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Adenovirus-mediated Genetic Removal of Signaling Molecules in Cultured Primary Mouse Embryonic Fibroblasts

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Lyme disease is a serious vector-borne infection that is caused by the Borrelia burgdorferi sensu lato family of spirochetes, which are transmitted to ...

University of Guelph

Mount Allison University

Src &#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x548C;&#x80F6;&#x539F; (&#x7279;&#x56F0;&#x60C5;&#x51B5;) &#x4F5C;&#x4E3A;&#x5206;&#x5B50;&#x63A5;&#x5408;&#x5668;&#x5728;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x56DB;&#x79CD;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7279;&#x56F0;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;ShcD &#x662F;&#x6700;&#x5C11;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x4E3A;&#x6B64;&#x76EE;&#x7684;&#xFF0C;ShcD &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x662F;&#x8BB0;&#x8F7D;&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5176;&#x4ED6;&#x7279;&#x56F0;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#xFF0C;ShcD &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x7279;&#x56F0;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x4E0E; post-mitotic &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x91CD;&#x53E0;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x9C81;&#x68D2; ShcD &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x770B;&#x5230;&#x5185;&#x6709;&#x533A;&#x522B;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x673A;&#x5173;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x3001; &#x5FC3;&#x810F;&#x808C;&#x8089;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x6765;&#x6E90;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x7279;&#x56F0;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x8868;&#x793A;&#x80A5;&#x5927;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x9AA8;&#x67B6;&#x4E2D;&#x7684;&#x7279;&#x56F0;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x62A5;&#x544A;&#x3002;&#x552F;&#x4E00;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5206;&#x5E03;&#x683C;&#x5C40;&#x7684;&#x7279;&#x56F0;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53EF;&#x80FD;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x751F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x8D21;&#x732E;&#x53CA;&#x5176;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x4FE1;&#x53F7;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684; ShcD &#x548C;&#x7279;&#x56F0;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

The Src homology and collagen (Shc) proteins function as molecular adaptors in signaling pathways mediated by a variety of cell surface receptors. Of the four mammalian Shc proteins, ShcD is the least characterized. To this end, ShcD expression was documented and compared to that of other Shc family proteins. In the developing mouse embryo, expression of ShcD overlaps with that of other Shc proteins in the central nervous system, with specific distribution in post-mitotic neurons. In addition, robust ShcD expression is seen within differentiated epithelial cells of several organs, as well as in skeletal and cardiac muscle, and various tissues of neural crest origin. Interestingly, all Shc family members are expressed in hypertrophic chondrocytes, the first report of Shc protein expression in the developing skeleton. The unique tissue distribution patterns of Shc proteins likely contribute to their complex tissue-specific signaling functions during embryogenesis.

Expression patterns of ShcD and Shc family adaptor proteins during mouse embryonic development.

Le homologie Src et le collag&#xE8;ne (SHC) les prot&#xE9;ines fonctionnent comme des adaptateurs mol&#xE9;culaires dans les voies de signalisation m&#xE9;di&#xE9;es par une vari&#xE9;t&#xE9; de r&#xE9;cepteurs de surface cellulaire. Parmi les quatre mammif&#xE8;res prot&#xE9;ines Shc, SHCD est le moins caract&#xE9;ris&#xE9;. &#xC0; cette fin, l&#x26;#39;expression SHCD a &#xE9;t&#xE9; document&#xE9;e et compar&#xE9;e &#xE0; celle d&#x26;#39;autres prot&#xE9;ines de la famille Shc. Dans l&#x26;#39;embryon de souris en d&#xE9;veloppement, l&#x26;#39;expression de chevauchements SHCD avec celle d&#x26;#39;autres prot&#xE9;ines Shc dans le syst&#xE8;me nerveux central, avec une distribution sp&#xE9;cifique dans les neurones post-mitotiques. En outre, robuste expression SHCD est vu dans les cellules &#xE9;pith&#xE9;liales diff&#xE9;renci&#xE9;es de plusieurs organes, ainsi que dans le muscle squelettique et cardiaque, et des tissus divers d&#x26;#39;origine de la cr&#xEA;te neurale. Fait int&#xE9;ressant, tous les membres de la famille Shc sont exprim&#xE9;s en chondrocytes hypertrophiques, le premier rapport de l&#x26;#39;expression des prot&#xE9;ines Shc dans le squelette en d&#xE9;veloppement. Les mod&#xE8;les uniques de distribution tissulaire des prot&#xE9;ines Shc susceptibles de contribuer &#xE0; leurs complexes tissu-sp&#xE9;cifiques des fonctions de signalisation lors de l&#x26;#39;embryogen&#xE8;se.

Profils d&#x26;#39;expression de la SHCD et Shc prot&#xE9;ines Adaptateur famille Pendant embryonnaire de la souris de d&#xE9;veloppement

Der Src-Homologie und Kollagen (Shc) Proteine fungieren als molekulare Adapter in Signalisierung Wege, die von einer Vielzahl von Oberfl&auml;chen Zellrezeptoren vermittelt. Von den vier S&auml;ugetierproteine Shc ist ShcD die wenigsten gekennzeichnet. Zu diesem Zweck wurde ShcD Ausdruck dokumentiert und im Vergleich zu anderen Familien Shc-Proteinen. In der dritten Maus-Embryo &uuml;berlappt Ausdruck des ShcD mit der anderen Shc-Proteinen in das zentrale Nervensystem mit bestimmten Distribution in post-mitotic Neuronen. Dar&uuml;ber hinaus differenziert robuste ShcD Ausdruck innerhalb gesehen ist Epithelzellen von mehreren Organen sowie Skelett und Herz-Muskel und verschiedenen Geweben Neuralleiste Ursprungs. Interessanterweise sind alle Mitglieder der Shc-Familie in hypertrophen Chondrozyten, der erste Bericht von Shc-Proteinexpression in den Entwicklungsl&auml;ndern Skelett ausgedr&uuml;ckt. Die einzigartige Gewebe-Verteilungsmuster der Shc-Proteine, die wahrscheinlich dazu beitragen, ihre komplexen Gewebe-spezifischen Signalling Funktionen w&auml;hrend der Embryogenese.

Ausdrucksmuster ShcD und Shc Familie Adapter-Proteine w&auml;hrend der Embryonalentwicklung der Maus.

La Src homology e collagene (Shc) proteine fungono da adattatori molecolari nel signaling pathways mediata da una variet&agrave; di recettori di superficie delle cellule. Delle quattro proteine Shc mammiferi, ShcD &egrave; meno caratterizzata. A tal fine, ShcD espressione &egrave; stato documentato e paragonato a quello di altre proteine della famiglie Shc. Nell&#39;embrione di topo in via di sviluppo, espressione di ShcD si sovrappone con quello di altre proteine Shc nel sistema nervoso centrale, con specifica distribuzione nei neuroni post-mitotic. Inoltre, robusto ShcD espressione &egrave; visto all&#39;interno differenziato cellule epiteliali degli organi diversi, cos&igrave; come nel muscolo scheletrico e cardiaco e vari tessuti di origine cresta neurale. Curiosamente, tutti i membri della famiglia Shc sono espressi in condrociti ipertrofica, la prima relazione di espressione della proteina Shc nello scheletro in via di sviluppo. I modelli di distribuzione tessuto unico delle proteine Shc probabilmente contribuiscono alla loro complesse tessuto-specifica segnalazione funzioni durante l&#39;embriogenesi.

Modelli di espressione delle proteine di famiglia adattatore ShcD e Shc durante lo sviluppo embrionale del mouse.

Src&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x3068;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#xFF08;SHC&#xFF09;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x5A92;&#x4ECB;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 4&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;Shc&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x3001;ShcD&#x304C;&#x7279;&#x5FB4;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;ShcD&#x5F0F;&#x304C;&#x6587;&#x66F8;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;Shc&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x5F8C;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x3001;&#x767A;&#x5C55;&#x9014;&#x4E0A;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x5185;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;Shc&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3068;&#x91CD;&#x306A;&#x308B;ShcD&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5805;&#x7262;&#x306A;ShcD&#x5F0F;&#x306F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x81D3;&#x5668;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x53CA;&#x3073;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;Shc&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306F;&#x80A5;&#x5927;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3001;&#x30B9;&#x30B1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;Shc&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Shc&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x5206;&#x5E03;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x80DA;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;ShcD&#x3068;Shc&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;

Src homology&#xACFC; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; (Shc) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC791;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; Shc &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; Shcd&#xB294; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774;. &#xC774; &#xC704;&#xD574; ShcD &#xC2DD; &#xC124;&#xBA85; &#xC774;&#xC5C8;&#xACE0; &#xB2E4;&#xB978; Shc &#xAC00;&#xC871; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;. Shcd&#xC758; &#xC2DD; post-mitotic &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xBD84;&#xD3EC;&#xC640; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; Shc &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC911;&#xBCF5; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xB610;&#xD55C;, &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; ShcD &#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF8; &#xACE8;&#xACA9;&#xACFC; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xADFC;&#xC721;&#xACFC; &#xC2E0;&#xACBD;&#xB3C4;&#xAC00; &#xBA38;&#xB9AC; &#xC720;&#xB798;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAE30;&#xAD00;&#xC758; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xBAA8;&#xB4E0; Shc &#xAC00;&#xC871; hypertrophic chondrocytes, Shc &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBF08;&#xB300;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; Shc &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC870;&#xC9C1; &#xBD84;&#xD3EC; &#xD328;&#xD134; embryogenesis &#xB3D9;&#xC548; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1; &#xAD00;&#xB828; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; Shcd&#xC640; Shc &#xAC00;&#xC871; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC2DD;&#xC774; &#xD328;&#xD134;.

La homolog&#xED;a Src y col&#xE1;geno (SHC) prote&#xED;nas funcionan como adaptadores moleculares en las v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n mediadas por una variedad de receptores de superficie celular. De las cuatro prote&#xED;nas de mam&#xED;feros SHC, ShcD es el menos caracterizado. Para este fin, la expresi&#xF3;n ShcD se document&#xF3; y se compar&#xF3; con la de otras prote&#xED;nas de la familia SHC. En el embri&#xF3;n de rat&#xF3;n en desarrollo, la expresi&#xF3;n de solapa ShcD con la de otras prote&#xED;nas SHC en el sistema nervioso central, con una distribuci&#xF3;n espec&#xED;fica de las neuronas post-mit&#xF3;tico. Adem&#xE1;s, la expresi&#xF3;n ShcD s&#xF3;lido se ve en las c&#xE9;lulas epiteliales diferenciadas de varios &#xF3;rganos, as&#xED; como en el m&#xFA;sculo esquel&#xE9;tico y card&#xED;aco, y diversos tejidos de origen de la cresta neural. Curiosamente, todos los miembros de la familia en situaci&#xF3;n especialmente dif&#xED;cil se expresan en condrocitos hipertr&#xF3;ficos, el primer informe de la expresi&#xF3;n de la prote&#xED;na Shc en el desarrollo del esqueleto. Los patrones de tejidos exclusivos de distribuci&#xF3;n de las prote&#xED;nas SHC probablemente contribuyen a sus complejos tejidos espec&#xED;ficos de las funciones de se&#xF1;alizaci&#xF3;n durante la embriog&#xE9;nesis.

Patrones de expresi&#xF3;n de prote&#xED;nas adaptadoras ShcD y Shc familiares durante el desarrollo embrionario del rat&#xF3;n

&#x53D1;&#x80B2;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x9AD3;&#x9798;&#x78B1;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; (MBPs)&#xFF0C;&#x6240;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x590D;&#x6742; golli (&#x5C11;&#x7A81;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBF;&#x88AD;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF09;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x6B63;&#x7535;&#xFF0C;&#x672C;&#x8D28;&#x4E0A;&#x65E0;&#x5E8F;&#x3001; &#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5177;&#x6709;&#x51E0;&#x79CD;&#x526A;&#x63A5;&#x7684;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x548C;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x7684;&#x4FEE;&#x6539;&#xFF0C;&#x548C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5728;&#x9AD3;&#x9798;&#x538B;&#x5B9E;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7ECF;&#x5178; 18.5 kDa MBP &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x5DF2;&#x7EC4;&#x6210;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178; 92-99 &#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x4E30;&#x5BCC;&#x5730;&#x533A; &#xFF08;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5E8F;&#x5217;-T(92)PRTPPPS(99)-) &#x4E2D;&#x5305;&#x542B;&#x6700;&#x5C0F;&#x7684; SH3 &#x914D;&#x4F53;&#x57DF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5148;&#x524D;&#x5DF2;&#x8868;&#x660E; 18.5 kDa MBP &#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x51E0;&#x4E2A; SH3 &#x57DF;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; Fyn&#xFF0C;Src &#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x5728;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x671F;&#x95F4;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x6B64;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x4EE5;&#x53CA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; Thr92 &#x548C; Thr95&#xFF0C;&#x5F53;&#x524D;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x4F5C;&#x4E86;&#x4E13;&#x95E8;&#x9488;&#x5BF9;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7F51;&#x7AD9;&#x548C; MBP &#x7684; SH3 &#x914D;&#x4F53;&#x57DF;&#x7ED3;&#x6784;&#x5173;&#x952E;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x82E5;&#x5E72; MBP &#x53D8;&#x79CD;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x7B49;&#x6E29;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x91CF;&#x70ED;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x4F4E;&#x4EB2;&#x548C; Fyn &#x7684; SH3 &#x57DF;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x6807;&#x8BB0; GFP &#x7248;&#x672C;&#x4E2D;&#x7684;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C38;&#x751F;&#x7684;&#x819C;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x5F02;&#x5E38;&#x4F38;&#x957F;&#x7387;&#x5C11;&#x7A81;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE; N19 &#x548C; N20.1 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6587;&#x5316;&#x6210;&#x679C;&#x548C;&#x5206;&#x652F;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x589E;&#x52A0;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236; MBP &#x80FD;&#x591F;&#x51CF;&#x5C11;&#x7ECF;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x3002;Thr92 &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4E5F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5BFC;&#x81F4; MBP &#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x5B83;&#x53EF;&#x80FD;&#x5728;&#x53C2;&#x52A0;&#x5176;&#x4ED6;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x901A;&#x8BAF;&#x91CF;&#x3002;&#x5171; Fyn &#x6FC0;&#x9176;&#x4E00;&#x6D3B;&#x6027;&#x5F62;&#x5F0F;&#x4E0E;&#x9AD3;&#x9798;&#x78B1;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x819C;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x62DF;&#x8BA2;&#xFF0C;&#x5E9F;&#x9664;&#x4E86;&#x70B9;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x66FF;&#x6362; MBP &#x7684; SH3 &#x914D;&#x4F53;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x73B0;&#x8C61;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; MBP &#x7684; SH3 &#x914D;&#x4F53;&#x57DF;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x819C;&#x62DF;&#x8BA2;&#x53D1;&#x5C55;&#x5C11;&#x7A81;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;Thr92 &#x548C; Thr95 &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x53EF;&#x8C03;&#x8282;&#x6B64;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;

&#x6539;&#x53D8;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5728;&#x5C11;&#x7A81;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x66FF;&#x6362;&#x548C;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178; pseudophosphorylation SH3 18.5 kDa &#x9AD3;&#x9798;&#x78B1;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x914D;&#x4F53;&#x51CF;&#x5C11;&#x5176;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B; Fyn SH3 &#x57DF;&#x3002;

The developmentally regulated myelin basic proteins (MBPs), which arise from the golli (gene of oligodendrocyte lineage) complex, are highly positively charged, intrinsically disordered, multifunctional proteins having several alternatively spliced isoforms and posttranslational modifications, and they play key roles in myelin compaction. The classic 18.5-kDa MBP isoform has a proline-rich region comprising amino acids 92-99 (murine sequence -T(92)PRTPPPS(99)-) that contains a minimal SH3 ligand domain. We have previously shown that 18.5-kDa MBP binds to several SH3 domains, including that of Fyn, a member of the Src family of tyrosine kinases involved in a number of signaling pathways during CNS development. To determine the physiological role of this binding as well as the role of phosphorylation of Thr92 and Thr95, in the current study we have produced several MBP variants specifically targeting phosphorylation sites and key structural regions of MBP's SH3 ligand domain. Using isothermal titration calorimetry, we have demonstrated that, compared with the wild-type protein, these variants have lower affinity for the SH3 domain of Fyn. Moreover, overexpression of N-terminal-tagged GFP versions in immortalized oligodendroglial N19 and N20.1 cell cultures results in aberrant elongation of membrane processes and increased branching complexity and inhibits the ability of MBP to decrease Ca(2+) influx. Phosphorylation of Thr92 can also cause MBP to traffic to the nucleus, where it may participate in additional protein-protein interactions. Coexpression of MBP with a constitutively active form of Fyn kinase resulted in membrane process elaboration, a phenomenon that was abolished by point amino acid substitutions in MBP's SH3 ligand domain. These results suggest that MBP's SH3 ligand domain plays a key role in intracellular protein interactions in vivo and may be required for proper membrane elaboration of developing oligodendrocytes and, further, that phosphorylation of Thr92 and Thr95 can regulate this function.

Proline substitutions and threonine pseudophosphorylation of the SH3 ligand of 18.5-kDa myelin basic protein decrease its affinity for the Fyn-SH3 domain and alter process development and protein localization in oligodendrocytes.

Les prot&#xE9;ines de my&#xE9;line de base r&#xE9;gul&#xE9;s par le d&#xE9;veloppement (Mbps), qui d&#xE9;coulent de la Golli (g&#xE8;ne de la lign&#xE9;e des oligodendrocytes) complexe, sont fortement charg&#xE9;e positivement, intrins&#xE8;quement d&#xE9;sordonn&#xE9;es, des prot&#xE9;ines multifonctionnelles ayant plusieurs isoformes d&#x26;#39;&#xE9;pissage alternatif et des modifications post-traductionnelles, et ils jouent un r&#xF4;le cl&#xE9; dans la compaction de my&#xE9;line . Le classique 18,5 kDa MBP isoforme a une r&#xE9;gion riche en proline comprenant les acides amin&#xE9;s 92-99 (murin s&#xE9;quence-T (92) PRTPPPS (99) -), qui contient une minimale domaine SH3 ligand. Nous avons pr&#xE9;c&#xE9;demment montr&#xE9; que 18,5 kDa se lie &#xE0; plusieurs MBP domaines SH3, y compris celle de Fyn, un membre de la famille Src de tyrosine kinases impliqu&#xE9;es dans un certain nombre de voies de signalisation au cours du d&#xE9;veloppement du SNC. Pour d&#xE9;terminer le r&#xF4;le physiologique de cette liaison, ainsi que le r&#xF4;le de la phosphorylation de la Thr92 et Thr95, dans l&#x26;#39;&#xE9;tude actuelle, nous avons produit des variantes MBP plusieurs ciblant sp&#xE9;cifiquement les sites de phosphorylation et les principales r&#xE9;gions structurelles de domaine MBP ligand SH3. Utilisation de la calorim&#xE9;trie &#xE0; titration isotherme, nous avons d&#xE9;montr&#xE9; que, comparativement &#xE0; la prot&#xE9;ine de type sauvage, ces variantes ont une plus faible affinit&#xE9; pour le domaine SH3 de Fionie. En outre, la surexpression de versions GFP N-terminal-&#xE9;tiquet&#xE9;s dans immortalis&#xE9; oligodendrogliale N19 et N20.1 cultures cellulaires en r&#xE9;sulte un allongement anormal des proc&#xE9;d&#xE9;s membranaires et une augmentation de branchement complexit&#xE9; et inhibe la capacit&#xE9; de MBP pour diminuer Ca (2 +) afflux. La phosphorylation de la Thr92 peut &#xE9;galement causer des MBP &#xE0; la circulation vers le noyau, o&#xF9; il peut participer &#xE0; d&#x26;#39;autres interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine. La coexpression de MBP avec une forme constitutivement active de Fyn kinase abouti &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;laboration proc&#xE9;d&#xE9; &#xE0; membrane, un ph&#xE9;nom&#xE8;ne qui a &#xE9;t&#xE9; aboli par points des substitutions d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s du domaine MBP ligand SH3. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que le domaine MBP ligand SH3 joue un r&#xF4;le cl&#xE9; dans les interactions entre prot&#xE9;ines intracellulaires in vivo et peuvent &#xEA;tre n&#xE9;cessaires &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;laboration membrane propre des oligodendrocytes en d&#xE9;veloppement et, en outre, que la phosphorylation de Thr92 et Thr95 pouvez r&#xE9;gler cette fonction.

Substitutions Proline et Pseudophosphorylation thr&#xE9;onine du ligand SH3 de 18,5 kDa Myelin Basic Protein diminuer son affinit&#xE9; pour le domaine SH3-Fyn et Alter d&#xE9;veloppement de proc&#xE9;d&#xE9;s et la localisation des prot&#xE9;ines dans les oligodendrocytes

Die entwicklungspolitisch geregelten Myelin grundlegende Proteine (Mbit/s), die durch die Golli (Gen Oligodendrozyt Verwandtschaftsgruppe) komplexe entstehen, sind sehr positiv aufgeladen, intrinsisch ungeordneten, multifunktionelle Proteine mit mehreren alternativ gesplei&szlig;ten Isoformen und posttranslationale Modifikationen, und sie spielen eine Schl&uuml;sselrolle im Myelin Verdichtung. Die klassische 18,5-kDa-MBP-Isoform hat eine Prolin-reiche Region bestehend aus Aminos&auml;uren 92-99 (Murine laufende-T(92)PRTPPPS(99)-), die eine minimale SH3-Ligand-Dom&auml;ne enth&auml;lt. Wir haben bereits gezeigt, dass 18,5-kDa-MBP an mehreren SH3-Dom&auml;nen bindet, einschlie&szlig;lich der Fyn, Mitglied der Src-Familie von Tyrosinkinasen, die in einer Vielzahl von Signalwege w&auml;hrend der CNS-Entwicklung beteiligt. Um zu bestimmen, die physiologische Rolle dieser Bindung sowie die Rolle der Phosphorylierung von Thr92 und Thr95, in der aktuellen Studie haben wir mehrere MBP-Varianten, die speziell auf Phosphorylierung Websites und strukturelle Schl&uuml;sselregionen MBPs-SH3-Ligand-Dom&auml;ne hergestellt. Isothermischer Titrierung Kalorimetrie verwenden, wir haben gezeigt, dass, verglichen mit dem Wildtyp-Protein, diese Varianten haben niedrigere Affinit&auml;t f&uuml;r die SH3-Dom&auml;ne von Fyn. Au&szlig;erdem eine &Uuml;berexpression von N-Terminal-Tag GFP-Versionen in verewigt oligodendroglial N19 und N20.1 Zelle Kulturen Ergebnisse in abweichenden Dehnung von Membranverfahren und Verzweigungen Komplexit&auml;t erh&ouml;ht, und hemmt die F&auml;higkeit des MBP, Ca(2+) Zustrom zu verringern. Phosphorylierung von Thr92 verursachen MBP-Datenverkehr an den Zellkern dem es in zus&auml;tzliche Protein-Protein Interaktionen teilnehmen k&ouml;nnen. Coexpression von MBP mit einer konstitutiv aktive Form von Fyn-Kinase f&uuml;hrte Membran Prozess Ausarbeitung, ein Ph&auml;nomen, das durch Punkt Aminos&auml;ure Ersetzungen in MBPs SH3 Ligand Dom&auml;ne abgeschafft wurde. Diese Ergebnisse legen nahe, dass MBPs SH3 Ligand Dom&auml;ne spielt eine Schl&uuml;sselrolle in der intrazellul&auml;ren Protein-Interaktionen in-vivo und f&uuml;r reibungslose Membran Ausarbeitung der Entwicklung von Oligodendrozyten erforderlich sein und dar&uuml;ber hinaus die Phosphorylierung von Thr92 und Thr95 diese Funktion regulieren kann.

Prolin Auswechslungen und Threonin Pseudophosphorylation des Liganden SH3 von 18,5-kDa-Myelin-basisches Protein seine Affinit&auml;t f&uuml;r die Fyn-SH3-Dom&auml;ne zu verringern, und &auml;ndern Prozess-Entwicklung und Protein-Lokalisierung in Oligodendrozyten.

Le proteine di base inerente allo sviluppo regolamentato mielina (MBPs), derivanti dall&#39;isola la calva (gene del lignaggio Oligodendrocita) complesso, sono altamente positivamente caricate, proteine intrinsecamente disordinate, multifunzionale, avendo diverse isoforme impiombato alternativamente e modifiche di posttranslational, e giocano ruoli chiave nella compattazione di mielina. L&#39;isoforma MBP classico 18,5-kDa &egrave; una regione ricca di prolina composto da aminoacidi 92-99 (murino sequenza-T(92)PRTPPPS(99)-) che contiene un dominio di ligando SH3 minimal. Abbiamo precedentemente dimostrato che 18,5-kDa MBP si lega a diversi domini SH3, compresa quella di Fyn, un membro della famiglia Src tirosina chinasi coinvolta in una serie di vie di segnalazione durante lo sviluppo di CNS. Per determinare il ruolo fisiologico di questa associazione, cos&igrave; come il ruolo della fosforilazione di Thr92 e Thr95, in questo studio abbiamo prodotto diverse varianti MBP specificamente rivolte ai siti di fosforilazione e regioni strutturali chiave di dominio ligand di MBP SH3. Mediante calorimetria isotermica di titolazione, abbiamo dimostrato che, confrontato con la proteina wild-type, queste varianti hanno bassa affinit&agrave; per il dominio SH3 di Fyn. Inoltre, sovraespressione di versioni del N-terminale-tagged GFP in immortalato oligodendrogliali N19 e N20.1 cell culture risultati aberrante allungamento dei processi a membrana e aumentata complessit&agrave; ramificazione e inibisce la capacit&agrave; del MBP per diminuire l&#39;afflusso di Ca(2+). La fosforilazione di Thr92 pu&ograve; anche causare MBP per il traffico verso il nucleo, dove pu&ograve; partecipare alle interazioni proteina-proteina supplementare. Coexpression di MBP con una forma costitutivamente attiva di chinasi Fyn ha portato nell&#39;elaborazione del processo di membrana, un fenomeno che &egrave; stato abolito dal punto aminoacidiche nel dominio di ligando SH3 MBP. Questi risultati suggeriscono che dominio di ligando SH3 MBP gioca un ruolo chiave nelle interazioni della proteina intracellulare in vivo e pu&ograve; essere richiesto per l&#39;elaborazione corretta membrana di sviluppare gli oligodendrociti e, inoltre, che la fosforilazione di Thr92 e Thr95 pu&ograve; regolare questa funzione.

Sostituzioni di prolina e pseudophosphorylation treonina del legante SH3 della proteina basica mielinica di 18,5-kDa diminuire la sua affinit&agrave; per il dominio SH3 Fyn e alterare il processo di localizzazione della proteina e sviluppo negli oligodendrociti.

golli&#xFF08;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x7CFB;&#x8B5C;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#xFF09;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x767A;&#x9054;&#x898F;&#x5236;&#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x5869;&#x57FA;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#xFF08;Mbps&#xFF09;&#x3067;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x5145;&#x96FB;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x4FEE;&#x98FE;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x7121;&#x79E9;&#x5E8F;&#x306A;&#x3001;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;SH3&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080; - &#x30AF;&#x30E9;&#x30B7;&#x30C3;&#x30AF;18.5 kDa&#x306E;MBP&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;92&#x304B;&#x3089;99&#x3092;&#xFF08;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;-T&#xFF08;92&#xFF09;PRTPPPS&#xFF08;99&#xFF09;&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x5BCC;&#x3080;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;18.5 kDa&#x306E;MBP&#x306F;&#x30D5;&#x30E5;&#x30F3;&#x5CF6;&#x3001;CNS&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x306B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6570;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;Src&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;SH3&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;Thr92&#x3068;Thr95&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3068;MBP&#x306E;SH3&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC;&#x69CB;&#x9020;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;MBP&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7B49;&#x6E29;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x71B1;&#x91CF;&#x8A08;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x304C;Fyn&#x306E;SH3&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x4F4E;&#x3044;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x819C;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x4F38;&#x3073;&#x306E;&#x4E0D;&#x6B7B;&#x5316;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;N19&#x3068;N20.1&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;N-&#x672B;&#x7AEF;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x304D;GFP&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x3092;&#x5206;&#x5C90;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;MBP&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3002; Thr92&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x5225;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x53C2;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x6838;&#x3078;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;MBP&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D5;&#x30E5;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x5F62;&#x3068;MBP&#x306E;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x819C;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x7CBE;&#x7DFB;&#x5316;&#x3001;MBP&#x306E;SH3&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x7F6E;&#x63DB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x73FE;&#x8C61;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;MBP&#x306E;SH3&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Thr92&#x3068;Thr95&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x958B;&#x767A;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x819C;&#x306E;&#x7CBE;&#x7DFB;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;

&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3068;18.5 kDa&#x306E;&#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x5869;&#x57FA;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;SH3&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;Pseudophosphorylation&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Fyn-SH3&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5909;&#x66F4;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5C40;&#x5728;&#x5316;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x4E0B;&#x3052;&#x308B;

&#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; golli (oligodendrocyte &#xD608;&#xD1B5;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;)&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xADDC;&#xC81C; myelin &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (MBPs) &#xCDA9;&#xC804; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xBA87;&#xBA87; &#xC591;&#xC790; &#xD0DD;&#xC77C;&#xB85C; &#xC811;&#xD569;&#xB41C; isoforms &#xBC0F; posttranslational &#xC218;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBB34;&#xC9C8;&#xC11C;, &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; myelin &#xC555;&#xCD95;&#xC5D0; &#xD575;&#xC2EC; &#xC5ED;&#xD560;. &#xACE0;&#xC804;&#xC801;&#xC778; 18.5 kDa MBP isoform&#xB294; &#xD504;&#xB864;&#xB9B0; &#xBD80;&#xC720;&#xD55C; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC740; 92-99 (murine-T(92)PRTPPPS(99)-) &#xCD5C;&#xC18C; SH3 &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; 18.5 kDa MBP Fyn, tyrosine kinases CNS &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xC218;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; Src &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; SH3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC5ED;&#xD560; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C;, &#xD604;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; Thr92 &#xBC0F; Thr95, &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC640; MBP&#xC758; SH3 &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC9C0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; MBP &#xBCC0;&#xC885; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xB4F1;&#xC628; &#xC801;&#xC815; &#xC5F4; &#xB7C9;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;, &#xC99D;&#xBA85; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xC885; Fyn&#xC758; SH3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;. &#xB610;&#xD55C;,&#xC5D0; GFP N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xD0DC;&#xADF8; &#xBC84;&#xC804;&#xC758; overexpression oligodendroglial N19 &#xBC0F; N20.1 &#xC140; &#xBB38;&#xD654; &#xB2E4;&#xB978; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xACF5;&#xC815;&#xC758; &#xD0C8; &#xC120; &#xC2E0;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xACB0;&#xACFC; &#xBD88;&#xD6C4;&#xC758; &#xBA85;&#xC791; &#xBC0F; &#xBD84;&#xAE30; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00; Ca(2+) &#xC720;&#xC785; &#xAC10;&#xC18C; MBP&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;. Thr92&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xCD94;&#xAC00; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xCC38;&#xAC00;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD575;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B8;&#xB798;&#xD53D;&#xC744;&#xC5D0; MBP&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Coexpression constitutively &#xD65C;&#xC131; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; Fyn &#xB2C8; MBP&#xC758; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC815;&#xAD50;, &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xB97C; &#xD568;&#xC720;&#xD55C; &#xC0B0; &#xC131; &#xB300;&#xCCB4; MBP&#xC758; SH3 &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xD604;&#xC0C1; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; MBP&#xC758; SH3 &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575;&#xC2EC;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xAC1C;&#xBC1C; oligodendrocytes&#xC758; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC815;&#xAD50;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xB610;&#xD55C;, Thr92 &#xBC0F; thr95&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294;&#xC774; &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xC870;&#xC808;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD504;&#xB864;&#xB9B0; &#xB300;&#xCCB4; &#xBC0F; 18.5 kDa myelin &#xAE30;&#xBCF8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; SH3 &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;&#xC758; &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; pseudophosphorylation Fyn SH3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xACE0; oligodendrocytes&#xC5D0; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xACFC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las prote&#xED;nas de la mielina de desarrollo regulados b&#xE1;sicas (Mbps), que surgen de la golli (gen del linaje de los oligodendrocitos) compleja, altamente cargado positivamente, intr&#xED;nsecamente desordenadas, prote&#xED;nas multifuncionales que tienen varias isoformas de empalme alternativo y modificaciones postraduccionales, y que desempe&#xF1;an un papel clave en la compactaci&#xF3;n de la mielina . El cl&#xE1;sico 18,5 kDa MBP isoforma tiene una regi&#xF3;n rica en prolina que comprende los amino&#xE1;cidos 92-99 (murino secuencia-T (92) PRTPPPS (99) -) que contiene un m&#xED;nimo dominio SH3 ligando. Hemos demostrado anteriormente que el 18,5 kDa MBP se une a varios dominios SH3, incluido el de Fionia, un miembro de la familia Src de las tirosina quinasas implicadas en una serie de v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n durante el desarrollo del sistema nervioso central. Para determinar el papel fisiol&#xF3;gico de esta uni&#xF3;n, as&#xED; como el papel de la fosforilaci&#xF3;n de Thr92 y Thr95, en el presente estudio se han producido varias versiones MBP dirigidas espec&#xED;ficamente a los sitios de fosforilaci&#xF3;n y regiones claves estructurales del dominio SH3 MBP ligando. Utilizando calorimetr&#xED;a de titulaci&#xF3;n isot&#xE9;rmica, hemos demostrado que, en comparaci&#xF3;n con la prote&#xED;na de tipo salvaje, estas variantes tienen una menor afinidad por el dominio SH3 de Fyn. Por otra parte, la sobreexpresi&#xF3;n de las versiones de las buenas pr&#xE1;cticas agrarias N-terminal-etiquetados en inmortalizado oligodendroglial N19 N20.1 y cultivos celulares resulta en el alargamiento aberrante de los procesos de membrana y el aumento de la complejidad y ramificaci&#xF3;n inhibe la capacidad de MBP para disminuir el Ca (2 +) afluencia. La fosforilaci&#xF3;n de Thr92 tambi&#xE9;n puede causar MBP para el tr&#xE1;fico hacia el n&#xFA;cleo, donde se puede participar en otras interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na. Coexpresi&#xF3;n de MBP con una forma constitutivamente activa de Fyn quinasa resultado en la elaboraci&#xF3;n de la membrana de proceso, un fen&#xF3;meno que fue abolida por el punto de sustituciones de amino&#xE1;cidos en el dominio SH3 MBP ligando. Estos resultados sugieren que SH3 MBP dominio ligando juega un papel clave en las interacciones prote&#xED;na intracelular in vivo y puede ser requerido para la elaboraci&#xF3;n membrana adecuada de los oligodendrocitos en desarrollo y, adem&#xE1;s, que la fosforilaci&#xF3;n de Thr92 y Thr95 puede regular esta funci&#xF3;n.

Sustituciones de prolina y treonina Pseudophosphorylation del ligando SH3 de la prote&#xED;na de 18,5 kDa b&#xE1;sica de mielina disminuir su afinidad por el dominio SH3-Fionia y alterar el desarrollo de procesos y localizaci&#xF3;n de la prote&#xED;na en los oligodendrocitos

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Publication title Cited by 5	2010
Publication title Cited by 21	2018

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Expression patterns of ShcD and Shc family adaptor proteins during mouse embryonic development. Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists\| PubMed ID: 21117147	2011
Proline substitutions and threonine pseudophosphorylation of the SH3 ligand of 18.5-kDa myelin basic protein decrease its affinity for the Fyn-SH3 domain and alter process development and pr... Journal of neuroscience research\| PubMed ID: 21887699	2012

Melanie K. B. Wills

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