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Fabrication of Micro-tissues using Modules of Collagen Gel Containing Cells

This protocol describes the fabrication of a type of micro-tissues called modules.  The module approach generates uniform, scalable and vascularized ...

University of Toronto

&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x7528;&#x4E8E;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x6D3B;&#x529B; L929 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4FDD;&#x5229; (&#x7F9F;&#x4E59;&#x57FA;&#x7532;&#x57FA;&#x4E19;&#x70EF;&#x9178;-co-&#x7532;&#x57FA;&#x4E19;&#x70EF;&#x9178;&#x7532;&#x916F;) (HEMA &#x7532;&#x57FA;&#x4E19;&#x70EF;&#x9178;&#x7532;&#x916F;) &#x5FAE;&#x80F6;&#x56CA;&#x3002;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x5149;&#xFF0C;&#x7531; Xenogen &#x6210;&#x50CF;&#x540E;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x5BF9;&#x5FAE;&#x56CA;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x53E6;&#x5916;&#x589E;&#x52A0;&#x968F;&#x7740;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x63A8;&#x79FB;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6570;&#x76EE;&#x6709;&#x6240;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x80F6;&#x56CA;&#x662F;&#x60AC;&#x6D6E;&#x5728; Matrigel &#x548C;&#x76AE;&#x4E0B;&#x6CE8;&#x5C04;&#x3002;&#x4F53;&#x5185; bioluminesence &#x7B2C; 3 &#x5468;&#x589E;&#x52A0;&#x800C;&#x7136;&#x540E;&#x51CF;&#x5C11;&#xFF0C;&#x4E24;&#x8005;&#x90FD;&#x4E0E;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684; mVEGF(164) &#xFF08;1.2 &#x5434;/24 h/200 &#x5FAE;&#x56CA;&#x4F53;&#x5916;&#xFF09; &#xFF1B;VEGF &#x4F20;&#x9012;&#x662F;&#x4ECE;&#x5FAE;&#x56CA;&#x5316;&#x53CC;&#x91CD;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x548C; mVEGF(164))&#x3002;VEGF &#x4EA4;&#x4ED8;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x4EA7;&#x751F;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x5E26;&#x6765;&#x9884;&#x671F;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x5728;&#x5FAE;&#x56CA;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728; 28 &#x5929;&#x7684;&#x8239;&#x53EA;&#x6570;&#x76EE;&#x662F;&#x5C0F;&#x4E8E; 21&#xFF0C;&#x4E00;&#x81F4;&#x4E0E;&#x4EC0;&#x4E48;&#x5929;&#x5C06;&#x9884;&#x671F;&#x7684;&#x51CF;&#x5C11; VEGF &#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E22;&#x5931;&#x65F6;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x63D0;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E0D;&#x652F;&#x6301;&#x5047;&#x8BBE;&#x8BE5;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x4E0E; VEGF &#x7684;&#x5FAE;&#x56CA;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x662F;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x7EA0;&#x6B63;&#x6C27;&#x8FD0;&#x8F93;&#x9650;&#x5236;&#xFF0C;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x5EFA;&#x8BBE;&#x3002;&#x53E6;&#x4E00;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x662F;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5728;&#x5F88;&#x591A;&#x4E2A;&#x661F;&#x671F;&#x4F53;&#x5185;&#x76D1;&#x6D4B;&#x5FAE;&#x56CA;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

&#x9F20;&#x6807; VEGF164 &#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x7F9F;&#x4E59;&#x57FA;&#x7532;&#x57FA;&#x4E19;&#x70EF;&#x9178;&#x7532;&#x916F;-&#x7532;&#x57FA;&#x4E19;&#x70EF;&#x9178;&#x7532;&#x916F;&#x5FAE;&#x56CA;&#x5316;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x4F53;&#x5185;&#xFF1A; &#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x3002;

Bioluminescent imaging was used to track the viability of luciferase transfected L929 cells in poly(hydroxyethyl methacrylate-co-methyl methacrylate) (HEMA-MMA) microcapsules. Bioluminescence, as determined by Xenogen imaging after addition of luciferin to microcapsules in vitro, increased with time, consistent with an increase in cell number. Capsules were suspended in Matrigel and injected subcutaneously. The bioluminesence in vivo increased over the first 3 weeks and then decreased, both with and without the delivery of mVEGF(164) (1.2 ng/24 h/200 microcapsules in vitro); VEGF delivery was from microencapsulated doubly transfected cells (both luciferase and mVEGF(164)). VEGF delivery was sufficient to generate a greater number of vascular structures, but this did not result in the expected increase in microencapsulated cell viability. Interestingly, the number of vessels at day 28 was less than at day 21, consistent with what would be an expected reduction in VEGF secretion when cell viability is lost. The results presented here do not support the hypothesis that transfection of microencapsulated cells with VEGF is sufficient to correct the oxygen transport limitation, at least with this type of tissue engineering construct. On the other hand, bioluminescent imaging proved to be a useful method of monitoring microencapsulated cell viability over many weeks in vivo.

Effect of mouse VEGF164 on the viability of hydroxyethyl methacrylate-methyl methacrylate-microencapsulated cells in vivo: bioluminescence imaging.

Bioluminescent imagerie a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour suivre la viabilit&#xE9; de la lucif&#xE9;rase transfect&#xE9;es des cellules L929 en poly (m&#xE9;thacrylate d&#x26;#39;hydroxy&#xE9;thyle-co-m&#xE9;thacrylate de m&#xE9;thyle) (HEMA-MMA) microcapsules. Bioluminescence, tel que d&#xE9;termin&#xE9; par imagerie Xenogen apr&#xE8;s addition de lucif&#xE9;rine des microcapsules in vitro, augmente avec le temps, conform&#xE9;ment &#xE0; une augmentation du nombre de cellules. Capsules ont &#xE9;t&#xE9; suspendues en Matrigel et injection sous-cutan&#xE9;e. Le bioluminesence in vivo augment&#xE9; au cours des 3 premi&#xE8;res semaines, puis a diminu&#xE9;, &#xE0; la fois avec et sans la livraison de mVEGF (164) (1,2 ng/24 h/200 microcapsules in vitro), la prestation de VEGF &#xE9;tait de microencapsul&#xE9;s cellules doublement transfect&#xE9;es (&#xE0; la fois la lucif&#xE9;rase et mVEGF (164)). La livraison du VEGF a &#xE9;t&#xE9; suffisante pour g&#xE9;n&#xE9;rer un plus grand nombre de structures vasculaires, mais cela n&#x26;#39;a pas abouti &#xE0; l&#x26;#39;augmentation attendue de la viabilit&#xE9; des cellules micro-encapsul&#xE9;e. Fait int&#xE9;ressant, le nombre de navires &#xE0; jour 28 &#xE9;tait inf&#xE9;rieure &#xE0; celle de 21 jours, conform&#xE9;ment &#xE0; ce qui serait une r&#xE9;duction attendue de la s&#xE9;cr&#xE9;tion de VEGF lorsque la viabilit&#xE9; cellulaire est perdue. Les r&#xE9;sultats pr&#xE9;sent&#xE9;s ici ne supportent pas l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se que la transfection de cellules microencapsul&#xE9;es avec le VEGF est suffisant pour corriger la limitation transport de l&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne, du moins avec ce type de l&#x26;#39;ing&#xE9;nierie tissulaire de construire. D&#x26;#39;autre part, bioluminescents imagerie s&#x26;#39;est av&#xE9;r&#xE9;e &#xEA;tre une m&#xE9;thode utile de surveiller la viabilit&#xE9; des cellules micro-encapsul&#xE9;e pendant de nombreuses semaines in vivo.

Effet de la souris VEGF164 sur la viabilit&#xE9; des hydroxy&#xE9;thyl m&#xE9;thacrylate-m&#xE9;thacrylate de m&#xE9;thyle-microencapsul&#xE9;s cellules in vivo: imagerie par bioluminescence

Phosphoreszierende Bildgebung wurde verwendet, um die Lebensf&auml;higkeit der Luciferase transfected verfolgen L929 Zellen in Poly (Hydroxyethyl-Methacrylat-co-Methyl-Methacrylat) (HEMA-MMA) Mikrokapseln. Biolumineszenz, erh&ouml;ht durch Xenogen Bildgebung nach Zugabe von Luciferin zu Mikrokapseln in vitro bestimmt mit der Zeit mit einem Anstieg der Anzahl von Zellen. Kapseln wurden in Matrigel ausgesetzt und subkutan injiziert. Die in-vivo Bioluminesence stieg in den ersten drei Wochen und dann abgenommen, sowohl mit als auch ohne die Bereitstellung von mVEGF(164) (1,2 ng/24 h/200 Mikrokapseln in-vitro); VEGF-Lieferung war von mikroverkapselten doppelt transfected Zellen (Luciferase und mVEGF(164)). VEGF-Lieferung war ausreichend, um eine gr&ouml;&szlig;ere Anzahl von vaskul&auml;ren Strukturen zu erzeugen, aber dadurch nicht in der erwarteten Zunahme in mikroverkapselte Zellviabilit&auml;t. Interessanterweise war die Zahl der Schiffe am Tag 28 weniger als am Tag 21, konsistent mit dem, was ein erwarteter R&uuml;ckgang der VEGF-Sekretion bei w&auml;re Zellviabilit&auml;t verloren geht. Die hier vorgestellten Ergebnisse unterst&uuml;tzen nicht die Hypothese, dass Transfection der MIKROVERKAPSELTER Zellen mit VEGF ist ausreichend, um die Sauerstoff-Transport-Begrenzung, zumindest mit dieser Art von Tissue-engineering Konstrukt zu korrigieren. Auf der anderen Seite erwiesen biolumineszierende Bildgebung eine n&uuml;tzliche Methode zur &Uuml;berwachung von mikroverkapselten Zellviabilit&auml;t &uuml;ber viele Wochen in-vivo.

Auswirkungen auf die Lebensf&auml;higkeit der Hydroxyethyl Methacrylat-Methyl Methacrylat-microencapsulated Maus VEGF164 Zellen in-vivo: Biolumineszenz Bildgebung.

Bioluminescenti imaging &egrave; stato utilizzato per monitorare la redditivit&agrave; della luciferasi transfected L929 cells in poli (metacrilato di idrossietile metacrilato-co-metil) microcapsule (HEMA-MMA). Bioluminescenza, come determinato da Xenogen imaging dopo aggiunta di luciferina di microcapsule in vitro, aumentato con il tempo, coerenza con un aumento nel numero delle cellule. Capsule sono stati sospesi in Matrigel e iniettate per via sottocutanea. La bioluminesence in vivo aumentato oltre le prime 3 settimane e poi diminuito, sia con che senza la consegna di mVEGF(164) (1,2 ng/24 h/200 microcapsule in vitro); VEGF consegna era da celle transfected doppiamente microincapsulate (luciferase e mVEGF(164)). Consegna VEGF &egrave; stata sufficiente a generare un maggior numero di strutture vascolari, ma questo non si traducesse in aumento previsto in vitalit&agrave; cellulare microincapsulati. &Egrave; interessante notare che, il numero di navi al giorno 28 &egrave; stato inferiore al giorno 21, coerente con quello che sarebbe una prevista riduzione della secrezione di VEGF quando si perde la vitalit&agrave; cellulare. I risultati presentati qui non supportano l&#39;ipotesi che transfezione delle celle microincapsulate con VEGF &egrave; sufficiente a correggere la limitazione del trasporto di ossigeno, almeno con questo tipo di costrutto di ingegneria dei tessuti. D&#39;altra parte, bioluminescenti imaging ha dimostrato di essere un metodo utile di monitoraggio vitalit&agrave; cellulare microincapsulati molte settimane in vivo.

Effetto del mouse VEGF164 sull&#39;attuabilit&agrave; di idrossietil metacrilato-metil metacrilato-microincapsulati cells in vivo: imaging di bioluminescenza.

&#x751F;&#x7269;&#x767A;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;L929&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#xFF08;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30E1;&#x30BF;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;-co-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30E1;&#x30BF;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#xFF09;&#xFF08;HEMA-MMA&#xFF09;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x751F;&#x7269;&#x767A;&#x5149;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x6DFB;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;Xenogen&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6570;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;&#x6642;&#x9593;&#x3068;&#x3068;&#x3082;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B2;&#x30EB;&#x306B;&#x61F8;&#x6FC1;&#x3057;&#x3001;&#x76AE;&#x4E0B;&#x6CE8;&#x5C04;&#x3057;&#x305F;&#x3002; in vivo&#x3067;&#x306E;bioluminesence&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3068;mVEGF&#xFF08;164&#xFF09;&#xFF08;in vitro&#x3067;1.2 ng/24 h/200&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#xFF09;&#x306E;&#x914D;&#x9054;&#x306A;&#x3057;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3066;&#x6700;&#x521D;&#x306E;3&#x9031;&#x9593;&#x306B;&#x6E21;&#x3063;&#x3066;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;VEGF&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x5316;&#x4E8C;&#x91CD;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304B;&#x3089;&#x3067;&#x3057;&#x305F;mVEGF&#xFF08;164&#xFF09;&#xFF09;&#x3002; VEGF&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x7BA1;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x6570;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x5316;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x304C;&#x4E88;&#x60F3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;28&#x65E5;&#x306B;&#x8239;&#x306E;&#x6570;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x304C;&#x5931;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;VEGF&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x4E88;&#x60F3;&#x524A;&#x6E1B;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;21&#x65E5;&#x76EE;&#x672A;&#x6E80;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x793A;&#x3059;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;VEGF&#x3068;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x5316;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x7D44;&#x7E54;&#x5DE5;&#x5B66;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x7A2E;&#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x7269;&#x3067;&#x3001;&#x9178;&#x7D20;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x3092;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x767A;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x6570;&#x9031;&#x9593;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x5316;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30E1;&#x30BF;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3001;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30E1;&#x30BF;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x5316;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;VEGF164&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#xFF1A;&#x751F;&#x7269;&#x767A;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;

&#xBD80; &#xC601;&#xC0C1; &#xD398; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xCD94;&#xC801; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C; L929 &#xC138;&#xD3EC; &#xD3F4; &#xB9AC; (hydroxyethyl &#xBA54; &#xD2F8; &#xBA54;&#xD0C0; &#xD06C; &#xB9B4; &#xC0B0;-co &#xBA54;&#xD0C0; &#xD06C; &#xB9B4; &#xC0B0;) (HEMA-&#xBCD1; &#xBB34; &#xCCAD;) microcapsules. &#xC0DD;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xAD11;, &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; microcapsules &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB9B0;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xD6C4; Xenogen &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC815;&#xD55C; &#xC2DC;&#xAC04;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; &#xC77C;&#xAD00; &#xB41C; &#xC99D;&#xAC00;. &#xCEA1;&#xC290; Matrigel&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xC2DC; &#xC911;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; subcutaneously&#xC744; &#xC8FC;&#xC785; &#xD588;&#xB2E4;. Vivo&#xC5D0;&#xC11C; bioluminesence &#xCCAB; 3 &#xC8FC; &#xB3D9;&#xC548; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xAC10;&#xC18C;&#xC640; mVEGF(164) (1.2 ng/24 h/200 microcapsules &#xCCB4; &#xC678;); &#xBC30;&#xB2EC; &#xC5C6;&#xC774; &#xBAA8;&#xB450; (&#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xBC0F; mVEGF(164)) microencapsulated &#xC774;&#xC911; transfected &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; VEGF &#xBC30;&#xB2EC;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4;. VEGF &#xBC30;&#xB2EC; &#xD608;&#xAD00; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xC218;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;&#xC774; microencapsulated &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xC608;&#xC0C1; &#xC99D;&#xAC00; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xD558;&#xB8E8; 28&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120;&#xBC15; &#xC218; &#xC8FC; 21, &#xC77C;&#xAD00; &#xB41C; &#xBB34;&#xC5C7; &#xAC83; VEGF &#xBD84; &#xBE44;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC608;&#xC0C1;&#xB41C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825; &#xC190;&#xC2E4; &#xB418; &#xBA74; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB35C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; VEGF&#xC640; microencapsulated &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; transfection&#xB294; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4;&#xC774; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xAD6C;&#xC870; &#xC5D4;&#xC9C0;&#xB2C8;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC804;&#xC1A1; &#xC81C;&#xD55C;&#xC744; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD558;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xD55C;&#xD3B8;&#xC73C;&#xB85C;, &#xBC1C;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9CE;&#xC740; &#xC8FC; &#xB3D9;&#xC548; microencapsulated &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC785;&#xC99D;.

Hydroxyethyl &#xBA54;&#xD0C0; &#xD06C; &#xB9B4; &#xC0B0; &#xBA54; &#xD2F8; &#xBA54;&#xD0C0; &#xD06C; &#xB9B4; &#xC0B0; microencapsulated&#xC758; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; vegf164&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; in vivo &#xC138;&#xD3EC;: &#xC0DD;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xAD11; &#xC601;&#xC0C1;.

Bioluminiscente de im&#xE1;genes se utiliza para rastrear la viabilidad de luciferasa transfectadas en c&#xE9;lulas L929 de poli (hidroxietil metacrilato-co-metacrilato de metilo) (HEMA-MMA) microc&#xE1;psulas. La bioluminiscencia, como se determina por formaci&#xF3;n de im&#xE1;genes Xenogen tras la adici&#xF3;n de luciferina a microc&#xE1;psulas in vitro, aument&#xF3; con el tiempo, en consonancia con un aumento del n&#xFA;mero de c&#xE9;lulas. Las c&#xE1;psulas se suspendi&#xF3; en Matrigel y se inyecta por v&#xED;a subcut&#xE1;nea. El bioluminesence in vivo aumentado durante las 3 primeras semanas y luego disminuy&#xF3;, con y sin la entrega de mVEGF (164) (1,2 ng/24 h/200 microc&#xE1;psulas in vitro); entrega VEGF fue de microencapsulados c&#xE9;lulas doblemente transfectadas (tanto luciferasa y mVEGF (164)). Entrega VEGF fue suficiente para generar un mayor n&#xFA;mero de estructuras vasculares, pero esto no result&#xF3; en el incremento esperado de la viabilidad celular microencapsulado. Curiosamente, el n&#xFA;mero de buques en los 28 d&#xED;as fue menor que en el d&#xED;a 21, en consonancia con lo que ser&#xED;a una esperada reducci&#xF3;n en la secreci&#xF3;n de VEGF en la viabilidad celular se pierde. Los resultados presentados aqu&#xED; no apoyan la hip&#xF3;tesis de que la transfecci&#xF3;n de c&#xE9;lulas microencapsuladas con VEGF es suficiente para corregir la limitaci&#xF3;n de transporte de ox&#xED;geno, por lo menos con este tipo de ingenier&#xED;a de tejidos construir. Por otro lado, bioluminiscente im&#xE1;genes demostrado ser un m&#xE9;todo &#xFA;til de seguimiento de la viabilidad celular microencapsulado durante muchas semanas in vivo.

Efecto del rat&#xF3;n VEGF164 sobre la viabilidad de hidroxietil metacrilato de metilo-metacrilato-microencapsulados c&#xE9;lulas in vivo: im&#xE1;genes de bioluminiscencia

Chuen Lo

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