit&eacute; du facteur de transcription Cubitus interruptus. Deux mod&egrave;les essentiels qui int&egrave;grent la g&eacute;n&eacute;tique, les renseignements biologiques et biochimiques cellulaire ont &eacute;t&eacute; propos&eacute;es pour expliquer comment ces composants signalisation se rapportent &agrave; un autre dans le contexte cellulaire. Comme les rapports molaires des signalisation effecteurs requis dans chacun de ces mod&egrave;les sont tr&egrave;s diff&eacute;rentes, quantifiant le taux cellulaire de composants de voie pourrait distinguer ces deux mod&egrave;les. Ici, nous abordons cette question importante, &agrave; l&#39;aide d&#39;un ensemble de normes de prot&eacute;ine purifi&eacute;e pour effectuer une analyse quantitative des lysats de cellules de drosophile pour chaque composant de la voie en aval. Nous d&eacute;terminer la concentration d&#39;&eacute;quilibre de chaque composant au sein d&#39;une cellule donn&eacute;e, d&eacute;montrer le rapport molaire de Hh signalisation effecteurs diff&egrave;re de plus de deux ordres de grandeur, et que ce ratio est conserv&eacute; in vivo. Nous constatons que les prot&eacute;ines transmembranaires coupl&eacute;s aux prot&eacute;ines G Smoothened, un &eacute;l&eacute;ment d&eacute;clencheur, est pr&eacute;sent &agrave; limiter les quantit&eacute;s, alors qu&#39;un r&eacute;gulateur de la voie n&eacute;gative, suppresseur de fondue, est pr&eacute;sent en exc&egrave;s molaire vaste. Fait int&eacute;ressant, malgr&eacute; de grandes diff&eacute;rences dans le taux d&#39;&eacute;quilibre, tout en aval signalisation composants existent dans un complexe associ&eacute; &agrave; la membrane &eacute;quimolaire. Nous utilisons ces r&eacute;sultats quantitatifs pour r&eacute;&eacute;valuer les mod&egrave;les actuels de la signalisation de Hh et maintenant proposer un nouveau mod&egrave;le de signalisation qui prend en compte les diff&eacute;rences stoechiom&eacute;triques observ&eacute;es entre les divers composants de voie de Hh.

Une quantification des composants de la voie prend en charge un mod&egrave;le original de transduction de signal de h&eacute;risson.

Die sekretierten Proteine Igel (Hh) spielt eine wichtige anweisende Rolle w&auml;hrend indem Entwicklung. Drosophila ist Hh Signalisierung durch eine Reihe von konservierten, nachgeschalteten Effektoren interpretiert die differentiell zu lokalisieren und zu interagieren, um die Stabilit&auml;t und die T&auml;tigkeit des Transkriptionsfaktors Cubitus Interruptus zu regulieren. Zwei wesentliche Modelle, die genetische integrieren, biologische und biochemische Zellinformationen wurden vorgeschlagen zu erkl&auml;ren, wie diese Signalisierung Komponenten im Zusammenhang mit zellul&auml;ren zueinander. Wie das molare Verh&auml;ltnis die Signalisierung Effektoren, die ben&ouml;tigt werden, in jedem dieser Modelle sehr unterschiedlich sind, k&ouml;nnte die Quantifizierung des zellul&auml;ren Verh&auml;ltnis der Stoffwechselweg Komponenten diese beiden Modelle unterscheiden. Hier wenden wir uns an diese wichtige Frage mithilfe eines gereinigtes Protein-Standards auf eine quantitativen Analyse des Drosophila-Zelllysate f&uuml;r jede Komponente des nachgeschalteten Weg durchf&uuml;hren. Wir jede Komponente Steady-State Konzentration innerhalb einer bestimmten Zelle zu bestimmen, zeigen das molare Verh&auml;ltnis von Hh Signalisierung Effektoren unterscheidet sich mehr als zwei Gr&ouml;&szlig;enordnungen und, dass dieses Verh&auml;ltnis in-vivo erhalten bleibt. Wir finden, dass die G-Protein-gekoppelter Transmembraneprotein gegl&auml;ttet, eine aktivierende Komponente ist in Mengen, zu begrenzen, w&auml;hrend eine negative Weg-Spannungsregler, Suppressor aus geschmolzenen, in gro&szlig;en molaren &Uuml;berschuss vorhanden ist. Interessant ist, Signalisierung trotz der gro&szlig;en Unterschiede im station&auml;ren Verh&auml;ltnis, alles stromabw&auml;rts, dass Komponenten in einem equimolar Membran-assoziierte Komplex vorhanden sind. Wir verwenden diese quantitative Ergebnisse zu bewerten die aktuellen Modelle Hh zu signalisieren und jetzt vorschlagen ein neuartiges Modell signalisieren, die Konten f&uuml;r die st&ouml;chiometrische Unterschiede zwischen verschiedenen Hh Weg Komponenten beobachtet.

Eine Quantifizierung der Stoffwechselweg Komponenten unterst&uuml;tzt ein neuartiges Modell der Igel-Signaltransduktion.

La proteina secreta Hedgehog (Hh) svolge un ruolo critico didattico durante lo sviluppo di metazoi. In drosofila, Hh segnalazione &egrave; interpretato da un set di effettori a valle, conservate che differenzialmente localizzare e interagire per regolare la stabilit&agrave; e l&#39;attivit&agrave; del fattore di trascrizione Cubitus interruptus. Due modelli essenziali che integrano la genetica, informazioni biologiche e biochimiche delle cellule sono state proposte per spiegare come questi componenti di segnalazione si riferiscono l&#39;uno a altro all&#39;interno del contesto cellulare. Come i rapporti molari della segnalazione effettori richiesti in ciascuno di questi modelli sono abbastanza differenti, quantificazione del rapporto cellulare di componenti pathway potrebbe distinguere questi due modelli. Qui, ci rivolgiamo questa domanda importante utilizzando un insieme di proteine purificate standard per eseguire un&#39;analisi quantitativa della drosofila lisati cellulari per ogni componente a valle del percorso. Noi determinare concentrazione allo stato stazionario di ogni componente all&#39;interno di una data cellula, dimostrare il rapporto molare di Hh segnalazione effettori differisce da pi&ugrave; di due ordini di grandezza e che questo rapporto &egrave; conservato in vivo. Troviamo che G-proteina-accoppiato del transmembrane proteina lisciato, un componente di attivazione, &egrave; presente nel limitare gli importi, mentre un regolatore negativo pathway, soppressore del fuso, &egrave; presente in grande eccesso molare. &Egrave; interessante notare che, nonostante le grandi differenze nel rapporto dello stato stazionario, tutti a valle segnalazione componenti esistono in un complesso equimolare di membrana-associato. Usiamo questi risultati quantitativi per rivalutare gli attuali modelli di segnalazione Hh e ora proporre un modello di romanzo di segnalazione che conti per stechiometriche differenze osservate tra i vari componenti di pathway di Hh.

Una quantificazione delle componenti del pathway supporta un modello di romanzo della trasduzione del segnale Hedgehog.

&#x5206;&#x6CCC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0; (Hh) &#x5F8C;&#x751F;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x306B;&#x6559;&#x80B2;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Hh &#x3092;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x5DEE;&#x52D5;&#x3092;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3057;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3068;&#x81A3;&#x5916;&#x5C04;&#x7CBE;&#x3067;&#x8098;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5BFE;&#x8A71;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3001;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89E3;&#x91C8;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2 &#x3064;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x7D71;&#x5408;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x60C5;&#x5831;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x5225;&#x306B;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x5185;&#x3067;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5404;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x306E;&#x30E2;&#x30EB;&#x6BD4;&#x306F;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD4;&#x30B1;&#x30A4;&#x5149;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3067;&#x304D;&#x305F;.&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x5404;&#x4E0B;&#x6D41;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB; lysates &#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x6D44;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A19;&#x6E96;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8CEA;&#x554F;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x5185;&#x306E;&#x5404;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x4EE5;&#x4E0A; 2 &#x6841;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6BD4;&#x7387;&#x306F; in vivo &#x3067;&#x7BC0;&#x7D04;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E; Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x30E2;&#x30EB;&#x6BD4;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x578B;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6ED1;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x8CA0;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF; &#x30B5;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x3001;&#x5E83;&#x5927;&#x306A;&#x5927;&#x81FC;&#x6B6F;&#x904E;&#x5270;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9593;&#x306E;&#x91D1;&#x984D;&#x306F;&#x3001;&#x5236;&#x9650;&#x3059;&#x308B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x6BD4;&#x7387;&#x3067;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x7B49;&#x30E2;&#x30EB;&#x306E;&#x819C;&#x6E96;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x3002;Hh &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x518D;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x3001;&#x4ECA;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A; Hh &#x7D4C;&#x8DEF;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x9593;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x7684;&#x5DEE;&#x7570;&#x3092;&#x5360;&#x3081;&#x3066;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D4C;&#x8DEF;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBE44; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; (Hh) metazoan &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC9C0;&#xCE68; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;, Hh &#xC2E0;&#xD638; &#xBCF4;&#xC874;, &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xCC28;&#xB3D9; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xACFC; Cubitus interruptus &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC9D1;&#xD569;&#xC73C;&#xB85C; &#xD574;&#xC11D; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xBAA8;&#xB378;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;, &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; &#xC815;&#xBCF4; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC11C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB418;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC01;&#xAC01;&#xC758;&#xC774; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xC5B4; &#xAE08; &#xB2C8; &#xBE44;&#xC728;&#xC774; &#xB2E4;&#xB974;&#xB2E4;&#xB85C; &#xD1B5;&#xB85C; &#xCEF4;&#xD3EC;&#xB10C;&#xD2B8;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xBE44;&#xC728; quantitating&#xC774; &#xB450; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xAD6C;&#xBCC4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD45C;&#xC900; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC01; &#xD1B5;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC; lysates&#xC758; &#xC815;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD2B9;&#xC815;&#xB41C; &#xC140; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC01; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4; &#xACB0;&#xC815;, Hh &#xC2E0;&#xD638; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC640; &#xB2E4;&#xB978; &#xB450; &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xBE44;&#xC728;&#xC740; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874;&#xC740; &#xC5B4; &#xAE08; &#xB2C8; &#xBE44;&#xC728;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Smoothened, &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD1B5;&#xB85C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;, &#xC5B5;&#xC555;&#xC758; &#xC735;&#xD569;, &#xAD11;&#xB300; &#xD55C; &#xC5B4; &#xAE08; &#xB2C8; &#xCD08;&#xACFC;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;, &#xAE08;&#xC561; &#xC81C;&#xD55C;&#xC5D0; &#xCC3E;&#xC744;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xBE44;&#xC728;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD070; &#xCC28;&#xC774;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; equimolar &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Hh &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C0;&#xAE08;&#xC740; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; Hh &#xD1B5;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC0AC;&#xC774; &#xAD00;&#xCC30; stoichiometric &#xCC28;&#xC774; &#xCC28;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD1B5;&#xB85C; &#xCEF4;&#xD3EC;&#xB10C;&#xD2B8;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654; &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La prote&iacute;na secretada Hedgehog (Hh) juega un papel fundamental de la instrucci&oacute;n durante el desarrollo de metazoarios. En Drosophila, se&ntilde;alizaci&oacute;n Hh es interpretada por un conjunto de efectores conservados, aguas abajo que diferencialmente localizar e interact&uacute;an para regular la estabilidad y la actividad del factor de transcripci&oacute;n Cubitus interruptus. Dos modelos esenciales que integran gen&eacute;tica, informaci&oacute;n biol&oacute;gica y bioqu&iacute;mica celular se han propuesto para explicar c&oacute;mo estos componentes de se&ntilde;alizaci&oacute;n se relacionan entre s&iacute; dentro del contexto celular. Como las relaciones molares de los efectores se&ntilde;alizaci&oacute;n requeridas en cada uno de estos modelos son bastante diferentes, la cuantificaci&oacute;n la relaci&oacute;n celular de componentes de la v&iacute;a podr&iacute;a distinguir estos dos modelos. Aqu&iacute;, nos dirigimos a esta importante cuesti&oacute;n mediante un conjunto de normas de la prote&iacute;na purificada para realizar un an&aacute;lisis cuantitativo de lisados celulares de Drosophila para cada componente de la v&iacute;a descendente. Nosotros determinar la concentraci&oacute;n de estado estacionario de cada componente dentro de una celda determinada, demuestran la fracci&oacute;n molar de Hh se&ntilde;alizaci&oacute;n efectores difiere m&aacute;s de dos &oacute;rdenes de magnitud y que esta relaci&oacute;n se conserva in vivo. Encontramos que la g-prote&iacute;na-juntado prote&iacute;na transmembrana alisado, un componente de activaci&oacute;n, est&aacute; presente en la limitaci&oacute;n de cantidades, mientras que un regulador negativo de la v&iacute;a, supresor de fundido, est&aacute; presente en gran exceso molar. Curiosamente, a pesar de grandes diferencias en la proporci&oacute;n de estado estacionario, todo r&iacute;o abajo se&ntilde;alizaci&oacute;n componentes existen en un complejo equimolar asociado a membrana. Utilizamos estos resultados cuantitativos para evaluar los modelos actuales de se&ntilde;alizaci&oacute;n Hh y proponer un modelo novedoso de se&ntilde;alizaci&oacute;n que tenga en cuenta las estequiom&eacute;tricas diferencias observadas entre los distintos componentes del camino de Hh.

Una cuantificaci&oacute;n de los componentes de la v&iacute;a apoya un modelo novedoso de transducci&oacute;n de la se&ntilde;al del erizo.

&#x5728;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x523A;&#x732C; (HH) &#x5BB6;&#x5EAD;&#x91CD;&#x8981;&#x6559;&#x5B66;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x4F5C;&#x7528;&#x540E;&#x751F;&#x3002;HH &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6700;&#x521D;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x5927;&#x7EA6; 45 kDa &#x5168;&#x957F;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x5206;&#x5B50;&#x88C2;&#x89E3;&#x751F;&#x6210;&#x5176;&#x540E;&#x6210;&#x4E3A;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x4FEE;&#x6539; (HH-Np) &#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x53EF;&#x63A5;&#x53D7;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x6539;&#x6027;&#x6C28;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x88C2;&#x89E3;&#x4EA7;&#x54C1;&#x662F;&#x6240;&#x6709;&#x4F9D;&#x8D56; HH &#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x8D1F;&#x8D23;&#x3002;&#x4E0E;&#x6B64;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A;&#x5168;&#x957F;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684; HH &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5F97;&#x4EE5;&#x4EA4;&#x901A;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x548C;&#x76F4;&#x63A5;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x80FD;&#x591F;&#x62EF;&#x6551;&#x529F;&#x80FD;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x679C;&#x8747;&#x773C;&#x775B;&#x7279;&#x5B9A; hh &#x635F;&#x5931;&#x8868;&#x793A;&#x4E0D;&#x80FD;&#x52A0;&#x5DE5;&#x6210; HH-Np &#x7684; hh &#x5168;&#x957F;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x67D0;&#x4E9B;&#x751F;&#x7406;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x5168;&#x957F; HH &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53EF;&#x80FD;&#x76F4;&#x63A5;&#x53C2;&#x4E0E; HH &#x4FE1;&#x53F7;&#x548C;&#x5168;&#x957F; HH &#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x6D3B;&#x52A8;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x8FDB;&#x5316;&#x4FDD;&#x5B88;&#x3002;

&#x5168;&#x957F;&#x672A;&#x5904;&#x7406;&#x7684;&#x523A;&#x732C;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;

The hedgehog (HH) family of ligands plays an important instructional role in metazoan development. HH proteins are initially produced as approximately 45-kDa full-length proteins, which undergo an intramolecular cleavage to generate an amino-terminal product that subsequently becomes cholesterol-modified (HH-Np). It is well accepted that this cholesterol-modified amino-terminal cleavage product is responsible for all HH-dependent signaling events. Contrary to this model we show here that full-length forms of HH proteins are able to traffic to the plasma membrane and participate directly in cell-cell signaling, both in vitro and in vivo. We were also able to rescue a Drosophila eye-specific hh loss of function phenotype by expressing a full-length form of hh that cannot be processed into HH-Np. These results suggest that in some physiological contexts full-length HH proteins may participate directly in HH signaling and that this novel activity of full-length HH may be evolutionarily conserved.

The full-length unprocessed hedgehog protein is an active signaling molecule.

La famille de h&eacute;risson (HH) des ligands joue un r&ocirc;le p&eacute;dagogique important dans le d&eacute;veloppement de m&eacute;tazoaires. Prot&eacute;ines HH sont initialement produits environ 45 kDa les prot&eacute;ines pleine longueur, qui subissent un clivage intramol&eacute;culaire pour g&eacute;n&eacute;rer un produit amino-terminale qui devient par la suite modifi&eacute;s cholest&eacute;rol (HH-Np). Il est bien &eacute;tabli que ce produit modifi&eacute; cholest&eacute;rol amino-terminale clivage est responsable de tous les &eacute;v&eacute;nements de signalisation de HH-d&eacute;pendante. &Agrave; l&#39;encontre de ce mod&egrave;le, nous montrons ici que les formes pleine longueur de prot&eacute;ines HH sont capables de trafic vers la membrane plasmique et participer directement &agrave; la signalisation de cellules, aussi bien in vitro et in vivo. Nous avons &eacute;galement pu sauver une perte sp&eacute;cifique yeux hh de Drosophila du ph&eacute;notype de la fonction en exprimant une forme pleine longueur de hh qui ne peuvent pas &ecirc;tre trait&eacute;e en HH-Np. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que, dans certains contextes physiologiques des prot&eacute;ines HH pleine longueur peuvent participer directement dans la signalisation de HH et que cette nouvelle activit&eacute; de pleine longueur HH peut &ecirc;tre conserv&eacute;e &eacute;volutives.

La prot&eacute;ine pleine longueur h&eacute;risson non transform&eacute;es est une mol&eacute;cule de signalisation active.

Die Familie die Igel (HH) Liganden Rolle eine wichtige Lehr indem Entwicklung. HH-Proteine werden zun&auml;chst als etwa 45-kDa in Proteine, produziert, die eine intramolekulare Spaltung um ein amino-Terminal-Produkt zu generieren, die Cholesterin-modifizierte (HH-Np) anschlie&szlig;end wird zu unterziehen. Es wird gut angenommen, dass dieses Cholesterin-modifizierte amino-Terminal Dekollet&eacute;-Produkt f&uuml;r alle HH-abh&auml;ngige Signalling Ereignisse verantwortlich ist. Im Gegensatz zu diesem Modell zeigen wir hier, dass in Formen der HH-Proteine in der Lage sind, um Verkehr auf der Plasmamembran und direkt an Zell-Zell-Signaltechnik, in vitro und in vivo. Wir konnten auch zur Rettung der Taufliege Augen-spezifische Hh Verlust der Funktion Ph&auml;notyp Ausdruck einer in Form von Hh, die in HH-Np nicht verarbeitet werden kann. Diese Ergebnisse legen nahe, dass in bestimmten physiologischen zusammenh&auml;ngen in HH-Proteine direkt in HH Signalisierung beteiligen k&ouml;nnen und dass diese neuartige T&auml;tigkeit in HH evolution&auml;r konserviert werden kann.

Das in unverarbeiteten Igel-Protein ist eine aktive signalisierende Molek&uuml;l.

La famiglia hedgehog (HH) di ligandi gioca un ruolo importante didattico nello sviluppo di metazoi. HH proteine vengono prodotte inizialmente come circa 45-kDa full-length proteine, che subiscono una scissione intramolecolare per generare un prodotto amino-terminale che successivamente diventa colesterolo-modificato (HH-Np). &Egrave; ben accettato che questo prodotto modificati colesterolo amminico-terminale scissione &egrave; responsabile per tutti gli eventi di segnalazione HH-dipendente. Contrariamente a questo modello che vi mostriamo qui che forme full-length di proteine HH sono in grado di traffico verso la membrana plasmatica e partecipare direttamente alla cella di segnalazione sia in vitro che in vivo. Siamo stati anche in grado di salvare una perdita occhio specifiche hh drosofila del fenotipo funzione esprimendo una forma full-length di hh che non possono essere trasformati in HH-Np. Questi risultati suggeriscono che in alcuni contesti fisiologici full-length proteine HH possono partecipare direttamente a HH segnalazione e che questa attivit&agrave; romanzo di HH full-length pu&ograve; essere evolutivamente conservata.

La proteina hedgehog non trasformati full-length &egrave; una molecola di segnalazione attiva.

&#x30CF;&#x30EA;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF; &#xFF08;HH&#xFF09; &#x5BB6;&#x65CF;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6559;&#x80B2;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x5F8C;&#x751F;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3067;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HH &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x5F53;&#x521D;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C; (HH Np) &#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x304C;&#x5909;&#x66F4;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE; &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB;&#x88FD;&#x54C1;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x306E;&#x958B;&#x88C2;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x7D04; 45 kDa &#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x751F;&#x7523;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x3053;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x5909;&#x66F4;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE; &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB;&#x958B;&#x88C2;&#x88FD;&#x54C1;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; HH &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x5165;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x53CD;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E;&#x5F62;&#x5F0F; HH &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x819C;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x53C2;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;HH-Np &#x306B;&#x51E6;&#x7406;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093; hh &#x306E;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x5F62;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x95A2;&#x6570;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x773C;&#x7279;&#x7570; hh &#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x6551;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x6587;&#x8108;&#x3067;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E; HH &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F4;&#x63A5; HH &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x6D3B;&#x6027;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9; HH &#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x7684;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E;&#x672A;&#x51E6;&#x7406;&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0;&#x86CB;&#x767D;&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x5206;&#x5B50;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

Ligands&#xC758; &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; (HH) &#xAC00;&#xC871; metazoan &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC9C0;&#xCE68; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. HH &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCC98;&#xC74C; &#xC57D; 45-kDa &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xC218;&#xC220; &#xC774;&#xD6C4;&#xC5D0; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xC218;&#xC815; (HH Np) &#xB418;&#xB294; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC81C;&#xD488;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; intramolecular &#xBD84;&#xC5F4;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xBD84;&#xC5F4; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xC218;&#xC815; &#xC81C;&#xD488;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBAA8;&#xB4E0; HH &#xC885;&#xC18D; &#xC2E0;&#xD638; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC744; &#xC798; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xC774; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; HH &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; &#xD2B8;&#xB798;&#xD53D;&#xC744; &#xC140; &#xC2E0;&#xD638;, &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xCC38;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; hh HH Np&#xB85C; &#xCC98;&#xB9AC;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xB208; &#xAD00;&#xB828; hh &#xC190;&#xC2E4; &#xD568;&#xC218; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xC548; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC0C1;&#xD669;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; HH &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; HH &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xCC38;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; HH&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC774; &#xC9C4;&#xD654; &#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xD5E4; &#xC9C0; &#xD638; &#xADF8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xD65C;&#xC131; &#xC2E0;&#xD638; &#xBD84;&#xC790; &#xC774;&#xB2E4;.

La familia de hedgehog (HH) de ligandos desempe&ntilde;a un papel importante de la ense&ntilde;anza en desarrollo metazoarios. Inicialmente se fabrican prote&iacute;nas HH aproximadamente 45 kDa integral prote&iacute;nas, que se someten a una hendidura intramolecular para generar un producto amino-terminal que posteriormente se convierte en colesterol-modificado (HH-Np). Es bien aceptado que este producto modificado colesterol amino-terminal escote es responsable de todos los eventos de se&ntilde;alizaci&oacute;n HH-dependiente. Contrario a este modelo mostramos aqu&iacute; que las formas largas de prote&iacute;nas HH son capaces de tr&aacute;fico a la membrana plasm&aacute;tica y participar directamente en la se&ntilde;alizaci&oacute;n de la c&eacute;lula, tanto in vitro como in vivo. Tambi&eacute;n hemos podido rescatar una p&eacute;rdida de ojo espec&iacute;ficos hh de Drosophila del fenotipo de funci&oacute;n expresando una forma integral de hh que no puede ser transformado en HH-Np. Estos resultados sugieren que en algunos contextos fisiol&oacute;gicos integrales prote&iacute;nas HH pueden participar directamente en la se&ntilde;alizaci&oacute;n de HH y que esta novedosa actividad de larga duraci&oacute;n HH puede ser conservada evolutivamente.

La prote&iacute;na de larga duraci&oacute;n sin procesar erizo es una mol&eacute;cula de se&ntilde;alizaci&oacute;n activa.

RNA &#x8A8A;&#x672C;&#x662F;&#x8F6C;&#x5F55;&#x540E;&#x57FA;&#x56E0;&#x76D1;&#x7BA1;&#x6D89;&#x53CA;&#x6570;&#x4EE5;&#x767E;&#x8BA1;&#x7684; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (&#x9650;&#x5236;&#x6027;&#x5546;&#x4E1A;&#x60EF;&#x4F8B;) &#x548C;&#x542B;&#x6709; microRNA &#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269; (miRNPs) &#x8868;&#x793A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x4F9D;&#x8D56;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x4EA4;&#x8054;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x786E;&#x5B9A;&#x5728;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7EC4;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x6027;&#x5546;&#x4E1A;&#x60EF;&#x4F8B;&#x548C; miRNPs &#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x70B9;&#x3002;&#x4EA4;&#x8054;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E2D;&#x7F16;&#x5199;&#x4ECE; immunopurified RNPs 4 thiouridine &#x6CBB;&#x7597;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6269;&#x589E;&#x80DE;&#x82F7;&#x8FC7;&#x6E21;&#x5230;&#x80F8;&#x82F7;&#x6240;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7684;&#x5BC6;&#x96C6;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x6027;&#x5546;&#x4E1A;&#x60EF;&#x4F8B;&#x548C; miRNPs&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; PUM2&#x3001; QKI&#x3001; IGF2BP1 3&#x3001; &#x6208;/EIF2C1-4 &#x548C; TNRC6A C.&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x548C;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x540E;&#x679C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x56E0;&#x7D20;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6210;&#x5343;&#x4E0A;&#x4E07;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x5305;&#x542B;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x56FE;&#x6848;&#x4E3A; exonic &#x4E0E;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x6216;&#x7F16;&#x7801;&#x4E0E;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x559C;&#x597D;&#x8C08;&#x8BDD;&#x5185;&#x5BB9;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x8DE8;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7684;&#x7CBE;&#x786E;&#x6620;&#x5C04;&#x5C06;&#x8FC5;&#x901F;&#x65B0;&#x5174;&#x6570;&#x636E;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D8;&#x5316;&#x5982;&#x4F55;&#x8D21;&#x732E;&#x590D;&#x6742;&#x9057;&#x4F20;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x53D8;&#x5F02;&#x7684;&#x89E3;&#x91CA;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;

&#x8F6C;&#x5F55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x5168;&#x7531; PAR &#x526A;&#x8F91; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; microRNA &#x76EE;&#x6807;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

RNA transcripts are subject to posttranscriptional gene regulation involving hundreds of RNA-binding proteins (RBPs) and microRNA-containing ribonucleoprotein complexes (miRNPs) expressed in a cell-type dependent fashion. We developed a cell-based crosslinking approach to determine at high resolution and transcriptome-wide the binding sites of cellular RBPs and miRNPs. The crosslinked sites are revealed by thymidine to cytidine transitions in the cDNAs prepared from immunopurified RNPs of 4-thiouridine-treated cells. We determined the binding sites and regulatory consequences for several intensely studied RBPs and miRNPs, including PUM2, QKI, IGF2BP1-3, AGO/EIF2C1-4 and TNRC6A-C. Our study revealed that these factors bind thousands of sites containing defined sequence motifs and have distinct preferences for exonic versus intronic or coding versus untranslated transcript regions. The precise mapping of binding sites across the transcriptome will be critical to the interpretation of the rapidly emerging data on genetic variation between individuals and how these variations contribute to complex genetic diseases.

Transcriptome-wide identification of RNA-binding protein and microRNA target sites by PAR-CLIP.

Transcrits d&#x26;#39;ARN sont soumis &#xE0; la r&#xE9;gulation des g&#xE8;nes post-transcriptionnelle impliquant des centaines de prot&#xE9;ines liant l&#x26;#39;ARN (pratiques commerciales restrictives) et des complexes ribonucl&#xE9;oprot&#xE9;iques microARN contenant (miRNPs) exprim&#xE9;es de fa&#xE7;on d&#xE9;pendante du type cellulaire. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une approche de r&#xE9;ticulation &#xE0; base de cellules pour d&#xE9;terminer &#xE0; haute r&#xE9;solution et du transcriptome &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;chelle des sites de liaison des pratiques commerciales restrictives cellulaires et miRNPs. Les sites r&#xE9;ticul&#xE9;s sont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9;es par la thymidine &#xE0; des transitions cytidine dans les ADNc pr&#xE9;par&#xE9;s &#xE0; partir de immunopurifi&#xE9; RNP de la 4-thiouridine cellules trait&#xE9;es. Nous avons d&#xE9;termin&#xE9; les sites de liaison et les cons&#xE9;quences r&#xE9;glementaires de plusieurs pratiques commerciales restrictives intens&#xE9;ment &#xE9;tudi&#xE9;es et miRNPs, y compris PUM2, QKI, IGF2BP1-3, AGO/EIF2C1-4 et TNRC6A-C. Notre &#xE9;tude a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que ces facteurs se lient des milliers de sites contenant des motifs de s&#xE9;quence d&#xE9;finis et ont des pr&#xE9;f&#xE9;rences distinctes pour exonique contre intronique ou de codage par rapport &#xE0; des r&#xE9;gions non traduites transcription. La cartographie pr&#xE9;cise des sites de liaison &#xE0; travers le transcriptome sera cruciale pour l&#x26;#39;interpr&#xE9;tation des donn&#xE9;es se font jour rapidement sur la variation g&#xE9;n&#xE9;tique entre les individus et la fa&#xE7;on dont ces variations contribuent &#xE0; des maladies g&#xE9;n&#xE9;tiques complexes.

Transcriptome &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;chelle d&#x26;#39;identification de l&#x26;#39;ARN-binding protein et sites cibles microARN par PAR-CLIP

RNA-Transkripte unterliegen Posttranscriptionale Genregulation bei denen hunderte von RNA-bindende Proteine (RBPs) und MicroRNA-haltigen-Gebiets-komplexe (MiRNPs) in einer Art von Zelle abh&auml;ngigen Weise ausgedr&uuml;ckt. Wir entwickelten einen zellbasierte vernetzender Ansatz um die Bindungsstellen der zellul&auml;ren RBPs und MiRNPs bei hoher Aufl&ouml;sung und Transkriptom-weite zu bestimmen. Die vernetzte Standorte sind durch Thymidin zu Cytidin &Uuml;berg&auml;nge in die cDNAs aus Immunopurified RNPs 4-Thiouridine-behandelte Zellen vorbereitet offenbart. Wir entschlossen die Bindungsstellen und regulatorische Konsequenzen f&uuml;r mehrere intensiv studierte RBPs und MiRNPs, einschlie&szlig;lich PUM2, QKI, IGF2BP1-3, her/EIF2C1-4 und TNRC6A-C. Unsere Studie ergab, dass diese Faktoren binden Tausende von Seiten mit definierten Sequenz Motive und unterschiedliche Vorlieben haben f&uuml;r exonic versus verband intronic oder Codierung gegen&uuml;ber nicht &uuml;bersetzte Abschrift Regionen. Die genaue Zuordnung der Bindung von Websites &uuml;ber das Transkriptom ist entscheidend, um die Interpretation der sich schnell verbreitende Daten auf genetische Variation zwischen Individuen und wie diese Variationen zu komplexen genetischen Erkrankungen beitragen.

Transkriptom-weite Identifikation von RNS-bindene Protein und MicroRNA Ziel-Sites von PAR-CLIP.

Trascrizioni di RNA sono soggetti a regolazione genica posttranscriptional coinvolgendo centinaia di RNA-binding proteins (RBPs) e microRNA contenenti complessi ribonucleoproteina (miRNPs) espressi in modo dipendente dal tipo di cellula. Abbiamo sviluppato un approccio basato sulle celle reticolazione per determinare a livello transcriptome e ad alta risoluzione i siti di legame di RBPs cellulare e miRNPs. I siti di reticolati sono rivelati da timidina a transizioni citidina in cDNAs preparato da immunopurified RNPs di cellule 4-thiouridine-trattati. Abbiamo determinato i siti di legame e conseguenze normative per diversi RBPs intensamente studiato e miRNPs, tra cui PUM2, QKI, IGF2BP1-3, 4-fa/EIF2C1 e TNRC6A-C. Il nostro studio &egrave; emerso che questi fattori legano migliaia di siti che contengono motivi di sequenza definita e hanno preferenze distinte per untranslated esonico versus intronic o codifica versus regioni di trascrizione. La precisa mappatura dei siti di legame attraverso il trascrittoma sar&agrave; fondamentale per l&#39;interpretazione dei dati rapidamente emergenti sulla variazione genetica tra individui e come tali variazioni contribuiscono a malattie genetiche complesse.

Transcriptome identificazione dei siti di RNA-binding protein e microRNA bersaglio da PAR-CLIP.

RNA&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x306F;&#x3001;RNA&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;RBP&#xFF09;&#x3068;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;RNA&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x5F62;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#xFF08;miRNPs&#xFF09;&#x6570;&#x767E;&#x4EBA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8EE2;&#x5199;&#x5F8C;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x3084;&#x643A;&#x5E2F;RBPs&#x3068;miRNPs&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3067;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x200B;&#x200B;&#x67B6;&#x6A4B;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x67B6;&#x6A4B;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306F;&#x3001;4  - &#x30C1;&#x30AA;&#x30A6;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x51E6;&#x7406;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;RNP&#x306F;&#x3092;&#x514D;&#x75AB;&#x7CBE;&#x88FD;&#x304B;&#x3089;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;cDNA&#x3067;&#x30B7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x9077;&#x79FB;&#x306B;&#x30C1;&#x30DF;&#x30B8;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;PUM2&#x3001;QKI&#x3001;IGF2BP1-3&#x3001;AGO/EIF2C1-4&#x3068;TNRC6A-C&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x71B1;&#x5FC3;&#x306B;&#x7814;&#x7A76;RBPs&#x3068;miRNPs&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x304C;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x914D;&#x5217;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4F55;&#x5343;&#x3082;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30F3;&#x5BFE;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x975E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x8EE2;&#x5199;&#x9818;&#x57DF;&#x5BFE;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x55DC;&#x597D;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0;&#x9593;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x500B;&#x4EBA;&#x3068;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x306F;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3078;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x65B0;&#x8208;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x89E3;&#x91C8;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

PAR-CLIP&#x306B;&#x3088;&#x308B;RNA&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;microRNA&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;

RNA &#xC0AC;&#xBCF8;&#xC744; RNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (RBPs)&#xC640; microRNA &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC218;&#xBC31; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; posttranscriptional &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC808; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; ribonucleoprotein &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C; (miRNPs) &#xC140; &#xD0C0;&#xC785; &#xC885;&#xC18D; &#xD328;&#xC158;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; RBPs &#xBC0F; Mirnps&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB192;&#xC740; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; transcriptome &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xC815; &#xAC00;&#xAD50; &#xC140; &#xAE30;&#xBC18; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;. Crosslinked &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD2F0; &#xBBF8; &#xB518; immunopurified 4 thiouridine &#xCE58;&#xB8CC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; Rnps&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC900;&#xBE44; &#xB41C; Cdnas&#xC5D0; cytidine &#xC804;&#xD658;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACF5;&#xAC1C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2EC;&#xAC01; &#xD558; &#xAC8C; &#xACF5;&#xBD80;&#xC640; miRNPs, PUM2, QKI, IGF2BP1 3, &#xC804;/EIF2C1-4&#xC640; TNRC6A C&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5EC;&#xB7EC; RBPs &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC0F; &#xADDC;&#xC81C; &#xACB0;&#xACFC; &#xACB0;&#xC815; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC1D;&#xD600; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC694;&#xC18C; &#xC21C;&#xC11C; &#xB300;&#xB85C; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xD504;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC218;&#xCC9C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0;, intronic &#xB610;&#xB294; &#xCF54;&#xB529; &#xB300; &#xB300; exonic untranslated&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xD2B9;&#xD61C;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4; &#xB300; &#xBCF8; &#xC601;&#xC5ED;. Transcriptome &#xAC78;&#xCCD0; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xB9E4;&#xD551; &#xAC1C;&#xC778;&#xACFC;&#xC774; &#xBCC0;&#xC774; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC9C8;&#xD658;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC720;&#xC804; &#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xC2E0;&#xD765; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC758; &#xD574;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Transcriptome &#xC218;&#xC900; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD30C; &#xD074;&#xB9BD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; microRNA &#xB300;&#xC0C1; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758;.

Las transcripciones de ARN est&#xE1;n sujetos a la regulaci&#xF3;n de genes postranscripcional que participaron cientos de ARN-prote&#xED;nas de uni&#xF3;n a las pr&#xE1;cticas comerciales restrictivas () y que contienen complejos de microARN-ribonucleoprote&#xED;na (miRNPs) expresados &#x200B;&#x200B;en forma de c&#xE9;lulas de tipo dependiente. Hemos desarrollado un enfoque reticulaci&#xF3;n a base de c&#xE9;lulas para determinar en alta resoluci&#xF3;n y en todo el transcriptoma de los sitios de uni&#xF3;n de las pr&#xE1;cticas comerciales restrictivas y miRNPs celulares. Los sitios reticuladas son reveladas por timidina a las transiciones de citidina en los ADNc preparadas a partir de immunopurified RNPs de 4-tiouridina c&#xE9;lulas tratadas. Se determinaron los sitios de uni&#xF3;n y las consecuencias reglamentarias para varias pr&#xE1;cticas comerciales restrictivas intensamente estudiados y miRNPs, incluyendo PUM2, QKI, IGF2BP1 3, AGO/EIF2C1-4 y TNRC6A-C. Nuestro estudio revel&#xF3; que estos factores se unen miles de sitios que contengan la secuencia de motivos definidos y tienen distintas preferencias de exonic contra intr&#xF3;nica o codificaci&#xF3;n en comparaci&#xF3;n con las regiones no traducidas de transcripci&#xF3;n. La asignaci&#xF3;n exacta de los sitios de uni&#xF3;n de todo el transcriptoma ser&#xE1; fundamental para la interpretaci&#xF3;n de los datos que emergen r&#xE1;pidamente sobre la variaci&#xF3;n gen&#xE9;tica entre los individuos y c&#xF3;mo estas variaciones contribuyen a enfermedades gen&#xE9;ticas complejas.

Transcriptoma en toda la identificaci&#xF3;n de la prote&#xED;na de uni&#xF3;n al ARN y los sitios de destino microARN por PAR-CLIP

&#x6CF0;&#x745E;&#x514B;&#x65AF;-translin heteromers&#xFF0C;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A; C3PO&#xFF0C;&#x5DF2;&#x63D0;&#x8BAE;&#x8981;&#x6FC0;&#x6D3B; RNA &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6C89;&#x9ED8;&#x590D;&#x5408;&#x4F53; (RISC) &#x901A;&#x8FC7;&#x4FC3;&#x8FDB; siRNA &#x5BA2;&#x8FD0;&#x7EDE;&#x7EBF; endonucleolytic &#x5288;&#x88C2;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x516D;&#x7531;&#x622A;&#x65AD;&#x7684; translin &#x548C; Trax&#xFF0C;&#x7EC4;&#x6210;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7535;&#x955C;&#x548C; octameric C3PO &#x5F62;&#x6210;&#x5168;&#x957F; translin &#x548C;&#x6CF0;&#x745E;&#x514B;&#x65AF;-&#x8D28;&#x8C31;&#x7814;&#x7A76;&#x679C;&#x8747; C3PO &#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x6CF0;&#x745E;&#x514B;&#x65AF;-&#x91C7;&#x7528; translin &#x6298;&#x3001; &#x62E5;&#x6709;&#x50AC;&#x5316;&#x4E2D;&#x5FC3; C3PO &#x7684; endoRNase &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x548C;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x4E0E; translin &#x5F62;&#x6210; octameric &#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x6CF0;&#x745E;&#x514B;&#x65AF;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x53E3;&#x888B;&#x4F4D;&#x4E8E; octameric &#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x5BA4;&#x5185;&#x4F1A;&#x8BAE;&#x5385;&#x5185;&#x3002;&#x622A;&#x65AD;&#x7684; C3PO&#xFF0C;&#x5168;&#x957F; C3PO&#xFF0C;&#x50CF;&#x663E;&#x793A;&#x53F6; 3&#39;-&#x7F9F;&#x57FA;-&#x5206;&#x89E3;&#x4E24;&#x7AEF;&#x7684; endoRNase &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8861;&#x91CF; C3PO &#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x663E;&#x793A;&#x5B83;&#x5728;&#x886C;&#x5E95;&#x6BCF;&#x79D2;&#x51E0;&#x4E4E;&#x8BA1;&#x91CF;&#x91D1;&#x989D;&#x3002;

Multimeric &#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x548C;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x6CF0;&#x745E;&#x514B;&#x65AF;-translin &#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x7279;&#x6027;&#x3002;

Trax-translin heteromers, also known as C3PO, have been proposed to activate the RNA-induced silencing complex (RISC) by facilitating endonucleolytic cleavage of the siRNA passenger strand. We report on the crystal structure of hexameric Drosophila C3PO formed by truncated translin and Trax, along with electron microscopic and mass spectrometric studies on octameric C3PO formed by full-length translin and Trax. Our studies establish that Trax adopts the translin fold, possesses catalytic centers essential for C3PO's endoRNase activity and interacts extensively with translin to form an octameric assembly. The catalytic pockets of Trax subunits are located within the interior chamber of the octameric scaffold. Truncated C3PO, like full-length C3PO, shows endoRNase activity that leaves 3'-hydroxyl-cleaved ends. We have measured the catalytic activity of C3PO and shown it to cleave almost stoichiometric amounts of substrate per second.

Multimeric assembly and biochemical characterization of the Trax-translin endonuclease complex.

Trax-translin h&#xE9;t&#xE9;rom&#xE8;res, &#xE9;galement connu sous le nom C3PO, ont &#xE9;t&#xE9; propos&#xE9;es pour activer le complexe ARN-induite silence (RISC) en facilitant le clivage endonucl&#xE9;olytique du brin siARN passagers. Nous rapportons la structure cristalline de la drosophile hexam&#xE9;rique C3PO form&#xE9; par tronqu&#xE9;e translin et Trax, avec en microscopie &#xE9;lectronique et de la masse des &#xE9;tudes spectrom&#xE9;triques sur octam&#xE9;rique C3PO form&#xE9;s par toute la longueur translin et Trax. Nos &#xE9;tudes &#xE9;tablissent que le pli Trax adopte translin, poss&#xE8;de centres catalytiques essentiels pour l&#x26;#39;activit&#xE9; endoRNase C3PO et interagit avec beaucoup translin pour former un ensemble octam&#xE9;rique. Les poches de sous-unit&#xE9;s catalytiques Trax sont situ&#xE9;s dans la chambre int&#xE9;rieure de l&#x26;#39;&#xE9;chafaudage octam&#xE9;rique. Tronqu&#xE9; C3PO, comme sur toute la longueur C3PO, montre une activit&#xE9; qui laisse endoRNase 3&#x26;#39;-hydroxy-cliv&#xE9;es extr&#xE9;mit&#xE9;s. Nous avons mesur&#xE9; l&#x26;#39;activit&#xE9; catalytique de C3PO et il le montre &#xE0; des quantit&#xE9;s stoechiom&#xE9;triques de cliver presque substrat par seconde.

Assembl&#xE9;e Multimeric et caract&#xE9;risation biochimique du complexe endonucl&#xE9;ase Trax-translin

Trax-Translin Heteromers, auch bekannt als C3PO, sind vorgeschlagen worden, die RNA-induced silencing Complex (RISC) aktivieren, indem die Endonucleolytic Spaltung des Teilprogramms Passagier SiRNA zu erleichtern. Wir berichten &uuml;ber die Kristallstruktur von Hexameric Taufliege C3PO bildete durch abgeschnittene Translin und Trax, zusammen mit Elektronen-mikroskopischen und massenspektrometrische Untersuchungen &uuml;ber Octameric in Translin und Trax C3PO gebildet. Unsere Studien belegen, dass Trax die Translin Klappe nimmt, katalytische Zentren f&uuml;r C3POs EndoRNase Aktivit&auml;t besitzt und ausgiebig mit Translin interagiert, eine Octameric-Assembly zu bilden. Die katalytischen Taschen Trax-Untereinheiten befinden sich in der inneren Kammer des Octameric Ger&uuml;st. Abgeschnittene C3PO, wie in C3PO, zeigt EndoRNase-Aktivit&auml;t, die 3&#39;-Hydroxyl-zerspaltet enden l&auml;sst. Wir haben die katalytische Aktivit&auml;t von C3PO gemessen und es zu Zerspalten fast st&ouml;chiometrische Mengen an Substrat pro Sekunde gezeigt.

Werden Montage- und biochemische Charakterisierung der Trax-Translin Endonuklease Komplex.

Trax-translin heteromers, noto anche come C3PO, sono state proposte per facilitare endonucleolytic clivaggio del filamento passeggero siRNA per attivare il complesso di silenziamento RNA-induced (RISC). Segnaliamo su struttura cristallina di esamerica drosofila C3PO formata da translin troncato e Trax, insieme a elettrone microscopiche e spettrometrico di massa studi su octameric C3PO formata da translin full-length e Trax. I nostri studi stabiliscono che Trax adotta la piega translin, possiede centri catalitici essenziali per l&#39;attivit&agrave; endoRNase di C3PO e ampiamente interagisce con translin per formare un&#39;Assemblea octameric. Le tasche di Trax subunit&agrave; catalitiche si trovano all&#39;interno della camera interna del patibolo octameric. C3PO troncato, come full-length C3PO, Mostra attivit&agrave; endoRNase che lascia le estremit&agrave; 3&#39;--idrossi spaccati. Abbiamo misurato l&#39;attivit&agrave; catalitica di C3PO e mostrato a fendere quasi stechiometrico quantit&agrave; di substrato al secondo.

Assemblea multimerica e caratterizzazione biochimica del complesso endonucleasi Trax-translin.

&#x307E;&#x305F;&#x3001;C3PO&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;-translin heteromers&#x306F;&#x3001;siRNA&#x306E;&#x4E57;&#x5BA2;&#x9396;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x7684;&#x5207;&#x65AD;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;RNA&#x8A98;&#x5C0E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#xFF08;RISC&#xFF09;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;translin&#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x516B;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;C3PO&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3084;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3068;&#x3068;&#x3082;&#x306B;&#x3001;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;translin&#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D8;&#x30AD;&#x30B5;&#x30DE;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;C3PO&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x5831;&#x544A;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;translin&#x500D;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;C3PO&#x306E;endoRNase&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3001;&#x516B;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;translin&#x3068;&#x5E83;&#x304F;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x516B;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D0;&#x5185;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; C3PO&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3001;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;C3PO&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;3&#x26;#39;-&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x5207;&#x65AD;&#x672B;&#x7AEF;&#x3092;&#x6B8B;&#x3057;endoRNase&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;C3PO&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x5207;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6BCE;&#x79D2;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x307B;&#x307C;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x91CF;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#xB7;translin&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x591A;&#x91CF;&#x4F53;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;

&#xD2B8;&#xB799;&#xC2A4;-translin heteromers, c3po&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; siRNA &#xC5EC;&#xAC1D; &#xBB3C;&#xAC00;&#xC758; endonucleolytic &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558; &#xC5EC; RNA &#xC720;&#xB3C4; silencing &#xBCF5;&#xC7A1; (RISC)&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; hexameric &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBC0F; C3PO &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; translin&#xC640; &#xD2B8;&#xB799;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; octameric&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xB7C9; spectrometric &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; translin&#xC640; &#xD2B8;&#xB799;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; c3po&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD2B8;&#xB799;&#xC2A4; translin &#xBC30; &#xCC44;&#xD0DD; c3po&#xC758; endoRNase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC13C;&#xD130;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC720; &#xD558; &#xACE0; &#xBC0F; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; octameric &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xB97C; translin&#xB85C; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Octameric &#xBE44; &#xACC4;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xCC54;&#xBC84; &#xB0B4; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD2B8;&#xB799;&#xC2A4; subunits &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; C3PO &#xCC98;&#xB7FC; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; C3PO 3&#39;-&#xC218; &#xC0B0; &#xAE30;-&#xD2B9;&#xD788; &#xB05D; &#xC78E; endoRNase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; c3po&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xCD08;&#xB2F9; &#xAE30;&#xD310; &#xAC70;&#xC758; stoichiometric &#xC591;&#xC758; &#xCABC;&#xAC1C; &#xB2E4; &#xADF8;&#xAC83;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC;.

Multimeric &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC640; &#xD2B8;&#xB799;&#xC2A4; translin endonuclease &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131;.

Trax-translin heter&#xF3;meros, tambi&#xE9;n conocido como C3PO, se han propuesto para activar el complejo ARN inducida por silenciar (RISC) facilitando endonucleolytic divisi&#xF3;n de la hebra de pasajeros ARNsi. Se presenta en la estructura cristalina de hexameric Drosophila C3PO formado por truncada translin y Trax, junto con la electr&#xF3;nica de estudios de espectrometr&#xED;a de masas microsc&#xF3;picas y en octam&#xE9;rico C3PO formados por cuerpo entero translin y Trax. Nuestros estudios establecen que Trax adopta el pliegue translin, posee centros catal&#xED;ticos esenciales para la actividad endoRNase C3PO e interact&#xFA;a ampliamente con translin para formar un conjunto octam&#xE9;rico. Los bolsillos catal&#xED;ticas de subunidades Trax se encuentran dentro de la c&#xE1;mara interior del andamio octam&#xE9;rico. Truncado C3PO, como de larga duraci&#xF3;n C3PO, muestra una actividad que deja endoRNase 3&#x26;#39;-hidroxilo troceados extremos. Hemos medido la actividad catal&#xED;tica de C3PO y demostrado que cantidades escindir casi estequiom&#xE9;tricas de sustrato por segundo.

Asamblea multim&#xE9;rica y caracterizaci&#xF3;n bioqu&#xED;mica del Complejo Endonucleasa Trax-translin

RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x534F;&#x8C03;&#x591A;&#x4E2A; Rna &#x7684;&#x547D;&#x8FD0;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5168;&#x7403;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x539F;&#x5219;&#x4ECD;&#x7136;&#x77E5;&#x4E4B;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x96C6;&#x6210;&#x591A;&#x79CD;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x9776;&#x5411;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x4E13;&#x95E8; PAR &#x526A;&#x8F91;&#xFF0C;RIP-&#x82AF;&#x7247;&#x4E2D;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x9610;&#x660E;&#x7684; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x73E5;&#xFF0C;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x6574;&#x4E2A;&#x8C08;&#x8BDD;&#x5185;&#x5BB9;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E00;&#x8A8A;&#x672C;&#x3001; &#x73E5;&#x5173;&#x8054;&#x5EA6;&#x548C;&#x73E5;&#x4F9D;&#x8D56; RNA &#x7A33;&#x5B9A;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x662F;&#x6210;&#x6B63;&#x6BD4;&#x3002;Pre mRNA &#x548C;&#x5305;&#x542B;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x7684;&#x6210;&#x719F; mRNA 3&#39; UTR &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x88AB;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6BD4;&#x53EA;&#x6709; 3&#39; UTR &#x6216;&#x53EA;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x6697;&#x793A;&#x73E5;&#x592B;&#x5987;&#x524D; mRNA &#x52A0;&#x5DE5;&#x4E0E;&#x6210;&#x719F;&#x7684; mRNA &#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230;&#x73E5;&#x4F9D;&#x8D56;&#x62FC;&#x63A5;&#x53D8;&#x5316;&#x548C;&#x73E5; polypyrimidine &#x5927;&#x7247;&#x5927;&#x7247;&#x7684; pre &#x5206;&#x6CCC;&#x5927;&#x91CF;&#x88C5;&#x8BA2;&#x3002;&#x73E5;&#x548C;&#x7C73;&#x5C14;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x5468;&#x56F4;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x5206;&#x5E03;&#x683C;&#x5C40;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x529F;&#x80FD;&#x4E3A;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x7684;&#x8FD1;&#x7AEF;&#x7C73;&#x5C14;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x9547;&#x538B;&#x73E5;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x62EE;&#x6297;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x73E5;&#x5750;&#x6807;&#x7684; RNA &#x52A0;&#x5DE5;&#x591A;&#x4E2A;&#x76F8;&#x4E92;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#x5728;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;

&#x7EFC;&#x5408;&#x76D1;&#x7BA1;&#x6620;&#x5C04;&#x6307;&#x793A; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x73E5;&#x592B;&#x5987;&#x524D; mRNA &#x52A0;&#x5DE5;&#x548C; mRNA &#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;

RNA-binding proteins coordinate the fates of multiple RNAs, but the principles underlying these global interactions remain poorly understood. We elucidated regulatory mechanisms of the RNA-binding protein HuR, by integrating data from diverse high-throughput targeting technologies, specifically PAR-CLIP, RIP-chip, and whole-transcript expression profiling. The number of binding sites per transcript, degree of HuR association, and degree of HuR-dependent RNA stabilization were positively correlated. Pre-mRNA and mature mRNA containing both intronic and 3' UTR binding sites were more highly stabilized than transcripts with only 3' UTR or only intronic binding sites, suggesting that HuR couples pre-mRNA processing with mature mRNA stability. We also observed HuR-dependent splicing changes and substantial binding of HuR in polypyrimidine tracts of pre-mRNAs. Comparison of the spatial patterns surrounding HuR and miRNA binding sites provided functional evidence for HuR-dependent antagonism of proximal miRNA-mediated repression. We conclude that HuR coordinates gene expression outcomes at multiple interconnected steps of RNA processing.

Integrative regulatory mapping indicates that the RNA-binding protein HuR couples pre-mRNA processing and mRNA stability.

Prot&#xE9;ines liant l&#x26;#39;ARN coordonner les destins de plusieurs ARN, mais les principes qui sous-tendent ces interactions globales demeurent mal comprises. Nous &#xE9;lucid&#xE9; les m&#xE9;canismes de r&#xE9;gulation de la prot&#xE9;ine HuR fixation &#xE0; l&#x26;#39;ARN, en int&#xE9;grant les donn&#xE9;es provenant de diverses technologies &#xE0; haut d&#xE9;bit ciblant, en particulier PAR-CLIP, RIP-puce, et toute transcription-profilage de l&#x26;#39;expression. Le nombre de sites de liaison par la transcription, le degr&#xE9; de Hur association, et le degr&#xE9; de Hur-d&#xE9;pendante de l&#x26;#39;ARN de stabilisation &#xE9;taient positivement corr&#xE9;l&#xE9;s. Pr&#xE9;-ARNm et ARNm mature contenant &#xE0; la fois intronique et 3 &#x26;#39;UTR des sites de liaison ont &#xE9;t&#xE9; plus fortement stabilis&#xE9; que les transcriptions avec seulement 3&#x26;#39; UTR ou seulement introniques sites de liaison, ce qui sugg&#xE8;re que les couples Hur pr&#xE9;-ARNm de traitement avec la stabilit&#xE9; des ARNm mature. Nous avons &#xE9;galement observ&#xE9; des changements d&#x26;#39;&#xE9;pissage HuR-d&#xE9;pendants et de liaison substantielle de Hur dans des secteurs de polypyrimidine de pr&#xE9;-ARNm. La comparaison des structures spatiales qui entourent Hur et miRNA sites de liaison ont fourni des preuves fonctionnel pour HuR-d&#xE9;pendante de l&#x26;#39;antagonisme proximale de miARN-m&#xE9;diation de la r&#xE9;pression. Nous concluons que les r&#xE9;sultats HuR coordonne l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes dans de multiples &#xE9;tapes interconnect&#xE9;s de traitement de l&#x26;#39;ARN.

Int&#xE9;grative de cartographie r&#xE9;glementaire montre que l&#x26;#39;ARN-prot&#xE9;ine de liaison HuR couple pr&#xE9;-ARNm de traitement et de la stabilit&#xE9; des ARNm

RNA-bindende Proteine koordinieren die Schicksale von mehreren RNAs, sondern die Grunds&auml;tze dieser globalen Wechselwirkungen bleiben weitgehend unverstanden. Wir aufgekl&auml;rt Regulierungsmechanismen der RNS-bindene Proteine HuR, durch die Integration von Daten aus vielf&auml;ltigen Hochdurchsatz-targeting Technologien, speziell PAR-CLIP, RIP-Chip, und ganze-Transcript Expression profiling. Die Anzahl der Bindungsstellen pro Abschrift, Grad der HuR Association und Grad der HuR-abh&auml;ngigen RNA-Stabilisierung wurden positiv korreliert. Pre-mRNA und Reife mRNA enth&auml;lt beide verband intronic und 3&#39; UTR Bindungsstellen wurden mehr hoch stabilisierte als Abschriften nur mit 3&#39; UTR oder nur verband intronic Bindungsstellen, darauf hindeutet, dass HuR Pre-mRNA-Verarbeitung mit Reife mRNA Stabilit&auml;t Paare. Wir beobachteten auch HuR Splei&szlig;en &Auml;nderungen und wesentliche Bindung des HuR in Polypyrimidine Landstriche Pre-mRNAs. Vergleich der r&auml;umlichen Muster umgebenden HuR und MiRNA-Bindungsstellen funktionalen Beweise f&uuml;r HuR-abh&auml;ngige Antagonismus der proximalen MiRNA-vermittelten Repression vorgelegt. Wir schlie&szlig;en, dass HuR Gen Ausdruck Behandlungsergebnisse bei mehreren miteinander verbundenen Schritte der RNA Verarbeitung koordiniert.

Integrative rechtlichen Zuordnung zeigt, dass das RNS-bindene Protein HuR Pre-mRNA Processing und mRNA Stabilit&auml;t Paare.

RNA-binding proteins coordinare i destini della RNAs multiple, ma i principi alla base di queste interazioni globali rimangono scarsamente comprensibili. Abbiamo chiarito meccanismi regolatori di RNA-binding protein HuR, integrando dati da diverse tecnologie targeting high-throughput, in particolare PAR-CLIP, RIP-chip e tutta la trascrizione expression profiling. Il numero di siti di legame per trascrizione, grado di associazione HuR e grado di stabilizzazione HuR-dependent RNA era correlato positivamente. Pre-mRNA e mRNA maturo che contiene sia intronic e siti di legame 3&#39; UTR erano pi&ugrave; altamente stabilizzati di trascrizioni con solo 3&#39; UTR o solo siti di legame intronic, suggerendo che HuR coppie pre-mRNA processing con stabilit&agrave; mRNA maturo. Abbiamo anche osservato cambiamenti splicing HuR-dipendenti e sostanziale associazione di HuR nei tratti polypyrimidine del pre-mRNA. Confronto dei modelli spaziali che circondano HuR e siti di legame di miRNA fornito prove funzionali per antagonismo HuR-dipendente della repressione mediata da miRNA prossimale. Concludiamo che HuR coordina risultati espressione genica a pi&ugrave; passaggi interconnessi di elaborazione di RNA.

Mappatura regolamentare integrativa indica che il RNA-binding protein HuR coppie pre-mRNA elaborazione e mRNA stabilit&agrave;.

RNA&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;RNA&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3092;&#x306A;&#x3059;&#x539F;&#x5247;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x6280;&#x8853;&#x3001;PAR-CLIP&#x3001;RIP-&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;&#x5168;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;RNA&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;HuR&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6210;&#x7E3E;&#x8A3C;&#x660E;&#x66F8;&#x3001;HuR&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x5EA6;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;HuR&#x306E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;RNA&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3054;&#x3068;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x6570;&#x306F;&#x6B63;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; pre-mRNA&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x3068;3&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x6210;&#x719F;mRNA&#x6210;&#x719F;mRNA&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;HuR&#x306E;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;pre-mRNA&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30C3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;UTR&#x306E;&#x307F;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D; &#x26;#39;UTR&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306F;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x306E;&#x307F;3&#x8EE2;&#x5199;&#x304C;&#x9AD8;&#x304B;&#x3063;&#x305F; &#x26;quot;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;HuR&#x306E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3084;&#x30D7;&#x30EC;mRNA&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30D4;&#x30EA;&#x30DF;&#x30B8;&#x30F3;&#x7BA1;&#x306E;HuR&#x306E;&#x306E;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002; HuR&#x306E;&#x3068;miRNA&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306F;&#x3001;&#x8FD1;miRNA&#x306E;&#x5A92;&#x4ECB;&#x6291;&#x5236;&#x306E;HuR&#x306E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x62EE;&#x6297;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;HuR&#x306E;&#x306F;&#x3001;RNA&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x7D71;&#x5408;&#x7684;&#x306A;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;RNA&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;HuR&#x306E;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;pre-mRNA&#x306E;&#x51E6;&#x7406;&#x3068;mRNA&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;

RNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5EC;&#xB7EC; Rnas&#xC758; &#xC6B4;&#xBA85;&#xC744; &#xC870;&#xC815; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC6D0;&#xCE59; &#xC800;&#xC870;&#xD55C; &#xC774;&#xD574; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB300;&#xC0C1; &#xAE30;&#xC220;, &#xD2B9;&#xD788; &#xD30C; &#xD074;&#xB9BD;, RIP &#xCE69;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; RNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD5C8;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xD574;&#xBA85; &#xBC0F; &#xC804;&#xCCB4; &#xB300; &#xBCF8; &#xC2DD; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1;. &#xB300; &#xBCF8;, &#xD5C8; &#xD611;&#xD68C;&#xC758; &#xC815;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xD5C8; &#xC885;&#xC18D; RNA &#xC548;&#xC815;&#xD654;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC218; &#xD588;&#xB2E4; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xAD00; &#xB41C;&#xB2E4;. Pre Mrna&#xC640; intronic &#xBAA8;&#xB450;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; mRNA 3&#39; UTR &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD5C8; &#xCEE4;&#xD50C; &#xC608;&#xC57D; mRNA &#xC131;&#xC219;&#xD55C; mRNA &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xACFC; &#xCC98;&#xB9AC; &#xC81C;&#xC548; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xC131;&#xC801; &#xC99D;&#xBA85;&#xC11C;&#xB9CC; 3&#39; UTR &#xB610;&#xB294; intronic &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB9CC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC548;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xD5C8; &#xC885;&#xC18D; &#xC811;&#xD569; &#xBCC0;&#xACBD; &#xBC0F; &#xC0AC;&#xC804; Mrnas&#xC758; polypyrimidine &#xCC45;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD5C8;&#xC758; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAD00;&#xCC30;. &#xADFC; &#xC704; &#xBBF8;&#xB974; &#xC911;&#xC7AC; &#xC5B5;&#xC555;&#xC758; &#xD5C8; &#xC885;&#xC18D; &#xC801;&#xAC1C;&#xC2EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xD5C8; &#xACE0; &#xBBF8;&#xB974; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xB458;&#xB7EC;&#xC2FC; &#xACF5;&#xAC04; &#xD328;&#xD134;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD5C8; RNA &#xCC98;&#xB9AC;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC88C;&#xD45C; &#xACB0;&#xB860;.

&#xD1B5;&#xD569; &#xADDC;&#xC81C; &#xB9E4;&#xD551; RNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD5C8; &#xCEE4;&#xD50C; &#xC608;&#xC57D; mRNA &#xCC98;&#xB9AC; &#xBC0F; mRNA &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

ARN-prote&#xED;nas de uni&#xF3;n a coordinar los destinos de los RNAs m&#xFA;ltiples, pero los principios que subyacen a estas interacciones a escala mundial siguen siendo poco conocidos. Hemos aclarado los mecanismos de regulaci&#xF3;n de la Hur prote&#xED;nas de uni&#xF3;n al ARN, mediante la integraci&#xF3;n de datos provenientes de diferentes tecnolog&#xED;as de alto rendimiento destinados, espec&#xED;ficamente CLIP PAR-, RIP-chip, y de todo el expediente acad&#xE9;mico de perfiles de expresi&#xF3;n. El n&#xFA;mero de sitios de uni&#xF3;n por la transcripci&#xF3;n, el grado de asociaci&#xF3;n de Hur, y el grado de Hur-dependiente del RNA de estabilizaci&#xF3;n se correlacionaron positivamente. Pre-ARNm y ARNm maduro que contiene tanto intr&#xF3;nica y 3 &#x26;#39;UTR sitios de uni&#xF3;n eran m&#xE1;s altamente estabilizada que las transcripciones con s&#xF3;lo 3&#x26;#39; UTR o sitios de uni&#xF3;n s&#xF3;lo intr&#xF3;nicas, lo que sugiere que las parejas Hur pre-ARNm de procesamiento con la estabilidad del mRNA maduro. Tambi&#xE9;n se observ&#xF3; Hur cambios dependientes de empalme y la uni&#xF3;n sustancial de Hur en el tracto polypyrimidine de pre-ARNm. La comparaci&#xF3;n de los patrones espaciales que rodean Hur y miARN sitios de uni&#xF3;n proporcionan evidencia funcional de Hur-dependiente antagonismo de proximal miARN mediada por la represi&#xF3;n. Llegamos a la conclusi&#xF3;n de que HuR coordina los resultados de expresi&#xF3;n g&#xE9;nica en m&#xFA;ltiples etapas interconectadas de procesamiento del ARN.

Mapeo de regulaci&#xF3;n Integrativa Indica que la uni&#xF3;n al ARN Hur familia de prote&#xED;nas pre-mRNA de procesamiento y la estabilidad del mRNA

&#x673A;&#x5236;&#x7684; microRNA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x9776;&#x9547;&#x538B;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;

New insights in the mechanism of microRNA-mediated target repression.

Nouvelles perspectives dans le m&#xE9;canisme de r&#xE9;pression cible micro-ARN m&#xE9;di&#xE9;e

Neue Einblicke in den Mechanismus der MicroRNA-vermittelte Ziel Repression.

Nuove intuizioni nel meccanismo di repressione destinazione microRNA-mediata.

microRNA&#x306E;&#x5A92;&#x4ECB;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x6291;&#x5727;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6D1E;&#x5BDF;

MicroRNA &#xC911;&#xC7AC; &#xB300;&#xC0C1; &#xC5B5;&#xC555;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;.

Nuevos conocimientos en el mecanismo de la represi&#xF3;n mediada por objetivo microARN

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Manuel Ascano

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