how-to-culture-record-stimulate-neuronal-networks-on-micro-electrode

How to Culture, Record and Stimulate Neuronal Networks on Micro-electrode Arrays (MEAs)

For the last century, many neuroscientists around the world have dedicated their lives to understanding how neuronal networks work and why they stop ...

Emory University School of Medicine

University School of Medicine

&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x56DE;&#x6536;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x6709;&#x5FC5;&#x8981;&#x7EF4;&#x6301;&#x819C;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;Vb &#x9A6C;&#x8FBE;&#x86CB;&#x767D;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8C03;&#x8282;&#x8840;&#x6D46;&#x819C;&#x56DE;&#x6536;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x4E0E; Rab11a &#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x5C3E;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE; Vb &#x6270;&#x4E71;&#x4E86;&#x8D29;&#x8FD0;&#x51FA;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x56DE;&#x6536;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C; Rab11a &#x4E24;&#x6781;&#x5316;&#x548C;&#x975E;&#x6781;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x79EF;&#x7D2F;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86; Rab11 &#x5BB6;&#x5EAD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D; 2 (Rab11-FIP2) &#x4E0E;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D; Vb Rab11a &#x4E0E;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; vb.&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; Rab11-FIP2 &#x5171;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5728;&#x6885;&#x4E01;&#x8FBE;&#x6BD4;&#x72AC;&#x80BE; (&#x80BE;) &#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;-&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; Vb &#x5C3E;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E24;&#x79CD;&#x6742;&#x4EA4;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8868;&#x660E;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178; 129 356 Rab11 FIP2 &#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; Vb &#x7684;&#x5C3E;&#x5DF4;&#x3002;&#x4F53;&#x5916;&#x534F;&#x4F1A;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x53CA;&#x80BE;&#x548C; HeLa &#x7EC6;&#x80DE;&#x8054;&#x5408;&#x8F6C;&#x67D3;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7EC6;&#x5316;&#x5230;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178; 129 290 &#x7684; Rab11 FIP2 &#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x50CF; Vb &#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; Rab11 FIP2 &#x4E5F;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x8840;&#x6D46;&#x819C;&#x56DE;&#x6536;&#x3002;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;-Rab11-FIP2 (129-512)&#xFF0C;&#x800C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5176;&#x6C28;&#x57FA;&#x7AEF; C2 &#x57DF;&#xFF0C;&#x5145;&#x5F53;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D88;&#x6781;&#x4EE3;&#x7406;&#x622A;&#x65AD;&#xFF0C;&#x9020;&#x6210;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684; Rab11a &#x548C;&#x6253;&#x4E71;&#x4E86; IgA &#x8D29;&#x5356;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D29;&#x5356;&#x7684;&#x8F6C;&#x94C1;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;Vb &#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; Rab11 FIP2 &#x4E0E; Rab11a &#x4E09;&#x5143;&#x534F;&#x4F1A;&#x5EFA;&#x8BAE; multimeric &#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x53C2;&#x4E0E;&#x56CA;&#x6CE1;&#x8D29;&#x8FD0;&#x901A;&#x8FC7;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x56DE;&#x6536;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;

Rab11 &#x5BB6;&#x5EAD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D; 2 &#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; Vb &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8C03;&#x8282;&#x8840;&#x6D46;&#x819C;&#x56DE;&#x6536;&#x3002;

Plasma membrane recycling is an important process necessary for maintaining membrane composition. The motor protein myosin Vb regulates plasma membrane recycling through its association with Rab11a. Overexpression of the tail of myosin Vb disrupts trafficking out of plasma membrane recycling systems and leads to the accumulation of Rab11a in both polarized and non-polarized cells. We have investigated the association of Rab11 family interacting protein 2 (Rab11-FIP2) with myosin Vb as an adapter protein between Rab11a and myosin Vb. Immunofluorescence studies indicated a colocalization of endogenous Rab11-FIP2 with green fluorescent protein-myosin Vb tail overexpressed in Madin-Darby canine kidney (MDCK) cells. Yeast two hybrid assays showed that amino acids 129-356 of Rab11-FIP2 were important for binding to myosin Vb tail. In vitro association assays and co-transfection experiments in both MDCK and HeLa cells confirmed this result but further refined the binding site to amino acids 129-290 of Rab11-FIP2. Like myosin Vb, functional studies indicated that Rab11-FIP2 is also important for normal plasma membrane recycling. Green fluorescent protein-Rab11-FIP2 (129-512), which lacks its amino-terminal C2 domain, functioned as a dominant negative acting truncation that caused accumulation of Rab11a and disrupted IgA trafficking in MDCK cells and transferrin trafficking in HeLa cells. The ternary association of myosin Vb and Rab11-FIP2 with Rab11a suggests that a multimeric protein complex is involved in vesicle trafficking through plasma membrane recycling systems.

Rab11 family interacting protein 2 associates with Myosin Vb and regulates plasma membrane recycling.

Recyclage de la membrane plasmique est un processus important et n&eacute;cessaire pour maintenir la composition de la membrane. La myosine de prot&eacute;ine motrice Vb r&eacute;glemente le recyclage par le biais de son association avec Rab11a de la membrane plasmique. La surexpression de la queue de la myosine Vb perturbe le trafic hors des syst&egrave;mes de recyclage de la membrane plasmique et conduit &agrave; l&#39;accumulation de Rab11a dans les cellules polaris&eacute;es et non polaris&eacute;. Nous avons &eacute;tudi&eacute; l&#39;association de Rab11 famille prot&eacute;ine d&#39;interaction 2 (Rab11-FIP2) avec la myosine Vb comme un adaptateur prot&eacute;ines entre Rab11a et la myosine Immunofluorescence VB. des &eacute;tudes ont indiqu&eacute; une co-localisation d&#39;endog&egrave;ne Rab11-FIP2 vert fluorescent prot&eacute;ine-myosine Vb queue surexprim&eacute; dans les cellules de Madin-Darby canine kidney (MDCK). Deux dosages de hybride levure montrent que les acides amin&eacute;s 129-356 de FIP2 Rab11 sont importants pour la liaison &agrave; la myosine queue Vb. Association in vitro des essais et des exp&eacute;riences de co-transfection dans les cellules MDCK et HeLa a confirm&eacute; ce r&eacute;sultat, mais mis au point le site de liaison aux acides amin&eacute;s 129-290 de FIP2 Rab11. Comme la myosine Vb, &eacute;tudes fonctionnelles ont indiqu&eacute; que FIP2 Rab11 est &eacute;galement important pour le recyclage de la membrane de plasma normale. Vert fluorescent prot&eacute;ine-Rab11-FIP2 (129-512), qui ne dispose pas de son domaine C2 amin&eacute;e, fonctionn&eacute; comme une troncation par int&eacute;rim n&eacute;gative dominante qui entra&icirc;nait l&#39;accumulation de Rab11a et perturb&eacute; les IgA traite des cellules MDCK et transferrine traite les cellules HeLa. L&#39;association ternaire de la myosine Vb et Rab11-FIP2 avec Rab11a sugg&egrave;re qu&#39;un complexe de prot&eacute;ines multim&eacute;riques est impliqu&eacute;e dans le trafic v&eacute;siculaire par le biais de syst&egrave;mes de recyclage de la membrane plasmique.

Famille Rab11 interaction prot&eacute;ine 2 s&#39;associe &agrave; la myosine Vb et r&eacute;glemente le recyclage de la membrane plasmique.

Rab11 Familie interagierende Protein 2 Mitarbeiter mit Myosin Vb und regelt Plasmamembran Recycling.

Membrana plasmatica di riciclaggio &egrave; un importante processo necessario per mantenere la composizione della membrana. La miosina proteina motore Vb regola la membrana plasmatica di riciclaggio attraverso la sua associazione con Rab11a. Sovraespressione della coda di miosina Vb sconvolge il traffico dalla membrana plasmatica sistemi di riciclaggio e conduce all&#39;accumulo di Rab11a in cellule polarizzate e non polarizzato. Abbiamo studiato l&#39;associazione di Rab11 famiglia proteina d&#39;interazione 2 (Rab11-FIP2) con miosina Vb come una proteina adattatore tra Rab11a e miosina vb. immunofluorescenza studi indicato una presenza di Rab11 endogeni-FIP2 con la proteina fluorescente verde-della miosina Vb coda overexpressed in cellule di rene canino (MDCK) Madin-Darby. Due dosaggi ibrido lievito ha dimostrato che gli amminoacidi 129-356 di Rab11-FIP2 erano importanti per l&#39;associazione a miosina tail Vb. Associazione in vitro dosaggi e gli esperimenti di co-transfection nelle cellule MDCK sia HeLa ha confermato questo risultato ma ulteriormente affinato il sito di legame per gli amminoacidi 129-290 di Rab11-FIP2. Come miosina Vb, studi funzionali indicato che Rab11-FIP2 &egrave; anche importante per il riciclaggio della membrana del plasma normale. Verde fluorescente proteina-Rab11-FIP2 (129-512), che manca il dominio C2 amminico-terminale, ha funzionato come un effetto negativo dominante di troncamento che ha causato accumulo di Rab11a e perturbato IgA traffico di cellule MDCK e Transferrina traffico di cellule HeLa. L&#39;associazione ternaria della miosina Vb e Rab11-FIP2 con Rab11a suggerisce che una proteina multimerica complessa &egrave; coinvolto nella vescicola traffico attraverso la membrana plasmatica, sistemi di riciclaggio.

Rab11 famiglia interazione proteina 2 associa miosina Vb e regola la membrana plasmatica di riciclaggio.

&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3092;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x819C;&#x7D44;&#x6210;&#x306E;&#x7DAD;&#x6301;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; Vb Rab11a &#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x819C;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x5C3E;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE; Vb &#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3092;&#x4E71;&#x3059;&#x3057;&#x3001;&#x504F;&#x5149;&#x3068;&#x975E;&#x504F;&#x5149;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Rab11a &#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306B; &#x3002;Rab11 &#x5BB6;&#x65CF;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; 2 (Rab11-FIP2) &#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; &#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066; Vb &#x3067; Rab11a &#x3068;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; vb. &#x5185;&#x56E0;&#x6027; Rab11 FIP2 &#x306E;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x30DE;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;-&#x30C0;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x72AC;&#x814E;&#x81D3; (MDCK) &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x904E;&#x5270;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; Vb &#x306E;&#x5C3E;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x86CD;&#x5149;&#x6297;&#x4F53;&#x6CD5;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD; 2 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x8A66;&#x91D1;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178; 129 356 Rab11 FIP2 &#x306E;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092; Vb &#x306E;&#x5C3E;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;In vitro &#x5354;&#x4F1A;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x304A;&#x3088;&#x3073; MDCK &#x304A;&#x3088;&#x3073; HeLa &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178; 129 290 Rab11 FIP2 &#x306E;&#x6D17;&#x7DF4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; Vb &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76; Rab11 FIP2 &#x3082;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x3092;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-Rab11 - &#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE; &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB; C2 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;FIP2 &#xFF08;129-512) Rab11a &#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3068;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7; MDCK &#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E; HeLa &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3067;&#x4F0A;&#x8CC0;&#x4E2D;&#x65AD;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x5426;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x6F14;&#x6280;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; Vb &#x3068; Rab11-FIP2 &#x3068; Rab11a &#x306E;&#x4E09;&#x5143;&#x5354;&#x4F1A;&#x307E;&#x3068;&#x307E;&#x3063;&#x305F;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x819C;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Rab11 &#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 2 &#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; Vb &#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xB9C9; &#xAD6C;&#xC131; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; myosin Vb rab11a&#xC640;&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xC870;&#xC808;. Myosin &#xAF2C;&#xB9AC;&#xC758; overexpression Vb &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xB97C; &#xBC29;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xD3B8;&#xAD11; &#xBC0F; &#xBE44; &#xD3B8;&#xAD11; &#xC140;&#xC5D0; rab11a&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; Rab11 &#xAC00;&#xC871; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 2 (Rab11-FIP2) myosin &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; Vb&#xC640; rab11a&#xACFC; myosin vb. &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xC0AC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC0DD; Rab11 FIP2 colocalization Madin-&#xB2E4; &#xBE44; &#xC1A1;&#xACF3; &#xB2C8; &#xC2E0;&#xC7A5; (MDCK) &#xC140;&#xC5D0; overexpressed &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; myosin Vb &#xAF2C;&#xB9AC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC0AC;&#xC774; &#xD611;&#xD68C;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB204; &#xB8E9; &#xB450; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; 129-356 Rab11 fip2&#xC758; myosin Vb &#xAF2C;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xCCB4; &#xC678; &#xD611;&#xD68C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBC0F; MDCK&#xC640; HeLa &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC740; co-transfection&#xC774;&#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB354; &#xC138;&#xB828; &#xB41C; Rab11 fip2&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; 129-290&#xC744; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;. Myosin Vb, &#xAC19;&#xC740; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C; Rab11-fip2&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC77C;&#xBC18; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-Rab11-FIP2 (129-512) rab11a&#xC758; &#xCD95;&#xC801; &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; IgA MDCK &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; HeLa &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; transferrin&#xC5D0; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xB97C; &#xC911;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD589;&#xB3D9; &#xC790;&#xB974;&#xAE30;&#xB85C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; C2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;. Myosin Vb &#xC0BC;&#xD56D; &#xD611;&#xD68C; Rab11-FIP2 rab11a&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; multimeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xC18C;&#xD3EC; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC00;&#xB9E4; &#xAD00;&#xC5EC;&#xAC00; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;.

Rab11 &#xAC00;&#xC871; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 2 Myosin Vb&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558; &#xACE0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xADDC;&#xC81C;.

Reciclaje de la membrana plasm&aacute;tica es un proceso importante necesario para mantener la composici&oacute;n de la membrana. La miosina de prote&iacute;na motora Vb regula el reciclaje a trav&eacute;s de su asociaci&oacute;n con Rab11a de la membrana del plasma. Sobreexpresi&oacute;n de la cola de la miosina Vb interrumpe tr&aacute;fico de sistemas de reciclaje de membrana plasm&aacute;tica y conduce a la acumulaci&oacute;n de Rab11a en c&eacute;lulas polarizadas y no polarizados. Hemos investigado la Asociaci&oacute;n de Rab11 familia interacci&oacute;n prote&iacute;na 2 (Rab11-FIP2) con la miosina Vb como una prote&iacute;na adaptador entre Rab11a y miosina VB. inmunofluorescencia estudios indicaron una colocalizaci&oacute;n de end&oacute;geno Rab11-FIP2 con cola de Vb verde fluorescente prote&iacute;na-miosina sobreexpresa en c&eacute;lulas de ri&ntilde;&oacute;n canino (MDCK) Madin-Darby. Levadura dos h&iacute;bridos an&aacute;lisis demostraron que los amino&aacute;cidos 129-356 Rab11-FIP2 fueron importantes para unirse a la miosina Vb cola. Ensayos in vitro de la asociaci&oacute;n y experimentos de co-transfection en las c&eacute;lulas MDCK tanto HeLa confirmaron este resultado pero hab&iacute;a perfeccionado el sitio de Uni&oacute;n para los amino&aacute;cidos 129-290 Rab11-FIP2. Como la miosina Vb, estudios funcionales indican que Rab11-FIP2 tambi&eacute;n es importante para el reciclaje de la membrana de plasma normal. Verde fluorescente prote&iacute;na-Rab11-FIP2 (129-512), que carece de su dominio amino-terminal de C2, funcionado como un truncamiento de efecto negativo dominante que causa acumulaci&oacute;n de Rab11a y perturbado IgA trata de c&eacute;lulas MDCK y transferrina trata de c&eacute;lulas HeLa. La Asociaci&oacute;n ternaria de miosina Vb y Rab11-FIP2 con Rab11a sugiere que una prote&iacute;na multim&eacute;rica compleja est&aacute; implicada en tr&aacute;fico de ves&iacute;cula a trav&eacute;s de la membrana de plasma, sistemas de reciclaje.

Familia Rab11 interacci&oacute;n prote&iacute;na 2 asociados con miosina Vb y regula el reciclaje de la membrana plasm&aacute;tica.

Rab11 &#x5C0F;&#x86CB;&#x767D;&#x6210;&#x5458;&#x662F;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x56CA;&#x6CE1;&#x56DE;&#x6536;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x6563;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4E86;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#x540E;&#xFF0C;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x4E2D;&#x7684;&#x56DE;&#x6536;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x547D;&#x8FD0;&#x662F;&#x8F83;&#x6666;&#x6DA9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x4E86;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547D;&#x8FD0;&#x5728;&#x5FC3;&#x5C16;&#x56DE;&#x6536;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8D27;&#x7269;&#x3001; &#x9AD8;&#x5206;&#x5B50; IgA &#x53D7;&#x4F53; (pIgAR) &#x548C;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x7684;&#x56DE;&#x6536;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3001; Rab11a &#x53CA;&#x5176;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; Vb&#x3001; Rab11 FIP1&#x3001; Rab11 FIP2 &#x548C; pp75/Rip11 &#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;Rab11a&#x3001; pIgAR &#x53CA;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; Vb &#x542B;&#x56CA;&#x6CE1;&#x524D;&#x671F;&#x5206;&#x6563;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6EB6;&#x8D28;&#x4E2D;&#x6F2B; puncta&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x6210;&#x4E3A;&#x805A;&#x96C6;&#x5728;&#x4E3B;&#x8F74;&#x4E24;&#x6781;&#x9644;&#x8FD1;&#x540E;&#x4E2D;&#x665A;&#x671F;&#xFF0C;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x7EC8;&#x672B;&#x671F;&#x7684;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;Rab11-FIP1 &#x548C; Rab11 FIP2 &#x6307;&#x51FA;&#x4E86;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;Rab11-FIP1 &#x5171;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x56DE;&#x6536;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6807;&#x8BB0;&#x671F;&#x95F4;&#x4E22;&#x5931;&#x665A;&#x524D;&#x671F;&#xFF0C;&#x8FC1;&#x5F80; pericentriolar &#x7684;&#x6750;&#x6599;&#x3002;&#x5728;&#x7EC8;&#x672B;&#x671F;&#xFF0C;&#x671F;&#x95F4; Rab11 FIP1 &#x8FD4;&#x56DE;&#x5230;&#x56DE;&#x6536;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6C34;&#x6CE1;&#x3002;&#x5370;&#x8FF9;&#x5206;&#x6790;&#x6307;&#x51FA; Rab11a &#x548C; pIgAR &#x4ECD;&#x7136;&#x4E0E;&#x819C;&#x6CE1;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6B64;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x542B;&#x6709; Rab11a &#x7684;&#x5FC3;&#x5C16;&#x56DE;&#x6536; endosome &#x671F;&#x95F4;&#x53F8;&#x662F;&#x6709;&#x522B;&#x4E8E;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5FC3;&#x5C16;&#x56DE;&#x6536;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x4ECD;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x5173;&#x8054;&#x4E0A;&#x6C34;&#x6CE1;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E3A;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x540E;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x6062;&#x590D;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x79CD;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;

&#x6839;&#x5C16;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x56DE;&#x6536;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;

The members of the family of Rab11 small GTPases are critical regulators of the plasma membrane vesicle recycling system. While previous studies have determined that the Golgi apparatus disperses during mitosis and reorganizes after cytokinesis, the fate of the recycling system during the cell cycle is more obscure. We have now studied in MDCK cells the fate during mitosis of an apical recycling system cargo, the polymeric IgA receptor (pIgAR), and regulators of the recycling system, Rab11a and its interacting proteins myosin Vb, Rab11-FIP1, Rab11-FIP2 and pp75/Rip11. Rab11a, pIgAR and myosin Vb containing vesicles dispersed into diffuse puncta in the cytosol during prophase and then became clustered near the spindle poles after metaphase, increasing in intensity throughout telophase. A similar pattern was observed for Rab11-FIP1 and Rab11-FIP2. However, Rab11-FIP1 lost colocalization with other recycling system markers during late prophase, relocating to the pericentriolar material. During telophase, Rab11-FIP1 returned to recycling system vesicles. Western blot analysis indicated that both Rab11a and pIgAR remained associated with membrane vesicles throughout the cell cycle. This behavior of the Rab11a-containing apical recycling endosome system during division was distinct from that of the Golgi apparatus. These results indicate that critical components of the apical recycling system remain associated on vesicles throughout the cell cycle and may provide a means for rapid re-establishment of plasma membrane components after mitosis.

Dynamics of the apical plasma membrane recycling system during cell division.

Les membres de la famille des petites GTPases Rab11 sont des r&eacute;gulateurs critiques du syst&egrave;me recyclage v&eacute;sicules de membrane plasmique. Alors que des &eacute;tudes ant&eacute;rieures ont d&eacute;termin&eacute; que l&#39;appareil de Golgi se disperse au cours de la mitose et se r&eacute;organise apr&egrave;s la cytokin&egrave;se, le sort de la recirculation durant le cycle cellulaire est plus obscur. Nous avons maintenant &eacute;tudi&eacute; dans les cellules MDCK le sort durant la mitose d&#39;une cargaison de syst&egrave;me recyclage apical, les polym&egrave;re r&eacute;cepteur du IgA (pIgAR) et r&eacute;gulateurs du syst&egrave;me de recyclage, de Rab11a et de son interaction myosine prot&eacute;ines Vb, Rab11-FIP1, Rab11-FIP2 et pp75/Rip11. Rab11a, pIgAR et la myosine Vb v&eacute;sicules contenant dispersent dans punctums diffus dans le cytosol pendant la prophase et devint ensuite group&eacute;es pr&egrave;s des p&ocirc;les du fuseau apr&egrave;s la m&eacute;taphase, augmentant en intensit&eacute; tout au long de la t&eacute;lophase. Une tendance similaire a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e pour Rab11-FIP1 et Rab11-FIP2. Cependant, Rab11-FIP1 perdu co-localisation avec d&#39;autres marqueurs de syst&egrave;me recyclage au cours de la prophase tardive, d&eacute;pla&ccedil;ant le mat&eacute;riel p&eacute;ricentriolaire. Pendant la t&eacute;lophase, Rab11-FIP1 retourn&eacute; au recyclage des v&eacute;sicules de syst&egrave;me. Analyse par Western blot a indiqu&eacute; que les Rab11a et les pIgAR est rest&eacute; associ&eacute;s &agrave; des v&eacute;sicules membranaires tout au long du cycle cellulaire. Ce comportement du contenant Rab11a apical recyclage endosome syst&egrave;me lors de la division &eacute;tait distinct de celle de l&#39;appareil de Golgi. Ces r&eacute;sultats indiquent que les composants critiques du syst&egrave;me de recyclage apical restent des v&eacute;sicules associ&eacute;es sur tout au long du cycle cellulaire et peuvent fournir un moyen pour le r&eacute;tablissement rapide des composants de la membrane plasmique apr&egrave;s la mitose.

Dynamique de la membrane plasmique apicale, syst&egrave;me de recyclage pendant la division cellulaire.

Dynamik der apikalen Plasmamembran Recycling-System w&#xE4;hrend der Zellteilung.

I membri della famiglia di Rab11 piccolo GTPases sono regolatori critici del sistema di riciclaggio della vescicola membrana plasmatica. Mentre gli studi precedenti hanno determinato che l&#39;apparato di Golgi si disperde durante la mitosi e riorganizza dopo Citocinesi in, il destino del sistema di riciclaggio durante il ciclo cellulare &egrave; pi&ugrave; oscuro. Abbiamo ora studiato in cellule MDCK la sorte durante la mitosi di un carico di sistema riciclaggio apicale, il recettore IgA polimerico (pIgAR) e regolatori del sistema riciclaggio, Rab11a e la miosina le proteine interagenti Vb, Rab11-FIP1, Rab11-FIP2 e pp75/Rip11. Rab11a, pIgAR e miosina Vb contenenti vescicole dispersero nella puncta diffusa nel citosol durante la profase e divennero poi raggruppate vicino ai poli mandrino dopo metafase, in aumento in intensit&agrave; durante la telofase. Un modello simile &egrave; stato osservato per Rab11-FIP1 e Rab11-FIP2. Tuttavia, Rab11-FIP1 perso presenza con altri marcatori sistema riciclaggio durante la profase tardiva, ricollocando il materiale pericentriolar. Durante la telofase, Rab11-FIP1 restituito al riciclaggio vescicole di sistema. Analisi Western blot ha indicato che sia Rab11a e pIgAR &egrave; rimasto associati a vescicole di membrana per tutto il ciclo cellulare. Questo comportamento del Rab11a contenenti apicale riciclaggio endosoma sistema durante la divisione era distinto da quello dell&#39;apparato di Golgi. Questi risultati indicano che componenti critici del sistema di riciclaggio apicale rimangano associate a vescicole lungo tutto il ciclo delle cellule e possono fornire un mezzo per ristabilimento rapido dei componenti della membrana del plasma dopo la mitosi.

Dinamica della membrana plasmatica apicale sistema di riciclaggio durante la divisione cellulare.

Rab11 Gtpase &#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x4E2D;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x306F;&#x3001;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x88C5;&#x7F6E;&#x304C;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5206;&#x6563;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x5F8C;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x3068;&#x5224;&#x65AD;&#x3057;&#x305F;&#x3088;&#x308A;&#x3042;&#x3044;&#x307E;&#x3044;&#x306A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x4ECA; MDCK &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x3092;&#x9802;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x8CA8;&#x7269;&#x3001;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x4F0A;&#x8CC0;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (pIgAR)&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF; &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; &#x30FB; &#x30FB; Rab11a &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; Vb&#x3001;Rab11 FIP1&#x3001;Rab11 FIP2 pp75/Rip11 &#x306E;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x7814;&#x7A76;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Rab11a&#x3001;pIgAR &#x3068;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5C0F;&#x80DE;&#x524D;&#x671F;&#x4E2D;&#x306B;&#x30C7;&#x30A3;&#x30D5;&#x30E5;&#x30FC;&#x30BA;&#x6D99;&#x70B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x4E2D;&#x306B;&#x5206;&#x6563;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3001;[&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x6975;&#x8FD1;&#x304F;&#x4E2D;&#x671F;&#x5F8C;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x305F; Vb &#x7D42;&#x671F;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x5F37;&#x5EA6;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F; Rab11 FIP1 &#x3068; Rab11 FIP2 &#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;Rab11 FIP1 &#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x4ED6;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; &#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x5F8C;&#x534A;&#x306E;&#x524D;&#x671F;&#x4E2D;&#x306B;&#x4E00;&#x5206;&#x30DE;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x3092;&#x518D;&#x914D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x5931;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7D42;&#x671F;&#x4E2D; Rab11 FIP1 &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; &#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306B;&#x8FD4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x897F;&#x90E8;&#x306E;&#x3057;&#x307F;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;Rab11a &#x3068; pIgAR &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x819C;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x5168;&#x4F53;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x6B8B;&#x3063;&#x305F;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x73FE;&#x8C61;&#x306F; Rab11a &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x6839;&#x5C16;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x5206;&#x88C2;&#x4E2D;&#x306E;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x88C5;&#x7F6E;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304B;&#x3089;&#x9802;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3057;&#x3001;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x5F8C;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x518D;&#x5EFA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x6BB5;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x6642;&#x306B;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; &#x30A2;&#x30D4;&#x30AB;&#x30EB;&#x819C;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3002;

Rab11 &#xC791;&#xC740; Gtpases&#xC758; &#xAC00;&#xC871; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC740; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xAE30; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;. Golgi &#xAE30;&#xAD6C; &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC911; &#xBD84; &#xAD11; &#xACE0; cytokinesis &#xD6C4; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xC804;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xC815;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xB3D9;&#xC548; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC6B4;&#xBA85;&#xC744; &#xB354; &#xC560;&#xB9E4; &#xD55C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC9C0;&#xAE08; &#xACF5;&#xBD80;&#xAC00; MDCK &#xC140;&#xC5D0; &#xC6B4;&#xBA85;&#xC744; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xD654;&#xBB3C;, &#xACE0;&#xBD84;&#xC790;&#xAC00; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (pIgAR), &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;, Rab11a &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; myosin Vb, Rab11 FIP1, Rab11 fip2&#xC640; pp75/Rip11 &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xC758; &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;. Rab11a, pIgAR &#xBC0F; myosin Vb &#xD3EC;&#xD568; vesicles &#xC758;&#xD5A5; &#xC911; &#xC5EC; cytosol &#xD655;&#xC0B0; puncta&#xB85C; &#xBD84;&#xC0B0; &#xD558; &#xACE0; &#xBD84;&#xC5F4;, &#xD6C4; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xAE30;&#xB465; &#xADFC;&#xCC98; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xB41C; telophase&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xAC15;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00;. Rab11-FIP1 Rab11-fip2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, Rab11-FIP1 colocalization &#xB2E4;&#xB978; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xD45C;&#xC2DD;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC190;&#xC2E4; &#xB2A6;&#xC740; &#xC758;&#xD5A5;, pericentriolar &#xC790;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC7AC;&#xBC30;&#xCE58;. &#xC911; telophase, Rab11 FIP1 &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; vesicles &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xB3CC;&#xC544;&#xAC11;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC11C;&#xCABD; &#xC624; &#xC810; &#xBD84;&#xC11D; &#xD45C;&#xC2DC; Rab11a &#xBC0F; pIgAR &#xC140; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC804;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xB9C9; &#xC18C;&#xD3EC;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC9C0;. &#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758;&#xC774; &#xB3D9;&#xC791; Rab11a &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; endosome &#xBD80;&#xBB38; &#xC911; Golgi &#xAE30;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC4;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD600;&#xB05D; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC18C;&#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xD6C4; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBD80;&#xD488;&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xC7AC;&#xAC74;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC218;&#xB2E8;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xB3D9;&#xC548; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559;.

Los miembros de la familia de GTPasas peque&ntilde;as Rab11 son importantes reguladores del sistema de reciclaje de ves&iacute;culas de membrana plasm&aacute;tica. Mientras que estudios previos han determinado que el aparato de Golgi se dispersa durante la mitosis y reorganiza despu&eacute;s citocinesis, el destino del sistema de reciclaje durante el ciclo celular es m&aacute;s oscuro. Ahora estudiamos en las c&eacute;lulas MDCK el destino durante la mitosis de una carga de sistema reciclaje apical, polim&eacute;rico IgA receptor (pIgAR) y reguladores del sistema de reciclaje, Rab11a y su interacci&oacute;n miosina de prote&iacute;nas Vb, Rab11-FIP1, Rab11-FIP2 y pp75/Rip11. Rab11a, pIgAR y miosina Vb contiene ves&iacute;culas dispersaron en puncta difusa en el citosol durante la profase y luego se convirti&oacute; en agrupados cerca de los polos del huso despu&eacute;s de metafase, aumentando en intensidad a lo largo de la telofase. Un patr&oacute;n similar se observ&oacute; para Rab11-FIP1 y Rab11-FIP2. Sin embargo, Rab11-FIP1 hab&iacute;a perdido colocalizaci&oacute;n con otros marcadores de sistema de reciclaje durante la profase tard&iacute;a, reubicar el material pericentriolar. Durante la telofase, Rab11-FIP1 volvi&oacute; a ves&iacute;culas del sistema de reciclaje. An&aacute;lisis de Western blot indic&oacute; que tanto Rab11a como pIgAR segu&iacute;a siendo asociados con ves&iacute;culas de membrana a lo largo del ciclo celular. Este comportamiento de los que contienen Rab11a apical endosome sistema de reciclaje durante la divisi&oacute;n era distinta de la del aparato de Golgi. Estos resultados indican que componentes cr&iacute;ticos del sistema reciclaje apical permanecen asociadas en ves&iacute;culas a lo largo del ciclo celular y pueden proporcionar un medio para el r&aacute;pido reestablecimiento de componentes de la membrana plasm&aacute;tica despu&eacute;s de la mitosis.

Din&aacute;mica de la membrana de plasma apical, sistema de reciclaje durante la divisi&oacute;n celular.

Rab11a&#x3001; Vb&#xFF0C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; Rab11 &#x5BB6;&#x5EAD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D; 2 (FIP2) &#x89C4;&#x7BA1;&#x56DE;&#x6536;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8BD5;&#x56FE;&#x901A;&#x8FC7;&#x786E;&#x5B9A;&#x4FEE;&#x6539; Rab11 FIP2 &#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x66F4;&#x5145;&#x5206;&#x7684; Rab11 FIP2 &#x51FD;&#x6570;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x80C3;&#x836F;&#x819C;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x5BF9;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 227 phosphorylate Rab11-FIP2&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4F5C;&#x4E3A; MARK2/EMK1/Par-1Balpha (MARK2) &#x78F7;&#x9178; Rab11 FIP2 &#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x548C;&#x91CD;&#x7EC4; MARK2 &#x4EC5;&#x5BF9; 227 &#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; Rab11 FIP2&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x521B;&#x5EFA;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6885;&#x4E01;&#x8FBE;&#x6BD4;&#x72AC;&#x80BE; (&#x80BE;) &#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x8868;&#x8FBE;&#x589E;&#x5F3A;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;-Rab11-FIP2 &#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6216; nonphosphorylatable &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; [Rab11-FIP2(S227A)]&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x6F14;&#x793A;&#x65B0;&#x89D2;&#x8272; Rab11 FIP2 &#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x56DE;&#x6536;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x9499;&#x5728;&#x5207;&#x6362;&#x68C0;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE; Rab11-FIP2(S227A) p120 &#x542B;&#x95F4;&#x9699;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x53CA;&#x65F6;&#x91CD;&#x5EFA;&#x4E2D;&#x8868;&#x660E;&#x4E00;&#x79CD;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;Rab11-FIP2(S227A) &#x5E76;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E0E;&#x56DE;&#x6536;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x6216;&#x6839;&#x5C16;&#x56DE;&#x6536;&#x548C;&#x80DE;&#x541E;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x4E0A;&#x7684; Rab11 FIP2 &#x7684;&#x7531; MARK2 227 &#x8C03;&#x8282;&#x8C03;&#x8282;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6781;&#x6027;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x66FF;&#x4EE3;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;

MARK2/EMK1/Par-1Balpha &#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; Rab11 &#x5BB6;&#x5EAD;&#x4E92;&#x52A8; 2 &#x662F;&#x6885;&#x4E01;&#x8FBE;&#x6BD4;&#x72AC;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6781;&#x6027;&#x7684;&#x53CA;&#x65F6;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;

Rab11a, myosin Vb, and the Rab11-family interacting protein 2 (FIP2) regulate plasma membrane recycling in epithelial cells. This study sought to characterize more fully Rab11-FIP2 function by identifying kinase activities modifying Rab11-FIP2. We have found that gastric microsomal membrane extracts phosphorylate Rab11-FIP2 on serine 227. We identified the kinase that phosphorylated Rab11-FIP2 as MARK2/EMK1/Par-1Balpha (MARK2), and recombinant MARK2 phosphorylated Rab11-FIP2 only on serine 227. We created stable Madin-Darby canine kidney (MDCK) cell lines expressing enhanced green fluorescent protein-Rab11-FIP2 wild type or a nonphosphorylatable mutant [Rab11-FIP2(S227A)]. Analysis of these cell lines demonstrates a new role for Rab11-FIP2 in addition to that in the plasma membrane recycling system. In calcium switch assays, cells expressing Rab11-FIP2(S227A) showed a defect in the timely reestablishment of p120-containing junctional complexes. However, Rab11-FIP2(S227A) did not affect localization with recycling system components or the normal function of apical recycling and transcytosis pathways. These results indicate that phosphorylation of Rab11-FIP2 on serine 227 by MARK2 regulates an alternative pathway modulating the establishment of epithelial polarity.

MARK2/EMK1/Par-1Balpha phosphorylation of Rab11-family interacting protein 2 is necessary for the timely establishment of polarity in Madin-Darby canine kidney cells.

Rab11a, Vb de la myosine et la prot&eacute;ine d&#39;interaction Rab11-famille 2 (FIP2) r&eacute;glementent le recyclage dans les cellules &eacute;pith&eacute;liales de la membrane plasmique. Cette &eacute;tude visait &agrave; caract&eacute;riser plus compl&egrave;tement Rab11-FIP2 fonction en identifiant les activit&eacute;s de kinase modifiant Rab11-FIP2. Nous avons trouv&eacute; que membrane microsomique gastrique extraits phosphorylent Rab11-FIP2 sur serine 227. Nous avons identifi&eacute; la kinase qui phosphoryl&eacute; Rab11-FIP2 comme MARK2/EMK1/Par-1Balpha (MARK2) et recombinaison MARK2 phosphoryl&eacute;e Rab11-FIP2 seulement sur la s&eacute;rine 227. Nous avons cr&eacute;&eacute; stable rein de chien Madin-Darby de lign&eacute;es de cellules (MDCK Madin) exprimant le type sauvage am&eacute;lior&eacute; vert fluorescent prot&eacute;ine-Rab11-FIP2 ou un mutant nonphosphorylatable [Rab11-FIP2(S227A)]. L&#39;analyse de ces lign&eacute;es cellulaires montre un nouveau r&ocirc;le pour Rab11-FIP2 en plus de cela dans la syst&egrave;me de recyclage de la membrane plasmique. Dans les essais de commutateur de calcium, cellules exprimant Rab11-FIP2(S227A) a montr&eacute; un d&eacute;faut dans le r&eacute;tablissement rapide des complexes de jonction p120-contenant. Toutefois, Rab11-FIP2(S227A) n&#39;affecte pas la localisation avec recyclage des composants de syst&egrave;me ou de la fonction normale de recyclage apical et voies transcytose. Ces r&eacute;sultats indiquent que la phosphorylation de Rab11-FIP2 sur serine 227 par MARK2 r&eacute;glemente une voie alternative en modulant la mise en place de la polarit&eacute; &eacute;pith&eacute;liale.

Mark2/EMK1/Par-1Balpha la phosphorylation de la prot&eacute;ine d&#39;interaction Rab11-famille 2 est n&eacute;cessaire pour la mise en place en temps opportun de polarit&eacute; dans les cellules Madin-Darby canine kidney.

Rab11a, Myosin Vb und der Rab11-Familie zusammenwirkendes Protein 2 (FIP2) Regeln die Plasmamembran recycling in der Epithelzellen. Diese Studie versucht, mehr voll-Rab11-FIP2-Funktion zu charakterisieren, durch die Ermittlung der Kinase-Aktivit&auml;ten &auml;ndern Rab11-FIP2. Wir haben festgestellt, dass Magen mikrosomale Membran Ausz&uuml;ge Rab11-FIP2 auf 227 Serin phosphoryliert. Wir identifizieren das Kinase, das Rab11-FIP2 als MARK2/EMK1/Par-1Balpha (MARK2) phosphoryliert und rekombinante MARK2 phosphoryliert Rab11-FIP2 nur auf Serin 227. Wir haben stabile Madin Darby canine Kidney (MDCK)-Zelllinien, die verbesserte gr&uuml;n fluoreszierendes Protein-Rab11-FIP2-Wildtyp oder eine Nonphosphorylatable Mutante [Rab11-FIP2(S227A)]. Diese Zelllinien die Analyse zeigt eine neue Rolle f&uuml;r Rab11-FIP2 dar&uuml;ber hinaus in der Plasmamembran Recyclingsystem. Wechseln Sie im Kalzium Proben, Zellen Rab11-FIP2(S227A) zeigte einen Defekt in der rechtzeitigen Wiedererrichtung der p120-haltigen junktionale komplexe zum Ausdruck zu bringen. Jedoch hatte Rab11-FIP2(S227A) keine Auswirkungen auf die Lokalisierung mit recycling Systemkomponenten oder die normale Funktion des apikalen recycling und Transcytosis Wege. Diese Ergebnisse zeigen, dass die Phosphorylierung des Rab11-FIP2 auf Serin 227 von MARK2 regelt ein alternativer Weg modulieren die Einrichtung der epithelialen Polarit&auml;t.

MARK2/EMK1/Par-1Balpha Phosphorylierung von Rab11-Familie zusammenwirkendes Protein 2 ist f&uuml;r die rechtzeitige Errichtung der Polarit&auml;t in Madin Darby canine Kidney Zellen notwendig.

Rab11a, miosina Vb e la proteina d&#39;interazione Rab11-famiglia 2 (FIP2) regolare la membrana plasmatica delle cellule epiteliali di riciclaggio. Questo studio ha cercato di caratterizzare pi&ugrave; pienamente Rab11-FIP2 funzione individuando le attivit&agrave; della chinasi modifica di Rab11-FIP2. Abbiamo trovato che gastrico membrana microsomiale estratti fosforila Rab11-FIP2 su serina 227. Abbiamo individuato la chinasi che fosforilato Rab11-FIP2 come MARK2/EMK1/Par-1Balpha (MARK2) e ricombinante MARK2 fosforilato Rab11-FIP2 solo su serina 227. Abbiamo creato stabile rene canino Madin-Darby (MDCK) cell lines esprimendo avanzata verde fluorescente proteina-Rab11-FIP2 wild type o un mutante nonphosphorylatable [Rab11-FIP2(S227A)]. Analisi di queste linee cellulari dimostra un nuovo ruolo per Rab11-FIP2 in aggiunta a ci&ograve; nella membrana del plasma, sistema di riciclaggio. Dosaggi di interruttore del calcio, le cellule che esprimono Rab11-FIP2(S227A) ha mostrato un difetto nel ristabilimento tempestivo dei complessi giunzionali p120-contenenti. Tuttavia, Rab11-FIP2(S227A) non ha influito la localizzazione con riciclaggio componenti del sistema o la normale funzione di riciclo apicale e transcytosis vie. Questi risultati indicano che la fosforilazione della Rab11-FIP2 su serina 227 da MARK2 regola una via alternativa modulando l&#39;istituzione di polarit&agrave; epiteliale.

MARK2/EMK1/Par-1Balpha la fosforilazione della proteina d&#39;interazione 2 Rab11-famiglia &egrave; necessaria per la costituzione tempestiva di polarit&agrave; in cellule di rene canino Madin-Darby.

Rab11a&#x3001;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; Vb&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Rab11 &#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 2 (FIP2) &#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F; Rab11 FIP2 &#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B; Rab11 FIP2 &#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x307E;&#x3057;&#x3087;&#x3046;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x80C3;&#x306E;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x819C;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x304C;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3; 227 Rab11 FIP2 &#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; Rab11 FIP2 MARK2/EMK1/&#x30D1;&#x30FC;-1Balpha &#x3068;&#x3057;&#x3066; (MARK2) &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x8B58;&#x5225;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; MARK2 Rab11 FIP2 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3; 227 &#x4E0A;&#x306E;&#x307F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x5B89;&#x5B9A;&#x30DE;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;-&#x30C0;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x72AC;&#x814E;&#x81D3; (MDCK) &#x30BB;&#x30EB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x5F37;&#x5316;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; Rab11 FIP2 &#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F; [Rab11-FIP2(S227A)] nonphosphorylatable &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066; Rab11-FIP2 &#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067; Rab11-FIP2(S227A) &#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F; p120 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8907;&#x5408;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30EA;&#x30FC;&#x306A;&#x518D;&#x5EFA;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;Rab11-FIP2(S227A) &#x3067;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5C16;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;.&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304B;&#x3089;&#x305D;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3059; Rab11-FIP2 &#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x4E0A;&#x306E; 227 MARK2 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x6975;&#x6027;&#x306E;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3092;&#x5909;&#x8ABF;&#x4EE3;&#x66FF;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Rab11 &#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 2 &#x306E; MARK2/EMK1/&#x30D1;&#x30FC;-1Balpha &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30DE;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;-&#x30C0;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x72AC;&#x814E;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x6975;&#x6027;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30EA;&#x30FC;&#x306A;&#x78BA;&#x7ACB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Rab11a, Vb, myosin &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; Rab11 &#xAC00;&#xC871; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 2 (FIP2) &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xADDC;&#xC81C;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; Rab11 fip2&#xB97C; &#xC218;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xC5EC; &#xB354; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; Rab11 FIP2 &#xAE30;&#xB2A5; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xACE0;&#xC790; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC704; microsomal &#xB9C9; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 227&#xC5D0; Rab11 fip2&#xC744; phosphorylate&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Rab11 FIP2 MARK2/EMK1/&#xD30C;-1Balpha (MARK2)&#xB85C; phosphorylated &#xB2C8; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; MARK2 phosphorylated Rab11 FIP2 &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 227&#xC5D0;&#xB9CC;. &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-Rab11-FIP2 &#xC640;&#xC77C;&#xB4DC; &#xD615;&#xC2DD; &#xB610;&#xB294; nonphosphorylatable &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; [Rab11-FIP2(S227A)] (MDCK) &#xC140; &#xB77C;&#xC778; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; Madin Darby &#xC1A1;&#xACF3; &#xB2C8; &#xC2E0;&#xC7A5;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC5ED;&#xD560; Rab11 FIP2 &#xADF8; &#xC774;&#xC678;&#xC5D0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;. &#xCE7C;&#xC298; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; rab11-fip2(s227a)&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC140; p120 &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC811;&#xD569; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xC801;&#xC2DC; &#xC790;&#xBBFC;&#xB828;&#xACFC;&#xC758; &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, Rab11-FIP2(S227A) &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xB610;&#xB294; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBC0F; transcytosis &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;&#xC5D0; Rab11-fip2&#xC758; 227 MARK2 &#xC5EC; &#xC0C1;&#xD53C; &#xADF9;&#xC131; &#xC124;&#xB9BD; &#xBCC0;&#xC870; &#xB300;&#xCCB4; &#xD1B5;&#xB85C; &#xADDC;&#xC81C;.

Rab11 &#xAC00;&#xC871; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 2&#xC758; MARK2/EMK1/&#xD30C;-1Balpha &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; Madin-&#xB2E4; &#xBE44; &#xAC1C; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xADF9;&#xC131;&#xC758; &#xC801;&#xC2DC; &#xC124;&#xB9BD; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La prote&iacute;na de interacci&oacute;n Rab11-familia 2 (FIP2), Rab11a y miosina Vb regulan reciclaje en las c&eacute;lulas epiteliales de la membrana del plasma. Este estudio busc&oacute; caracterizar m&aacute;s completamente Rab11-FIP2 funci&oacute;n mediante la identificaci&oacute;n de las actividades de la cinasa de la modificaci&oacute;n de Rab11-FIP2. Hemos encontrado que los extractos de la membrana microsomal g&aacute;strico fosforilan Rab11-FIP2 en serina 227. Identificamos la quinasa que fosforila Rab11-FIP2 como MARK2/EMK1/Par-1Balpha (MARK2) y MARK2 recombinante hab&iacute;a fosforilado Rab11-FIP2 s&oacute;lo en serina 227. Creamos estable del ri&ntilde;&oacute;n canino Madin-Darby l&iacute;neas de celulares (MDCK) que expresan mayor prote&iacute;na-Rab11-FIP2 wild tipo fluorescente verde o un mutante de nonphosphorylatable [Rab11-FIP2(S227A)]. An&aacute;lisis de estas l&iacute;neas celulares demuestra un nuevo papel para Rab11-FIP2, adem&aacute;s de que en la membrana de plasma, sistema de reciclaje. En ensayos de interruptor de calcio, las c&eacute;lulas que expresan Rab11-FIP2(S227A) demostraron un defecto en el reestablecimiento oportuno de complejos junctional p120-que contiene. Sin embargo, Rab11-FIP2(S227A) no afect&oacute; la localizaci&oacute;n con componentes del sistema de reciclaje o la funci&oacute;n normal del reciclaje apical y v&iacute;as de transcitosis. Estos resultados indican que la fosforilaci&oacute;n de Rab11-FIP2 en serina 227 por MARK2 regula un camino alternativo, modulando el establecimiento de la polaridad epitelial.

La fosforilaci&oacute;n de la prote&iacute;na 2 de la interacci&oacute;n Rab11-familia Mark2/EMK1/Par-1Balpha es necesaria para el establecimiento oportuno de polaridad en c&eacute;lulas de ri&ntilde;&oacute;n canino Madin-Darby.

Article	Year
Rab11 family interacting protein 2 associates with Myosin Vb and regulates plasma membrane recycling. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 12393859	2002
Dynamics of the apical plasma membrane recycling system during cell division. Traffic (Copenhagen, Denmark)\| PubMed ID: 12956871	2003
MARK2/EMK1/Par-1Balpha phosphorylation of Rab11-family interacting protein 2 is necessary for the timely establishment of polarity in Madin-Darby canine kidney cells. Molecular biology of the cell\| PubMed ID: 16775013	2006

Chadwick M. Hales

Biography

JoVE Journal Publications

Other Publications