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Generation of RNA/DNA Hybrids in Genomic DNA by Transformation using RNA-containing Oligonucleotides

Synthetic short nucleic acid polymers, oligonucleotides (oligos), are the most functional and widespread tools of molecular biology. Oligos can be ...

Georgia Institute of Technology

&#x5B88;&#x6052;&#x3001; &#x7279;&#x5B9A;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x76AE;&#x74E3;&#x5207; FEN1 &#x88C2;&#x590D;&#x5236;&#x6216;&#x4FEE;&#x590D;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x51FA;&#x73B0;&#x7684; 5&#39; DNA &#x76AE;&#x74E3;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x89E3;&#x51B3;&#x4F53;&#x5185;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x76AE;&#x74E3;&#x5288;&#x88C2;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x90FD;&#x662F;&#x6709;&#x6BD2;&#x7684;&#x5F53;&#x9175;&#x6BCD;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; FEN1 &#x7A81;&#x53D8;&#x4E3A;&#x5F00;&#x53D1;&#x5C4F;&#x5E55;&#x3002;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E24;&#x4E2A;&#x76EE;&#x6807;&#xFF1A; &#x7075;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x57DF;&#x548C;&#x50AC;&#x5316;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x6709;&#x6BD2;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x9020;&#x6210; G(2) &#x902E;&#x6355;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#xFF0C;&#x65E0;&#x6CD5;&#x4FEE;&#x590D;&#x7532;&#x57FA;&#x78FA;&#x9178;&#x75C5;&#x53D8;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4FDD;&#x7559;&#x74E3;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x3002;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x79CD;&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x4EFB;&#x4F55;&#x895F;&#x7FFC; 5&#39; &#x7684;&#x5288;&#x88C2;&#xFF0C;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5C55;&#x51FA;&#x90E8;&#x5206;&#x80FD;&#x529B;&#x524A;&#x51CF; 5&#39; &#x895F;&#x7FFC;&#x65F6;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; 3&#39; &#x74E3;&#x5728;&#x573A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7075;&#x6D3B;&#x7684;&#x5FAA;&#x73AF;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x88C2;&#x89E3;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B9A;&#x4F4D; 5&#39; &#x74E3;&#x548C;&#x50AC;&#x5316;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;

&#x7075;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x6838;&#x9178;&#x5185;&#x5207;&#x9176; FEN1 &#x4EBA;&#x7C7B; DNA &#x590D;&#x5236;&#x548C;&#x4FEE;&#x590D;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x76AE;&#x74E3;&#x5288;&#x88C2;&#x3002;

The conserved, structure-specific flap endonuclease FEN1 cleaves 5' DNA flaps that arise during replication or repair. To address in vivo mechanisms of flap cleavage, we developed a screen for human FEN1 mutants that are toxic when expressed in yeast. Two targets were revealed: the flexible loop domain and the catalytic site. Toxic mutants caused G(2) arrest and cell death and were unable to repair methyl methanesulfonate lesions. All the mutant proteins retained flap binding. Unlike the catalytic site mutants, which lacked cleavage of any 5' flaps, the loop mutants exhibited partial ability to cut 5' flaps when an adjacent single nucleotide 3' flap was present. We suggest that the flexible loop is important for efficient cleavage through positioning the 5' flap and the catalytic site.

The flexible loop of human FEN1 endonuclease is required for flap cleavage during DNA replication and repair.

Le conserv&#xE9;e, endonucl&#xE9;ase volet sp&#xE9;cifique &#xE0; la structure FEN1 clive volets ADN 5 &#x26;#39;qui se posent lors de la r&#xE9;plication ou la r&#xE9;paration. Pour faire face &#xE0; des m&#xE9;canismes de clivage in vivo volet, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; un &#xE9;cran pour l&#x26;#39;homme FEN1 mutants qui sont toxiques lorsqu&#x26;#39;elles sont exprim&#xE9;es dans la levure. Deux objectifs ont &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9;: le domaine de boucle souple et le site catalytique. Mutants toxiques caus&#xE9;s G (2) la mort cellulaire et l&#x26;#39;arrestation et ont &#xE9;t&#xE9; incapables de r&#xE9;parer les l&#xE9;sions de m&#xE9;thyle m&#xE9;thanesulfonate. Toutes les prot&#xE9;ines mutantes conserv&#xE9; de liaison &#xE0; rabat. Contrairement aux mutants du site catalytique, qui manquaient de tout clivage 5 &#x26;#39;rabats, les mutants en boucle expos&#xE9;e la capacit&#xE9; partielle de couper 5&#x26;#39; rabats quand rabat une adjacente 3 nucl&#xE9;otide simple &#xBB;&#xE9;tait pr&#xE9;sent. Nous sugg&#xE9;rons que la boucle flexible est important pour le clivage efficace &#xE0; travers le positionnement de la 5 &#x26;#39;rabat et le site catalytique.

La boucle flexible de FEN1 endonucl&#xE9;ase humaine est requise pour le clivage Flap cours de la r&#xE9;plication de l&#x26;#39;ADN et de r&#xE9;paration

Die flexible Schleife des menschlichen FEN1 Endonuklease ist f&#xFC;r Klappe Spaltung w&#xE4;hrend der DNA-Replikation und Reparatur erforderlich ist.

Le endonucleasi lembo conservato, struttura specifica FEN1 fende lembi di DNA 5&#39; che si presentano durante la replica o la riparazione. Per affrontare in vivo meccanismi di scissione del lembo, abbiamo sviluppato uno schermo per umani mutanti FEN1 che sono tossici quando espresso in lievito. Sono stati rivelati due obiettivi: il dominio flessibile ciclo e il sito catalitico. Mutanti tossici causato 05 arresto e cellule morte e furono in grado di riparare le lesioni Metansulfonato metile. Tutte le proteine mutanti mantennero associazione lembo. A differenza dei mutanti sito catalitico, che mancavano di clivaggio di qualsiasi 5&#39; lembi, i mutanti del ciclo esposto parziale capacit&agrave; di taglio 5&#39; lembi quando un singolo nucleotide adiacente 3&#39; patta era presente. Suggeriamo che il loop flessibile &egrave; importante per la scissione efficiente attraverso il posizionamento del lembo 5&#39; e il sito catalitico.

Ciclo flessibile dell&#39;endonucleasi FEN1 umana &egrave; necessario per la scissione del lembo durante la riparazione e la replicazione del DNA.

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&#x30D2;&#x30C8;FEN1&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x306A;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x3084;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;

&#xBCF4;&#xC874;, &#xAD6C;&#xC870; &#xAD00;&#xB828; &#xD50C;&#xB7A9; endonuclease FEN1 &#xC55E; 5&#39; DNA &#xD50C;&#xB7A9; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB610;&#xB294; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294;. &#xD50C;&#xB7A9; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC758; &#xBE44;&#xBCF4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC720;&#xB3C5; &#xB204; &#xB8E9;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xBA74; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; FEN1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB300; &#xD55C; &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB450; &#xB300;&#xC0C1; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;: &#xC720;&#xC5F0;&#xD55C; &#xB8E8;&#xD504; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC0F; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;. &#xB3C5;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; G(2) &#xCCB4;&#xD3EC;&#xC640; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558; &#xACE0; &#xBA54; &#xD2F8; methanesulfonate &#xC7A5;&#xC560;&#xB97C; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD50C;&#xB7A9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0;. 5&#39; &#xD50C;&#xB7A9;&#xC758; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC774; &#xBD80;&#xC871;, &#xCD09;&#xB9E4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xB8E8;&#xD504; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; 3&#39; &#xD50C;&#xB7A9; &#xC874;&#xC7AC; &#xD55C; &#xACBD;&#xC6B0; 5&#39; &#xB0A0;&#xAC1C;&#xB97C; &#xC798;&#xB77C; &#xBD80;&#xBD84; &#xB2A5;&#xB825; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC720;&#xC5F0;&#xD55C; &#xB8E8;&#xD504; 5&#39; &#xD50C;&#xB7A9; &#xBC0F; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC30;&#xCE58;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04; FEN1 endonuclease&#xC758; &#xC720;&#xC5F0;&#xD55C; &#xB8E8;&#xD504;&#xB294; DNA &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD50C;&#xB7A9; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La conserva, la estructura espec&#xED;fica de solapa endonucleasa rompe FEN1 5 &#x26;#39;flaps de ADN que se presentan durante la replicaci&#xF3;n o la reparaci&#xF3;n. Para hacer frente a los mecanismos in vivo de la escisi&#xF3;n del colgajo, se desarroll&#xF3; una pantalla para humanos FEN1 mutantes que son t&#xF3;xicos cuando se expresa en la levadura. Dos objetivos fueron revelados: el dominio bucle flexible y el sitio catal&#xED;tico. Mutantes t&#xF3;xicos causados &#x200B;&#x200B;G (2) la detenci&#xF3;n y la muerte celular y eran incapaces de reparar las lesiones metanosulfonato de metilo. Todas las prote&#xED;nas mutantes retenido vinculante solapa. A diferencia de los mutantes del sitio catal&#xED;tico, que carec&#xED;an de cualquier divisi&#xF3;n 5 &#x26;#39;flaps, los mutantes mostraron la capacidad de bucle parcial para cortar 5&#x26;#39; flaps cuando se tapa un solo nucle&#xF3;tido adyacente 3 &#x26;#39;estaba presente. Se sugiere que el bucle flexible es importante para la escisi&#xF3;n eficiente a trav&#xE9;s de la colocaci&#xF3;n del 5 &#x26;#39;solapa y el sitio catal&#xED;tico.

El bucle flexible de los Derechos Humanos Endonucleasa FEN1 se requiere para la divisi&#xF3;n solapa durante la replicaci&#xF3;n y reparaci&#xF3;n del ADN

&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5DEE;&#x53CD;&#x5F0F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x7531; p53&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5728;&#x5730;&#x5740; p53 &#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x80FD;&#x529B;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;26 &#x4E0D;&#x540C; p53 &#x54CD;&#x5E94;&#x5143;&#x7D20; (REs) &#x4ECE;&#x9175;&#x6BCD;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x6240;&#x6709;&#x5176;&#x4ED6;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x5982;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#xFF0C;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E0D;&#x53D8;&#x3002;&#x8BE5;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4F9D;&#x9760;&#x76D1;&#x7BA1;&#x4E25;&#x683C;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50; (rheostatable)&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8303;&#x56F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684; p53 &#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5411;&#x6BCF;&#x4E2A; 20-22 bp &#x957F; RE p53 &#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x80FD;&#x529B;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x6392;&#x540D;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6709;&#x4E00;&#x6837;&#x6FC0;&#x6D3B; 1000 &#x500D;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x6CA1;&#x6709;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x80FD;&#x91CF;&#x7684; REs &#x529F;&#x80FD;&#x7B49;&#x7EA7;&#x548C;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x9884;&#x6D4B;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E2D; RE &#x7684;&#x4E2D;&#x592E;&#x5E8F;&#x5217;&#x5143;&#x7D20;&#x5927;&#x5927;&#x5F71;&#x54CD; p53 &#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E; DNA &#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x80FD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5185;&#x5728;&#x7684; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x548C; p53 &#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x8BF1;&#x5BFC; p53 &#x9274;&#x522B;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E5F;&#x4E0E;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5E8F;&#x5217;&#x76F8;&#x5173;&#x54CD;&#x5E94;&#x5143;&#x7D20;&#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09; &#x6709;&#x4E25;&#x5BC6;&#x76D1;&#x7BA1;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x5BF9;&#x5176;&#x4ED6;&#x5BB6;&#x5C5E;&#x4E86;&#x89E3;&#x89C4;&#x7BA1;&#x6709;&#x5173;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;p53 &#x5DF2;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4E00;&#x534A;&#x51CB;&#x4EA1; REs &#x5F31;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6027;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x60A3;&#x8005;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x524D;&#x5217;&#x4E3A;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; p53 &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x660E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x80FD;&#x529B;&#x5B9E;&#x73B0;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6C34;&#x5E93;&#x7684;&#x7EC6;&#x5FAE;&#x5DEE;&#x522B;&#x3002;

&#x9274;&#x522B;&#x6FC0;&#x6D3B; p53 &#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56; p53 &#x6C34;&#x5E73;&#x548C;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x76EE;&#x6807;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;

Little is known about the mechanisms that regulate differential transactivation by p53. We developed a system in the yeast Saccharomyces cerevisiae that addresses p53 transactivation capacity from 26 different p53 response elements (REs) under conditions where all other factors, such as chromatin, are kept constant. The system relies on a tightly regulated promoter (rheostatable) that can provide for a broad range of p53 expression. The p53 transactivation capacity toward each 20- to 22-bp-long RE could be ranked by using a simple phenotypic assay. Surprisingly, there was as much as a 1,000-fold difference in transactivation. There was no correlation between the functional rank and statistical predictions of binding energy of the REs. Instead we found that the central sequence element in an RE greatly affects p53 transactivation capacity, possibly because of DNA structural properties. Our results suggest that intrinsic DNA binding affinity and p53 protein levels are important contributors to p53-induced differential transactivation. These results are also relevant to understanding the regulation by other families of transcription factors that recognize several sequence-related response elements and/or have tightly regulated expression. We found that p53 had weak activity towards half the apoptotic REs. In addition, p53 alleles associated with familial breast cancer, previously classified as wild type, showed subtle differences in transactivation capacity towards several REs.

Differential transactivation by the p53 transcription factor is highly dependent on p53 level and promoter target sequence.

On conna&#xEE;t peu les m&#xE9;canismes qui r&#xE9;gulent la transactivation par p53 diff&#xE9;rentielle. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; un syst&#xE8;me dans la levure Saccharomyces cerevisiae qui aborde la capacit&#xE9; de transactivation de p53 &#xE0; partir de 26 diff&#xE9;rents &#xE9;l&#xE9;ments de r&#xE9;ponse p53 (ER) dans des conditions o&#xF9; tous les autres facteurs, tels que la chromatine, sont maintenus constants. Le syst&#xE8;me repose sur un promoteur strictement r&#xE9;glement&#xE9;es (rheostatable) qui peut servir &#xE0; un large &#xE9;ventail de l&#x26;#39;expression de p53. La capacit&#xE9; de transactivation de p53 vers chacun 20 - &#xE0; 22 pb au long de la RE pourrait &#xEA;tre class&#xE9; en utilisant un test simple ph&#xE9;notypique. &#xC9;tonnamment, il y avait autant que la diff&#xE9;rence de 1000 fois dans la transactivation. Il n&#x26;#39;y avait pas de corr&#xE9;lation entre le rang fonctionnel et des pr&#xE9;visions statistiques de l&#x26;#39;&#xE9;nergie de liaison de l&#x26;#39;ER. Au lieu de cela nous avons constat&#xE9; que l&#x26;#39;&#xE9;l&#xE9;ment de la s&#xE9;quence centrale dans un RE affecte grandement la capacit&#xE9; de transactivation de p53, peut-&#xEA;tre en raison des propri&#xE9;t&#xE9;s structurelles d&#x26;#39;ADN. Nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que l&#x26;#39;affinit&#xE9; d&#x26;#39;ADN liaison intrins&#xE8;que et les niveaux de prot&#xE9;ine p53 sont des contributeurs importants &#xE0; la transactivation induite par p53 diff&#xE9;rentielle. Ces r&#xE9;sultats sont &#xE9;galement pertinentes pour la compr&#xE9;hension de la r&#xE9;gulation par d&#x26;#39;autres familles de facteurs de transcription qui reconnaissent plusieurs &#xE9;l&#xE9;ments de r&#xE9;ponse s&#xE9;quence li&#xE9;es et / ou ont strictement r&#xE9;glement&#xE9; l&#x26;#39;expression. Nous avons constat&#xE9; que p53 avait une faible activit&#xE9; vers la moiti&#xE9; des ER apoptotiques. En outre, les all&#xE8;les p53 associ&#xE9;es au cancer du sein familial, auparavant class&#xE9;s comme de type sauvage, ont montr&#xE9; des diff&#xE9;rences subtiles dans la capacit&#xE9; de transactivation vers ER plusieurs.

Transactivation diff&#xE9;rentiel par le facteur de transcription p53 est hautement d&#xE9;pendant du niveau P53 et s&#xE9;quence cible du promoteur

Differential Transaktivierung durch p53-Transkriptionsfaktor ist stark abh&#xE4;ngig von p53 Ebene und Promotor Zielsequenz.

Poco &egrave; conosciuto circa i meccanismi che regolano la transattivazione differenziale da p53. Abbiamo sviluppato un sistema nel lievito Saccharomyces cerevisiae che affronta la capacit&agrave; di transattivazione p53 da 26 elementi di risposta differenti p53 (REs) in condizioni dove tutti gli altri fattori, come la cromatina, sono mantenute costante. Il sistema si basa su un promotore strettamente regolamentato (rheostatable) che pu&ograve; fornire per una vasta gamma di espressione di p53. La capacit&agrave; di transattivazione p53 verso ogni RE 20-22-bp-lungo potrebbe essere classificata utilizzando una semplice analisi fenotipica. Sorprendentemente, non c&#39;era tanto quanto una 1,000-fold differenza di transattivazione. Non non c&#39;era alcuna correlazione tra le previsioni di rango e statistiche funzionale di energia di legame della REs. Invece abbiamo trovato che l&#39;elemento centrale della sequenza in un RE influisce in modo significativo capacit&agrave; di transattivazione di p53, forse a causa delle propriet&agrave; strutturali del DNA. I nostri risultati suggeriscono che intrinseci del DNA binding affinit&agrave; e p53 proteina livelli sono importanti collaboratori di transattivazione differenziale indotta da p53. Questi risultati sono anche rilevanti per la comprensione del regolamento da altre famiglie di fattori di trascrizione che riconoscono diversi elementi correlati a sequenza di risposta e/o sono strettamente regolamentati espressione. Abbiamo trovato che p53 era debole attivit&agrave; verso la met&agrave; del apoptotic REs. Inoltre, p53 alleli associati con cancro della mammella familiare, precedentemente classificato come di tipo selvatico, ha mostrato sottili differenze nella capacit&agrave; di transattivazione verso diverse REs.

Transattivazione differenziale per il fattore di trascrizione p53 dipende fortemente dalla sequenza di destinazione di livello e promotore di p53.

&#x30EA;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;p53&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5DEE;&#x52D5;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x304C;&#x3001;&#x4E00;&#x5B9A;&#x306B;&#x4FDD;&#x305F;&#x308C;&#x308B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;26&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;p53&#x5FDC;&#x7B54;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x3001;p53&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x5BB9;&#x91CF;&#xFF08;RES&#xFF09;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x9175;&#x6BCD;Saccharomyces cerevisiae&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;p53&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3057;&#x3063;&#x304B;&#x308A;&#x3068;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;rheostatable&#xFF09;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5404;20&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3001;p53&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x5BB9;&#x91CF; -  22-bp&#x306E;&#x9577;RE&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30E9;&#x30F3;&#x30AF;&#x4ED8;&#x3051;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;1,000&#x500D;&#x306E;&#x5DEE;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x304F;&#x3089;&#x3044;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x30E9;&#x30F3;&#x30AF;&#x3068;RE&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306E;&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x306A;&#x4E88;&#x6E2C;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x306F;&#x76F8;&#x95A2;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;RE&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x306A;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x8981;&#x7D20;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;DNA&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7279;&#x6027;&#x304B;&#x3089;&#x3001;p53&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x80FD;&#x529B;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;DNA&#x7D50;&#x5408;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;p53&#x86CB;&#x767D;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304C;p53&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5DEE;&#x52D5;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8CA2;&#x732E;&#x8005;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x3057;&#x3066;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3063;&#x304B;&#x308A;&#x3068;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;p53&#x306E;&#x534A;&#x5206;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;RE&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x5F31;&#x3044;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5206;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6027;&#x4E73;&#x764C;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;p53&#x306E;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306B;&#x5206;&#x985E;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6B63;&#x898F;&#x8868;&#x73FE;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306E;&#x5FAE;&#x5999;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

P53&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5DEE;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;P53&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A19;&#x7684;&#x914D;&#x5217;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;

&#xC791;&#xC740; p53&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB3D9; transactivation &#xC870;&#xC808; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC1C;&#xBC1C; 26 &#xB2E4;&#xB978; p53 &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; (REs) &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; p53 transactivation &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xD6A8; &#xBAA8; Saccharomyces cerevisiae&#xC5D0; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; chromatin, &#xAC19;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC694;&#xC18C; &#xC77C;&#xC815; &#xD558; &#xAC8C; &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. P53 &#xC2DD;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; (rheostatable)&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;. &#xAC01; 20&#xC5D0; 22-&#xD608;&#xC555;-&#xAE34; &#xC7AC;&#xB97C; &#xD5A5;&#xD574; p53 transactivation &#xC6A9;&#xB7C9; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; phenotypic &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC21C;&#xC704;&#xAC00; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xAC70;&#xAE30;&#xC5D0; transactivation&#xC5D0; &#xBE4C;&#xB4DC;&#xD558;&#xAE30; &#xCC28;&#xC774; &#xB9CC;&#xD07C;. &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; Res&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC21C;&#xC704;&#xC640; &#xD1B5;&#xACC4; &#xC608;&#xCE21; &#xAC04;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xAC00; &#xC5C6;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC2E0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC911;&#xC559; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC694;&#xC18C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; p53 transactivation &#xC6A9;&#xB7C9;, &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; DNA &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB0B4;&#xC7A5; DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; p53 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB808;&#xBCA8; &#xCC28;&#xB3D9; transactivation p53 &#xC720;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xC5EC;&#xC790;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xAD00;&#xB828; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xB2E8;&#xB2E8;&#xD788; &#xC2DD;&#xC744; &#xD1B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xAC00;&#xC871;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC815;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xAD00;&#xB828;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; p53 &#xC808;&#xBC18; apoptotic &#xC785;&#xC220; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC57D;&#xD55C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xB610;&#xD55C;, p53 &#xB300;&#xB9BD; &#xAC00;&#xC871;&#xC131; &#xC720;&#xBC29;&#xC554;, &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC57C;&#xC0DD; &#xC885;&#xB958;&#xB85C; &#xBD84;&#xB958;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC785;&#xC220; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; transactivation &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xBB18;&#xD55C; &#xCC28;&#xC774; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;.

P53 &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB3D9; transactivation&#xB294; p53 &#xC218;&#xC900; &#xBC0F; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xB300;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Poco se sabe sobre los mecanismos que regulan la transactivaci&#xF3;n diferenciado por la p53. Hemos desarrollado un sistema en la levadura Saccharomyces cerevisiae que se ocupa de la capacidad de transactivaci&#xF3;n de p53 en 26 diferentes elementos de respuesta a p53 (RES) en condiciones en todos los dem&#xE1;s factores, como la cromatina, se mantienen constantes. El sistema se basa en un promotor estrechamente regulado (rheostatable) que puede proporcionar para una amplia gama de expresi&#xF3;n de p53. La capacidad de transactivaci&#xF3;n de p53 hacia cada 20 - al 22-BP-largo ER puede ser clasificado mediante un ensayo fenot&#xED;pico sencilla. Sorprendentemente, no fue tanto como una diferencia 1.000 veces en la transactivaci&#xF3;n. No hubo correlaci&#xF3;n entre el grado funcional y predicciones estad&#xED;sticas de la energ&#xED;a de enlace de la ER. En su lugar encontramos que el elemento de la secuencia central de un RE afecta en gran medida la capacidad de transactivaci&#xF3;n de p53, posiblemente debido a las propiedades de la estructura del ADN. Nuestros resultados sugieren que la afinidad de uni&#xF3;n intr&#xED;nseca del ADN y los niveles de la prote&#xED;na p53 son importantes contribuyentes a diferencia de transactivaci&#xF3;n de p53 inducida. Estos resultados tambi&#xE9;n son relevantes para la comprensi&#xF3;n de la regulaci&#xF3;n por otras familias de factores de transcripci&#xF3;n que reconocen varios relacionados con la secuencia de elementos de respuesta y / o han estrechamente regulada expresi&#xF3;n. Hemos encontrado que el gen p53 ten&#xED;an debilidad de la actividad hacia la mitad de las ER apopt&#xF3;ticas. Adem&#xE1;s, los alelos de p53 relacionadas con el c&#xE1;ncer de mama familiar, previamente clasificada como de tipo salvaje, mostraron diferencias sutiles en la capacidad de transactivaci&#xF3;n hacia ER varios.

Transactivaci&#xF3;n diferencial por el factor de transcripci&#xF3;n p53 es altamente dependiente de P53 y el nivel de secuencia de destino Promotor

&#x4FEE;&#x590D;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2; &#xFF08;DSBs&#xFF09; &#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x5728;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x6765;&#x5B9E;&#x73B0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x62A5;&#x544A;&#x5916;&#x6E90;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4FEE;&#x590D;&#x5355;&#x4E2A; DSB &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x6240;&#x9700;&#x7684; DNA &#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x7A00;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x53EF;&#x9AD8;&#x8FBE; 20%&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x4E89;&#x7AEF;&#x89E3;&#x51B3;&#x673A;&#x6784;&#x901A;&#x8FC7;&#x6211;-SceI &#x53EF;&#x8C03;&#x5207;&#x5C31;&#x5728;&#x8F6C;&#x6362;&#x4E4B;&#x524D;&#x6216;&#x51FA;&#x73B0;&#x81EA;&#x53D1;&#x5730;&#x5728;&#x957F;&#x5012;&#x7ACB;&#x91CD;&#x590D;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; Alu &#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x9009;&#x62E9;&#x6297;&#x866B;&#x4E00;&#x4F53;&#x5316;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4E0E;&#x6211;&#x4EEC;&#x524D;&#x9762;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684; delitto perfetto &#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6210;&#x5BF9;&#x7684;&#x4E92;&#x8865;&#x6574;&#x5408;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; DSB &#x4FEE;&#x590D;&#x662F;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x9776;&#x5411;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x63A5;&#x8FD1;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x5E8F;&#x5217;&#x6216;&#x9065;&#x8FDC;&#x4ECE;&#x4E89;&#x7AEF;&#x89E3;&#x51B3;&#x673A;&#x6784;&#x548C;&#x76F8;&#x4E92;&#x7ADE;&#x4E89;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5728;&#x4E8C;&#x500D;&#x4F53;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA; DSB &#x53EF;&#x4EE5;&#x5F3A;&#x70C8;&#x523A;&#x6FC0;&#x4E0E;&#x5355;&#x94FE; DNA&#xFF0C;&#x4E0D;&#x5E26;&#x4EFB;&#x4F55;&#x504F;&#x89C1;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x5C55;&#x5F00;&#x5F53;&#x524D;&#x6A21;&#x578B;&#x7684; DSB &#x4FEE;&#x590D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5FEB;&#x901F;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x6539;&#x6027;&#x7684;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;

&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2;&#x662F;&#x6709;&#x6548;&#x4FEE;&#x590D;&#x9488;&#x5BF9;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x3002;

The repair of chromosomal double-strand breaks (DSBs) can be accomplished through homologous recombination in most organisms. We report here that exogenous oligonucleotides can efficiently target for repair a single DSB induced in a chromosome of yeast. The efficiency of recombinational targeting leading to a desired DNA change can be as high as 20% of cells. The DSB was generated either by a regulatable I-SceI endonuclease just before transformation or appeared spontaneously at the site of a long inverted repeat composed of human Alu sequences. The approach used features of our previously described delitto perfetto system for selecting transformants with integrative recombinant oligonucleotides. The DSB repair mediated by pairs of complementary integrative recombinant oligonucleotides was efficient for targeting to homologous sequences that were close to or distant from the DSB and in the presence of a competing homologous chromosome in diploid cells. We also demonstrate that a DSB can strongly stimulate recombination with single-stranded DNA, without strand bias. These findings expand current models of DSB repair. In addition, we establish a high-throughput system for rapid genome-wide modification with oligonucleotides.

Chromosomal site-specific double-strand breaks are efficiently targeted for repair by oligonucleotides in yeast.

La r&#xE9;paration des chromosomes des cassures double brin (CDB) qui peut &#xEA;tre accompli par recombinaison homologue dans la plupart des organismes. Nous rapportons ici que des oligonucl&#xE9;otides exog&#xE8;nes peuvent cibler efficacement pour la r&#xE9;paration d&#x26;#39;un seul ORD induite dans un chromosome de la levure. L&#x26;#39;efficacit&#xE9; du ciblage recombinaison conduisant &#xE0; une modification de l&#x26;#39;ADN souhait&#xE9; peut &#xEA;tre aussi &#xE9;lev&#xE9;e que 20% des cellules. Le ORD a &#xE9;t&#xE9; g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; soit par une r&#xE9;gulable I-SceI endonucl&#xE9;ase juste avant la transformation ou apparu spontan&#xE9;ment &#xE0; l&#x26;#39;emplacement d&#x26;#39;une longue r&#xE9;p&#xE9;tition invers&#xE9;e compos&#xE9; de s&#xE9;quences Alu homme. L&#x26;#39;approche utilis&#xE9;e caract&#xE9;ristiques de notre syst&#xE8;me d&#xE9;crit pr&#xE9;c&#xE9;demment delitto perfetto pour la s&#xE9;lection des transformants d&#x26;#39;int&#xE9;gration oligonucl&#xE9;otides recombinants. La r&#xE9;paration ORD m&#xE9;di&#xE9;e par paires compl&#xE9;mentaires d&#x26;#39;oligonucl&#xE9;otides recombinants d&#x26;#39;int&#xE9;gration est efficace pour le ciblage d&#x26;#39;s&#xE9;quences homologues qui sont &#xE0; proximit&#xE9; de ou loin de l&#x26;#39;ORD et en pr&#xE9;sence d&#x26;#39;un chromosome concurrence homologue dans des cellules diplo&#xEF;des. Nous d&#xE9;montrons &#xE9;galement que l&#x26;#39;ORD peut fortement stimuler la recombinaison avec l&#x26;#39;ADN simple brin, sans parti pris volet. Ces r&#xE9;sultats &#xE9;largir les mod&#xE8;les actuels de r&#xE9;paration des CDB. En outre, nous &#xE9;tablissons un syst&#xE8;me de haut-d&#xE9;bit pour rapidement l&#x26;#39;&#xE9;chelle du g&#xE9;nome de modification avec des oligonucl&#xE9;otides.

Chromosomiques sp&#xE9;cifiques au site des cassures double brin sont efficacement cibl&#xE9;es pour la r&#xE9;paration par des oligonucl&#xE9;otides dans la levure

Chromosomale ortsspezifische Doppelstrangbr&#xFC;chen werden effizient f&#xFC;r die Reparatur von Oligonukleotiden in Hefe gezielt.

La riparazione di rotture cromosomiche di double-strand (DSBs) pu&ograve; essere realizzata attraverso ricombinazione omologa nella maggior parte degli organismi. Segnaliamo qui che esogeni oligonucleotidi efficientemente come destinazione per la riparazione di che un singolo DSB indotta in un cromosoma di lievito. L&#39;efficienza di recombinational targeting portando a un cambiamento di DNA desiderato pu&ograve; essere alto come il 20% delle cellule. Il DSB &egrave; stato generato da un&#39;endonucleasi regolabile io-SceI appena prima trasformazione o apparsa spontaneamente presso il sito di una ripetizione lunga rovesciata composto umane sequenze Alu. L&#39;approccio utilizzato caratteristiche del nostro sistema perfetto di delitto precedentemente descritte per la selezione di transformants con oligonucleotidi ricombinante integrative. La riparazione DSB mediata da coppie di oligonucleotidi ricombinante integrative complementare era efficiente per il targeting di sequenze omologhe che erano vicino a o distanti dall&#39;organo di conciliazione e in presenza di un cromosoma omologo concorrente nelle cellule diploidi. Abbiamo anche dimostrare che un DSB fortemente pu&ograve; stimolare la ricombinazione con single-stranded DNA, senza pregiudizi di strand. Questi risultati espandere modelli attuali di riparazione DSB. Inoltre, si stabilisce un sistema high-throughput per la rapida modifica genome-wide con oligonucleotidi.

Cromosomiche site specific double-strand break sono mirati in modo efficiente per la riparazione di oligonucleotidi in lievito.

&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#xFF08;DSB&#x306E;&#xFF09;&#x306E;&#x4FEE;&#x7406;&#x306F;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x304C;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306B;&#x4FEE;&#x7406;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;DSB&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x306E;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6240;&#x671B;&#x306E;DNA&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x63DB;&#x3048;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;20&#xFF05;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x9AD8;&#x304F;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; DSB&#x306F;&#x3061;&#x3087;&#x3046;&#x3069;&#x5909;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x524D;&#x306B;&#x3001;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;I-SCEI&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D2;&#x30C8;Alu&#x914D;&#x5217;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B;&#x9577;&#x3044;&#x9006;&#x65B9;&#x5411;&#x53CD;&#x5FA9;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306B;&#x767B;&#x5834;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x7D71;&#x5408;&#x7684;&#x306A;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3067;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x4F53;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x305F;delitto perfetto&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x88DC;&#x5B8C;&#x7684;&#x306A;&#x7D71;&#x5408;&#x7684;&#x306A;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;DSB&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x304C;&#x8FD1;&#x3044;&#x304B;&#x9060;&#x3044;DSB&#x304B;&#x3089;&#x4E8C;&#x500D;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x7AF6;&#x5408;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x76F8;&#x540C;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;DSB&#x304C;&#x5F37;&#x304F;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x306A;&#x3057;&#x3067;&#x3001;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;DNA&#x3068;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;DSB&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x5C55;&#x958B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306A;&#x4FEE;&#x6B63;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#x3092;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3067;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;

&#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xB098;&#xB204;&#xAE30; (DSBs)&#xC758; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC218;&#xD589;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC5EC;&#xAE30; exogenous oligonucleotides &#xB2E8;&#xC77C; DSB &#xC720;&#xBC1C; &#xD6A8; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC218;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; DNA &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; recombinational &#xB300;&#xC0C1; &#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728; &#xC140;&#xC758; 20%&#xB85C; &#xB192;&#xC740; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. DSB &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xAE34; &#xAC70;&#xAFB8;&#xB85C; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098; regulatable SceI endonuclease &#xBCC0;&#xD658; &#xC9C1;&#xC804; &#xB610;&#xB294; &#xB4F1;&#xC7A5; &#xD558; &#xC5EC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Alu &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;. &#xD1B5;&#xD569; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; oligonucleotides&#xC640; transformants&#xB97C; &#xC120;&#xD0DD; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC55E;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xBA85;&#xD55C; delitto perfetto &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; oligonucleotides &#xBCF4;&#xC644; &#xD1B5;&#xD569;&#xC758; &#xC30D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; DSB &#xC218;&#xB9AC; &#xC8FC;&#xBCC0;&#xC5D0; &#xC788;&#xB358; &#xB3D9;&#xC885; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xB610;&#xB294; &#xBA3C; DSB &#xBC0F; &#xACBD;&#xC7C1; &#xB3D9;&#xC885; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; diploid &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;&#xB294; DSB &#xAC00;&#xB2E5; &#xD3B8;&#xACAC; &#xC5C6;&#xC774; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; dna &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC790;&#xADF9; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; DSB &#xC218;&#xB9AC;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; oligonucleotides&#xC640; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; &#xC218;&#xC815; &#xC704;&#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9;&#xC758; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC124;&#xC815;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xBCC4; &#xB354;&#xBE14;-&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB79C;&#xB4DC; &#xB098;&#xB204;&#xAE30;&#xB294; &#xC218;&#xB9AC; oligonucleotides &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La reparaci&#xF3;n de los cromosomas de doble hebra se rompe (DSBs) se puede lograr a trav&#xE9;s de la recombinaci&#xF3;n hom&#xF3;loga en la mayor&#xED;a de los organismos. Presentamos aqu&#xED; que los oligonucle&#xF3;tidos ex&#xF3;genos pueden orientar de manera eficiente para la reparaci&#xF3;n de un solo OSD inducida en un cromosoma de la levadura. La eficiencia de la focalizaci&#xF3;n de recombinaci&#xF3;n que conduce a un cambio en el ADN deseado puede ser tan alta como 20% de las c&#xE9;lulas. El OSD se gener&#xF3; ya sea por una regulable I-CPE endonucleasa justo antes de la transformaci&#xF3;n o apareci&#xF3; espont&#xE1;neamente en el lugar de una repetici&#xF3;n invertida largo compuesto de secuencias Alu humanos. El enfoque utilizado las caracter&#xED;sticas de nuestro sistema se ha descrito anteriormente delitto perfetto para la selecci&#xF3;n de transformantes con integraci&#xF3;n oligonucle&#xF3;tidos recombinantes. La reparaci&#xF3;n OSD mediada por pares complementarios de oligonucle&#xF3;tidos recombinantes integradores era eficaz para la orientaci&#xF3;n de las secuencias hom&#xF3;logas que estaban cerca o lejos de la OSD y en presencia de un cromosoma compitiendo hom&#xF3;loga en c&#xE9;lulas diploides. Tambi&#xE9;n demuestran que una gran OSD puede estimular la recombinaci&#xF3;n con el ADN de cadena sencilla, sin prejuicios cadena. Estos hallazgos ampliar los modelos actuales de reparaci&#xF3;n de DSB. Adem&#xE1;s, se establecer&#xE1; un sistema de alto rendimiento para una r&#xE1;pida modificaci&#xF3;n de todo el genoma con los oligonucle&#xF3;tidos.

Cromos&#xF3;micas espec&#xED;ficas del sitio hebra doble saltos son eficientemente dirigida por oligonucle&#xF3;tidos para la reparaci&#xF3;n de la levadura

Rad50:Mre11:Xrs2 (RMX) &#x590D;&#x6742;&#x529F;&#x80FD;&#x4FEE;&#x590D; DNA &#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2; &#xFF08;DSBs&#xFF09; &#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x548C;&#x533A;&#x6BB5;&#x7ED3;&#x675F;-&#x52A0;&#x5165; &#xFF08;NHEJ&#xFF09;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x662F;&#x7AEF;&#x7C92;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;Mre11 &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x5C55;&#x54C1;&#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5C1A;&#x672A;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5728;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FEE;&#x590D;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x91C7;&#x53D6;&#x4E86;&#x4E09;&#x79CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x7814;&#x7A76; (mre11-D16A-D56N&#xFF0C;&#x548C; H125N&#xFF09; &#x4EE5;&#x524D;&#x6240;&#x793A;&#x4F53;&#x5916;&#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x6D3B;&#x52A8;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x3002;&#x5728;&#x7ED3;&#x675F;&#x5728;&#x548C;&#x4E24;&#x7AEF;&#x51FA;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x91CD;&#x7EC4;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4F7F;&#x7528;&#x5DF2;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x8D28;&#x7C92;&#x548C;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; DNA &#x5E95;&#x7269;&#xFF0C;mre11 D16A &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x7F3A;&#x9677; mre11 &#x7A7A;&#x682A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5C0F;&#x4E2D; mre11 D56N &#x548C; H125N &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;mre11 D16A &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x5176;&#x4ED6;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x4F1A;&#x663E;&#x793A;&#x5F3A;&#x70C8;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x5BF9;&#x7535;&#x79BB;&#x8F90;&#x5C04;&#x4E0E;&#x6B8B;&#x4F59;&#x963B;&#x529B;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x90E8;&#x5206;&#x5197;&#x4F59;&#x7684;&#x6838;&#x9178;&#x9176; Exo1 &#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;mre11 D16A &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E5F;&#x662F;&#x6700;&#x654F;&#x611F;&#x7684; S &#x76F8;&#x76F8;&#x5173;&#x6BD2;&#x5242;&#x7F9F;&#x57FA;&#x8132;&#x548C;&#x7532;&#x57FA;&#x78FA;&#x9178;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5982;&#x4EE5;&#x524D;&#x6240;&#x6307;&#x51FA;&#x7684; D56N &#x548C; H125N &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728; NHEJ &#x5B58;&#x5728;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;Rad50 &#x548C; Xrs2 &#x7684;&#x7EAF; Mre11 D16A &#x86CB;&#x767D;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x662F;&#x533A;&#x5206;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x86CB;&#x767D;&#x5F62;&#x6210;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x4E0E;&#x7B49;&#x6548;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x6BD4;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5728;&#x4EE5;&#x5F80;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E5F;&#x53D7;&#x5230;&#x8D28;&#x7591;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x91CC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; Mre11 RMX &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7A00;&#x6709;&#x4FEE;&#x590D;&#x548C;&#x7AEF;&#x7C92;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6240;&#x9700;&#x3002;

&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x4E2D;&#x4F11;&#x606F;&#xFF0C;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD; Mre11 &#x5728;&#x4FEE;&#x590D; DNA &#x53CC;&#x94FE;&#x4E2D;&#x7684;&#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The Rad50:Mre11:Xrs2 (RMX) complex functions in repair of DNA double-strand breaks (DSBs) by recombination and nonhomologous end-joining (NHEJ) and is also required for telomere stability. The Mre11 subunit exhibits nuclease activities in vitro, but the role of these activities in repair in mitotic cells has not been established. In this study we have performed a comparative study of three mutants (mre11-D16A, -D56N, and -H125N) previously shown to have reduced nuclease activities in vitro. In ends-in and ends-out chromosome recombination assays using defined plasmid and oligonucleotide DNA substrates, mre11-D16A cells were as deficient as mre11 null strains, but defects were small in mre11-D56N and -H125N mutants. mre11-D16A cells, but not the other mutants, also displayed strong sensitivity to ionizing radiation, with residual resistance largely dependent on the presence of the partially redundant nuclease Exo1. mre11-D16A mutants were also most sensitive to the S-phase-dependent clastogens hydroxyurea and methyl methanesulfonate but, as previously observed for D56N and H125N mutants, were not defective in NHEJ. Importantly, the affinity of purified Mre11-D16A protein for Rad50 and Xrs2 was indistinguishable from wild type and the mutant protein formed complexes with equivalent stoichiometry. Although the role of the nuclease activity has been questioned in previous studies, the comparative data presented here suggest that the nuclease function of Mre11 is required for RMX-mediated recombinational repair and telomere stabilization in mitotic cells.

Role of the nuclease activity of Saccharomyces cerevisiae Mre11 in repair of DNA double-strand breaks in mitotic cells.

Les Rad50: Mre11: Xrs2 (RMX) des fonctions complexes de r&#xE9;paration de l&#x26;#39;ADN double-brin (CDB) par recombinaison non homologue et fin-joining (NHEJ) et est &#xE9;galement n&#xE9;cessaire pour la stabilit&#xE9; des t&#xE9;lom&#xE8;res. La sous-unit&#xE9; pr&#xE9;sente des activit&#xE9;s nucl&#xE9;ases Mre11 in vitro, mais le r&#xF4;le de ces activit&#xE9;s dans la r&#xE9;paration dans les cellules mitotiques n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tablie. Dans cette &#xE9;tude, nous avons effectu&#xE9; une &#xE9;tude comparative de trois mutants (Mre11-D16A, D56N-et-H125N) pr&#xE9;alablement d&#xE9;montr&#xE9; qu&#x26;#39;ils ont r&#xE9;duit leurs activit&#xE9;s nucl&#xE9;ases in vitro. En se termine en-et se termine sur des essais de recombinaison des chromosomes &#xE0; l&#x26;#39;aide d&#xE9;finis substrats d&#x26;#39;ADN plasmidique et l&#x26;#39;oligonucl&#xE9;otide, Mre11-D16A cellules &#xE9;taient aussi d&#xE9;ficient que Mre11 souches nulles, mais les d&#xE9;fauts &#xE9;taient de petite Mre11-D56N et-H125N mutants. Mre11-D16A cellules, mais pas les autres mutants, &#xE9;galement affich&#xE9; une forte sensibilit&#xE9; aux rayonnements ionisants, &#xE0; la r&#xE9;sistance r&#xE9;siduelle d&#xE9;pend en grande partie sur la pr&#xE9;sence de l&#x26;#39;partiellement redondants nucl&#xE9;ase Exo1. Mre11-D16A mutants &#xE9;taient &#xE9;galement les plus sensibles &#xE0; l&#x26;#39;hydroxyur&#xE9;e en phase S-d&#xE9;pendant clastog&#xE8;nes et m&#xE9;thyl m&#xE9;thanesulfonate, mais, comme pr&#xE9;c&#xE9;demment observ&#xE9; pour D56N et des mutants H125N, n&#x26;#39;&#xE9;taient pas d&#xE9;fectueux dans NHEJ. Surtout, l&#x26;#39;affinit&#xE9; de purifier Mre11-D16A prot&#xE9;ines pour Rad50 et Xrs2 &#xE9;tait indiscernable de type sauvage et les complexes prot&#xE9;ine mutante form&#xE9;s avec stoechiom&#xE9;trie &#xE9;quivalente. Bien que le r&#xF4;le de l&#x26;#39;activit&#xE9; nucl&#xE9;ase a &#xE9;t&#xE9; remis en question dans des &#xE9;tudes ant&#xE9;rieures, les donn&#xE9;es comparatives pr&#xE9;sent&#xE9;es ici sugg&#xE8;rent que la fonction de nucl&#xE9;ase Mre11 est n&#xE9;cessaire pour RMX-m&#xE9;diation r&#xE9;paration par recombinaison et la stabilisation des t&#xE9;lom&#xE8;res dans les cellules en mitose.

R&#xF4;le de l&#x26;#39;activit&#xE9; nucl&#xE9;ase de Saccharomyces cerevisiae Mre11 en r&#xE9;paration de l&#x26;#39;ADN double-brin dans les cellules mitotiques

Die Rolle des Nuclease-Aktivit&#xE4;t von Saccharomyces cerevisiae Mre11 der Reparatur von DNA-Doppelstrang-Br&#xFC;che in mitotischen Zellen.

Il complesso Rad50:Mre11:Xrs2 (RMX) funzioni nella riparazione delle rotture di DNA double-strand (DSBs) di ricombinazione di nonhomologous fine adesione (NHEJ) ed &egrave; anche necessario per la stabilit&agrave; dei telomeri. La subunit&agrave; Mre11 presenta le attivit&agrave; della nucleasi in vitro, ma non &egrave; stato stabilito il ruolo di queste attivit&agrave; in riparazione in cellule mitotic. In questo studio abbiamo eseguito uno studio comparativo dei tre mutanti (mre11-D16A,-D56N e - H125N) dimostrato in precedenza che hanno ridotto le attivit&agrave; della nucleasi in vitro. Nel cromosoma finisce in e out estremit&agrave; dosaggi di ricombinazione usando definito plasmide e substrati del DNA del oligonucleotide, mre11-D16A cellule erano come carente come mre11 null ceppi, ma difetti erano piccoli in mre11-D56N e - H125N mutanti. MRE11-D16A cellule, ma non gli altri mutanti, inoltre visualizzato forte sensibilit&agrave; alle radiazioni ionizzanti, con resistenza residua in gran parte dipendente dalla presenza della nucleasi parzialmente ridondante Exo1. MRE11-D16A mutanti sono stati anche pi&ugrave; sensibile per la S-fase-dependent tra idrossiurea e metile Metansulfonato ma, come osservato in precedenza, per D56N e H125N, mutanti, non erano difettosi in NHEJ. Soprattutto, l&#39;affinit&agrave; della proteina purificata di Mre11-D16A Rad50 e Xrs2 era indistinguibile dal tipo selvatico e i complessi della proteina mutante formata con stechiometria equivalente. Anche se il ruolo dell&#39;attivit&agrave; della nucleasi &egrave; stato contestato in studi precedenti, i dati comparativi presentati qui suggeriscono che la funzione della nucleasi di Mre11 &egrave; necessaria per la RMX-mediata recombinational riparazione e telomeri stabilizzazione nelle cellule mitotic.

Ruolo dell&#39;attivit&agrave; della nucleasi di Saccharomyces cerevisiae Mre11 nella riparazione del DNA double-strand breaks in cellule mitotic.

RAD50&#xFF1A;MRE11&#xFF1A;Xrs2&#xFF08;RMX&#xFF09;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306B;&#x3088;&#x308B;DNA&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#xFF08;DSB&#x306E;&#xFF09;&#x306E;&#x4FEE;&#x7406;&#x3067;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x975E;&#x76F8;&#x540C;&#x672B;&#x7AEF;&#x63A5;&#x5408;&#xFF08;NHEJ&#xFF09;&#x3068;&#x3082;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; MRE11&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x793A;&#x3059;3&#x3064;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#xFF08;MRE11-D16A-D56N&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;-H125N&#xFF09;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3067;&#x7D42;&#x308F;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x4E21;&#x7AEF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30D7;&#x30E9;&#x200B;&#x200B;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;DNA&#x57FA;&#x8CEA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;MRE11-D16A&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;MRE11&#x30CC;&#x30EB;&#x682A;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x6B20;&#x640D;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x6B20;&#x9665;&#x304C;MRE11-D56N&#x304A;&#x3088;&#x3073;-H125N&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x5C0F;&#x3055;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; MRE11-D16A&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x5197;&#x9577;&#x306A;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;EXO1&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3001;&#x6B8B;&#x7559;&#x62B5;&#x6297;&#x3067;&#x3001;&#x96FB;&#x96E2;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA;&#x306B;&#x5F37;&#x3044;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; MRE11-D16A&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;S&#x76F8;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7570;&#x5E38;&#x8A98;&#x767A;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x3001;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30E1;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EB;&#x30DB;&#x30F3;&#x9178;&#x306B;&#x6700;&#x3082;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;D56N&#x3068;H125N&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;NHEJ&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;RAD50&#x3068;Xrs2&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;MRE11-D16A&#x7CBE;&#x88FD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x304C;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x533A;&#x5225;&#x304C;&#x3064;&#x304B;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x304C;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x7591;&#x554F;&#x8996;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6BD4;&#x8F03;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;MRE11&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;RMX&#x5A92;&#x4ECB;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;DNA&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;MRE11 Saccharomyces cerevisiae&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;

Rad50:Mre11:Xrs2 (RMX) &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; DNA &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xB098;&#xB204;&#xAE30; (DSBs)&#xC758; &#xC218;&#xB9AC; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; nonhomologous &#xB05D;-(NHEJ) &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; telomere &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;. Mre11 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC804;&#xC2DC; nuclease &#xD65C;&#xB3D9; &#xCCB4; &#xC678;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; mitotic &#xC140;&#xC5D0; &#xC120; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xC124;&#xB9BD; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; 3 &#xBA85;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC218;&#xD589; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; (mre11-D16A-D56N, &#xBC0F;-H125N) &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xCCB4; &#xC678; nuclease &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xB05D; &#xBC0F; &#xB05D; &#xC544;&#xC6C3; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC640; oligonucleotide DNA &#xAE30;&#xD310;, mre11 D16A &#xC140; mre11 null &#xBCC0;&#xC885;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD80;&#xC871; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xACB0;&#xD568;&#xC740; mre11-d56n&#xC640;-H125N &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xC791;&#xC740;. mre11 D16A &#xC140;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xB2E4;&#xB978; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;, &#xC804;&#xB9AC; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xC5D0; &#xC794;&#xC5EC; &#xC800;&#xD56D; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xBCF5; nuclease exo1&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC758;&#xC874; &#xAC15;&#xD55C; &#xAC10;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC;. mre11 D16A &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; S &#xC704;&#xC0C1; &#xC885;&#xC18D; clastogens hydroxyurea&#xC640; &#xBA54; &#xD2F8; methanesulfonate&#xC5D0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xB610;&#xD55C; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;, D56N &#xBC0F; h125n&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xCC30;&#xB85C; NHEJ&#xC5D0; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, Rad50 &#xBC0F; xrs2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xD654; Mre11 D16A &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC640;&#xC77C;&#xB4DC; &#xC720;&#xD615; &#xBC0F; &#xD574;&#xB2F9; stoichiometry&#xC640; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xBCC4;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xB85D; nuclease &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBB38;&#xC81C; &#xC2DC; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xBE44;&#xAD50; &#xB370;&#xC774;&#xD130; Mre11 nuclease &#xAE30;&#xB2A5; RMX &#xC911;&#xC7AC; recombinational &#xC218;&#xB9AC; &#xBC0F; telomere &#xC548;&#xC815;&#xD654; mitotic &#xC140;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

DNA &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5;&#xC758; &#xC218;&#xB9AC;&#xC5D0; Saccharomyces cerevisiae Mre11 nuclease &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; mitotic &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB098;&#xB204;&#xAE30;.

Los Rad50: Mre11: XRS2 (RMX) funciones complejas en la reparaci&#xF3;n de ADN de doble hebra se rompe (DSBs) por recombinaci&#xF3;n hom&#xF3;loga y la final (NHEJ) y tambi&#xE9;n es necesario para la estabilidad de los tel&#xF3;meros. La subunidad Mre11 exhibe actividades nucleasa in vitro, pero el papel de estas actividades en la reparaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas mit&#xF3;ticas no se ha establecido. En este estudio se ha realizado un estudio comparativo de tres mutantes (Mre11-D16A, D56N, y H125N) anteriormente se&#xF1;aladas han reducido las actividades nucleasa in vitro. En termina en y termina fuera de los ensayos de recombinaci&#xF3;n de cromosomas utilizando definidos sustratos de ADN pl&#xE1;smido y oligonucle&#xF3;tidos, Mre11-D16A c&#xE9;lulas eran tan deficiente como Mre11 cepas nulos, pero los defectos eran peque&#xF1;as en Mre11-D56N y H125N mutantes. Mre11-D16A c&#xE9;lulas, pero no los otros mutantes, tambi&#xE9;n se muestra fuerte sensibilidad a la radiaci&#xF3;n ionizante, con la resistencia residual en gran medida dependiente de la presencia de la nucleasa parcialmente redundante Exo1. Mre11-D16A mutantes tambi&#xE9;n eran m&#xE1;s sensibles a la fase S-dependiente clast&#xF3;genos hidroxiurea y metanosulfonato de metilo, aunque, como ya se observ&#xF3; para el D56N y mutantes H125N, no eran defectuosas en NHEJ. Es importante destacar que la afinidad de purificar la prote&#xED;na Mre11-D16A para Rad50 y XRS2 era indistinguible de la de tipo salvaje y los complejos de prote&#xED;nas mutantes formado con estequiometr&#xED;a equivalente. Aunque el papel de la actividad de nucleasa ha sido cuestionada en estudios anteriores, los datos comparativos presentados aqu&#xED; sugieren que la funci&#xF3;n de la nucleasa Mre11 se requiere para la RMX mediada por recombinaci&#xF3;n de reparaci&#xF3;n y estabilizaci&#xF3;n de los tel&#xF3;meros en las c&#xE9;lulas mit&#xF3;ticas.

El papel de la actividad de nucleasa de Saccharomyces cerevisiae Mre11 en la reparaci&#xF3;n de ADN de doble filamento-Las interrupciones de las c&#xE9;lulas mit&#xF3;ticas

Delitto perfetto &#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E0E;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;

Delitto perfetto targeted mutagenesis in yeast with oligonucleotides.

Delitto Perfetto cibl&#xE9;e mutagen&#xE8;se chez la levure avec des oligonucl&#xE9;otides

Delitto perfetto gezielte Mutagenese in Hefe mit Oligonukleotiden.

Delitto perfetto mirati mutagenesi in lievito con oligonucleotidi.

&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Delitto Perfetto&#x6A19;&#x7684;&#x5909;&#x7570;

Delitto perfetto mutagenesis oligonucleotides&#xC640; &#xB204; &#xB8E9;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD55C;&#xB2E4;.

Delitto Perfetto Targeted Mutag&#xE9;nesis en levadura con oligonucle&#xF3;tidos

P53 &#x80BF;&#x7624;&#x6291;&#x5236;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x4E3B;&#x76D1;&#x7BA1;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5B83;&#x534F;&#x8C03;&#x7EC6;&#x80DE; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5E94;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x5728; p53&#xFF0C;&#x6216;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; p53 &#x53CD;&#x5E94;&#x9014;&#x5F84;&#x4E2D;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x9057;&#x4F20;&#x53D8;&#x5F02;&#x7684; p53 &#x9776;&#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x54CD;&#x5E94;&#x5143;&#x7D20; (REs) &#x4E2D;&#x9884;&#x8BA1;&#x5C06;&#x6539;&#x53D8;&#x751F;&#x7269;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x8981;&#x8BC6;&#x522B;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x53EF;&#x80FD;&#x4FEE;&#x6539;&#x63A7;&#x5236; p53 &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; p53 REs &#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x8BA2;&#x4E00;&#x79CD;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408;&#x81EA;&#x5B9A;&#x4E49;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x641C;&#x7D22;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x5019;&#x9009;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x9175;&#x6BCD;&#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5316;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5BF9; p53 &#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x5927;&#x7EA6; 200 &#x4E07;&#x4EBA; SNPs&#xFF0C;&gt; &#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x7834;&#x574F;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; p53 &#x7684; 200 res.&#x516B;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x4E2D;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5047;&#x5B9A; RE &#x548C;&#x4E0A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x90FD;&#x5F97;&#x5230;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x516B;&#x4E2A;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA; REs &#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x6BCF;&#x79CD;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x5BF9;&#x5C55;&#x51FA;&#x5FAE;&#x5206;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x4E0E;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684;&#x516B;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x516D;&#x4E2A;&#x9057;&#x4F20;&#x6BD2;&#x6027;&#x5E94;&#x6FC0;&#x6240;&#x81F4;&#xFF0C;&#x6216;&#x88AB;&#x76F4;&#x63A5;&#x6FC0;&#x6D3B; p53 &#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6218;&#x7565;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x6807;&#x8BC6;&#x53EF;&#x80FD;&#x5DEE;&#x5F02;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D; p53 &#x8C03;&#x63A7;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684; SNPs&#x3002;

&#x529F;&#x80FD;&#x72EC;&#x7279;&#x591A;&#x6001;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217; p53 &#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

The p53 tumor suppressor protein is a master regulatory transcription factor that coordinates cellular responses to DNA damage and cellular stress. Besides mutations in p53, or in proteins involved in the p53 response pathway, genetic variation in promoter response elements (REs) of p53 target genes is expected to alter biological responses to stress. To identify SNPs in p53 REs that may modify p53-controlled gene expression, we developed an approach that combines a custom bioinformatics search to identify candidate SNPs with functional yeast and mammalian cell assays to assess their effect on p53 transactivation. Among approximately 2 million human SNPs, we identified >200 that seem to disrupt functional p53 REs. Eight of these SNPs were evaluated in functional assays to determine both the activity of the putative RE and the impact of the candidate SNPs on transactivation. All eight candidate REs were functional, and in every case the SNP pair exhibited differential transactivation capacities. Additionally, six of the eight genes adjacent to these SNPs are induced by genotoxic stress or are activated directly by transfection with p53 cDNA. Thus, this strategy efficiently identifies SNPs that may differentially affect gene expression responses in the p53 regulatory pathway.

Functionally distinct polymorphic sequences in the human genome that are targets for p53 transactivation.

La prot&#xE9;ine suppresseur de tumeur p53 est un facteur de transcription ma&#xEE;tre r&#xE9;glementaire qui coordonne les r&#xE9;ponses cellulaires aux dommages &#xE0; l&#x26;#39;ADN et le stress cellulaire. Outre des mutations dans p53, ou dans des prot&#xE9;ines impliqu&#xE9;es dans la voie de r&#xE9;ponse p53, la variation g&#xE9;n&#xE9;tique dans des &#xE9;l&#xE9;ments de r&#xE9;ponse du promoteur (ER) de g&#xE8;nes cibles de p53 est susceptible de modifier les r&#xE9;ponses biologiques au stress. Pour identifier les SNPs dans les &#xE9;nergies renouvelables p53 qui peuvent modifier l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes p53-contr&#xF4;l&#xE9;e, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une approche qui combine une recherche personnalis&#xE9;e bioinformatique pour identifier SNPs candidats avec de la levure fonctionnelle et les tests de cellules de mammif&#xE8;res pour &#xE9;valuer leur effet sur la transactivation de p53. Parmi environ 2 millions de SNP humaine, nous avons identifi&#xE9;&#x26;gt; 200 qui semblent perturber ER p53 fonctionnelle. Huit de ces SNP ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;valu&#xE9;es dans des tests fonctionnels afin de d&#xE9;terminer &#xE0; la fois l&#x26;#39;activit&#xE9; de la RE putatif et l&#x26;#39;impact de la SNP candidat sur la transactivation. Tous les candidats ER huit &#xE9;taient fonctionnels, et dans tous les cas la paire SNP expos&#xE9; capacit&#xE9;s de transactivation diff&#xE9;rentielles. En outre, six des huit g&#xE8;nes adjacents &#xE0; ces SNPs sont induites par le stress g&#xE9;notoxique ou sont activ&#xE9;s directement par transfection avec l&#x26;#39;ADNc de p53. Ainsi, cette strat&#xE9;gie identifie efficacement SNP qui peuvent affecter diff&#xE9;remment les r&#xE9;ponses l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes dans la voie p53 r&#xE9;glementaire.

Fonctionnellement distinct des s&#xE9;quences polymorphes dans le g&#xE9;nome humain qui sont des cibles pour la transactivation P53

Funktionell unterschiedlichen polymorphen Sequenzen im menschlichen Genom, die Ziele f&#xFC;r die Transaktivierung p53 sind.

La proteina soppressore tumorale p53 &egrave; un fattore di trascrizione normativo principale che coordina le risposte cellulari ai danni al DNA e stress cellulare. Oltre alle mutazioni p53, o proteine coinvolte nella via di risposta della p53, variazione genetica in elementi di risposta del promotore (REs) di geni bersaglio p53 dovrebbe alterare le risposte biologiche allo stress. Per identificare SNPs in REs p53 che pu&ograve; modificare l&#39;espressione del gene p53-controllato, abbiamo sviluppato un approccio che unisce una ricerca bioinformatica personalizzato per identificare i candidati SNPs con lievito funzionale e dosaggi di cellule di mammifero per valutare il loro effetto sulla p53 transattivazione. Tra circa 2 milioni SNPs umana, abbiamo identificato &amp;gt; 200 che sembrano disturbare funzionale p53 res. otto di questi polimorfismi sono stati valutati in analisi funzionale per determinare sia l&#39;attivit&agrave; del RE putativo e l&#39;impatto del candidato SNPs su transattivazione. Tutti gli otto candidati REs erano funzionali, e in ogni caso il SNP coppia esposto capacit&agrave; differenziale di transattivazione. Inoltre, sei delle otto geni adiacenti a questi SNPs sono indotte da stress genotossici o sono attivati direttamente dalla transfezione con cDNA di p53. Cos&igrave;, questa strategia identifica in modo efficiente SNPs che differenzialmente pu&ograve; influire sulle risposte di espressione genica nel percorso normativo p53.

Funzionalmente distinti polimorfici sequenze nel genoma umano che sono gli obiettivi per p53 transattivazione.

p53&#x816B;&#x760D;&#x6291;&#x5236;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; p53&#x306E;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;p53&#x5FDC;&#x7B54;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;p53&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF08;RE&#xFF09;&#x3092;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x671F;&#x5F85;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; p53&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;p53&#x306E;res&#x306B;SNP&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;p53&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306B;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x9175;&#x6BCD;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3068;&#x5019;&#x88DC;SNP&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30AB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30E0;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x691C;&#x7D22;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D04;200&#x4E07;&#x4EBA;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;SNP&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;p53&#x306E;RE&#x3092;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x308B;&#x26;gt; 200&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;SNP&#x306E;8&#x3064;&#x306F;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;RE&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8EE2;&#x5199;&#x4E0A;&#x306E;&#x5019;&#x88DC;SNP&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;8&#x3064;&#x306E;&#x5019;&#x88DC;&#x306E;&#x6B63;&#x898F;&#x8868;&#x73FE;&#x306F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;SNP&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x5DEE;&#x52D5;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x5BB9;&#x91CF;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;SNP&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B;8&#x3064;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;6&#x4EBA;&#x304C;&#x907A;&#x4F1D;&#x6BD2;&#x6027;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;cDNA&#x3092;p53&#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x76F4;&#x63A5;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x5DEE;p53&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;SNP&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

P53&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30D2;&#x30C8;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E2;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x914D;&#x5217;

P53 &#xC885;&#xC591; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC870;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD130; &#xADDC;&#xC81C; &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; p53, &#xB610;&#xB294; p53 &#xC751;&#xB2F5; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC678;&#xC5D0;&#xB3C4; p53 &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; (REs)&#xC5D0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC751;&#xB2F5; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC608;&#xC815;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. P53 &#xC81C;&#xC5B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC218;&#xC815;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; p53 &#xC785;&#xC220;&#xC5D0;&#xC11C; Snp &#xC2DD;&#xBCC4; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC640; p53 transactivation&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; Snp &#xD6C4;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC790; &#xC9C0;&#xC815; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC815;&#xBCF4;&#xD559; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xC2DD; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC57D; 2 &#xBC31;&#xB9CC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Snp &#xC911;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD655;&#xC778; &amp;gt; 200 p53 &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; Res. 8 &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; Snp&#xC758; &#xBAA8;&#xB450; &#xC0C1; &#xC7AC; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; transactivation&#xC5D0; &#xD6C4;&#xBCF4; Snp&#xC758; &#xC601;&#xD5A5; &#xACB0;&#xC815; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; 8 &#xBA85;&#xC758; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xAE30;&#xB2A5;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xACBD;&#xC6B0; SNP &#xC30D; &#xCC28;&#xB3D9; transactivation &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC;. &#xB610;&#xD55C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; Snp&#xC5D0; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; 8 &#xAC1C;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 6 &#xCC28;&#xC801;&#xC778; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xBC1C; &#xB610;&#xB294; &#xC9C1;&#xC811; p53 Cdna&#xC640; transfection&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;,&#xC774; &#xC804;&#xB7B5;&#xC740; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC28;&#xB3D9; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xC751;&#xB2F5; p53 &#xADDC;&#xC81C; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; Snp&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xB2E4;&#xD615;&#xC131; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC778;&#xAC04; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0;&#xC11C; p53 transactivation&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA9;&#xD45C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La prote&#xED;na supresora de tumores p53 es un factor principal regulador de la transcripci&#xF3;n que coordina la respuesta celular al da&#xF1;o del ADN y el estr&#xE9;s celular. Adem&#xE1;s de las mutaciones en p53, o en las prote&#xED;nas implicadas en la ruta de respuesta de p53, la variaci&#xF3;n gen&#xE9;tica en los elementos de respuesta del promotor (RES) de los genes diana de p53 se espera que altere las respuestas biol&#xF3;gicas al estr&#xE9;s. Para identificar SNPs en la Resoluci&#xF3;n de p53 p53 que pueden modificar la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica controlada, hemos desarrollado un enfoque que combina una b&#xFA;squeda personalizada de la bioinform&#xE1;tica para identificar SNPs candidatos con la levadura y los ensayos funcionales de c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros para evaluar su efecto sobre la transactivaci&#xF3;n de p53. Entre los aproximadamente 2 millones de SNPs humanos, hemos identificado&#x26;gt; 200 que parecen perturbar ER funcionales de p53. Ocho de estos SNPs se evalu&#xF3; en ensayos funcionales para determinar tanto la actividad del RE putativo y el impacto de los SNPs candidato en transactivaci&#xF3;n. Todos los candidatos ER ocho eran funcionales, y en todos los casos el par de SNP exhibi&#xF3; las capacidades diferenciales de transactivaci&#xF3;n. Adem&#xE1;s, seis de los ocho genes adyacentes a estos SNPs son inducidas por el estr&#xE9;s genot&#xF3;xico o se activan directamente por transfecci&#xF3;n con ADNc de p53. Por lo tanto, esta estrategia identifica de manera eficiente los SNPs que pueden afectar la respuesta diferencial de expresi&#xF3;n g&#xE9;nica en la ruta de p53 de reglamentaci&#xF3;n.

Funcionalmente distintas secuencias polim&#xF3;rficas en el genoma humano que son el blanco de transactivaci&#xF3;n P53

&#x901A;&#x8FC7;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x548C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x91CD;&#x6392;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x57FA;&#x56E0;&#x64CD;&#x7EB5;&#x4E5F;&#x53D7;&#x5230;&#x4E86;&#x5B9E;&#x73B0;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x9AD8;&#x9891;&#x7387;&#x548C;&#x521B;&#x5EFA;&#x4E0D;&#x5305;&#x542B;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5916;&#x6E90;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x6539;&#x53D8;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x52B3;&#x52A8;&#x96C6;&#x7EA6;&#x7684;&#x56F0;&#x96BE;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A; delitto perfetto&#xFF0C;&#x5C06;&#x9488;&#x5BF9;&#x5408;&#x6210;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E;&#x4E00;&#x822C;&#x9009;&#x62E9;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x6027;&#x7ED3;&#x5408;&#x8D77;&#x6765;&#x3002;&#x5B83;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x975E;&#x5E38;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5404;&#x79CD;&#x901A;&#x8FC7;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4FEE;&#x6539;&#x3002;&#x5F53;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2; (DSB) &#x8BF1;&#x5BFC;&#x5408;&#x6210;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x8F68;&#x8FF9;&#x5185;&#x8FBE;&#x5230;&#x7279;&#x6B8A;&#x7684;&#x9AD8;&#x9891;&#x7387;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7AE0;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E86;&#x662F; delitto perfetto &#x6218;&#x7565;&#x7A81;&#x53D8;&#x548C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x6539;&#x9020;&#x524D;&#x540E;&#x65E0;&#x611F;&#x5E94;&#x7684;&#x4E89;&#x7AEF;&#x89E3;&#x51B3;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x548C;&#x6750;&#x6599;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x6DF1;&#x5165;&#x8BF4;&#x660E;&#x3002;

&#x4F53;&#x5185;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x548C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x91CD;&#x6392;&#x5408;&#x6210;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x4E0E; delitto perfetto &#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

In vivo genome manipulation through site-directed mutagenesis and chromosome rearrangements has been hindered by the difficulty in achieving high frequencies of targeting and the intensive labor required to create altered genomes that do not contain any heterologous sequence. Here we describe our approach, referred to as delitto perfetto, that combines the versatility of synthetic oligonucleotides for targeting with the practicality of a general selection system. It provides for an enormously wide variety of genome modifications via homologous recombination. Exceptional high frequencies of mutations are reached when a site-specific double-strand break (DSB) is induced within the locus targeted by the synthetic oligonucleotides. Presented in this chapter is an in-depth description of a series of applications of the delitto perfetto strategy for mutagenesis and chromosome modification both with and without the induction of a DSB, along with the procedures and materials.

The delitto perfetto approach to in vivo site-directed mutagenesis and chromosome rearrangements with synthetic oligonucleotides in yeast.

Dans la manipulation des g&#xE9;nomes in vivo gr&#xE2;ce &#xE0; la mutagen&#xE8;se dirig&#xE9;e et de r&#xE9;arrangements chromosomiques a &#xE9;t&#xE9; entrav&#xE9;e par la difficult&#xE9; &#xE0; atteindre les hautes fr&#xE9;quences de ciblage et de la main-d&#x26;#39;&#x153;uvre intensive requise pour cr&#xE9;er des g&#xE9;nomes modifi&#xE9;s qui ne contiennent aucune s&#xE9;quence h&#xE9;t&#xE9;rologue. Ici, nous d&#xE9;crivons notre approche, d&#xE9;nomm&#xE9;e delitto perfetto, qui combine la polyvalence d&#x26;#39;oligonucl&#xE9;otides synth&#xE9;tiques pour le ciblage avec la praticit&#xE9; d&#x26;#39;un syst&#xE8;me de s&#xE9;lection g&#xE9;n&#xE9;ral. Il pr&#xE9;voit une vari&#xE9;t&#xE9; &#xE9;norme &#xE9;ventail de modifications du g&#xE9;nome par recombinaison homologue. Exceptionnelles hautes fr&#xE9;quences de mutations sont atteint lorsque la zone en particulier de br&#xE8;che bicat&#xE9;naire (ORD) est induite dans le locus cible par les oligonucl&#xE9;otides synth&#xE9;tiques. Pr&#xE9;sent&#xE9; dans le pr&#xE9;sent chapitre est une description en profondeur d&#x26;#39;une s&#xE9;rie d&#x26;#39;applications de la strat&#xE9;gie de delitto perfetto pour la mutagen&#xE8;se et la modification des chromosomes &#xE0; la fois avec et sans l&#x26;#39;induction d&#x26;#39;une ORD, ainsi que les proc&#xE9;dures et les mat&#xE9;riaux.

L&#x26;#39;approche Delitto Perfetto au Vivo mutagen&#xE8;se dirig&#xE9;e et de r&#xE9;arrangements chromosomiques avec des oligonucl&#xE9;otides synth&#xE9;tiques dans la levure

In-vivo-Genom Manipulation durch Site-verwiesene Mutagenese und Chromosome Rearrangements hat behindert worden, durch die Schwierigkeiten bei der Verwirklichung der hohen Frequenzen des Zielens und die intensive Arbeit ben&ouml;tigt, um ge&auml;nderte Genome zu erstellen, die keine heterologe Sequenz enthalten. Hier beschreiben wir unseren Ansatz, als Delitto Perfetto, das die Vielseitigkeit des synthetischen Oligonucleotides Targeting mit die Praktikabilit&auml;t der eine allgemeine Auswahlsystem bezeichnet. Es bietet ein enorm breites Spektrum Genom Modifikationen durch homologe Rekombination. Au&szlig;ergew&ouml;hnlich hohe Frequenzen von Mutationen sind erreicht, wenn eine standortspezifische Doppel-Strang-Pause (DSB) innerhalb der Locus gezielt durch die synthetischen Oligonucleotides induziert wird. In diesem Kapitel dargestellt, ist eine ausf&uuml;hrliche Beschreibung von einer Reihe von Anwendungen der Delitto Perfetto Strategie f&uuml;r Mutagenese und Chromosom &Auml;nderung sowohl mit als auch ohne die Induktion von einem DSB, zusammen mit den Verfahren und Materialien.

Der Delitto Perfetto Ansatz zur in-vivo Site-verwiesene Mutagenese und Chromosomen-Rearrangements mit synthetischen Oligonucleotides in der Hefe.

Manipolazione del genoma in vivo mediante mutagenesi luogo-diretta e riorganizzazioni cromosomiche &egrave; stato ostacolato dalla difficolt&agrave; nel raggiungimento di alte frequenze di targeting e il lavoro intensivo necessari per creare il genoma alterato che non contenga alcuna sequenza eterologa. Qui descriviamo il nostro approccio, definito come delitto perfetto, che combina la versatilit&agrave; dei oligonucleotides sintetici per il targeting con la praticit&agrave; di un sistema di selezione generale. Essa prevede un&#39;enormemente ampia variet&agrave; di modificazioni del genoma tramite ricombinazione omologa. Eccezionale alte frequenze di mutazioni sono raggiunto quando un site specific double-strand break (DSB) &egrave; indotta all&#39;interno del locus bersagliato dai oligonucleotides sintetici. Presentato in questo capitolo &egrave; una descrizione approfondita di una serie di applicazioni della strategia delitto perfetto per mutagenesi e cromosoma modifica sia con che senza l&#39;induzione di un DSB, insieme con le procedure e materiali.

Il delitto perfetto approccio in vivo diretto sito mutagenesi e cromosoma riarrangiamenti con oligonucleotidi sintetici in lievito.

&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x3001;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x64CD;&#x4F5C;&#x304C;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x7570;&#x7A2E;&#x914D;&#x5217;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x52B4;&#x50CD;&#x96C6;&#x7D04;&#x578B;&#x306E;&#x9AD8;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x56F0;&#x96E3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x59A8;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x9078;&#x5B9A;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x5B9F;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x5408;&#x6210;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x6C4E;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x517C;&#x306D;&#x5099;&#x3048;delitto perfetto&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x3001;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x591A;&#x7A2E;&#x591A;&#x69D8;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#xFF08;DSB&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5408;&#x6210;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x5185;&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x9AD8;&#x57DF;&#x306B;&#x9054;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7AE0;&#x3067;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x624B;&#x9806;&#x3084;&#x6750;&#x6599;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;DSB&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3001;&#x306A;&#x3057;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3068;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x6539;&#x5909;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;delitto perfetto&#x6226;&#x7565;&#x306E;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x8AAC;&#x660E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5408;&#x6210;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x7528;&#x3044;&#x305F;in vivo&#x306E;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x53CA;&#x3073;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x518D;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x3078;Delitto Perfetto&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;

&#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xB41C; mutagenesis &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC7AC;&#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xAC8C;&#xB188; &#xC870;&#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC218;&#xC815; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC9D1;&#xC911;&#xC801;&#xC778; &#xB178;&#xB3D9; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xB97C; &#xB2EC;&#xC131; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6C0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC29;&#xD574; &#xC801; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC77C;&#xBC18; &#xC120;&#xD0DD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC2E4;&#xC6A9;&#xC131;&#xACFC; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD569;&#xC131; oligonucleotides&#xC758; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; delitto perfetto &#xB77C;&#xACE0; &#xD558;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85;. &#xAC8C;&#xB188; &#xC218;&#xC815; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC5C4;&#xCCAD;&#xB098;&#xAC8C; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xBCC4; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xBE0C;&#xB808;&#xC774;&#xD06C; (DSB) &#xD569;&#xC131; oligonucleotides &#xB300;&#xC0C1; &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xB6F0;&#xC5B4;&#xB09C; &#xB192;&#xC740; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xB2EC;. &#xC774; &#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xC2DC;&#xC640; &#xC808;&#xCC28; &#xBC0F; &#xC790;&#xB8CC; DSB&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xC5C6;&#xC774; &#xBAA8;&#xB450; mutagenesis &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xBCC0;&#xD615;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; delitto perfetto &#xC804;&#xB7B5;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; &#xC77C;&#xB828;&#xC758; &#xAE4A;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xC124;&#xBA85;&#xC774;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAC10;&#xB3C5; mutagenesis &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC7AC;&#xBC30;&#xC5F4; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xD569;&#xC131; oligonucleotides&#xC640; delitto perfetto &#xC811;&#xADFC;.

En la manipulaci&#xF3;n del genoma vivo mediante mutag&#xE9;nesis dirigida al sitio y reordenamientos cromos&#xF3;micos se ha visto obstaculizada por la dificultad de lograr altas frecuencias de focalizaci&#xF3;n y de la mano de obra intensiva necesaria para crear genomas alterados que no contengan ninguna secuencia heter&#xF3;loga. Aqu&#xED; describimos nuestro enfoque, conocido como delitto perfetto, que combina la versatilidad de los oligonucle&#xF3;tidos sint&#xE9;ticos para la orientaci&#xF3;n con la practicidad de un sistema general de selecci&#xF3;n. Se prev&#xE9; una variedad enormemente gama de modificaciones del genoma mediante recombinaci&#xF3;n hom&#xF3;loga. Excepcionales de alta frecuencia de mutaciones se alcanza cuando un sitio espec&#xED;fico de doble filamento romper (OSD) se induce en el locus blanco de los oligonucle&#xF3;tidos sint&#xE9;ticos. Se presenta en este cap&#xED;tulo es una descripci&#xF3;n en profundidad de una serie de aplicaciones de la estrategia de delitto perfetto para la mutag&#xE9;nesis y la modificaci&#xF3;n de cromosomas con y sin la inducci&#xF3;n de un OSD, junto con los procedimientos y materiales.

El enfoque de Delitto Perfetto en Vivo mutag&#xE9;nesis dirigida y reordenamientos cromos&#xF3;micos con oligonucle&#xF3;tidos sint&#xE9;ticos en la levadura

&#x4FEE;&#x590D;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2; &#xFF08;DSBs&#xFF09; &#x5BF9;&#x6B63;&#x5E38;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#xFF0C;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x548C;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x662F;&#x666E;&#x904D;&#x7684; DSB &#x4FEE;&#x590D;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A2;&#x8BA8;&#x4E86;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528;&#x5177;&#x6709;&#x540C;&#x6E90;&#x5230;&#x53CC;&#x65B9;&#x7684;&#x4E89;&#x7AEF;&#x89E3;&#x51B3;&#x673A;&#x6784;&#x7684;&#x5355;&#x94FE;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684; DSB &#x4FEE;&#x590D;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x6307;&#x5BFC;&#x4FEE;&#x590D;&#x53D1;&#x751F;&#x5B8C;&#x5168;&#x901A;&#x8FC7; Rad52 &#x548C; Rad59 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x5355;&#x94FE;&#x9000;&#x706B; (SSA)&#x3002;&#x751A;&#x81F3;&#x4EBA;&#x7C7B; Rad52 &#x7684; SSA &#x57DF;&#x63D0;&#x4F9B;&#x90E8;&#x5206;&#x4E92;&#x8865;&#x7684;&#x7A7A; rad52 &#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x4FEE;&#x590D;&#x4E0D;&#x6D89;&#x53CA; Rad51 &#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x5165;&#x4FB5;&#x548C;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x5165;&#x4FB5;&#x5236;&#x6B62;&#x6B64;&#x5916;&#x589E;&#x52A0;&#x4E0E;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4FEE;&#x590D;&#x3002;&#x663E;&#x793A; DSB &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x540C;&#x6E90;&#x5230;&#x53EA;&#x6709;&#x4E00;&#x4FA7;&#x7684;&#x5728;&#x9003;&#x4E2D;&#x65AD;&#x8DDD;&#x79BB; (&#x81F3;&#x5C11; 20 kb) &#x4ECE;&#x4E2D;&#x65AD;&#x4E2D;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x5E26;&#x6709;&#x504F;&#x89C1;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x9488;&#x5BF9;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5E7F;&#x6CDB; 5&#39; &#x5230; 3&#39; &#x5207;&#x9664;&#x540E;, &#x8DDF;&#x7684;&#x6062;&#x590D;&#x624B;&#x672F;&#x5207;&#x9664; DNA &#x7684;&#x53CC;&#x94FE;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x7ED3;&#x675F;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x624B;&#x672F;&#x5207;&#x9664;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; DSB &#x4E24;&#x7AEF;&#x88AB;&#x4FEE;&#x590D;&#x7684;&#x5355;&#x94FE; DNA &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x901A;&#x8FC7;&#x9000;&#x706B;&#x7684;&#x4E24;&#x8F6E;&#x3002;&#x7531;&#x5355;&#x94FE; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4FDD;&#x5B88;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53EF;&#x80FD;&#x5141;&#x8BB8;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; Dna &#x4E0E;&#x5BC6; DSBs &#x51C6;&#x786E;&#x6062;&#x590D;&#x3002;

&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x5355;&#x94FE; DNA &#x901A;&#x8FC7;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6B65;&#x9AA4;&#x7684;&#x9000;&#x706B;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2;&#x4FEE;&#x590D;&#x3002;

The repair of chromosomal double-strand breaks (DSBs) is essential to normal cell growth, and homologous recombination is a universal process for DSB repair. We explored DSB repair mechanisms in the yeast Saccharomyces cerevisiae using single-strand oligonucleotides with homology to both sides of a DSB. Oligonucleotide-directed repair occurred exclusively via Rad52- and Rad59-mediated single-strand annealing (SSA). Even the SSA domain of human Rad52 provided partial complementation for a null rad52 mutation. The repair did not involve Rad51-driven strand invasion, and moreover the suppression of strand invasion increased repair with oligonucleotides. A DSB was shown to activate targeting by oligonucleotides homologous to only one side of the break at large distances (at least 20 kb) from the break in a strand-biased manner, suggesting extensive 5' to 3' resection, followed by the restoration of resected DNA to the double-strand state. We conclude that long resected chromosomal DSB ends are repaired by a single-strand DNA oligonucleotide through two rounds of annealing. The repair by single-strand DNA can be conservative and may allow for accurate restoration of chromosomal DNAs with closely spaced DSBs.

Conservative repair of a chromosomal double-strand break by single-strand DNA through two steps of annealing.

La r&#xE9;paration des chromosomes des cassures double brin (CDB) est essentiel &#xE0; la croissance normale des cellules, et la recombinaison homologue est un processus universel pour la r&#xE9;paration ORD. Nous avons explor&#xE9; les m&#xE9;canismes de r&#xE9;paration de l&#x26;#39;ORD dans la levure Saccharomyces cerevisiae en utilisant des oligonucl&#xE9;otides simple brin ayant une homologie avec les deux c&#xF4;t&#xE9;s d&#x26;#39;un ORD. Oligonucl&#xE9;otide dirig&#xE9;e r&#xE9;paration a eu lieu exclusivement par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire Rad52 et Rad59-m&#xE9;diation simple brin recuit (SSA). M&#xEA;me le domaine de l&#x26;#39;ASS Rad52 humaine, &#xE0; condition de compl&#xE9;mentation partielle pour une valeur nulle RAD52 mutation. La r&#xE9;paration n&#x26;#39;a pas entra&#xEE;n&#xE9; invasion de brins Rad51-moteur, et d&#x26;#39;ailleurs la suppression de l&#x26;#39;invasion brin augment&#xE9; de r&#xE9;paration avec des oligonucl&#xE9;otides. Un ORD a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; pour activer le ciblage par des oligonucl&#xE9;otides homologues &#xE0; un seul c&#xF4;t&#xE9; de la rupture &#xE0; de grandes distances (au moins 20 ko) &#xE0; partir de la rupture d&#x26;#39;une mani&#xE8;re un brin biais&#xE9;e, ce qui sugg&#xE8;re une vaste 5 &#x26;#39;&#xE0; 3&#x26;#39; r&#xE9;section, suivie par la restauration de la ADN r&#xE9;s&#xE9;qu&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tat double brin. Nous concluons que longtemps r&#xE9;s&#xE9;qu&#xE9;es chromosomiques extr&#xE9;mit&#xE9;s ORD sont r&#xE9;par&#xE9;s par un seul brin d&#x26;#39;oligonucl&#xE9;otide d&#x26;#39;ADN &#xE0; travers deux s&#xE9;ries de recuit. La r&#xE9;paration de l&#x26;#39;ADN simple brin peut &#xEA;tre prudentes et ne peuvent permettre la reconstitution exacte d&#x26;#39;ADN chromosomiques avec CSD rapproch&#xE9;es.

R&#xE9;paration d&#x26;#39;un conservateur chromosomique cassures double brin de l&#x26;#39;ADN simple brin en deux &#xE9;tapes de recuit

Die Reparatur von Br&uuml;chen der chromosomalen Doppel-Str&auml;nge (DSBs) unbedingt erforderlich, normales Zellwachstum und Homologe Rekombination ist ein universeller Prozess f&uuml;r DSB-Reparatur. Wir untersuchten DSB-Repair-Mechanismen in der Hefe Saccharomyces Cerevisiae mit Single-Strand-Oligonukleotide mit Homologie zu beiden Seiten der einen DSB. Unter der Regie von Oligonukleotid-Reparatur erfolgte ausschlie&szlig;lich &uuml;ber Rad52 - und Rad59-vermittelter Single-Strand Gl&uuml;hen (SSA). Sogar die SSA-Dom&auml;ne des menschlichen Rad52 bereitgestellt, teilweise Erg&auml;nzung f&uuml;r null rad52 Mutation. Die Reparatur nicht mit Rad51-gesteuerte Strang Einmarsch, und au&szlig;erdem die Unterdr&uuml;ckung der Strang Invasion Reparatur mit Oligonukleotiden erh&ouml;ht. Ein DSB zeigte zur Aktivierung der targeting Oligonukleotide homologe auf nur eine Seite des Bruches bei gro&szlig;en Entfernungen (mindestens 20 kb) aus der Pause in gewissem Strang-voreingenommen vorschlagen umfangreiche 5&#39; bis 3&#39; Resektion, gefolgt von der Wiederherstellung der reseziertem DNA in den Doppel-Strang-Zustand. Wir schlie&szlig;en, dass lange reseziertem chromosomale DSB-Enden von einer Single-Strand-DNA-Oligonukleotid in zwei gl&uuml;hen repariert werden. Die Reparatur durch Single-Strand DNA kann konservativ und genaue Wiederherstellung der chromosomalen DNA mit eng beieinander DSBs erm&ouml;glicht.

Konservative Reparatur einer chromosomalen Doppel-Strang-Unterbrechung durch Single-Strand DNA durch zwei Schritte zum gl&uuml;hen.

La riparazione di rotture cromosomiche di double-strand (DSBs) &egrave; essenziale per la crescita delle cellule normali, e ricombinazione omologa &egrave; un processo universale per la riparazione DSB. Abbiamo esplorato i meccanismi di riparazione DSB nel lievito saccaromices cerevisiae utilizzando oligonucleotidi a singolo filamento con omologia ad entrambi i lati di un DSB. Riparazione del oligonucleotide diretto si &egrave; verificato esclusivamente via Rad52 - e Rad59-mediata single-strand ricottura (SSA). Anche il dominio SSA di Rad52 umano fornito parziale complementazione per una mutazione rad52 null. La riparazione non coinvolgono invasione strand Rad51-driven, e inoltre la soppressione dell&#39;invasione strand aumentata riparazione con oligonucleotidi. Un DSB &egrave; stata indicata per attivare targeting di oligonucleotidi omologo a un solo lato della rottura a grande distanze (almeno 20 kb) dalla rottura in maniera strand-polarizzato, suggerendo vasta 5&#39; a 3&#39; resezione, seguita dalla restaurazione del DNA resecato allo stato double-strand. Concludiamo che cromosomiche DSB lungo resecate estremit&agrave; sono riparate da un oligonucleotide di DNA single-strand attraverso due cicli di ricottura. La riparazione di DNA single-strand pu&ograve; essere conservativa e pu&ograve; permettere per il restauro accurato di DNAs cromosomica con DSBs ravvicinati.

Riparazione conservatore di un double-strand break cromosomico DNA single-strand attraverso due fasi di ricottura.

&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#xFF08;DSB&#x304C;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306F;&#x3001;DSB&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x666E;&#x904D;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;DSB&#x306E;&#x4E21;&#x5074;&#x306B;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;Saccharomyces cerevisiae&#x3067;&#x306E;DSB&#x4FEE;&#x5FA9;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x63A2;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x6307;&#x5411;&#x6027;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x304C;&#x7D4C;&#x7531;&#x3057;&#x3066;&#x6392;&#x4ED6;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;Rad52&#x3068;Rad59&#x4EF2;&#x4ECB;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#xFF08;SSA&#xFF09;&#x306F;&#x30A2;&#x30CB;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;&#x3067;&#x3082;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;Rad52&#x306E;SSA&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;null&#x306E;rad52&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x88DC;&#x6027;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306F;Rad51&#x306E;&#x4E3B;&#x5C0E;&#x306E;&#x9396;&#x4FB5;&#x5165;&#x3092;&#x4F34;&#x308F;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3082;&#x9396;&#x4FB5;&#x5165;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3067;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002; DSB&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306F;&#x3001;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3067;&#x30D6;&#x30EC;&#x30FC;&#x30AF;&#x304B;&#x3089;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x8DDD;&#x96E2;&#xFF08;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;20&#x30AD;&#x30ED;&#x30D0;&#x30A4;&#x30C8;&#xFF09;&#x3067;&#x30D6;&#x30EC;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x7247;&#x5074;&#x3060;&#x3051;&#x306B;&#x76F8;&#x540C;&#x306A;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6A19;&#x7684;&#x5E83;&#x7BC4;5&#x793A;&#x5506;&#x5207;&#x9664; &#x26;#39;&#x304B;&#x3089;3&#x26;#39;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x5207;&#x9664;&#x3057;&#x305F;DNA&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x9577;&#x3044;&#x5207;&#x9664;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;DSB&#x672B;&#x7AEF;&#x304C;&#x30A2;&#x30CB;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;2&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3067;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;DNA&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;DNA&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4FEE;&#x7406;&#x306F;&#x3001;&#x4FDD;&#x5B88;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x9593;&#x9694;&#x306E;DSB&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;DNA&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x200B;&#x200B;&#x306A;&#x5FA9;&#x5143;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;

&#x30A2;&#x30CB;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;2&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;DNA&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B88;&#x4FEE;&#x7406;

&#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xB098;&#xB204;&#xAE30; (DSBs)&#xC758; &#xC218;&#xB9AC; &#xC815;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xBA70; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; DSB &#xC218;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xD3B8;&#xC801;&#xC778; &#xACFC;&#xC815; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; oligonucleotides homology&#xB97C; DSB&#xC758; &#xC591;&#xCABD; &#xBAA8;&#xB450;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB204; &#xB8E9; Saccharomyces cerevisiae&#xC758; DSB &#xBCF5;&#xAD6C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD0D0;&#xD5D8;. &#xC218;&#xB9AC; oligonucleotide &#xAC10;&#xB3C5; (SSA)&#xB97C; &#xC5B4; &#xB2D0; &#xB9C1; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; Rad52 Rad59 &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB3C5;&#xC810;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2EC;&#xC9C0;&#xC5B4; &#xC778;&#xAC04; rad52&#xC758; &#xD2B9;&#xC218; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; null rad52 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB300; &#xD55C; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC778; &#xBCF4;&#xC644;&#xC131; &#xC81C;&#xACF5;. &#xBCF5;&#xAD6C; Rad51 &#xAD6C;&#xB3D9; &#xAC00;&#xB2E5; &#xCE68;&#xACF5;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xAC00;&#xB2E5; &#xCE68;&#xB7B5; &#xC5B5;&#xC81C; oligonucleotides &#xC218;&#xB9AC; &#xC99D;&#xAC00;. DSB oligonucleotides &#xB300;&#xD615; &#xD734;&#xC2DD;&#xC758; &#xB3D9;&#xC885;&#xC744; &#xD55C; &#xCABD; &#xAC00;&#xB2E5; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD734;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; (&#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 20 kb) &#xAC70;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC81C;&#xC548; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; 5&#39; 3&#39; &#xC808;&#xC81C;, &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC808;&#xC81C; DNA &#xBCF5;&#xC6D0; &#xB4A4;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC624;&#xB7AB;&#xB3D9;&#xC548; &#xC808;&#xC81C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; DSB &#xB05D; &#xC5B4; &#xB2D0; &#xB9C1; &#xD558;&#xB294; 2 &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; DNA oligonucleotide&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xB9AC;&#xB294; &#xACB0;&#xB860;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; DNA&#xB85C; &#xC218;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xC218; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; Dnas&#xC640; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC04;&#xACA9; &#xB454;&#xB41C; Dsbs&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC5B4; &#xB2D0; &#xB9C1;&#xC758; &#xB450; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; DNA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xD734;&#xC2DD;&#xC758; &#xBCF4;&#xC218; &#xC218;&#xB9AC;.

La reparaci&#xF3;n de los cromosomas de doble hebra se rompe (DSBs) es esencial para el crecimiento celular normal, y la recombinaci&#xF3;n hom&#xF3;loga es un proceso universal para la reparaci&#xF3;n del OSD. Hemos estudiado los mecanismos de reparaci&#xF3;n del OSD en la levadura Saccharomyces cerevisiae utilizando un solo filamento de oligonucle&#xF3;tidos con homolog&#xED;a a ambos lados de un OSD. Dirigida a oligonucle&#xF3;tidos de reparaci&#xF3;n se produjo exclusivamente a trav&#xE9;s de Rad52 y Rad59 mediada por una sola l&#xED;nea de recocido (SSA). Incluso el dominio de la SSA de los derechos humanos Rad52 siempre complementaci&#xF3;n parcial para un nulo rad52 mutaci&#xF3;n. La reparaci&#xF3;n no implicaba Rad51 impulsada invasi&#xF3;n hebra, y adem&#xE1;s, la supresi&#xF3;n de la invasi&#xF3;n hebra aumentado reparaci&#xF3;n con oligonucle&#xF3;tidos. Un OSD se muestra para activar la orientaci&#xF3;n por oligonucle&#xF3;tidos hom&#xF3;loga a un solo lado de la ruptura a grandes distancias (al menos 20 kb) de la ruptura de una manera hebra de polarizaci&#xF3;n, lo que sugiere una amplia 5 &#x26;#39;a 3&#x26;#39; resecci&#xF3;n, seguido por la restauraci&#xF3;n de resecado de ADN para el estado de doble hebra. Llegamos a la conclusi&#xF3;n de que a largo resecados cromos&#xF3;micas extremos del OSD son reparados por un solo cap&#xED;tulo de oligonucle&#xF3;tidos de ADN a trav&#xE9;s de dos rondas de recocido. La reparaci&#xF3;n de ADN de cadena sencilla, puede ser conservador y puede permitir la restauraci&#xF3;n exacta del ADN cromos&#xF3;mico con DSBs poco espaciados.

Reparaci&#xF3;n de un conservador cromos&#xF3;mico de doble filamento romper por cadenas simples de ADN-en los dos pasos de recocido

RNA &#x53EF;&#x4EE5;&#x5145;&#x5F53;&#x5728;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x53CA;&#x53CD;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x7684;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x4F38;&#x957F;&#x7387;&#x7684;&#x7AEF;&#x7C92; DNA &#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x6A21;&#x677F;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5176;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E30;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x4E00;&#x76F4;&#x6CA1;&#x6709; RNA &#x4F5C;&#x4E3A;&#x6A21;&#x677F;&#x4E2D;&#x7684;&#x4EFB;&#x4F55;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7684; DNA &#x75C5;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; DNA &#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2; &#xFF08;DSBs&#xFF09;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x901A;&#x8FC7;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x6216;&#x975E;&#x540C;&#x6E90;&#x672B;&#x7AEF;&#x52A0;&#x5165;&#x4FEE;&#x590D;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x751F;&#x7269;&#x4FEE;&#x590D;&#x76F4;&#x63A5;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;DSB &#x4E24;&#x7AEF;&#x7684;&#x975E;&#x540C;&#x6E90;&#x52A0;&#x5165;&#x4E2D;&#x51FA;&#x73B0;&#x8FC7; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x3001; &#x4E0B;&#x5217;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x5F62;&#x6210;&#x4E92;&#x8865;&#x7684; DNA&#xFF0C;RNA &#x7684;&#x95F4;&#x63A5;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#xFF0C;&#x5728;&#x54EA;&#x4E2A;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x662F;&#x6709;&#x6548;&#x7387;&#x7684; RNA &#x662F;&#x6240;&#x793A;&#x6765;&#x8C03;&#x89E3;&#x91CD;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4EC5;&#x9650;&#x4E8E;&#x95F4;&#x63A5;&#x901A;&#x8FC7; cDNA &#x4E2D;&#x95F4;&#x7531; Ty &#x53CD;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x5728; Ty &#x7C92;&#x5B50;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x4E2D;&#x7684;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x9176;&#x529F;&#x80FD;&#x751F;&#x6210;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x914D;&#x5BF9;&#x53CC;&#x9762; DNA &#x548C;&#x5355;&#x94FE; (ss) RNA &#x4E4B;&#x95F4;&#x53EF;&#x4EE5;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x9075;&#x5B88;&#x76F4;&#x63A5;&#x540C;&#x6E90;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x4EA4;&#x6D41; RNA &#x548C; DNA &#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A; RNA &#x53EF;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9175;&#x6BCD;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; DSB &#x4FEE;&#x590D;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684; DNA &#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x6A21;&#x677F;&#x3002;&#x4FEE;&#x590D;&#x5B8C;&#x6210;&#x4E86; RNA &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5BF9;&#x65AD;&#x5934;&#x7684;&#x8865;&#x5145;&#x3002;&#x8FD9;&#x548C;&#x751A;&#x81F3;&#x9175;&#x6BCD;&#x590D;&#x5236; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; &alpha; &#x548C;&#x4E09;&#x89D2;&#x6D32;&#x7B49;&#x53EF;&#x4EE5;&#x590D;&#x5236;&#x77ED; RNA &#x6A21;&#x677F;&#x5927;&#x7247;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x89C2;&#x5BDF;&#x8868;&#x660E; RNA &#x53EF;&#x4EE5;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x4F53;&#x5185;&#x901A;&#x8FC7;&#x76F4;&#x63A5;&#x540C;&#x6E90;&#x4E92;&#x52A8;&#x4E0E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; DNA &#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;

RNA &#x6A21;&#x677F; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x3002;

RNA can act as a template for DNA synthesis in the reverse transcription of retroviruses and retrotransposons and in the elongation of telomeres. Despite its abundance in the nucleus, there has been no evidence for a direct role of RNA as a template in the repair of any chromosomal DNA lesions, including DNA double-strand breaks (DSBs), which are repaired in most organisms by homologous recombination or by non-homologous end joining. An indirect role for RNA in DNA repair, following reverse transcription and formation of a complementary DNA, has been observed in the non-homologous joining of DSB ends. In the yeast Saccharomyces cerevisiae, in which homologous recombination is efficient, RNA was shown to mediate recombination, but only indirectly through a cDNA intermediate generated by the reverse transcriptase function of Ty retrotransposons in Ty particles in the cytoplasm. Although pairing between duplex DNA and single-strand (ss)RNA can occur in vitro and in vivo, direct homologous exchange of genetic information between RNA and DNA molecules has not been observed. We show here that RNA can serve as a template for DNA synthesis during repair of a chromosomal DSB in yeast. The repair was accomplished with RNA oligonucleotides complementary to the broken ends. This and the observation that even yeast replicative DNA polymerases such as alpha and delta can copy short RNA template tracts in vitro demonstrate that RNA can transfer genetic information in vivo through direct homologous interaction with chromosomal DNA.

RNA-templated DNA repair.

ARN peut agir comme une matrice pour la synth&#xE8;se d&#x26;#39;ADN dans la transcription inverse de r&#xE9;trovirus et r&#xE9;trotransposons et de l&#x26;#39;allongement des t&#xE9;lom&#xE8;res. Malgr&#xE9; son abondance dans le noyau, il n&#x26;#39;y a eu aucune preuve d&#x26;#39;un r&#xF4;le direct de l&#x26;#39;ARN comme un mod&#xE8;le dans la r&#xE9;paration des l&#xE9;sions de l&#x26;#39;ADN chromosomique, y compris d&#x26;#39;ADN double-brin (CDB), qui sont r&#xE9;par&#xE9;s dans la plupart des organismes ou par recombinaison homologue par des non-homologue fin de rejoindre. Un r&#xF4;le indirect de l&#x26;#39;ARN dans la r&#xE9;paration de l&#x26;#39;ADN, &#xE0; la suite de la transcription inverse et la formation d&#x26;#39;un ADN compl&#xE9;mentaire, a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9; dans le non-homologue de rejoindre des extr&#xE9;mit&#xE9;s ORD. Dans la levure Saccharomyces cerevisiae, dans lequel la recombinaison homologue est efficace, l&#x26;#39;ARN a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; &#xE0; la m&#xE9;diation de recombinaison, mais seulement indirectement par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire d&#x26;#39;un ADNc interm&#xE9;diaire g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; par la fonction de la transcriptase inverse des r&#xE9;trotransposons Ty Ty dans les particules dans le cytoplasme. Bien que le jumelage entre l&#x26;#39;ADN double brin et simple brin (ss) ARN peut se produire in vitro et in vivo, directement homologue d&#x26;#39;&#xE9;change d&#x26;#39;information g&#xE9;n&#xE9;tique entre mol&#xE9;cules d&#x26;#39;ARN et d&#x26;#39;ADN n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e. Nous montrons ici que l&#x26;#39;ARN peut servir de matrice pour la synth&#xE8;se d&#x26;#39;ADN lors de la r&#xE9;paration d&#x26;#39;une chromosomique ORD dans la levure. La r&#xE9;paration a &#xE9;t&#xE9; accompli avec des oligonucl&#xE9;otides d&#x26;#39;ARN compl&#xE9;mentaires aux extr&#xE9;mit&#xE9;s bris&#xE9;es. Ceci et l&#x26;#39;observation que m&#xEA;me polym&#xE9;rases r&#xE9;plicatives d&#x26;#39;ADN de levure tels que l&#x26;#39;alpha et delta pouvez copier de courtes voies matrice d&#x26;#39;ARN in vitro d&#xE9;montrent que l&#x26;#39;ARN peut transf&#xE9;rer l&#x26;#39;information g&#xE9;n&#xE9;tique in vivo par le biais directe homologue interaction avec l&#x26;#39;ADN chromosomique.

R&#xE9;paration de l&#x26;#39;ADN ARN-bas&#xE9; sur un mod&#xE8;le

RNA kann als Vorlage f&uuml;r die DNA-Synthese in der R&uuml;ck&uuml;bertragung von Retroviren und Retrotransposons und die Verl&auml;ngerung der Telomere fungieren. Trotz seiner F&uuml;lle im Zellkern gab es keine Beweise f&uuml;r eine direkte Rolle der RNA als Vorlage in der Reparatur chromosomale DNA-L&auml;sionen, inklusive DNA Doppel-Strang Pausen (DSBs), die in den meisten Organismen durch homologe Rekombination oder durch den Beitritt von nicht-homologe Ende repariert werden. Eine indirekte Rolle f&uuml;r RNA in DNA Reparatur, folgenden reverse Transkription und Bildung von einer cDNA wurde beobachtet, bei der nicht-homologe Verkn&uuml;pfung der DSB enden. In der Hefe Saccharomyces Cerevisiae in denen homologe Rekombination effizient ist, RNA hat gezeigt, Rekombination zu vermitteln, aber nur indirekt &uuml;ber eine cDNA Mittelstufe von der reversen Transkriptase-Funktion von Ty-Retrotransposons Ty Partikel im Zytoplasma generiert. Obwohl die Paarung zwischen duplex DNA und Single-Strand (ss) RNA in vitro und in vivo auftreten kann, hat direkten homologe Austausch von Erbinformationen zwischen RNA und DNA-Molek&uuml;le nicht beobachtet. Hier zeigen wir, dass RNA w&auml;hrend der Reparatur von einem chromosomalen DSB in der Hefe als Vorlage f&uuml;r die DNA-Synthese dienen kann. Die Reparatur wurde mit RNA-Oligonukleotide komplement&auml;r zu den gebrochenen enden erreicht. Dies und die Beobachtung, dass sogar Hefe replicative DNA-Polymerasen wie Alpha und Delta kurze RNA-Vorlage-Traktate in-vitro-kopieren k&ouml;nnen zeigen, dass genetischen Information in-vivo durch direkte homologe Interaktion mit chromosomaler DNA RNA &uuml;bertragen werden kann.

RNA-Vorlage gebildeten DNA-Reparatur.

RNA pu&ograve; agire come un modello per la sintesi del DNA, la trascrizione inversa dei retrovirus e retrotrasposoni e l&#39;allungamento dei telomeri. Nonostante la sua abbondanza nel nucleo, c&#39; non &egrave; stata alcuna prova per un ruolo diretto di RNA come modello la riparazione di eventuali lesioni del DNA cromosomici, compresi la interruzioni di double-strand DNA (DSBs), che sono riparati nella maggior parte degli organismi di ricombinazione omologa o unendo le estremit&agrave; non omologhe. Un ruolo indiretto per il RNA in DNA repair, seguente trascrizione d&#39;inversione e formazione di un DNA complementare, &egrave; stata osservata nell&#39;Unione non omologhe di estremit&agrave; DSB. Nel lievito Saccharomyces cerevisiae, in cui ricombinazione omologa &egrave; efficiente, RNA &egrave; stato indicato per mediare la ricombinazione, ma solo indirettamente attraverso un intermedio di cDNA generato dalla funzione reverse transcriptase di retrotrasposoni Ty Ty particelle nel citoplasma. Anche se l&#39;appaiamento tra DNA duplex e single-strand (ss) RNA pu&ograve; verificarsi in vitro e in vivo, scambio diretto omologo dell&#39;informazione genetica tra molecole di RNA e DNA non &egrave; stato osservato. Mostriamo qui che RNA pu&ograve; servire come modello per la sintesi del DNA durante la riparazione di un DSB cromosomiche in lievito. La riparazione &egrave; stata compiuta con oligonucleotidi da RNA complementare alle estremit&agrave; rotta. Questo e l&#39;osservazione che anche lievito replicative DNA polimerasi come alfa e delta possono copiare brevi tratti di modello di RNA in vitro dimostrano che il RNA pu&ograve; trasferire informazioni genetiche in vivo attraverso la diretta interazione omologo con DNA cromosomico.

Riparazione del DNA RNA-basato su modelli.

RNA&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3084;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x306E;&#x9006;&#x8EE2;&#x5199;&#x3068;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x306E;&#x4F38;&#x9577;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;DNA&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x92F3;&#x578B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6838;&#x5185;&#x306B;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x306B;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;DNA&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#xFF08;DSB&#x304C;&#xFF09;&#x3001;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306B;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;RNA&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x304B;&#x975E;&#x76F8;&#x540C;&#x672B;&#x7AEF;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3002;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;DNA&#x306E;&#x9006;&#x8EE2;&#x5199;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5F62;&#x6210;&#x5F8C;&#x306B;DNA&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;RNA&#x306E;&#x9593;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x76F8;&#x540C;DSB&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x63A5;&#x5408;&#x306B;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;Saccharomyces cerevisiae&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x304C;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;RNA&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x9593;&#x63A5;&#x7684;&#x306B;&#x3057;&#x304B;cDNA&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5185;&#x306E;Ty&#x306E;&#x7C92;&#x5B50;&#x3067;&#x306F;Ty&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x306E;&#x9006;&#x8EE2;&#x5199;&#x9175;&#x7D20;&#x95A2;&#x6570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002; RNA&#x306F;&#x3001;in vitro&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;DNA&#x3068;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#xFF08;ss&#xFF09;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x3001;RNA&#x3068;DNA&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x9593;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x60C5;&#x5831;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x4EA4;&#x63DB;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;RNA&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;DSB&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x4E2D;&#x306B;&#x3001;DNA&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x92F3;&#x578B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4FEE;&#x7406;&#x306F;&#x58CA;&#x308C;&#x305F;&#x4E21;&#x7AEF;&#x306B;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;RNA&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3067;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3068;&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3082;&#x9175;&#x6BCD;&#x8907;&#x88FD;DNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x77ED;&#x3044;RNA&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x7BA1;&#x3092;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306F;&#x3001;RNA&#x304C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;DNA&#x3068;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x540C;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x8EE2;&#x9001;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

RNA&#x92F3;&#x578B;DNA&#x4FEE;&#x5FA9;

RNA&#xB294; DNA &#xD569;&#xC131; retroviruses &#xBC0F; retrotransposons&#xC758; &#xBC18;&#xC804; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xBC0F; telomeres&#xC758; &#xC5F0;&#xC2E0; &#xC728;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD575;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD48D;&#xC694;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB610;&#xB294; &#xBE44; &#xB3D9;&#xC885; &#xB05D;&#xC5D0; &#xD569;&#xB958; &#xD558; &#xC5EC; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xB9AC;&#xB294; DNA &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xB098;&#xB204;&#xAE30; (DSBs)&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; DNA &#xC7A5;&#xC560;&#xC758; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF;&#xC73C;&#xB85C; RNA&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xAC00; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. DNA &#xC218;&#xB9AC;, &#xB2E4;&#xC74C; &#xBC18;&#xC804; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xBC0F; &#xBCF4;&#xC644; DNA&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; RNA&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560; DSB &#xB05D;&#xC758; &#xBE44; &#xB3D9;&#xC885; &#xD569;&#xB958;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6A8; &#xBAA8; Saccharomyces cerevisiae&#xC5D0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778;&#xB294; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC5D0; RNA&#xB294; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;, &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C;&#xC5D0; &#xC911;&#xAC04; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC785;&#xC790; &#xD0C0;&#xC774; &#xD0C0;&#xC774; retrotransposons&#xC758; &#xC5ED;&#xC804;&#xC0AC; &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; Cdna&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;. &#xC774;&#xC911; DNA &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; (ss) RNA&#xC640; &#xD398;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xBE44;&#xB85D; &#xC9C1;&#xC811; &#xB3D9;&#xC885; RNA&#xC640; DNA &#xBD84;&#xC790; &#xAC04;&#xC758; &#xC720;&#xC804; &#xC815;&#xBCF4; &#xAD50;&#xD658;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xC9C0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; RNA &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; DSB&#xC758; &#xC218;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; DNA &#xC885;&#xD569;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xC218;&#xB9AC;&#xB294; RNA oligonucleotides &#xAE68;&#xC9C4;&#xB41C; &#xB05D;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC644;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACE0; &#xC54C;&#xD30C;&#xC640; &#xB378;&#xD0C0; &#xB4F1;&#xB3C4; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC77C;&#xCC28; DNA &#xD3F4; &#xCCB4; &#xC678; &#xC9E7;&#xC740; RNA &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; &#xCC45;&#xC790;&#xB97C; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAD00;&#xCC30; &#xBCF4;&#xC5EC; RNA &#xC720;&#xC804; &#xC815;&#xBCF4; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; DNA&#xC640; &#xC9C1;&#xC811; &#xB3D9;&#xC885; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC1A1;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RNA &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; DNA &#xC218;&#xB9AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

ARN puede actuar como una plantilla para la s&#xED;ntesis de ADN en la transcripci&#xF3;n reversa de los retrovirus y retrotransposones y en el alargamiento de los tel&#xF3;meros. A pesar de su abundancia en el n&#xFA;cleo, no ha habido ninguna evidencia de un papel directo de RNA como una plantilla en la reparaci&#xF3;n de las lesiones de ADN cromos&#xF3;mico, incluyendo ADN de doble hebra se rompe (DSBs), que son reparados en la mayor&#xED;a de los organismos por recombinaci&#xF3;n hom&#xF3;loga o por no unirse a fin hom&#xF3;loga. Un papel indirecto para el ARN en la reparaci&#xF3;n del ADN, despu&#xE9;s de la transcripci&#xF3;n reversa y la formaci&#xF3;n de un ADN complementario, se ha observado en la no hom&#xF3;loga uni&#xF3;n de los extremos del OSD. En la levadura Saccharomyces cerevisiae, en el que la recombinaci&#xF3;n hom&#xF3;loga es eficiente, el RNA se muestra para mediar la recombinaci&#xF3;n, pero s&#xF3;lo indirectamente a trav&#xE9;s de un ADNc intermedio generado por la funci&#xF3;n de la transcriptasa inversa de retrotransposones Ty en part&#xED;culas Ty en el citoplasma. Aunque el emparejamiento entre d&#xFA;plex de ADN y de un solo filamento-(ss) ARN puede producirse in vitro e in vivo, directo hom&#xF3;loga intercambio de informaci&#xF3;n gen&#xE9;tica entre el ARN y mol&#xE9;culas de ADN no se ha observado. Se demuestra aqu&#xED; que el ARN puede servir como una plantilla para la s&#xED;ntesis de ADN durante la reparaci&#xF3;n de un cromos&#xF3;mico OSD en la levadura. La reparaci&#xF3;n se llev&#xF3; a cabo con oligonucle&#xF3;tidos de ARN complementarios a los extremos rotos. Esto y la observaci&#xF3;n de que incluso la levadura ADN polimerasas replicativas como el alfa y delta puede copiar cortos tramos de la plantilla de ARN in vitro demuestran que el ARN puede transferir la informaci&#xF3;n gen&#xE9;tica en vivo a trav&#xE9;s de la interacci&#xF3;n directa hom&#xF3;loga con el ADN cromos&#xF3;mico.

ARN-ADN plantilla de reparaci&#xF3;n

&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4EE3;&#x8868;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x4FEE;&#x6539;&#x6700;&#x591A;&#x624D;&#x591A;&#x827A;&#x548C;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x5408;&#x6210;&#x5927;&#x91CF;&#xFF0C;&#x514D;&#x9664;&#x8D39;&#x529B;&#x514B;&#x9686;&#x3001; &#x4F53;&#x5916;&#x8BF1;&#x53D8;&#x548C;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x77ED;&#x6838;&#x9178;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x5229;&#x7528;&#x4F53;&#x5185;&#x81F4;&#x7A81;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5230;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x7531;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684; DNA &#x6B8B;&#x7559;&#x53EA;&#xFF0C;&#x6216;&#x5E76;&#x5165;&#x53CC;&#x53D1;&#x5939;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684; DNA &#x4E0E;&#x4E92;&#x8865;&#x7684; RNA &#x9053; (&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#xFF09;&#x3002;&#x4EBA;&#x4EEC;&#x666E;&#x904D;&#x8BA4;&#x4E3A; DNA &#x62C9;&#x4F38;&#x7684;&#x804C;&#x80FD;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x7EA0;&#x6B63;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x53D8;&#x66F4;&#x3001; RNA &#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x5728;&#x51FA;&#x73B0;&#x65F6;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x7A33;&#x5B9A;&#x53CC;&#x5DE5;&#x3002;RNA &#x7684;&#x57FA;&#x5730;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; RNA &#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x76F4;&#x63A5;&#x548C;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4FEE;&#x6539;&#x548C;&#x91CD;&#x6784;&#x3002;&#x5236;&#x8BA2;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5229;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x72EC;&#x7279;&#x7684; RNA &#x529F;&#x80FD;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EA7;&#x751F;&#x91CD;&#x8981;&#x5F71;&#x54CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x6253;&#x9776;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x8003;&#x8651;&#x5230;&#x53EF;&#x76F4;&#x63A5;&#x5728;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x5730;&#x901A;&#x8FC7;&#x8F6C;&#x5F55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E2D;&#x751F;&#x6210;&#x6A21;&#x4EFF; RNA &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684; RNA &#x5206;&#x5B50;&#x3002;

RNA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; DNA &#x4FEE;&#x6539;&#x548C; RNA &#x6A21;&#x677F; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x3002;

Oligonucleotides represent the most versatile and high-throughput tool for introducing specific modifications in the genome of living cells. These short nucleic acid molecules can be designed and synthesized in large amounts, dispensing with laborious cloning, in vitro mutagenesis and extensive sequencing procedures. Oligonucleotides, which are utilized for in vivo mutagenesis in organisms ranging from bacteria to mammalian cells, are composed of DNA residues only, or DNA with a complementary RNA tract (chimeras) folded into a double hairpin structure. It is generally believed that the DNA stretch functions to correct the genomic alteration, while the RNA part, when present, serves to stabilize the duplex. RNA bases, as well as RNA molecules, can also have a direct and active role in genome modification and remodeling. The development of strategies that can exploit such unique RNA functions may have important implications in gene targeting and gene therapy, especially considering that RNA molecules mimicking RNA oligonucleotides could be generated directly in the nucleus of targeted cells via transcription from viral vectors.

RNA-mediated DNA modifications and RNA-templated DNA repair.

Oligonucl&#xE9;otides repr&#xE9;sentent l&#x26;#39;outil le plus polyvalent et haut d&#xE9;bit pour l&#x26;#39;introduction de modifications sp&#xE9;cifiques dans le g&#xE9;nome de cellules vivantes. Ces mol&#xE9;cules courtes d&#x26;#39;acides nucl&#xE9;iques peut &#xEA;tre con&#xE7;u et synth&#xE9;tis&#xE9; en grande quantit&#xE9;, de distribution avec le clonage laborieuse, la mutagen&#xE8;se in vitro et les proc&#xE9;dures de s&#xE9;quen&#xE7;age &#xE0; grande. Oligonucl&#xE9;otides, qui sont utilis&#xE9;s pour la mutagen&#xE8;se in vivo dans les organismes allant des bact&#xE9;ries aux cellules de mammif&#xE8;res, sont compos&#xE9;s de r&#xE9;sidus d&#x26;#39;ADN seulement, ou de l&#x26;#39;ADN avec une compl&#xE9;mentarit&#xE9; des voies d&#x26;#39;ARN (chim&#xE8;res) pli&#xE9;e en une structure en &#xE9;pingle &#xE0; cheveux double. Il est g&#xE9;n&#xE9;ralement admis que les fonctions extensibles ADN afin de corriger l&#x26;#39;alt&#xE9;ration g&#xE9;nomique, tandis que la partie ARN, lorsqu&#x26;#39;ils sont pr&#xE9;sents, sert &#xE0; stabiliser le duplex. Bases de l&#x26;#39;ARN, ainsi que des mol&#xE9;cules d&#x26;#39;ARN, peuvent &#xE9;galement avoir un r&#xF4;le direct et actif dans la modification du g&#xE9;nome et le remodelage. L&#x26;#39;&#xE9;laboration de strat&#xE9;gies qui peuvent exploiter ces fonctions uniques d&#x26;#39;ARN peuvent avoir des implications importantes dans le ciblage de g&#xE8;nes et la th&#xE9;rapie g&#xE9;nique, en particulier &#xE9;tant donn&#xE9; que les mol&#xE9;cules d&#x26;#39;ARN mimant des oligonucl&#xE9;otides d&#x26;#39;ARN pourraient &#xEA;tre cr&#xE9;&#xE9;s directement dans le noyau des cellules cibl&#xE9;es par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire de la transcription &#xE0; partir des vecteurs viraux.

Modifications de l&#x26;#39;ADN ARN-ARN-m&#xE9;diation et bas&#xE9; sur des mod&#xE8;les r&#xE9;paration de l&#x26;#39;ADN

Oligonukleotide repr&auml;sentieren das vielseitigste und Hochdurchsatz-Werkzeug f&uuml;r bestimmte &Auml;nderungen im Genom von lebenden Zellen. Diese kurze Nukleins&auml;ure-Molek&uuml;le k&ouml;nnen entwickelt und in gro&szlig;en Mengen, Verzicht auf aufw&auml;ndige Klonen, in-vitro-Mutagenese und umfangreiche Sequenzierung Verfahren synthetisiert werden. Oligonukleotide, die f&uuml;r in-vivo Mutagenese in Organismen, die von Bakterien bis hin zu den S&auml;ugetier-Zellen genutzt werden, bestehen aus DNA R&uuml;ckst&auml;nde nur oder DNA mit einem komplement&auml;ren RNA-Trakt (Chim&auml;ren), die in eine doppelte Haarnadel-Struktur gefaltet. Es wird allgemein angenommen, dass die DNA-Strecken-Funktionen die genomische Ver&auml;nderung, w&auml;hrend der RNA-Teil, sofern vorhanden, zu korrigieren dient zur Stabilisierung des Duplex. RNA-Basen sowie RNA-Molek&uuml;le, k&ouml;nnen auch eine direkte und aktive Rolle im Genom &Auml;nderung und Umbau haben. Die Entwicklung von Strategien, die diese einzigartigen RNA-Funktionen zu nutzen, k&ouml;nnen m&ouml;glicherweise erhebliche Auswirkungen in Gene targeting und Gentherapie, besonders wenn man bedenkt, dass RNA-Molek&uuml;le, die Nachahmung von RNA-Oligonukleotide direkt in den Zellkern von gezielten Zellen &uuml;ber Transkription von viralen Vektoren erzeugt werden konnten.

RNA-vermittelte DNA-Modifikationen und RNA-Vorlage gebildeten DNA-Reparatur.

Oligonucleotidi rappresentano lo strumento pi&ugrave; versatile e ad alta velocit&agrave; per l&#39;introduzione di modifiche specifiche nel genoma delle cellule viventi. Queste molecole di acido nucleico breve possono essere progettate e sintetizzate in grandi quantit&agrave;, con clonazione laborioso, mutagenesi in vitro e sequenziamento estese procedure di erogazione. Oligonucleotidi, che vengono utilizzati per la mutagenesi in vivo negli organismi, dai batteri alle cellule di mammiferi, sono costituite da residui di DNA soltanto, o DNA con un tratto di RNA complementare (chimere) piegato in una struttura di doppio tornante. Si ritiene generalmente che le funzioni di DNA stretch per correggere l&#39;alterazione genomica, mentre la parte di RNA, quando presente, serve a stabilizzare il duplex. Basi di RNA, cos&igrave; come le molecole di RNA, possono anche avere un ruolo diretto e attivo nella modifica del genoma e rimodellamento. Lo sviluppo di strategie che possono sfruttare tali funzioni uniche di RNA pu&ograve; avere importanti implicazioni nel gene targeting e terapia genica, soprattutto considerando che molecole di RNA che mimano oligonucleotidi da RNA potrebbero essere generati direttamente nel nucleo delle cellule bersaglio tramite trascrizione da vettori virali.

Le modifiche del DNA RNA-mediata e riparazione del DNA RNA-basato su modelli.

&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4E2D;&#x306B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x6C4E;&#x7528;&#x6027;&#x3068;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77ED;&#x3044;&#x6838;&#x9178;&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x3068;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30B7;&#x30FC;&#x30AF;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3067;&#x3001;&#x9AA8;&#x306E;&#x6298;&#x308C;&#x308B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x8ABF;&#x5264;&#x3001;&#x5927;&#x91CF;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x3001;&#x5408;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x304B;&#x3089;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x81F3;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x306E;in vivo&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5229;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CD;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;RNA&#x8DEF;&#xFF08;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#xFF09;&#x306E;DNA&#x306E;&#x307F;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;DNA&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; RNA&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x3001;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CD;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x3001;DNA&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x4FE1;&#x3058;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; RNA&#x62E0;&#x70B9;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;RNA&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4FEE;&#x98FE;&#x3068;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;RNA&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x6226;&#x7565;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x610F;&#x5473;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x3001;&#x7279;&#x306B;RNA&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x6A21;&#x5023;&#x3059;&#x308B;RNA&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6838;&#x5185;&#x3067;&#x76F4;&#x63A5;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x8003;&#x616E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

RNA-&#x5A92;&#x4ECB;DNA&#x306E;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3068;RNA&#x92F3;&#x578B;DNA&#x4FEE;&#x5FA9;

Oligonucleotides &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xD55C; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB2E4;&#xC7AC; &#xB2E4;&#xB2A5; &#xD558; &#xACE0; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC9E7;&#xC740; &#xD575; &#xC0B0; &#xBD84;&#xC790; &#xC124;&#xACC4; &#xD558; &#xACE0; &#xD798; &#xB4DC;&#xB294; &#xBCF5;&#xC81C;, &#xCCB4; &#xC678; mutagenesis &#xBC0F; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xC808;&#xCC28;&#xC640; &#xBD84;&#xBC30; &#xB2E4;&#xB7C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD569;&#xC131; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. In vivo mutagenesis &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAE30;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xB300; &#xD55C; &#xD65C;&#xC6A9; oligonucleotides DNA &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;, &#xAD6C;&#xC131; &#xB610;&#xB294; &#xBCF4;&#xC644;&#xC801;&#xC778; RNA&#xB85C; (&#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C;)&#xC640; DNA &#xC774;&#xC911; &#xBA38;&#xB9AC; &#xD540; &#xAD6C;&#xC870;&#xB85C; &#xC811;&#xD600;. &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; RNA &#xBD80;&#xBD84; &#xB3D9;&#xC548; genomic &#xBCC0;&#xACBD;&#xC744; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; DNA &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xCE58; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC774;&#xC911; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBBFF;&#xC5B4;&#xC9C4;&#xB2E4;. RNA &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; RNA &#xBD84;&#xC790; &#xAC8C;&#xB188; &#xC218;&#xC815; &#xBC0F; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; RNA &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC804;&#xB7B5; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;, &#xD2B9;&#xD788; RNA &#xBD84;&#xC790; RNA oligonucleotides &#xD749;&#xB0B4; &#xB0B8; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544; &#xC0AC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD575;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0DD;&#xC131; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xACE0;&#xB824;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC758;&#xBBF8; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RNA &#xC911;&#xC7AC; DNA &#xC218;&#xC815; &#xBC0F; RNA &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; DNA &#xBCF5;&#xAD6C;.

Los oligonucle&#xF3;tidos representan la herramienta m&#xE1;s vers&#xE1;til y de alto rendimiento para la introducci&#xF3;n de modificaciones espec&#xED;ficas en el genoma de las c&#xE9;lulas vivas. Estas mol&#xE9;culas cortas de &#xE1;cido nucleico puede ser dise&#xF1;ado y sintetizado en grandes cantidades, prescindiendo de la clonaci&#xF3;n laborioso, mutag&#xE9;nesis in vitro y procedimientos extensos de secuenciaci&#xF3;n. Los oligonucle&#xF3;tidos, que son utilizados para la mutag&#xE9;nesis in vivo en organismos que van desde las bacterias a las c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros, est&#xE1;n compuestos de residuos de ADN solamente, o de ADN con una complementaria tracto ARN (quimeras) doblado en una estructura de horquilla doble. Se cree generalmente que las funciones de estiramiento de ADN para corregir la alteraci&#xF3;n gen&#xF3;mica, mientras que la parte del ARN, cuando est&#xE1; presente, sirve para estabilizar el d&#xFA;plex. Bases de ARN, as&#xED; como mol&#xE9;culas de ARN, tambi&#xE9;n puede tener un papel directo y activo en la modificaci&#xF3;n del genoma y remodelaci&#xF3;n. El desarrollo de estrategias que pueden explotar estas funciones &#xFA;nicas de ARN puede tener implicaciones importantes en la orientaci&#xF3;n de genes y la terapia g&#xE9;nica, especialmente teniendo en cuenta que las mol&#xE9;culas de ARN imitan oligonucle&#xF3;tidos de ARN se podr&#xED;an generar directamente en el n&#xFA;cleo de las c&#xE9;lulas diana a trav&#xE9;s de la transcripci&#xF3;n de vectores virales.

RNA mediada por modificaciones del ADN y ARN plantilla de reparaci&#xF3;n del ADN

&#x4E3B;&#x8981;&#x7684; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x9014;&#x5F84;&#x64CD;&#x4F5C;&#x5BF9;&#x53CC;&#x94FE; DNA &#x7684;&#x635F;&#x4F24;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x635F;&#x5BB3;&#x642C;&#x8FC1;&#x540E;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6A21;&#x677F;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B8C;&#x597D;&#x7684;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x77AC;&#x6001;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; DNA &#x5355;&#x94FE;&#x5EF6;&#x4F38;&#x75C5;&#x53D8;&#x9884;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x5A01;&#x80C1;&#x5230;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x4E86;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53EF;&#x4EE5;&#x751F;&#x6210;&#x6301;&#x4E45;&#x6027;&#x7684;&#x5355;&#x94FE; DNA &#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2;&#x6216;&#x4E0A;&#x9650;&#x7684;&#x7C92;&#x65C1;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A; kilobases &#x7684;&#x840C;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x3002;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5141;&#x8BB8;&#x63A7;&#x5236;&#x5230;&#x53CC;&#x94FE;&#x72B6;&#x6001;&#x5E94;&#x7528; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x540E;&#x7684;&#x6062;&#x590D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; UV &#x706F;&#x548C;&#x7532;&#x57FA;&#x78FA;&#x9178;&#x6240;&#x81F4;&#x7684;&#x75C5;&#x53D8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5BB9;&#x5FCD;&#x7684;&#x957F;&#x5355;&#x94FE;&#x5730;&#x533A;&#xFF0C;hypermutagenic&#x3002;Hypermutability &#x6240;&#x9700;&#x589E;&#x6B96;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x6297;&#x539F; monoubiquitination&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x5F52;&#x56E0;&#x4E8E;&#x6613;&#x51FA;&#x9519;&#x7684; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; zeta translesion &#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x652F;&#x6301;&#x591A;&#x4E2A;&#x75C5;&#x53D8;&#x7684; hypermutability &#x6765;&#x6E90;&#x7684;&#x5355;&#x94FE; DNA&#xFF0C;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x5F3A;&#x70C8;&#x7684;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x5177;&#x4F53;&#x504F;&#x89C1;&#x548C;&#x610F;&#x5916;&#x9AD8;&#x9891;&#x7387;&#x7684;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E0E;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5206;&#x9694;&#x591A;&#x4E2A;&#x5206;&#x6563;&#x5728;&#x51E0;&#x4E2A; kilobases &#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;Hypermutability &#x548C;&#x77AC;&#x6001;&#x7EF5;&#x5EF6;&#x957F;&#x7684;&#x5355;&#x94FE; DNA &#x7684;&#x75C5;&#x53D8;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x764C;&#x53D8;&#x7684;&#x6765;&#x6E90;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x8FDB;&#x5316;&#x4E2D;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x4F18;&#x52BF;&#x3002;

Hypermutability &#x7684;&#x5DF2;&#x635F;&#x574F;&#x7684;&#x5355;&#x94FE; DNA &#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x4E0A;&#x9650;&#x7AEF;&#x7C92;&#x9175;&#x6BCD;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x3002;

The major DNA repair pathways operate on damage in double-strand DNA because they use the intact strand as a template after damage removal. Therefore, lesions in transient single-strand stretches of chromosomal DNA are expected to be especially threatening to genome stability. To test this hypothesis, we designed systems in budding yeast that could generate many kilobases of persistent single-strand DNA next to double-strand breaks or uncapped telomeres. The systems allowed controlled restoration to the double-strand state after applying DNA damage. We found that lesions induced by UV-light and methyl methanesulfonate can be tolerated in long single-strand regions and are hypermutagenic. The hypermutability required PCNA monoubiquitination and was largely attributable to translesion synthesis by the error-prone DNA polymerase zeta. In support of multiple lesions in single-strand DNA being a source of hypermutability, analysis of the UV-induced mutants revealed strong strand-specific bias and unexpectedly high frequency of alleles with widely separated multiple mutations scattered over several kilobases. Hypermutability and multiple mutations associated with lesions in transient stretches of long single-strand DNA may be a source of carcinogenesis and provide selective advantage in adaptive evolution.

Hypermutability of damaged single-strand DNA formed at double-strand breaks and uncapped telomeres in yeast Saccharomyces cerevisiae.

Les principales voies r&#xE9;paration de l&#x26;#39;ADN fonctionnent sur des dommages dans l&#x26;#39;ADN double-brin, car ils utilisent le brin intact comme un mod&#xE8;le apr&#xE8;s l&#x26;#39;enl&#xE8;vement des dommages. Par cons&#xE9;quent, les l&#xE9;sions de transitoires simple brin de l&#x26;#39;ADN chromosomique tron&#xE7;ons devraient &#xEA;tre particuli&#xE8;rement mena&#xE7;ant pour la stabilit&#xE9; du g&#xE9;nome. Pour tester cette hypoth&#xE8;se, nous avons con&#xE7;u des syst&#xE8;mes de levure bourgeonnante qui pourrait g&#xE9;n&#xE9;rer beaucoup de kilobases persistante ADN simple brin &#xE0; c&#xF4;t&#xE9; de cassures double-brin ou t&#xE9;lom&#xE8;res non plafonn&#xE9;s. Les syst&#xE8;mes de permis de restauration contr&#xF4;l&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tat double brin apr&#xE8;s l&#x26;#39;application de dommages &#xE0; l&#x26;#39;ADN. Nous avons constat&#xE9; que les l&#xE9;sions induites par la lumi&#xE8;re UV m&#xE9;thanesulfonate de m&#xE9;thyle peut &#xEA;tre tol&#xE9;r&#xE9;e dans de longues r&#xE9;gions simple brin et sont hypermutagenic. Le hypermutabilit&#xE9; n&#xE9;cessaire monoubiquitination PCNA et &#xE9;tait en grande partie attribuable &#xE0; la synth&#xE8;se trans par le error-prone l&#x26;#39;ADN polym&#xE9;rase zeta. &#xC0; l&#x26;#39;appui de l&#xE9;sions multiples dans un seul brin d&#x26;#39;ADN &#xE9;tant une source de hypermutabilit&#xE9;, l&#x26;#39;analyse des mutants induites par les UV a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; une forte volet sp&#xE9;cifique biais et de la fr&#xE9;quence &#xE9;tonnamment &#xE9;lev&#xE9;e d&#x26;#39;all&#xE8;les avec tr&#xE8;s &#xE9;loign&#xE9;es les unes des mutations multiples dispers&#xE9;es sur plusieurs kilobases. Hypermutabilit&#xE9; et de multiples mutations associ&#xE9;es &#xE0; des l&#xE9;sions &#xE9;tendues dans transitoires de longue simple brin d&#x26;#39;ADN peut &#xEA;tre une source de la canc&#xE9;rogen&#xE8;se et de fournir un avantage s&#xE9;lectif dans l&#x26;#39;&#xE9;volution adaptative.

Hypermutabilit&#xE9; de endommag&#xE9; simple brin d&#x26;#39;ADN Form&#xE9; &#xE0; des cassures double brin et les t&#xE9;lom&#xE8;res non plafonn&#xE9;s dans la levure Saccharomyces cerevisiae

Die gro&szlig;en DNA-Reparatur-Wege operieren Schaden in Doppel-Strang DNA weil sie nach Beseitigung der Sch&auml;den den intakten Strang als Vorlage verwenden. Daher d&uuml;rften L&auml;sionen im transienten Single-Strand erstreckt sich von chromosomaler DNA Genom-Stabilit&auml;t besonders bedrohlich sein. Um diese Hypothese zu testen, haben wir Systeme in Knospen Hefe, die viele Kilobases persistente Single-Strand DNA neben Doppel-Einzelstrangbr&uuml;chen oder unbeschr&auml;nkt Telomere generieren konnte entwickelt. Die Systeme erlaubt kontrollierte Wiederherstellung auf der Doppel-Strang-Status nach der Anwendung von DNA-Sch&auml;den. Wir fanden, dass L&auml;sionen induziert durch UV-Licht und Methyl Methansulfonat in lange Single-Strand-Regionen toleriert werden k&ouml;nnen und sind Hypermutagenic. Die Hypermutability erforderlichen PCNA Monoubiquitination und war im Wesentlichen auf Translesion Synthese von fehleranf&auml;lligen DNA-Polymerase-Zeta. Zur Unterst&uuml;tzung mehrerer L&auml;sionen in Einzel-Strang-DNA, die eine Quelle der Hypermutability Analyse der UV-induzierten Mutanten ergab starken Strang-spezifische Voreingenommenheit und unerwartet hohen H&auml;ufigkeit der Allele mit weit voneinander mehrere Mutationen &uuml;ber mehrere Kilobases verstreut. Hypermutability und mehrere Mutationen zugeordnete L&auml;sionen im transienten erstreckt sich der lange Single-Strand DNA k&ouml;nnen eine Quelle der Karzinogenese und selektiven Vorteil adaptive Evolution.

Hypermutability von besch&auml;digten Einzel-Strang-DNA an Doppel-Einzelstrangbr&uuml;chen gebildet und unbeschr&auml;nkt Telomere in Hefe Saccharomyces Cerevisiae.

I principali percorsi di riparazione del DNA operano sui danni nel DNA double-strand perch&eacute; usano il filamento intatto come un modello dopo la rimozione di danni. Pertanto, le lesioni in tratti di single-strand transitorie del DNA cromosomico dovrebbero essere particolarmente minaccioso per la stabilit&agrave; del genoma. Per verificare questa ipotesi, abbiamo progettato sistemi nel lievito gemmante che potrebbe generare molti kilobasi di DNA single-strand persistente accanto al double-strand break o telomeri scoperchiate. I sistemi ammessi restauro controllato lo stato di double-strand dopo l&#39;applicazione di danni del DNA. Abbiamo trovato che le lesioni indotte da raggi UV e metile Metansulfonato possono essere tollerate nelle regioni lungo single-strand e sono hypermutagenic. La hypermutability necessaria monoubiquitination PCNA e fu in gran parte attribuibile alla sintesi di translesion dalla zeta error-prone del DNA polimerasi. A sostegno di lesioni multiple nel DNA single-strand, essendo una fonte di hypermutability, analisi dei mutanti UV-indotta ha rivelato forte pregiudizio specifico filone e inaspettatamente ad alta frequenza di alleli con ampiamente separate multiple mutazioni sparpagliate in parecchi kilobases. Hypermutability e pi&ugrave; mutazioni associate a lesioni in tratti transitori di DNA single-strand lungo possono essere una fonte di cancerogenesi e fornire un vantaggio selettivo in evoluzione adattiva.

Hypermutability di DNA single-strand danneggiato formata al double-strand break e scoperchiate telomeri nel lievito Saccharomyces cerevisiae.

&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x30C0;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3092;&#x9664;&#x53BB;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x9396;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;DNA&#x4FEE;&#x5FA9;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;DNA&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x3067;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;DNA&#x306E;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x75C5;&#x5909;&#x306F;&#x3001;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306B;&#x7279;&#x306B;&#x8105;&#x5A01;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3068;&#x4E88;&#x60F3;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x672A;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x306E;&#x96A3;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;DNA&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30AD;&#x30ED;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5FA9;&#x5143;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x7D2B;&#x5916;&#x7DDA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30E1;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EB;&#x30DB;&#x30CD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x75C5;&#x5909;&#x306F;&#x9577;&#x3044;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x5FCD;&#x5BB9;&#x6027;hypermutagenic&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x3002; hypermutability&#x306F;PCNA&#x306E;&#x30E2;&#x30CE;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x30A8;&#x30E9;&#x30FC;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3084;&#x3059;&#x3044;DNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30BC;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E57;&#x308A;&#x8D8A;&#x3048;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x4E3B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; hypermutability&#x306E;&#x6E90;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;DNA&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x75C5;&#x5909;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;UV&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x6570;&#x30AD;&#x30ED;&#x306B;&#x6563;&#x5728;&#x5E83;&#x304F;&#x533A;&#x5207;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5F37;&#x649A;&#x7279;&#x6709;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x3068;&#x4E88;&#x60F3;&#x5916;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Hypermutability&#x3001;&#x9577;&#x3044;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;DNA&#x306E;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x75C5;&#x5909;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x304C;&#x767A;&#x764C;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x3068;&#x9069;&#x5FDC;&#x9032;&#x5316;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x5229;&#x70B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9175;&#x6BCD;Saccharomyces cerevisiae&#x3067;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#x3068;&#x4E0A;&#x9650;&#x306A;&#x3057;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x305F;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;DNA&#x306E;Hypermutability

&#xC8FC;&#xC694; DNA &#xBCF5;&#xAD6C; &#xACBD;&#xB85C; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xAC00;&#xB2E5; &#xC190;&#xC0C1; &#xC81C;&#xAC70; &#xD6C4; &#xC11C;&#xC2DD; &#xD30C;&#xC77C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; DNA&#xC758; &#xC190;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; DNA&#xC758; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; &#xBED7;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xD2B9;&#xD788; &#xAC8C;&#xB188; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xC704;&#xD611;&#xC774; &#xB420; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC608;&#xC0C1; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC601;&#xAD6C;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; DNA &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xB098;&#xB204;&#xAE30; &#xB610;&#xB294; &#xC138;&#xCC99;&#xC81C; telomeres &#xC606;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; kilobases&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC2E0;&#xC9C4; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0;&#xB294; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC124;&#xACC4;. &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC744; &#xC801;&#xC6A9; &#xD55C; &#xD6C4; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; &#xBCD1; &#xBCC0;-&#xC790;&#xC678;&#xC120; &#xBC0F; &#xBA54; &#xD2F8; methanesulfonate&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xAE34; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6A9;&#xB0A9; &#xB420; &#xC218;&#xB294; hypermutagenic. Hypermutability PCNA monoubiquitination &#xD544;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xC624;&#xB958;&#xAC00; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC81C;&#xD0C0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; translesion &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xAE30;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xC6D0; &#xB418;&#xB294; hypermutability&#xC758; &#xC18C;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; DNA&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBCD1; &#xBCC0;, UV &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xACF5;&#xAC1C; &#xAC15;&#xD55C; &#xBB3C;&#xAC00; &#xAD00;&#xB828; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4; &#xD558; &#xACE0; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xAC8C; &#xACE0;&#xC8FC;&#xD30C;&#xC640; &#xB300;&#xB9BD;&#xC758; &#xB110;&#xB9AC; &#xC5EC;&#xB7EC; kilobases &#xD769;&#xC5B4;&#xC838; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBD84;&#xB9AC;. Hypermutability &#xBC0F; &#xAE34; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; DNA&#xC758; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xBED7; &#xAE30;&#xC5D0; &#xBCD1; &#xBCC0;&#xC774;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC1C;&#xC554;&#xC758; &#xC6D0;&#xCC9C;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70;, &#xC801;&#xC751; &#xC9C4;&#xD654;&#xC5D0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC6B0;&#xC704; &#xC81C;&#xACF5;.

Hypermutability &#xC190;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; DNA&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xB2E5; &#xB098;&#xB204;&#xAE30;&#xC5D0; &#xD615;&#xC131; &#xBC0F;&#xC5D0; &#xC138;&#xCC99;&#xC81C; telomeres Saccharomyces cerevisiae &#xD6A8; &#xBAA8;.

Las v&#xED;as principales de reparaci&#xF3;n de ADN operan en el da&#xF1;o en el ADN de doble cadena, ya que utilizan la hebra intacta como una plantilla despu&#xE9;s de la eliminaci&#xF3;n del da&#xF1;o. Por lo tanto, las lesiones en transitorios monocatenarias tramos de ADN cromos&#xF3;mico se espera que sean especialmente amenazante para la estabilidad del genoma. Para probar esta hip&#xF3;tesis, hemos dise&#xF1;ado sistemas de levadura en ciernes que podr&#xED;a generar muchas kilobases de persistencia de una sola hebra de ADN junto a roturas de doble cadena o tel&#xF3;meros no niveladas. Los sistemas permiten la restauraci&#xF3;n controlado por el estado de doble cadena despu&#xE9;s de aplicar el da&#xF1;o del ADN. Hemos encontrado que las lesiones inducidas por la luz UV metanosulfonato de metilo y se puede tolerar en largos de una sola hebra y regiones son hypermutagenic. El hipermutabilidad requiere monoubiquitination PCNA y se debi&#xF3; principalmente a la s&#xED;ntesis de translesion por la polimerasa zeta propenso a errores del ADN. En apoyo de las lesiones m&#xFA;ltiples en una sola cadena de ADN es una fuente de hipermutabilidad, el an&#xE1;lisis de los mutantes inducidos por UV revel&#xF3; una fuerte cap&#xED;tulo espec&#xED;fico sesgo y la frecuencia inesperadamente alta de alelos muy distantes entre s&#xED; con m&#xFA;ltiples mutaciones dispersas en varios kilobases. Hipermutabilidad y m&#xFA;ltiples mutaciones asociadas a lesiones en tramos transitorios de tiempo de una sola cadena de ADN puede ser una fuente de la carcinog&#xE9;nesis y proporcionar una ventaja selectiva en la evoluci&#xF3;n adaptativa.

Hipermutabilidad da&#xF1;ado de una sola hebra de ADN Formado en doble filamento se rompe y los tel&#xF3;meros sin tope salarial en la levadura Saccharomyces cerevisiae

&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2; (&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#xFF09; &#x8F6C;&#x5BFC;&#x542F;&#x52A8;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x7EA7;&#x8054;&#xFF0C;&#x6700;&#x7EC8;&#x624D;&#x80FD;&#x5F97;&#x5230;&#x77ED;&#x6682;&#x7684; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x5E94;&#x7B54;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x671F;&#x95F4;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x673A; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x86CB;&#x767D;&#x8F6C;&#x6362;&#x7EBF;&#x6027;&#x7684;&#x5355;&#x94FE;&#x57FA;&#x56E0;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E3A;&#x53CC;&#x94FE;&#x5FAA;&#x73AF;&#x5355;&#x4F53;&#x548C; concatemers &#x5728;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5012;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x91CD;&#x590D; &#xFF08;&#x53C2;&#x8003;&#x7CFB;&#xFF09;&#x3002;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; concatemerization &#x7684;&#x65B9;&#x5411;&#x51FA;&#x73B0;&#x65E0;&#x504F;&#xFF0C;concatemerization &#x5728;&#x6240;&#x9700;&#x65B9;&#x5411;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x504F;&#x4F4E; &#xFF08;&#x5C0F;&#x4E8E; 1 &#x4E2D; 6&#xFF09;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x91CD;&#x7EC4;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;Oligo-Assisted &#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x91CD;&#x7EC4; (OAGR)&#xFF0C;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6F14;&#x793A;&#x76F4;&#x63A5; concatemerization &#x4E13;&#x95E8;&#x5230;&#x4EBA;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x6240;&#x9700;&#x65B9;&#x5411;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x8FD9;&#x88AB;&#x901A;&#x8FC7;&#x5355;&#x94FE; DNA &#x5BE1; (&#x5BE1;) &#x663E;&#x793A;&#x80FD;&#x591F;&#x5F62;&#x6210;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5206;&#x5B50;&#x95F4;&#x7684;&#x6865;&#x6881;&#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x57FA;&#x56E0;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E0E;&#x5BF9;&#x5E94;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x540C;&#x6E90;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x8DEF;&#x53E3; concatemers&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;OAGR &#x662F;&#x9650;&#x4E8E;&#x5355;&#x94FE;&#x3001; &#x4E0D;&#x53CC;&#x9762;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x6027;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x4F9D;&#x8D56;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF0C;OAGR &#x8868;&#x660E;&#x6240;&#x6709;&#x7ECF;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#xFF0C;&#x9664;&#x90E8;&#x5206;&#x4F4E;&#x805A;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684; ITR &#x5BE1;&#x6781;&#x6027;&#x5B58;&#x5728;&#x504F;&#x89C1;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x662F;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x5185;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6F84;&#x6E05;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x53D1;&#x73B0;&#x6700;&#x7EC8;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x7684;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x5927;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;

&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4E0E;&#x5355;&#x94FE;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x3002;

Adeno-associated virus (AAV) transduction initiates a signaling cascade that culminates in a transient DNA damage response. During this time, host DNA repair proteins convert the linear single-strand AAV genomes to double-strand circular monomers and concatemers in processes stimulated by the AAV inverted terminal repeats (ITRs). As the orientation of AAV genome concatemerization appears unbiased, the likelihood of concatemerization in a desired orientation is low (less than 1 in 6). Using a novel recombineering method, Oligo-Assisted AAV Genome Recombination (OAGR), this work demonstrates the ability to direct concatemerization specifically to a desired orientation in human cells. This was achieved by a single-strand DNA oligonucleotide (oligo) displaying homology to distinct AAV genomes capable of forming an intermolecular bridge for recombination. This DNA repair process results in concatemers with genomic junctions corresponding to the sequence of oligo homology. Furthermore, OAGR was restricted to single-strand, not duplexed, AAV genomes suggestive of replication-dependent recombination. Consistent with this process, OAGR demonstrated oligo polarity biases in all tested configurations except when a portion of the oligo targeted the ITR. This approach, in addition to being useful for the elucidation of intermolecular homologous recombination, may find eventual relevance for AAV mediated large gene therapy.

AAV recombineering with single strand oligonucleotides.

Virus ad&#xE9;no-associ&#xE9; (AAV) de transduction d&#xE9;clenche une cascade de signalisation qui aboutit &#xE0; une r&#xE9;ponse transitoire dommages &#xE0; l&#x26;#39;ADN. Pendant ce temps, prot&#xE9;ines de l&#x26;#39;h&#xF4;te r&#xE9;paration de l&#x26;#39;ADN de convertir les lin&#xE9;aires simple brin g&#xE9;nomes AAV &#xE0; double-brin monom&#xE8;res circulaires et concat&#xE9;m&#xE8;res dans les processus stimul&#xE9;s par les r&#xE9;p&#xE9;titions terminales invers&#xE9;es AAV (RTI). Comme l&#x26;#39;orientation de l&#x26;#39;AAV g&#xE9;nome concatemerization appara&#xEE;t biais&#xE9;, la probabilit&#xE9; de concatemerization dans une orientation souhait&#xE9;e est faible (moins de 1 sur 6). En utilisant une m&#xE9;thode recombineering roman, Oligo-assist&#xE9;e recombinaison du g&#xE9;nome AAV (OAGR), ce travail d&#xE9;montre la capacit&#xE9; de diriger concatemerization sp&#xE9;cifiquement &#xE0; une orientation d&#xE9;sir&#xE9;e dans les cellules humaines. Cela a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9; par un oligonucl&#xE9;otide d&#x26;#39;ADN simple brin (oligo) affichant une homologie avec les g&#xE9;nomes AAV distinctes susceptibles de former un pont intermol&#xE9;culaire pour la recombinaison. Il en r&#xE9;sulte r&#xE9;paration de l&#x26;#39;ADN de processus dans concat&#xE9;m&#xE8;res avec des jonctions g&#xE9;nomiques correspondant &#xE0; la s&#xE9;quence d&#x26;#39;homologie oligo. En outre, OAGR a &#xE9;t&#xE9; limit&#xE9; &#xE0; un seul brin, pas recto verso, les g&#xE9;nomes d&#x26;#39;AAV &#xE9;vocateurs de la r&#xE9;plication d&#xE9;pendante de recombinaison. Conform&#xE9;ment &#xE0; ce processus, OAGR d&#xE9;montr&#xE9; biais de polarit&#xE9; oligo dans toutes les configurations test&#xE9;es, sauf si une partie de l&#x26;#39;oligo cibl&#xE9;e de l&#x26;#39;ITR. Cette approche, en plus d&#x26;#39;&#xEA;tre utile pour l&#x26;#39;&#xE9;lucidation de recombinaison homologue intermol&#xE9;culaire, peut trouver la pertinence &#xE9;ventuelle pour la th&#xE9;rapie g&#xE9;nique AAV m&#xE9;diation grande.

Recombineering AAV avec des oligonucl&#xE9;otides simple brin

Adeno-assoziierte Virus (AAV) Transduktion initiiert eine signalisierende Kaskade, die in einem Einschwingverhalten des DNA-Sch&auml;den gipfelt. W&auml;hrend dieser Zeit Host DNA-Reparatur-Proteine die lineare Single-Strand-AAV-Genome in Doppel-Strang kreisf&ouml;rmige Monomere konvertieren und Concatemers Prozesse angeregt durch das AAV invertiert-Terminal wird wiederholt (ITRs). Da die Ausrichtung des AAV Genom Concatemerization unvoreingenommene wirkt, ist die Wahrscheinlichkeit eines Concatemerization in eine gew&uuml;nschte Richtung niedrig (weniger als 1 in 6). Mit einer neuartigen Recombineering-Methode, Oligo-Assisted AAV Genom Rekombination (OAGR), demonstriert diese Arbeit die F&auml;higkeit zum direkten Concatemerization speziell auf eine gew&uuml;nschte Ausrichtung in den menschlichen Zellen. Dies wurde erreicht durch eine Single-Strand-DNA-Oligonukleotid (Oligo) anzeigen Homologie f&uuml;r unterschiedliche AAV Genome f&auml;hig f&uuml;r Rekombination eine intermolekulare Br&uuml;cke zu bilden. Diese DNA-Reparatur-Prozess f&uuml;hrt zu Concatemers mit genomischen Kreuzungen entsprechend der Reihenfolge der Oligo-Homologie. Dar&uuml;ber hinaus war OAGR auf Single-Strand, nicht Duplexbetrieb, AAV-Genome suggestive der Replikation-abh&auml;ngige Rekombination beschr&auml;nkt. In &Uuml;bereinstimmung mit diesem Prozess, demonstrierte OAGR Oligo Polarit&auml;t Vorurteile in allen getesteten Konfigurationen au&szlig;er wenn ein Teil der Oligo die ITR ausgerichtet. Dieser Ansatz, zus&auml;tzlich zum sein n&uuml;tzlich f&uuml;r die Aufkl&auml;rung der intermolekularen homologe Rekombination kann finden, sind m&ouml;gliche Relevanz f&uuml;r AAV gro&szlig;e Gentherapie vermittelt.

AAV Recombineering mit einzelnen Faser Oligonukleotide.

Trasduzione del virus adeno-associati (AAV) avvia una cascata di segnalazione che culmina in una risposta transitoria di danni del DNA. Durante questo tempo, le proteine di riparazione del DNA ospite convertire i genomi AAV single-strand lineari a doppio filamento circolare monomeri e concatemeri nei processi stimolati da terminale AAV invertito si ripete (ITRs). Come l&#39;orientamento dell&#39;AAV genoma concatemerization appare imparziale, la probabilit&agrave; di concatemerization in un orientamento desiderato &egrave; bassa (meno di 1 a 6). Utilizzando un metodo del romanzo recombineering, Oligo-Assisted AAV genoma ricombinazione (OAGR), questo lavoro dimostra la capacit&agrave; di concatemerization diretta in particolare a un orientamento desiderato nelle cellule umane. Questo &egrave; stato ottenuto da un oligonucleotide di DNA single-strand (oligo) visualizzazione omologia a distinti genomi AAV in grado di formare un ponte per ricombinazione intermolecolare. Questo processo di riparazione del DNA si traduce in concatemeri con giunzioni genomiche corrisponde alla sequenza di oligo omologia. Inoltre, OAGR &egrave; stata limitata a singolo filamento, non Duplexing, genomi AAV suggestivi di ricombinazione replica-dipendente. Coerentemente con questo processo, OAGR dimostrato biases polarit&agrave; oligo in tutte le configurazioni testate tranne quando una parte dell&#39;oligo mirati l&#39;ITR. Questo approccio, oltre ad essere utile per la delucidazione di ricombinazione omologa intermolecolari, possa trovare eventuale pertinenza per AAV mediata terapia genica grandi.

AAV recombineering con oligonucleotidi a singolo filamento.

&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x968F;&#x4F34;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;AAV&#xFF09;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x7D76;&#x9802;&#x306B;&#x9054;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x3001;&#x5BBF;&#x4E3B;DNA&#x4FEE;&#x5FA9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;AAV&#x9006;&#x65B9;&#x5411;&#x672B;&#x7AEF;&#x53CD;&#x5FA9;&#x914D;&#x5217;&#xFF08;ITR&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x523A;&#x6FC0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x5185;&#x306E;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;&#x74B0;&#x72B6;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B3;&#x30F3;&#x30AB;&#x30C6;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x76F4;&#x7DDA;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;AAV&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3092;&#x5909;&#x63DB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; AAV&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;concatemerization&#x306E;&#x5411;&#x304D;&#x304C;&#x516C;&#x5E73;&#x306A;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x6240;&#x671B;&#x306E;&#x5411;&#x304D;&#x306B;concatemerization&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306F;&#x4F4E;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#xFF08;6&#x5206;&#x306E;1&#x4EE5;&#x4E0B;&#xFF09;&#x3002;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D3;&#x30CB;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x6CD5;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x652F;&#x63F4;AAV&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#xFF08;OAGR&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x65B9;&#x5411;&#x306B;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306B;concatemerization&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x9593;&#x67B6;&#x6A4B;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;AAV&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;DNA&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#xFF08;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x63A5;&#x5408;&#x3068;&#x30B3;&#x30F3;&#x30AB;&#x30C6;&#x30DE;&#x30FC;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;DNA&#x4FEE;&#x5FA9;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;OAGR&#x306F;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CD;&#x3001;AAV&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x3001;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;OAGR&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;ITR&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3092;&#x9664;&#x304D;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x69CB;&#x6210;&#x3067;&#x306F;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x6975;&#x6027;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x89E3;&#x660E;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;AAV&#x5A92;&#x4ECB;&#x5927;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5358;&#x4E00;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;AAV&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;

Adeno &#xC81C;&#xD734;&#xD574; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (AAV) &#xBCC0;&#xD658; &#xACFC;&#xB3C4; DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC808;&#xC815; &#xC2E0;&#xD638; &#xBAA8;&#xB450;&#xB97C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; DNA &#xC218;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xC6D0;&#xD615; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4;&#xB97C; &#xC120;&#xD615; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; AAV &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD658; &#xD558; &#xACE0; &#xAC70;&#xAFB8;&#xB85C; AAV &#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; concatemers (ITRs) &#xBC18;&#xBCF5;. AAV &#xAC8C;&#xB188; concatemerization&#xC758; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD3B8;&#xACAC;, &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; concatemerization&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; (1&#xC5D0;&#xC11C; 6 &#xBBF8;&#xB9CC;) &#xB0AE;&#xC740;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Oligo-Assisted AAV &#xAC8C;&#xB188; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; (OAGR), &#xC18C;&#xC124; recombineering &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xC791;&#xC5C5; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C1;&#xC811; concatemerization &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; DNA oligonucleotide (oligo) homology &#xBCC4;&#xAC1C; AAV &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; intermolecular &#xB2E4;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD45C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2EC;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; DNA &#xBCF5;&#xAD6C; &#xACFC;&#xC815; &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; homology &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; genomic &#xC811;&#xD569; &#xB41C; concatemers &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, OAGR&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB79C;&#xB4DC;, &#xC548; &#xC591;&#xBA74;, AAV &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC885;&#xC18D; &#xC7AC;&#xACB0;&#xD569;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58;, OAGR&#xB294; oligo&#xC758; &#xC77C;&#xBD80; ITR&#xC744; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xB54C;&#xB97C; &#xC81C;&#xC678; &#xD558; &#xACE0; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB41C; &#xAD6C;&#xC131;&#xC5D0; &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF9;&#xC131; &#xD3B8;&#xACAC;&#xC744; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. Intermolecular &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC758; &#xD574;&#xBA85;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xBFD0;&#xC774; &#xC774;&#xB807;&#xAC8C; AAV &#xCD5C;&#xC885; &#xAD00;&#xB828; &#xC911;&#xC7AC; &#xD070; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; oligonucleotides &#xAC00;&#xC9C4; AAV recombineering&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Virus adeno-asociado (AAV) de transducci&#xF3;n se inicia una cascada de se&#xF1;alizaci&#xF3;n que culmina en una respuesta transitoria de los da&#xF1;os del ADN. Durante este tiempo, las prote&#xED;nas de reparaci&#xF3;n del ADN de acogida convertir a los lineales de un solo filamento de genomas de AAV a los mon&#xF3;meros de doble cadena y circulares concatemers en los procesos estimulados por las repeticiones terminales invertidas (RTI AAV). A medida que la orientaci&#xF3;n de AAV concatemerization genoma aparece sesgada, la probabilidad de concatemerization en una orientaci&#xF3;n deseada es bajo (menos de 1 en 6). Utilizando un m&#xE9;todo recombiner&#xED;a novela, oligo-Assisted recombinaci&#xF3;n del genoma AAV (OAGR), este trabajo demuestra la capacidad de dirigir concatemerization espec&#xED;ficamente a la orientaci&#xF3;n deseada en las c&#xE9;lulas humanas. Esto se logr&#xF3; mediante un oligonucle&#xF3;tido de ADN de una sola hebra (oligo) muestra homolog&#xED;a con genomas AAV distintas capaces de formar un puente intermolecular para la recombinaci&#xF3;n. Este ADN resultados de reparaci&#xF3;n de proceso en concatemers con uniones gen&#xF3;micos correspondientes a la secuencia de homolog&#xED;a oligo. Por otra parte, OAGR se limit&#xF3; a un solo cap&#xED;tulo, no genomas de impresi&#xF3;n d&#xFA;plex, AAV sugerentes de la replicaci&#xF3;n dependiente de recombinaci&#xF3;n. De acuerdo con este proceso, OAGR demostrado sesgos oligo polaridad en todas las configuraciones ensayadas excepto cuando una porci&#xF3;n del oligo dirigido el ITR. Este enfoque, adem&#xE1;s de ser &#xFA;til para la elucidaci&#xF3;n de intermolecular recombinaci&#xF3;n hom&#xF3;loga, puede encontrar relevancia eventual para AAV terapia g&#xE9;nica mediada grande.

AAV recombiner&#xED;a con oligonucle&#xF3;tidos &#xFA;nico cap&#xED;tulo

&#x6700;&#x8FD1;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x4F7F;&#x7528;&#x5408;&#x6210; RNA &#x542B;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; (&#x770B;) &#x9175;&#x6BCD;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x6A21;&#x578B;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#x4E2D;&#xFF0C;RNA &#x53EF;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A; DNA &#x5408;&#x6210;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E00;&#x7EA7;&#x7684;&#x6A21;&#x677F; (DSB) &#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2;&#x4FEE;&#x590D;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; RNA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; DNA &#x4FEE;&#x9970;&#x548C;&#x4FEE;&#x590D;&#x7684;&#x73B0;&#x8C61;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5C40;&#x9650;&#x4E8E;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x4E00;&#x5757;&#x516D; ribonucleotides &#x5D4C;&#x5165;&#x5728;&#x5BF9;&#x5E94;&#x4E8E;&#x4EFB;&#x4E00;&#x6EDE;&#x540E;&#x7684;&#x5355;&#x94FE; DNA &#x770B;&#x6216;&#x9886;&#x5148;&#x7684;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x5E8F;&#x5217;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6A21;&#x677F;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x7EA0;&#x6B63;&#x7EC6;&#x83CC;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684; lacZ &#x6807;&#x8BB0;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4FEE;&#x6539;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; DNA RNA &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528; DNA &#x770B;&#x5305;&#x542B;&#x5D4C;&#x5165;&#x5F0F;&#x7684;&#x9053;&#x516D; ribonucleotides&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x770B;&#x5927;&#x591A;&#x662F;&#x7531; RNA&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x770B;&#x90FD;&#x88AB;&#x4E3A;&#x4E86;&#x4FEE;&#x590D;&#x751F;&#x6210;&#x5185;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x57FA;&#x56E0;&#x968F;&#x673A;&#x7EB3;&#x5165;&#x66FC;&#x6D66;&#x6C49;&#x514B; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x65AD;&#x88C2;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E9B; RNA &#x542B;&#x770B;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6A21;&#x677F;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FEE;&#x590D;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E89;&#x7AEF;&#x89E3;&#x51B3;&#x673A;&#x6784;&#x548C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x57FA;&#x672C;&#x66F4;&#x6539;&#x5F15;&#x5165;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6216;&#x8D28;&#x7C92; DNA&#x3002;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5355;&#x94FE; RNA &#x542B;&#x770B;&#x6821;&#x6B63;&#x7684;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x504F;&#x89C1;&#x662F;&#x6240;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684; DNA &#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x76F8;&#x540C;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;RNA &#x542B;&#x770B;&#x4E0D;&#x8F6C;&#x6362;&#x6210; cDNA &#x4E0E;&#x4E92;&#x8865; DNA &#x9000;&#x706B;&#x524D;&#x3002;&#x603B;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x9175;&#x6BCD;&#xFF0C;RNA &#x5E8F;&#x5217;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6709;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728; DNA &#x57FA;&#x56E0;&#x6539;&#x9020;&#x548C;&#x91CD;&#x5851;&#x3002;

RNA &#x9A71;&#x52A8;&#x9057;&#x4F20;&#x53D8;&#x5316;&#x5728;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x4EBA;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

As recently demonstrated in the yeast Saccharomyces cerevisiae model organism using synthetic RNA-containing oligonucleotides (oligos), RNA can serve as a template for DNA synthesis at the chromosomal level during the process of double-strand break (DSB) repair. Herein we show that the phenomenon of RNA-mediated DNA modification and repair is not limited to yeast cells. A tract of six ribonucleotides embedded in single-strand DNA oligos corresponding to either lagging or leading strand sequences could serve as a template to correct a defective lacZ marker gene in the chromosome of the bacterium Escherichia coli. In order to test the capacity of RNA to modify DNA in mammalian cells, we utilized DNA oligos containing an embedded tract of six ribonucleotides, as well as oligos mostly made of RNA. These oligos were designed to repair a chromosomal break generated within a copy of the green fluorescent protein (GFP) gene randomly integrated into the genome of human HEK-293 cells. We show that these RNA-containing oligos can serve as templates to repair a DSB in human cells and can introduce base changes into genomic or plasmid DNA. In both E. coli and human cells, the strand bias of chromosomal gene correction by the single-strand RNA-containing oligos was the same as that obtained for the corresponding DNA molecules. Therefore, the RNA-containing oligos are not converted into a cDNA before annealing with complementary DNA. Overall, we demonstrate that in both bacterial and human cells, as in yeast, RNA sequences can have a direct role in DNA genetic modification and remodeling.

RNA-driven genetic changes in bacteria and in human cells.

Comme l&#x26;#39;a r&#xE9;cemment d&#xE9;montr&#xE9; dans l&#x26;#39;organisme la levure Saccharomyces cerevisiae en utilisant le mod&#xE8;le de synth&#xE8;se contenant de l&#x26;#39;ARN oligonucl&#xE9;otides (oligos), l&#x26;#39;ARN peut servir de matrice pour la synth&#xE8;se d&#x26;#39;ADN au niveau des chromosomes au cours du processus de cassures double brin (DSB) de r&#xE9;paration. Ici, nous montrons que le ph&#xE9;nom&#xE8;ne de la modification de l&#x26;#39;ADN ARN-m&#xE9;diation et de r&#xE9;paration ne se limite pas &#xE0; des cellules de levure. Un tract de six ribonucl&#xE9;otides incorpor&#xE9;s dans l&#x26;#39;ADN simple brin correspondant &#xE0; oligos soit inductif ou s&#xE9;quences de brin pourrait servir de mod&#xE8;le pour corriger un g&#xE8;ne marqueur lacZ d&#xE9;fectueuse dans le chromosome de la bact&#xE9;rie Escherichia coli. Afin de tester la capacit&#xE9; de l&#x26;#39;ARN de modifier l&#x26;#39;ADN dans les cellules de mammif&#xE8;res, nous avons utilis&#xE9; les oligos d&#x26;#39;ADN contenant un tract int&#xE9;gr&#xE9;e de six ribonucl&#xE9;otides, ainsi que la plupart du temps oligos sont constitu&#xE9;s d&#x26;#39;ARN. Ces oligonucl&#xE9;otides sont con&#xE7;us pour r&#xE9;parer une rupture chromosomique g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;int&#xE9;rieur d&#x26;#39;une copie de la prot&#xE9;ine verte (GFP) fluorescente g&#xE8;ne al&#xE9;atoire int&#xE9;gr&#xE9; dans le g&#xE9;nome de l&#x26;#39;homme HEK-293 cellules. Nous montrons que ces oligos contenant de l&#x26;#39;ARN peuvent servir de mod&#xE8;les pour r&#xE9;parer un ORD dans les cellules humaines et peut introduire des changements de base dans l&#x26;#39;ADN g&#xE9;nomique ou plasmidique. Chez E. coli et les cellules humaines, le biais brin de correction de g&#xE8;ne chromosomique par la simple brin d&#x26;#39;ARN contenant des oligos &#xE9;tait la m&#xEA;me que celle obtenue pour les mol&#xE9;cules d&#x26;#39;ADN correspondant. Par cons&#xE9;quent, les oligos contenant de l&#x26;#39;ARN ne sont pas convertis en un ADNc avant recuit avec de l&#x26;#39;ADN compl&#xE9;mentaire. Dans l&#x26;#39;ensemble, nous d&#xE9;montrons que dans les cellules bact&#xE9;riennes et humaines, comme chez la levure, des s&#xE9;quences d&#x26;#39;ARN peut avoir un r&#xF4;le direct dans la modification g&#xE9;n&#xE9;tique de l&#x26;#39;ADN et le remodelage.

ARN changements induits g&#xE9;n&#xE9;tique chez les bact&#xE9;ries et dans les cellules humaines

Wie vor kurzem in der Hefe Saccharomyces Cerevisiae Modellorganismus mit synthetischen RNA-haltigen Oligonucleotides (Oligos) kann die RNA als Vorlage f&uuml;r die DNA-Synthese auf chromosomaler Ebene w&auml;hrend des Prozesses der Reparatur von Doppel-Strang-Pause (DSB) dienen. Hier zeigen wir, dass das Ph&auml;nomen der RNA-vermittelte DNA-Modifikation und Reparatur auf Hefezellen nicht beschr&auml;nkt. Ein Traktat der sechs ribonucleotid eingebettet in Single-Strand DNA Oligos entspricht entweder mit Entwicklungsr&uuml;ckstand oder f&uuml;hrenden Strang Sequenzen k&ouml;nnte dienen als Vorlage, eine defekte LacZ-Markergen im Chromosom des Bakteriums Escherichia coli zu korrigieren. Um die F&auml;higkeit der RNA zur DNA in den S&auml;ugetier-Zellen &auml;ndern zu testen, verwendet wir DNA Oligos, enth&auml;lt eine eingebettete Trakt sechs Ribonucleotide, sowie Oligos meist RNA hergestellt. Diese Oligos wurden entwickelt, um die Reparatur einer chromosomalen Pause innerhalb eine Kopie des gr&uuml;n fluoreszierenden Proteins (GFP) Gen zuf&auml;llig in das Genom der HEK-293 Humanzellen integriert erzeugt. Wir zeigen, dass diese RNA-haltigen Oligos als Vorlagen dienen k&ouml;nnen, ein DSB in den menschlichen Zellen zu reparieren und kann in genomischer base &Auml;nderungen einf&uuml;hren oder Plasmid DNA. In E. Coli und menschliche Zellen war die Strang-Verschiebung des chromosomalen gen Korrektur durch die Single-Strand RNA-haltigen Oligos identisch mit dem f&uuml;r die entsprechenden DNA-Molek&uuml;le gewonnen. Daher werden die RNA-haltigen Oligos nicht in eine DNA konvertiert vor gl&uuml;hen mit komplement&auml;ren DNA. Insgesamt zeigen wir, dass sowohl bakterielle als auch menschliche Zellen, wie Hefe, RNA-Sequenzen eine direkte Rolle in genetischen DNA-Modifikation und Umbau haben k&ouml;nnen.

RNA-gesteuerte genetische Ver&auml;nderungen in Bakterien und in menschlichen Zellen.

Come recentemente dimostrato nell&#39;organismo lievito Saccharomyces cerevisiae modello usando i oligonucleotides sintetici contenenti RNA (oligos), RNA pu&ograve; servire come modello per la sintesi del DNA a livello cromosomico durante il processo di riparazione double-strand break (DSB). Qui vi mostriamo che il fenomeno di modificazione del DNA RNA-mediata e la riparazione non &egrave; limitato alle cellule di lievito. Un tratto di sei ribonucleotidi incorporato in single-strand DNA oligos corrispondente sia in ritardo o leading strand sequenze potrebbero servire come modello per correggere un gene marcatore lacZ difettoso nel cromosoma del batterio Escherichia coli. Al fine di testare la capacit&agrave; del RNA di modificare il DNA in cellule di mammifero, abbiamo utilizzato i oligos del DNA contenente un tratto incorporato di sei ribonucleotidi, come pure i oligos realizzati principalmente in RNA. Questi oligos sono stati progettati per riparare una rottura cromosomica generata all&#39;interno di una copia del gene proteina fluorescente (GFP) casualmente integrato nel genoma delle cellule HEK-293 verde. Mostriamo che questi oligos contenenti RNA pu&ograve; servire come modelli per riparare un DSB in cellule umane e possono introdurre modifiche base genomica o DNA del plasmide. In e. coli e cellule umane, il bias strand di correzione del gene cromosomico dal singolo filamento contenente RNA oligos era lo stesso di quello ottenuto per le molecole di DNA corrispondente. Pertanto, i oligos contenenti RNA non vengono convertiti in un cDNA prima ricottura con DNA complementare. Nel complesso, dimostreremo che in cellule batteriche e umane, come lievito, sequenze di RNA possono avere un ruolo diretto nella modificazione genetica del DNA e rimodellamento.

RNA-driven mutazioni genetiche nei batteri e nelle cellule umane.

&#x6700;&#x8FD1;&#x5408;&#x6210;RNA&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#xFF08;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;Saccharomyces cerevisiae&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x793A;&#x3059;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;RNA&#x306F;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#xFF08;DSB&#xFF09;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306E;&#x904E;&#x7A0B;&#x3067;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;DNA&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x92F3;&#x578B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;RNA&#x5A92;&#x4ECB;DNA&#x4FEE;&#x98FE;&#x3068;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306E;&#x73FE;&#x8C61;&#x304C;&#x9175;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x9650;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;DNA&#x306B;&#x57CB;&#x3081;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x305F;6&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x6D88;&#x5316;&#x304C;&#x9045;&#x308C;&#x305F;&#x308A;&#x3001;&#x9396;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x306E;lacZ&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;DNA&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;RNA&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;6&#x3064;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;RNA&#x3067;&#x4F5C;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x306E;&#x57CB;&#x3081;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x7BA1;&#x3092;&#x542B;&#x3080;DNA&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x306F;&#x3001;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306B;&#x4EBA;&#x9593;HEK-293&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;GFP&#xFF09;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x5185;&#x3067;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5207;&#x65AD;&#x3092;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;RNA&#x542B;&#x6709;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;DSB&#x3092;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;DNA&#x306B;&#x5869;&#x57FA;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8868;&#x793A;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D2;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x3001;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;RNA&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x88DC;&#x6B63;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;DNA&#x5206;&#x5B50;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;RNA&#x542B;&#x6709;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x306F;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;DNA&#x3068;&#x30A2;&#x30CB;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x524D;&#x306B;cDNA&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x3084;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;RNA&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x3001;DNA&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x6539;&#x5909;&#x3084;&#x6539;&#x9020;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x7D30;&#x83CC;&#x3068;&#x30D2;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;RNA&#x99C6;&#x52D5;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x5909;&#x5316;

&#xD569;&#xC131; RNA &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; oligonucleotides (oligos)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB204; &#xB8E9; Saccharomyces cerevisiae &#xBAA8;&#xB378; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xC2DC;&#xC5F0;&#xC73C;&#xB85C; RNA &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xBE0C;&#xB808;&#xC774;&#xD06C; (DSB) &#xC218;&#xB9AC;&#xC758; &#xACFC;&#xC815; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; DNA &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; DNA RNA &#xC911;&#xC7AC; &#xC218;&#xC815; &#xBC0F; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD604;&#xC0C1; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xAD6D;&#xD55C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. 6 Ribonucleotides&#xB85C; &#xC5B4;&#xB290; &#xC9C0;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; DNA oligos&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC788;&#xB294; lacZ &#xB9C8;&#xCEE4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xC815; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC120;&#xB3C4; &#xAC00;&#xB2E5; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;. &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; DNA&#xB97C; &#xC218;&#xC815;&#xD560; RNA&#xC758; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; 6 ribonucleotides, oligos &#xC8FC;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; RNA&#xC758; &#xC784;&#xBCA0;&#xB514;&#xB4DC; &#xAD00;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; DNA oligos&#xB97C; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; oligos &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xBB34;&#xC791;&#xC704;&#xB85C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; HEK 293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xD1B5;&#xD569;&#xC758; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xD734;&#xC2DD;&#xC744; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; RNA oligos &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; DSB &#xBCF5;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBCC0;&#xACBD; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC785;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xB610;&#xB294; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; DNA. &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC815;&#xC815; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; RNA &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; oligos &#xC5EC; &#xAC00;&#xB2E5; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4; &#xD574;&#xB2F9; DNA &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5BB;&#xC740; &#xAC83;&#xACFC; &#xB3D9;&#xC77C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; RNA oligos &#xBCF4;&#xC644; DNA&#xC640; &#xC5B4; &#xB2D0; &#xB9C1; &#xD558;&#xAE30; &#xC804;&#xC5D0; Cdna&#xB85C; &#xBCC0;&#xD658; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC19;&#xC774; &#xD6A8; &#xBAA8;, &#xC138;&#xADE0;&#xACFC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; RNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; DNA &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791; &#xBC0F; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RNA &#xAE30;&#xBC18; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD654; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;.

Como ha demostrado recientemente en el organismo levadura Saccharomyces cerevisiae modelo utilizando ARN sint&#xE9;ticos que contienen oligonucle&#xF3;tidos (oligos), el ARN puede servir como una plantilla para la s&#xED;ntesis de ADN en el nivel cromos&#xF3;mico durante el proceso de rotura de doble hebra (OSD) de reparaci&#xF3;n. Aqu&#xED; nos muestran que el fen&#xF3;meno de la modificaci&#xF3;n del ADN mediada por RNA y reparaci&#xF3;n no se limita a c&#xE9;lulas de levadura. Una extensi&#xF3;n de seis ribonucle&#xF3;tidos embebidos en ADN de una sola hebra-oligos correspondiente a cualquiera de retraso o secuencias que conduce cada tira podr&#xED;a servir como una plantilla para corregir un gen defectuoso lacZ marcador en el cromosoma de la bacteria Escherichia coli. Con el fin de probar la capacidad de ARN para modificar el ADN en c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero, se utiliz&#xF3; oligos de ADN que contienen un tracto embebido de seis ribonucle&#xF3;tidos, as&#xED; como oligos principalmente hechas de ARN. Estos oligos fueron dise&#xF1;ados para reparar una rotura cromos&#xF3;mica generado dentro de una copia de la prote&#xED;na verde fluorescente (GFP) de genes al azar integrado en el genoma de humanos HEK-293 c&#xE9;lulas. Se demuestra que estos oligos que contienen ARN puede servir como plantillas para reparar un OSD en c&#xE9;lulas humanas y pueden introducir cambios de bases en el ADN gen&#xF3;mico o pl&#xE1;smido. En tanto en E. coli y c&#xE9;lulas humanas, el sesgo hebra de correcci&#xF3;n por el gen cromos&#xF3;mico de una sola hebra de ARN que contienen oligonucle&#xF3;tidos fue el mismo que el obtenido para las mol&#xE9;culas de ADN correspondientes. Por lo tanto, los oligos de ARN que contienen no se convierten en un ADNc antes del recocido con ADN complementario. En general, nos demuestran que tanto en las c&#xE9;lulas bacterianas y humanas, como en la levadura, las secuencias de ARN puede tener un papel directo en la modificaci&#xF3;n gen&#xE9;tica de ADN y la remodelaci&#xF3;n.

ARN-impulsado cambios gen&#xE9;ticos en bacterias y en c&#xE9;lulas humanas

Delitto perfetto &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5DF2;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x66F4;&#x6539;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x81F4;&#x7A81;&#x53D8;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5C06;&#x9175;&#x6BCD;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x5C31;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8FC5;&#x901F;&#x548C;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x5E08;&#x9175;&#x6BCD;&#x83CC;&#x682A;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x51E0;&#x4E2A;&#x4E2D;&#x95F4;&#x6B65;&#x9AA4;&#xFF0C;&#x5B83;&#x7684;&#x804C;&#x80FD;&#x5728;&#x53EA;&#x6709;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6B65;&#x9AA4;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x4F9D;&#x8D56;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5F00;&#x8F66;&#x5230;&#x76EE;&#x6807; DNA &#x533A;&#x57DF;&#x6240;&#x505A;&#x7684;&#x66F4;&#x6539;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#x6D89;&#x53CA;&#x63D2;&#x5165;&#x5361;&#x5E26;&#x5305;&#x542B;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6807;&#x8BB0;&#x6216;&#x5176;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x8F68;&#x8FF9;&#x88AB;&#x6539;&#x53D8;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x6B65;&#x6D89;&#x53CA;&#x6B64;&#x5323;&#x4E0E;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x6216;&#x5176;&#x4ED6;&#x9057;&#x4F20;&#x6750;&#x6599;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x5220;&#x9664;&#x548C;&#x9884;&#x671F;&#x9009;&#x62E9;&#x7684; DNA &#x4F4D;&#x70B9;&#x9057;&#x4F20;&#x8F7D;&#x6CE2;&#x4F20;&#x8F93;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;delitto perfetto &#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x672C;&#x4F8B;&#x5B50;&#x7684;&#x6700;&#x5E38;&#x89C1;&#x548C;&#x6700;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E3A;&#x4F53;&#x5185;&#x7A81;&#x53D8;&#x6765;&#x751F;&#x6210;&#x57FA;&#x66FF;&#x6362;&#x3001; &#x5220;&#x9664;&#x3001; &#x63D2;&#x5165;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7CBE;&#x786E;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x5927;&#x4F1A;&#x548C;&#x4E00;&#x4F53;&#x5316;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x9057;&#x4F20;&#x5206;&#x5B50;&#x6216;&#x57FA;&#x56E0;&#x62FC;&#x8D34;&#x753B;&#x3002;

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Article	Year
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The delitto perfetto approach to in vivo site-directed mutagenesis and chromosome rearrangements with synthetic oligonucleotides in yeast. Methods in enzymology\| PubMed ID: 16793410	2006
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Mispaired rNMPs in DNA are mutagenic and are targets of mismatch repair and RNases H. Nature structural & molecular biology\| PubMed ID: 22139012	2012

Francesca Storici

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