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Rapid Quantification of Mitogen-induced Blastogenesis in T Lymphocytes for Identifying Immunomodulatory Drugs

Lymphocyte proliferation in response to antigenic or mitogenic stimulation is a readily quantifiable phenomenon useful for testing immunomodulatory (i.e., ...

Wright State University

&#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x55DC;&#x78B1;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x767D;&#x8840;&#x75C5; (RBL) &#x548C; Jurkat T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF; (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x901A;&#x9053;&#x6253;&#x5F00;&#x54CD;&#x5E94;&#x88AB;&#x52A8;&#x7ECF;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x3002;&#x5220;&#x9664;&#x5916;&#x90E8;&#x4E8C;&#x4EF7;&#x79BB;&#x5B50;&#x65F6;&#xFF0C;&#x5185;&#x5FC3;&#x6574;&#x6D41;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6E20;&#x9053;&#x627F;&#x8BA4;&#x5355;&#x4EF7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x3002;&#x5185;&#x90E8; Mg(2+) &#x53BB;&#x9664;&#x516C;&#x5F00;&#x5220;&#x9664;&#x5916;&#x90E8;&#x4E8C;&#x4EF7;&#x79BB;&#x5B50;&#x65F6;&#x4E5F;&#x627F;&#x8BA4;&#x5355;&#x4EF7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x5916;&#x5411;&#x6574;&#x6D41;&#x7535;&#x6D41; (Mg(2+) &#x6291;&#x5236;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50; [&#x9EA6;&#x514B;&#x98CE;]&#xFF09;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C;&#x9EA6;&#x514B;&#x98CE;&#x7535;&#x6D41;&#x662F;&#x53EF;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x548C;&#x6574;&#x6D41;&#x5C5E;&#x6027;&#xFF1A; &#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x8352;&#x5E9F;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x5BF9;&#x5916;&#x90E8; Mg(2+)&#x3001; &#x7CBE;&#x80FA;&#x548C; SKF 96365 &#x836F;&#x7406;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x8352;&#x5E9F;&#x7684; MIC &#x5F53;&#x524D;&#x5141;&#x8BB8;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C;&#x9EA6;&#x514B;&#x98CE;&#x5F53;&#x524D;&#x4F4E;&#x5185;&#x90E8; Mg(2+) &#x79BB;&#x5B50;&#x76F8;&#x540C;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x5185;&#x90E8; Mg(2+) &#x53BB;&#x9664;&#x8BF1;&#x5BFC; MIC &#x5F53;&#x524D;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7ECF;&#x548C; EGTA&#xFF0C;&#x6697;&#x793A; Ca(2+) &#x5B58;&#x50A8;&#x6D88;&#x8017;&#x5E76;&#x4E0D;&#x53C2;&#x4E0E;&#x6FC0;&#x6D3B; MIC &#x6E20;&#x9053;&#x3002;&#x589E;&#x52A0;&#x5185;&#x90E8; Mg(2+) &#x4ECE; submicromolar &#x5230; millimolar &#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E0B;&#x964D; MIC &#x7535;&#x6D41;&#x800C;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x6574;&#x6D41;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x6539;&#x53D8;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5F53;&#x524D;&#x6574;&#x987F;&#x6216;&#x632F;&#x5E45;&#x3002;&#x5916;&#x90E8;&#x7684; Mg(2+) &#x548C; Cs(+) &#x8FDB;&#x884C;&#x7535;&#x6D41;&#x901A;&#x8FC7;&#x9EA6;&#x514B;&#x98CE;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;SKF 96365 &#x53EF;&#x9006;&#x963B;&#x6B62;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5F53;&#x524D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x8F6C;&#x5730;&#x6291;&#x5236;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x9EA6;&#x514B;&#x98CE;&#x3002;Micromolar &#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x963B;&#x6B62;&#x5355;&#x4EF7; MIC &#x76EE;&#x524D;&#x53EF;&#x9006;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5355;&#x4EF7;&#x88C2;&#x7EB9;&#x5F53;&#x524D;&#x7CBE;&#x80FA;&#x548C;&#x80DE;&#x5916;&#x7684; Mg(2+)&#x3002;MIC &#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x5F88;&#x76F8;&#x914D;&#x514B;&#x9686;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE; TRPM7 &#x6E20;&#x9053;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#x5728;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C;&#x9EA6;&#x514B;&#x98CE;&#x901A;&#x9053;&#x91CD;&#x65B0;&#x8BC4;&#x4F30;&#x3002;

RBL &#x7EC6;&#x80DE;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C;&#x9EA6;&#x514B;&#x98CE;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;

In rat basophilic leukemia (RBL) cells and Jurkat T cells, Ca(2+) release-activated Ca(2+) (CRAC) channels open in response to passive Ca(2+) store depletion. Inwardly rectifying CRAC channels admit monovalent cations when external divalent ions are removed. Removal of internal Mg(2+) exposes an outwardly rectifying current (Mg(2+)-inhibited cation [MIC]) that also admits monovalent cations when external divalent ions are removed. Here we demonstrate that CRAC and MIC currents are separable by ion selectivity and rectification properties: by kinetics of activation and susceptibility to run-down and by pharmacological sensitivity to external Mg(2+), spermine, and SKF-96365. Importantly, selective run-down of MIC current allowed CRAC and MIC current to be characterized under identical ionic conditions with low internal Mg(2+). Removal of internal Mg(2+) induced MIC current despite widely varying Ca(2+) and EGTA levels, suggesting that Ca(2+)-store depletion is not involved in activation of MIC channels. Increasing internal Mg(2+) from submicromolar to millimolar levels decreased MIC currents without affecting rectification but did not alter CRAC current rectification or amplitudes. External Mg(2+) and Cs(+) carried current through MIC but not CRAC channels. SKF-96365 blocked CRAC current reversibly but inhibited MIC current irreversibly. At micromolar concentrations, both spermine and extracellular Mg(2+) blocked monovalent MIC current reversibly but not monovalent CRAC current. The biophysical characteristics of MIC current match well with cloned and expressed TRPM7 channels. Previous results are reevaluated in terms of separate CRAC and MIC channels.

Distinct properties of CRAC and MIC channels in RBL cells.

Dans rat basophiles leuc&#xE9;miques (RBL) et des cellules lymphocytes T Jurkat, Ca (2 +) &#xE0; lib&#xE9;ration activ&#xE9;s Ca (2 +) (CRAC) des canaux ouverts en r&#xE9;ponse &#xE0; passif de Ca (2 +) magasin &#xE9;puisement. Int&#xE9;rieurement redressement canaux CRAC admettre cations monovalents lorsque externes ions divalents sont supprim&#xE9;s. Enl&#xE8;vement de Mg interne (2 +) expose une vers l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur de redressement de courant (Mg (2 +)-inhib&#xE9;e cations [MIC]) qui admet &#xE9;galement des cations monovalents lorsque externes des ions divalents sont enlev&#xE9;s. Ici, nous d&#xE9;montrons que les courants CRAC et MIC sont s&#xE9;parables par la s&#xE9;lectivit&#xE9; des ions et des propri&#xE9;t&#xE9;s de rectification: par la cin&#xE9;tique de l&#x26;#39;activation et la susceptibilit&#xE9; &#xE0; d&#xE9;labr&#xE9;s et par la sensibilit&#xE9; pharmacologique externe Mg (2 +), la spermine, et SKF-96365. Il est important, s&#xE9;lective vers le bas de MIC CRAC a permis actuel et MIC actuelle soient caract&#xE9;ris&#xE9;s par des conditions identiques ioniques avec Mg interne faible (2 +). Suppression des internes Mg (2 +) induite par MIC actuelle, malgr&#xE9; un tr&#xE8;s variables Ca (2 +) et les niveaux de EGTA, ce qui sugg&#xE8;re que Ca (2 +) magasin appauvrissement de la couche n&#x26;#39;est pas impliqu&#xE9;e dans l&#x26;#39;activation des canaux MIC. L&#x26;#39;augmentation de Mg interne (2 +) &#xE0; partir submicromolaire &#xE0; des niveaux millimolaires diminu&#xE9; courants MIC sans affecter la rectification, mais ne modifie pas le CRAC de rectification en cours ou amplitudes. Externe Mg (2 +) et Cs (+) r&#xE9;alis&#xE9;e courant &#xE0; travers les canaux MIC, mais pas CRAC. SKF-96365 courant bloqu&#xE9; CRAC r&#xE9;versible, mais a inhib&#xE9; de fa&#xE7;on irr&#xE9;versible MIC actuelle. &#xC0; une concentration micromolaire, &#xE0; la fois la spermine et Mg extracellulaire (2 +) est bloqu&#xE9; de fa&#xE7;on r&#xE9;versible MIC monovalent courant mais pas monovalent CRAC courant. Les caract&#xE9;ristiques biophysiques du match MIC actuelle ainsi avec clon&#xE9; et exprim&#xE9; canaux TRPM7. Les r&#xE9;sultats pr&#xE9;c&#xE9;dents sont r&#xE9;&#xE9;valu&#xE9;s en termes de CRAC s&#xE9;par&#xE9;e et canaux MIC.

Des propri&#xE9;t&#xE9;s distinctes de canaux CRAC et MIC dans les cellules RBL

Unterschiedliche Eigenschaften von CRAC und MIC-Kan&#xE4;le in RBL-Zellen.

Nel ratto Leucemia basofila (RBL) e cellule Jurkat T, Ca(2+) rilascio attivato canali Ca(2+) (CRAC) aperto in risposta al passivo Ca(2+) negozio di esaurimento. Interiormente che rettifica il CRAC canali ammettono cationi monovalenti, quando gli ioni bivalenti esterni vengono rimossi. Rimozione di Mg(2+) interno espone una corrente esteriormente rettifica (Mg(2+)-inibito catione [MIC]) che ammette anche cationi monovalenti, quando gli ioni bivalenti esterni vengono rimossi. Qui dimostriamo che CRAC e MIC correnti sono separabili dalle propriet&agrave; di selettivit&agrave; e rettifica di ioni: cinetica di attivazione e suscettibilit&agrave; alla fatiscente e sensibilit&agrave; farmacologica per esterni Mg(2+), spermina e SKF-96365. Importante, fatiscente selettiva di MIC corrente consentita CRAC e MIC corrente ad essere caratterizzato in condizioni identiche ioniche con Mg(2+) interna bassa. Rimozione di Mg(2+) interna indotta MIC attuale nonostante ampiamente diversi livelli Ca(2+) ed EGTA, suggerendo che esaurimento Ca(2+)-store non &egrave; coinvolto nell&#39;attivazione dei canali MIC. Aumento interno Mg(2+) da submicromolar a livelli millimolare diminuito le correnti MIC senza intaccare la rettifica ma non alterava CRAC attuale rettifica o ampiezze. Esterno Mg(2+) e Cs(+) portato corrente attraverso il microfono, ma non i canali di CRAC. SKF-96365 bloccato reversibilmente CRAC corrente ma inibiscono irreversibilmente MIC corrente. A concentrazioni micromolari, spermina sia extracellulare Mg(2+) bloccato monovalente MIC corrente reversibilmente ma non monovalente CRAC corrente. Le caratteristiche biofisiche della corrispondenza corrente MIC bene con canali TRPM7 clonati ed espressi. I risultati precedenti vengono rivalutati in termini di canali separati di CRAC e MIC.

Propriet&agrave; distinte di canali CRAC e MIC in cellule RBL.

&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x597D;&#x5869;&#x57FA;&#x7403;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#xFF08;RBL&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Jurkat T&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;Ca&#x306E;&#x53D7;&#x52D5;&#x7684;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x958B;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x67AF;&#x6E07;&#x3002;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x90E8;&#x306E;&#x4E8C;&#x4FA1;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x304C;&#x9664;&#x53BB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4E00;&#x4FA1;&#x306E;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x3092;&#x8A8D;&#x3081;&#x308B;&#x3002;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306F;&#x3001;&#x516C;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x5916;&#x5074;&#x306B;&#x6574;&#x6D41;&#x96FB;&#x6D41;&#xFF08;&#x306E;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;[MIC]&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x90E8;&#x4FA1;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x304C;&#x9664;&#x53BB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3082;&#x3001;&#x4E00;&#x4FA1;&#x306E;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3092;&#x8A8D;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9F;&#x884C;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3057;&#x3001;&#x5916;&#x90E8;&#x306E;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3001;&#x30B9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;SKF-96365&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#xFF1A;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;CRAC&#x3068;MIC&#x96FB;&#x6D41;&#x304C;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x3068;&#x6574;&#x6D41;&#x7279;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5206;&#x96E2;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;MIC&#x8A31;&#x5BB9;&#x96FB;&#x6D41;CRAC&#x3068;&#x4F4E;&#x3044;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3068;&#x540C;&#x4E00;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;MIC&#x306E;&#x5B9F;&#x884C;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x9078;&#x629E;&#x3002;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x304C;MIC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x5E83;&#x304F;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;EGTA&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x8A98;&#x5C0E;MIC&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x304B;&#x3089;&#x30DF;&#x30EA;&#x30E2;&#x30EB;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3068;&#x6574;&#x6D41;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;MIC&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x304C;&#x3001;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x6574;&#x6D41;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x632F;&#x5E45;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5916;&#x90E8;&#x306E;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x53CA;&#x3073;Cs&#xFF08;+&#xFF09;&#x306F;MIC&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x73FE;&#x5728;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x904B;&#x3093;&#x3060;&#x3002; SKF-96365&#x306F;&#x3001;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306B;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306B;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;MIC&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x3001;&#x30B9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30DF;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x306E;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x4E00;&#x4FA1;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x4E00;&#x4FA1;MIC&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x5316;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;TRPM7&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x3088;&#x304F;MIC&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x5225;&#x3005;&#x306E;CRAC&#x3068;MIC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x7528;&#x8A9E;&#x3067;&#x518D;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

RBL&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;CRAC&#x3068;MIC&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x500B;&#x5225;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;

&#xC950; basophilic &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; (RBL) &#xC140;&#xACFC; Jurkat T &#xC138;&#xD3EC;, Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131; Ca(2+) (CRAC) &#xCC44;&#xB110; &#xC218;&#xB3D9; Ca(2+) &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xACE0;&#xAC08;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5FD;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCC44;&#xB110; &#xC678;&#xBD80; divalent &#xC774;&#xC628;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70;&#xD560; &#xB54C; &#xC5EC;&#xB7EC;&#xCC28;&#xB840; &#xC591;&#xC774;&#xC628;&#xC744; &#xC778;&#xC815; &#xB0B4;&#xC2EC; CRAC &#xC815;&#xB958;. &#xB0B4;&#xBD80; mg(2+)&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xB294; &#xAC89;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; &#xC804;&#xB958; (Mg(2+) &#xC800;&#xD574; &#xC591;&#xC774;&#xC628; [&#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;]) &#xB610;&#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC;&#xCC28;&#xB840; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xC778;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xC678;&#xBD80; divalent &#xC774;&#xC628; &#xC81C;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; CRAC &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xC804;&#xB958;&#xB294; &#xC774;&#xC628; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC815;&#xB958; &#xC18D;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xB9AC;&#xD560; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;: &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xBBFC;&#xAC10;&#xC131; &#xB0A1; &#xC558;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xBC0F; &#xC57D;&#xB9AC; &#xAC10;&#xB3C4;&#xB97C; &#xC678;&#xBD80; Mg(2+), spermine, SKF-96365. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xD604;&#xC7AC; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; run-down CRAC &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xD604;&#xC7AC; &#xB0AE;&#xC740; &#xB0B4;&#xBD80; mg(2+)&#xC640; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC774;&#xC628; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xB0B4;&#xBD80; Mg(2+) &#xC81C;&#xAC70; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; Ca(2+) &#xBC0F; EGTA &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xD604;&#xC7AC; &#xC81C;&#xC548; Ca(2+) &#xB9E4;&#xC7A5; &#xACE0;&#xAC08; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Submicromolar&#xC5D0;&#xC11C; millimolar &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0B4;&#xBD80; Mg(2+) &#xC99D;&#xAC00; &#xC815;&#xB958;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xC804;&#xB958; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; CRAC &#xD604;&#xC7AC; &#xC815;&#xB958; &#xB610;&#xB294; &#xC9C4;&#xD3ED;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC678;&#xBD80; mg(2+)&#xC640; Cs(+) &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xD558;&#xC9C0; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD604;&#xC7AC; &#xC2E4;&#xC2DC;. SKF-96365 CRAC &#xD604;&#xC7AC; &#xC5ED; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD604;&#xC7AC; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; irreversibly &#xC800;&#xD574;. Micromolar &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; spermine &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; Mg(2+) &#xC5EC;&#xB7EC;&#xCC28;&#xB840; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xD604;&#xC7AC; &#xC544;&#xB2C8;&#xC9C0; &#xC5ED; &#xC5EC;&#xB7EC;&#xCC28;&#xB840; CRAC &#xD604;&#xC7AC; &#xCC28;&#xB2E8;. &#xD604;&#xC7AC; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xD2B9;&#xC131; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xD45C;&#xD604; TRPM7 &#xCC44;&#xB110;&#xACFC; &#xC798; &#xC77C;&#xCE58;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCC4;&#xB3C4; CRAC &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xCC44;&#xB110;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xACC4;&#xC0B0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RBL &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; CRAC &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xACE0;&#xC720; &#xC18D;&#xC131;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

En ratas con leucemia bas&#xF3;filas (RBL) y las c&#xE9;lulas Jurkat T, Ca (2 +) activados por la liberaci&#xF3;n de Ca (2 +) (CRAC) de canales abiertos en respuesta a la pasiva Ca (2 +) tienda de agotamiento. Interiormente rectificar los canales CRAC admitir cationes monovalentes cuando externos iones divalentes se retiran. La eliminaci&#xF3;n de interna Mg (2 +) expone una exteriormente rectificar la corriente (Mg (2 +)-inhibida cati&#xF3;n [MIC]) que tambi&#xE9;n admite cationes monovalentes cuando externos iones divalentes se eliminan. Aqu&#xED; nos demuestran que las corrientes de CRAC y MIC son separables por la selectividad de iones y las propiedades de rectificaci&#xF3;n: por la cin&#xE9;tica de activaci&#xF3;n y la susceptibilidad a correr hacia abajo y por la sensibilidad farmacol&#xF3;gica a fuentes externas de Mg (2 +), espermina, y SKF 96365. Es importante destacar que, selectivo deteriorado de MIC actual CRAC permitido y MIC corriente que se caracteriza en id&#xE9;nticas condiciones i&#xF3;nicas con Mg interna baja (2 +). La eliminaci&#xF3;n de interna Mg (2 +) MIC corriente inducida a pesar ampliamente variables de Ca (2 +) y los niveles de EGTA, lo que sugiere que el Ca (2 +)-almac&#xE9;n agotamiento no est&#xE1; implicado en la activaci&#xF3;n de los canales MIC. El aumento de Mg interna (2 +) a partir submicromolar a los niveles de disminuci&#xF3;n de las corrientes milimolares MIC sin afectar a la rectificaci&#xF3;n, pero no alter&#xF3; la rectificaci&#xF3;n CRAC actual o la amplitud. Externo Mg (2 +) y C (+) lleva corriente a trav&#xE9;s de los canales MIC, pero no CRAC. SKF-96365 bloqueado CRAC actual reversible, pero inhibe MIC actual irreversible. A concentraciones micromolares, tanto espermina y Mg extracelular (2 +) bloqueado MIC actual monovalente reversiblemente pero no monovalente CRAC actual. Las caracter&#xED;sticas biof&#xED;sicas del partido MIC actual y con clonado y expresado TRPM7 canales. Los resultados anteriores se vuelven a evaluar en t&#xE9;rminos de la CRAC por separado y los canales MIC.

Distintas propiedades de los canales CRAC y el MIC en las c&#xE9;lulas RBL

We used differential screening of cDNAs from individual taste receptor cells to identify candidate taste transduction elements in mice. Among the differentially expressed clones, one encoded Trpm5, a member of the mammalian family of transient receptor potential (TRP) channels. We found Trpm5 to be expressed in a restricted manner, with particularly high levels in taste tissue. In taste cells, Trpm5 was coexpressed with taste-signaling molecules such as alpha-gustducin, Ggamma13, phospholipase C-beta2 (PLC-beta2) and inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type III (IP3R3). Our heterologous expression studies of Trpm5 indicate that it functions as a cationic channel that is gated when internal calcium stores are depleted. Trpm5 may be responsible for capacitative calcium entry in taste receptor cells that respond to bitter and/or sweet compounds.

A transient receptor potential channel expressed in taste receptor cells.

TRPM7 &#x9891;&#x9053;&#x662F;&#x5177;&#x5907;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; alpha &#x6FC0;&#x9176;&#x57DF;&#x7684;&#x975E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x6709;&#x4EBA;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; TRPM7 &#x6E20;&#x9053;&#x662F;&#x6FC0;&#x6D3B; &#xFF08;&#x96A7;&#x9053;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x65E0;&#x635F; et al&#xFF0C;2001&#x5E74;) &#x6216;&#x6291;&#x5236; (&#x7EB3;&#x5FB7;&#x52D2;&#x7B49;&#x4EBA;&#xFF0C;2001 &#x5E74;&#xFF09; &#x7531;&#x900F;&#x6790; millimolar &#x6C34;&#x5E73;&#x7684; ATP &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5DF2;&#x5728; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; RBL &#xFF08;&#x5927;&#x9F20;&#x55DC;&#x78B1;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#xFF09; &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x547D;&#x540D;&#x7684;&#x739B;&#x683C;&#x5357; &#xFF08;&#x5BF9;&#x4E8E; Mg(2+) &#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x6291;&#x5236;&#x91D1;&#x5C5E;) &#x6216;&#x9EA6;&#x514B;&#x98CE; &#xFF08;&#x5BF9;&#x4E8E; Mg(2+) &#x6291;&#x5236;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;) &#x53D1;&#x73B0;&#x7684; TRPM7 &#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x5185;&#x90E8; Mg(2+)&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F; MgATP &#x6291;&#x5236;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7535;&#x6D41;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28; MgATP&#xFF0C;&#x7531; millimolar &#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x900F;&#x6790;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6709;&#x6548;&#x6291;&#x5236;&#x53EA;&#x5F53;&#x5F31; Mg(2+) &#x87AF;&#x5408;&#x5242;&#x662F;&#x5438;&#x7BA1;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;MgATP &#x4F5C;&#x4E3A; Mg(2+) &#x7684;&#x6765;&#x6E90;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x7684;&#x6E90;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x751F;&#x7269;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x4F7F;&#x7528;&#x9EA6;&#x514B;&#x98CE;&#x901A;&#x9053;&#x672C;&#x8EAB;&#x7684;&#x5B54;&#x9699;&#x5185;&#x53EF;&#x4ECE;&#x5916;&#x90E8;&#x8BBF;&#x95EE;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7B49;&#x6469;&#x5C14;&#x7684; MgCl(2) &#x548C; MgATP &#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x5305;&#x542B;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6570;&#x91CF;&#x7684;&#x514D;&#x8D39;&#x7684; Mg(2+)&#xFF0C;&#x89E3;&#x91CA;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x5B8C;&#x5168;&#x6291;&#x5236; Mg(2+) &#x548C; MgATP &#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x6570;&#x503C;&#x90FD;&#x662F;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E; Mg(2+) &#x4E0D;&#x552F;&#x4E00;&#x5728;&#x5176;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5982; Ba(2+)&#x3001; Sr(2+)&#x3001; Zn(2+)&#x3001; Mn(2+) &#x53EF;&#x4EE5;&#x66FF;&#x4EE3; Mg(2+)&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA; MIC &#x5F53;&#x524D;&#x6291;&#x5236;&#x53D1;&#x751F;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x4E8C;&#x4EF7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x3002;

MIC &#x6E20;&#x9053;&#x5747;&#x7531;&#x5185;&#x90E8;&#x7684;&#x4E8C;&#x4EF7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x6709;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

TRPM7 channels are nonselective cation channels that possess a functional alpha-kinase domain. It has been proposed that heterologously expressed TRPM7 channels are activated (Runnels et al., 2001) or inhibited (Nadler et al., 2001) by dialyzing the cell with millimolar levels of ATP. The endogenous correlate of TRPM7 has been identified in T-lymphocytes and RBL (rat basophilic leukemia) cells and named MagNuM (for Mg(2+)-nucleotide-inhibited metal) or MIC (for Mg(2+)-inhibited cation). Here, we report that internal Mg(2+) rather than MgATP inhibits this current. Cytoplasmic MgATP, supplied by dialysis at millimolar concentrations, effectively inhibits only when a weak Mg(2+) chelator is present in the pipette solution. Thus, MgATP acts as a source of Mg(2+) rather than a source of ATP. Using an externally accessible site within the pore of the MIC channel itself as a bioassay, we show that equimolar MgCl(2) and MgATP solutions contain similar amounts of free Mg(2+), explaining the fact that numeric values of Mg(2+) and MgATP concentrations necessary for complete inhibition are the same. Furthermore, we demonstrate that Mg(2+) is not unique in its inhibitory action, as Ba(2+), Sr(2+), Zn(2+), and Mn(2+) can substitute for Mg(2+), causing complete inhibition. We conclude that MIC current inhibition occurs simply by divalent cations.

MIC channels are inhibited by internal divalent cations but not ATP.

TRPM7 canaux sont des canaux cationiques non s&#xE9;lectifs qui poss&#xE8;dent une fonction alpha-kinase de domaine. Il a &#xE9;t&#xE9; propos&#xE9; que h&#xE9;t&#xE9;rologue exprim&#xE9;es canaux TRPM7 sont activ&#xE9;s (Runnels et al., 2001) ou interdit (Nadler et al., 2001) par la cellule de dialyse avec des niveaux millimolaires d&#x26;#39;ATP. Le corr&#xE9;lat de TRPM7 endog&#xE8;ne a &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;e dans les lymphocytes T et RBL (rat basophile leuc&#xE9;mie) des cellules et nomm&#xE9; Magnum (pour Mg (2 +)-nucl&#xE9;otides-inhib&#xE9;e en m&#xE9;tal) ou MIC (pour Mg (2 +)-inhib&#xE9;e cation). Ici, nous d&#xE9;clarons que Mg interne (2 +) plut&#xF4;t que MgATP inhibe ce courant. MgATP cytoplasmique, fourni par dialyse &#xE0; des concentrations millimolaires, inhibe efficacement que lorsqu&#x26;#39;un Mg faible (2 +) ch&#xE9;lateur est pr&#xE9;sent dans la solution de la pipette. Ainsi, MgATP agit comme une source de Mg (2 +), plut&#xF4;t que d&#x26;#39;une source de l&#x26;#39;ATP. En utilisant un site accessible de l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur dans le pore du canal MIC lui-m&#xEA;me comme un essai biologique, nous montrons que des solutions &#xE9;quimolaires de MgCl (2) et MgATP contiennent des quantit&#xE9;s similaires de libre Mg (2 +), expliquant le fait que les valeurs num&#xE9;riques de Mg (2 + ) et les concentrations MgATP n&#xE9;cessaires pour l&#x26;#39;inhibition compl&#xE8;te sont les m&#xEA;mes. En outre, nous d&#xE9;montrons que Mg (2 +) n&#x26;#39;est pas unique dans son action inhibitrice, comme Ba (2 +), Sr (2 +), Zn (2 +), et Mn (2 +) peuvent se substituer &#xE0; Mg (2 + ), provoquant une inhibition compl&#xE8;te. Nous concluons que l&#x26;#39;inhibition se produit tout simplement MIC actuelle par des cations divalents.

Cha&#xEE;nes MIC sont inhib&#xE9;es par internes cations divalents, mais pas l&#x26;#39;ATP

MIC-Kan&#xE4;le werden durch interne zweiwertigen Kationen gehemmt, nicht aber ATP.

TRPM7 canali sono canali non selettivi cazione che possiedono un dominio alfa-chinasi funzionale. &Egrave; stato proposto che heterologously espressi TRPM7 canali sono attivati (Runnels et al., 2001) o inibito (Nadler et al., 2001) di dialisi la cella con millimolare livelli di ATP. La correlazione endogeno di TRPM7 &egrave; stato identificato nel T-linfociti e RBL (Leucemia basofila ratto) cellule e denominato MagNuM (per metallo Mg(2+)-nucleotide-inibito) o microfono (per inibito Mg(2+) cazione). Qui, segnaliamo che interna Mg(2+) piuttosto che MgATP inibisce questa corrente. Citoplasmatico MgATP, fornito da dialisi a concentrazioni millimolare, inibisce efficacemente solo quando un debole chelante Mg(2+) &egrave; presente nella soluzione di pipetta. Cos&igrave;, MgATP agisce come una fonte di Mg(2+), piuttosto che una fonte di ATP. Utilizzando un sito accessibile dall&#39;esterno all&#39;interno del poro del canale MIC se stessa come un&#39;analisi biologica, mostriamo che soluzioni equimolari di MgCl(2) e MgATP contengono quantit&agrave; simili di Mg(2+) gratuito, spiegando il fatto che i valori numerici delle concentrazioni di Mg(2+) e MgATP necessarie per la completa inibizione sono gli stessi. Inoltre, dimostriamo che Mg(2+) non &egrave; unica nella sua azione inibitoria, come Ba(2+), Sr(2+), Zn(2+) e Mn(2+) possono sostituire Mg(2+), provocando una inibizione totale. Possiamo concludere che l&#39;inibizione di corrente MIC si verifica semplicemente da cationi divalenti.

Canali microfonici sono inibiti da cationi divalenti interni ma non ATP.

TRPM7&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x3B1;-&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x975E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x7570;&#x7A2E;TRPM7&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;ATP&#x306E;&#x30DF;&#x30EA;&#x30E2;&#x30EB;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x900F;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#xFF08;Runnels&#x3089;&#x3001;2001&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7981;&#x6B62;&#xFF08;&#x30CA;&#x30C9;&#x30E9;&#x30FC;&#x3089;&#x3001;2001&#xFF09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;TRPM7&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;MIC&#xFF08;MG&#xFF08;2 +&#xFF09;-&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#xFF09;&#xFF08;MG&#xFF08;2 +&#xFF09;-&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7528;&#xFF09;T-&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x304A;&#x3088;&#x3073;RBL&#xFF08;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x597D;&#x5869;&#x57FA;&#x7403;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30DE;&#x30B0;&#x30CA;&#x30E0;&#x547D;&#x540D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;MgATP&#x3088;&#x308A;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30DF;&#x30EA;&#x30E2;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x900F;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4F9B;&#x7D66;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;MgATP&#x306F;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x306E;&#x307F;&#x5F31;&#x3044;&#x306E;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30AD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5264;&#x306F;&#x3001;&#x30D4;&#x30DA;&#x30C3;&#x30C8;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;MgATP&#x306F;&#x3001;Mg&#x306E;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;ATP&#x306E;&#x4F9B;&#x7D66;&#x6E90;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3068;&#x3057;&#x3066;MIC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x81EA;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x5B54;&#x5185;&#x306B;&#x5916;&#x90E8;&#x304B;&#x3089;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x7B49;&#x30E2;&#x30EB;&#x306E;MgCl&#xFF08;2&#xFF09;MgATP&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;Mg&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x305F;&#x91CF;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;Mg&#x306E;&#x6570;&#x5024;&#xFF08;2 +&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#xFF09;&#x3068;MgATP&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F;&#x540C;&#x3058;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;BA&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306F;&#x3001;Sr&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306F;&#x3001;Zn&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Mn&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#xFF08;2 + Mg&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#xFF09;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;MIC&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x4E8C;&#x4FA1;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3060;&#x3051;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

MIC&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x5185;&#x90E8;&#x4FA1;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;ATP&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

TRPM7 &#xCC44;&#xB110;&#xC740; &#xBE44;&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC54C;&#xD30C; &#xB2C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xC18C;&#xC720; &#xD558;&#xB294;. Heterologously &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; TRPM7 &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; (Runnels &#xC678;., 2001) &#xB610;&#xB294; &#xC800;&#xD574; (Nadler &#xC678;., 2001) ATP millimolar &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC140; dialyzing &#xC5EC;&#xC740;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Trpm7&#xC758; &#xC0DD; &#xC0C1;&#xAD00; T-&#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; RBL (&#xC950; basophilic &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;) &#xC140; &#xBC0F; &#xBA85;&#xBA85; &#xB41C; &#xB9E4;&#xADF8;&#xB118; (Mg(2+) &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC800;&#xD574; &#xAE08;&#xC18D;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB610;&#xB294; MIC (Mg(2+) &#xC800;&#xD574; &#xC591;&#xC774;&#xC628;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; MgATP &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC624;&#xD788;&#xB824; &#xB0B4;&#xBD80; mg(2+)&#xC774;&#xC774; &#xC804;&#xB958; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Millimolar &#xB18D;&#xB3C4;, &#xD22C; &#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; Mgatp&#xC5D0;&#xB294; &#xC57D;&#xD55C; Mg(2+) chelator &#xD53C;&#xD3AB;&#xC740; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, MgATP &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; ATP&#xC758; &#xC18C;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; mg(2+)&#xC758; &#xC18C;&#xC2A4;. &#xC790;&#xCCB4; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAE30; &#xACF5; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC678;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD55C; bioassay&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xC5EC; equimolar MgCl(2) &#xBC0F; MgATP &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xD3EC;&#xD568; &#xBB34;&#xB8CC; Mg(2+) &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC591;&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; mg(2+)&#xC640; Mgatp&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xC22B;&#xC790; &#xAC12;&#xC774; &#xAC19;&#xC740; &#xC0AC;&#xC2E4;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;. &#xB610;&#xD55C;, Ba(2+), Sr(2+), Zn(2+), &#xBC0F; Mn(2+) &#xB300;&#xCCB4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; Mg(2+), &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; mg(2+)&#xB294; &#xAE08;&#xC9C0; &#xC561;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xC720; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACB0;&#xB860; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xD604;&#xC7AC; &#xC800;&#xD574; &#xB2E8;&#xC21C;&#xD788; divalent &#xC591;&#xC774;&#xC628;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xCC44;&#xB110; &#xB0B4;&#xBD80; divalent &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xD558;&#xC9C0; ATP&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

TRPM7 canales son canales de cationes no selectivos que poseen un funcional alfa-quinasa de dominio. Se ha propuesto que heter&#xF3;loga expresada TRPM7 canales se activan (Runnels et al., 2001) o inhibida (Nadler et al., 2001) por di&#xE1;lisis la celda con los niveles de ATP milimolares. La end&#xF3;gena se correlacionan de TRPM7 ha sido identificado en linfocitos T y RBL (rata leucemia bas&#xF3;fila) y c&#xE9;lulas llamado Magnum (para Mg (2 +)-nucle&#xF3;tido-inhibida de metal) o MIC (para Mg (2 +)-inhibida cati&#xF3;n). Aqu&#xED;, nosotros reportamos que el Mg interna (2 +) en lugar de MgATP inhibe esta corriente. MgATP citoplasm&#xE1;tica, suministrado por di&#xE1;lisis en concentraciones milimolares, inhibe eficazmente s&#xF3;lo cuando una d&#xE9;bil Mg (2 +) quelante est&#xE1; presente en la soluci&#xF3;n de la pipeta. As&#xED;, MgATP act&#xFA;a como una fuente de Mg (2 +) en lugar de una fuente de ATP. Uso de un sitio accesible desde el exterior dentro del poro del canal MIC a s&#xED; mismo como un bioensayo, que demuestran que las soluciones equimolares MgCl (2) y MgATP contienen cantidades similares de libre de Mg (2 +), que explica el hecho de que los valores num&#xE9;ricos de Mg (2 + ) y concentraciones MgATP necesarias para la inhibici&#xF3;n completa son los mismos. Adem&#xE1;s, se demuestra que el Mg (2 +) no es &#xFA;nica en su acci&#xF3;n inhibidora, como Ba (2 +), Sr (2 +), Zn (2 +) y Mn (2 +) puede sustituir a Mg (2 + ), causando la inhibici&#xF3;n completa. Se concluye que la inhibici&#xF3;n MIC corriente se produce simplemente por cationes divalentes.

Canales MIC son inhibidas por internos cationes divalentes, pero ATP no

Jurkat T &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x55DC;&#x78B1;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; Mg(2+) &#x6291;&#x5236;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50; (MIC) &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; TRPM7 Eyring &#x7387;&#x6A21;&#x578B;&#x5916;&#x90E8;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x51E0;&#x4E2A;&#x591A;&#x4EF7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x548C; Mg(2+) &#x6765;&#x963B;&#x6B62;&#x5355;&#x4EF7; MIC &#x5F53;&#x524D;&#x4ECE;&#x5916;&#x90E8;&#x7684;&#x7279;&#x5F81;&#x8FDB;&#x884C;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;&#x8150;&#x80FA;&#x3001; &#x4E9A;&#x7CBE;&#x80FA;&#x3001; &#x7CBE;&#x80FA;&#x3001; PhTX-343 &#xFF08;&#x81EA;&#x7136;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x591A;&#x80FA;&#x6BD2;&#x7D20; philanthotoxin &#x7684;&#x884D;&#x751F;&#x54C1;&#xFF09; &#x548C; Mg(2+) &#x6BCF;&#x4E2A;&#x5242;&#x91CF;&#x548C;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x963B;&#x6B62;&#x6307;&#x793A;&#x5185;&#x7535;&#x573A;&#x5BF9;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x963B;&#x585E;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x7CBE;&#x80FA;&#x548C;&#x4F53;&#x79EF;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x5927;&#x7684; PhTX 343 &#x5C55;&#x51FA;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x964D;&#x5E45;&#x4F4E;&#x4E8E;&#x9884;&#x671F;&#x7684;&#x6536;&#x8D39;&#x5BF9;&#x5206;&#x5B50;&#x6570;&#x3002;&#x591A;&#x80FA;&#x548C; Mg(2+) &#x662F; permeant &#x53D7;&#x4F53;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#xFF0C;&#x6839;&#x636E;&#x5757;&#x5728;&#x5F3A;&#x70C8;&#x8D1F;&#x9762;&#x819C;&#x7535;&#x4F4D;&#x7684;&#x6551;&#x6D4E;&#x6765;&#x5224;&#x65AD;&#x3002;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x900F;&#x6790;&#x6CBB;&#x7597;&#x7CBE;&#x80FA; (300 microM) &#x65E0;&#x4EFB;&#x4F55;&#x6548;&#x679C;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x7684;&#x5B54;&#x9699;&#x3002;&#x5355;&#x901A;&#x9053;&#x4E00;&#x7EA7;&#x7CBE;&#x80FA;&#x548C; Mg(2+) &#x8BF1;&#x5BFC; 40 pS &#x5355;&#x901A;&#x9053; flickery &#x5757;&#x3002;&#x6211; / V &#x7279;&#x5F81;&#x548C;&#x591A;&#x80FA;&#x5757;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x5728;&#x8868;&#x8FBE; TRPM7 &#x548C;&#x672C;&#x673A; MIC &#x7535;&#x6D41;&#xFF0C;&#x9EA6;&#x514B;&#x98CE;&#x901A;&#x9053; TRPM7 &#x4E9A;&#x57FA;&#x7EC4;&#x6210;&#x4E0E;&#x672C;&#x673A;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x76F8;&#x4E00;&#x81F4;&#x3002;Eyring &#x7387;&#x6A21;&#x578B;&#x4E3A;&#x6211;&#x5236;&#x5B9A;&#x5230;&#x5E10;&#x6237; / V &#x7279;&#x5F81;&#x548C; MIC &#x7684;&#x5757;&#x4ECE;&#x5916;&#x9762;&#x591A;&#x4EF7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x3002;

MIC &#x548C; TRPM7 permeant &#x63A2;&#x9488;&#x7684;&#x591A;&#x4EF7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x6BDB;&#x5B54;&#x3002;

Recent studies in Jurkat T cells and in rat basophilic leukemia cells revealed an Mg(2+)-inhibited cation (MIC) channel that has electrophysiological properties similar to TRPM7 Eyring rate model expressed exogenously in mammalian cells. Here we compare the characteristics of several polyvalent cations and Mg(2+) to block monovalent MIC current from the outside. Putrescine, spermidine, spermine, PhTX-343 (a derivative of the naturally occurring polyamine toxin philanthotoxin), and Mg(2+) each blocked in a dose- and voltage-dependent manner, indicating a blocking site within the electric field of the ion channel. Spermine and the relatively bulky PhTX-343 exhibited voltage dependence steeper than that expected for the number of charges on the molecule. Polyamines and Mg(2+) are permeant blockers, as judged by relief of block at strongly negative membrane potentials. Intracellular dialysis with spermine (300 microM) had no effect, indicating an asymmetrical pore. At the single-channel level, spermine and Mg(2+) induced flickery block of 40-pS single channels. I/V characteristics and polyamine block are similar in expressed TRPM7 and in native MIC currents, consistent with the conclusion that native MIC channels are composed of TRPM7 subunits. An Eyring rate model is developed to account for I/V characteristics and block of MIC channels by polyvalent cations from the outside.

Polyvalent cations as permeant probes of MIC and TRPM7 pores.

Des &#xE9;tudes r&#xE9;centes dans les cellules T Jurkat et dans les cellules de rat leuc&#xE9;mie basophiles a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; une Mg (2 +)-cation inhib&#xE9;e (MIC) de canal qui poss&#xE8;de des propri&#xE9;t&#xE9;s &#xE9;lectrophysiologiques similaires &#xE0; TRPM7 mod&#xE8;le de taux de Eyring exprim&#xE9;es de mani&#xE8;re exog&#xE8;ne dans les cellules de mammif&#xE8;res. Ici, nous comparons les caract&#xE9;ristiques de plusieurs cations polyvalents et Mg (2 +) pour bloquer MIC monovalent actuelle de l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur. Putrescine, la spermidine, la spermine, PhTX-343 (un d&#xE9;riv&#xE9; de l&#x26;#39;philanthotoxine toxine polyamine naturelle), et Mg (2 +), chacun bloqu&#xE9;s dans une dose et d&#xE9;pendant de la tension de mani&#xE8;re, indiquant un des sites de blocage dans le champ &#xE9;lectrique de l&#x26;#39;ion voie. Spermine et la relativement volumineux PhTX-343 pr&#xE9;sent&#xE9; la d&#xE9;pendance de tension plus forte que celle attendue pour le nombre d&#x26;#39;accusations sur la mol&#xE9;cule. Polyamines et Mg (2 +) sont des bloqueurs perm&#xE9;ant, &#xE0; en juger par le soulagement de bloc aux potentiels de membrane fortement n&#xE9;gatives. Dialyse intracellulaire avec la spermine (300 microM) n&#x26;#39;a eu aucun effet, indiquant un pore asym&#xE9;trique. Au niveau mono-canal, la spermine et Mg (2 +) bloc Flickery induite de 40 pS-canaux unique. Caract&#xE9;ristiques I / V et le bloc de polyamine sont similaires dans TRPM7 exprim&#xE9;s et des courants MIC indig&#xE8;nes, conform&#xE9;ment &#xE0; la conclusion que les canaux MIC indig&#xE8;nes sont compos&#xE9;es de TRPM7 sous-unit&#xE9;s. Un mod&#xE8;le de taux de Eyring est d&#xE9;velopp&#xE9; pour tenir compte de caract&#xE9;ristiques I / V et le bloc de canaux MIC par des cations polyvalents de l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur.

Cations polyvalents comme Sondes perm&#xE9;ants de MIC et TRPM7 Pores

Mehrwertige Kationen wie Permeant Sonden von MIC und TRPM7 Poren.

Recenti studi in cellule Jurkat T e nelle cellule di Leucemia basofila ratto ha rivelato un canale inibito Mg(2+) cazione (MIC) che ha propriet&agrave; elettrofisiologiche simili a Eyring TRPM7 modello di tasso espresso in maniera esogena in cellule di mammifero. Qui si confrontano le caratteristiche dei diversi cationi polivalenti e Mg(2+) di bloccare monovalente MIC corrente dall&#39;esterno. Putrescina, spermidina, spermina, PhTX-343 (un derivato della naturale poliammina tossina philanthotoxin) e Mg(2+) bloccato in maniera dose - e voltaggio-dipendente, che indica un blocco sito all&#39;interno del campo elettrico della scanalatura dello ione. Spermina e la PhTX-343 relativamente ingombranti esposto dipendenza tensione pi&ugrave; ripida rispetto a quello previsto per il numero di cariche sulla molecola. Poliammine e Mg(2+) sono permeant bloccanti, come giudicato dal rilievo del blocco a potenziali di membrana fortemente negativo. Dialisi intracellulare con spermina (300 microM) ha avuto alcun effetto, che indica un poro asimmetrico. A livello di singolo canale, spermina e Mg(2+) indotta flickery blocco dei canali singola 40-pS. I / V caratteristiche e blocco delle poliammine sono simili in TRPM7 espresso e nelle correnti MIC native, coerente con la conclusione che nativa canali microfonici sono composte da subunit&agrave; TRPM7. Un modello di tasso di Eyring &egrave; stato sviluppato per conto per I / le caratteristiche V e blocco di MIC canali di cationi polivalenti dall&#39;esterno.

Cationi polivalenti come sonde permeant MIC e TRPM7 i pori.

Jurkat T&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x597D;&#x5869;&#x57FA;&#x7403;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Mg&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;TRPM7&#x30A2;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#xFF08;MIC&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x90E8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x4E00;&#x4FA1;&#x306E;MIC&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x591A;&#x4FA1;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x53CA;&#x3073;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x30B9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30DF;&#x30B8;&#x30F3;&#x3001;&#x30B9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;PhTX-343&#xFF08;&#x5929;&#x7136;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x6BD2;&#x7D20;philanthotoxin&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5404;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x96FB;&#x754C;&#x4E2D;&#x3067;&#x306E;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x7528;&#x91CF;&#x3068;&#x96FB;&#x5727;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3002;&#x30B9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x304B;&#x3055;&#x3070;&#x308B;PhTX-343&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x4E0A;&#x306E;&#x96FB;&#x8377;&#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x4E88;&#x60F3;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x6025;&#x5CFB;&#x306A;&#x96FB;&#x5727;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5F37;&#x304F;&#x8CA0;&#x306E;&#x819C;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3067;&#x306E;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x6551;&#x6E08;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5224;&#x65AD;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AB;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30B9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30DF;&#x30F3;&#xFF08;300&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#xFF09;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x900F;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x7D30;&#x5B54;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#xB7;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xB7;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3001;&#x30B9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30DF;&#x30F3;&#x53CA;&#x3073;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3001;40 ps&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;flickery&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3002; I / V&#x7279;&#x6027;&#x3068;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x304C;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;TRPM7&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;MIC&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;MIC&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304C;TRPM7&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30A2;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x90E8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x591A;&#x4FA1;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;I / V&#x7279;&#x6027;&#x3068;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x8003;&#x616E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x900F;&#x904E;MIC&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;TRPM7&#x5B54;&#x7B49;&#x306E;&#x591A;&#x4FA1;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;

&#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C; Jurkat T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC950; basophilic &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; &#xC138;&#xD3EC; Mg(2+) &#xC800;&#xD574; &#xC591;&#xC774;&#xC628; (MIC) &#xCC44;&#xB110;&#xC744; electrophysiological &#xC18D;&#xC131;&#xC774; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; exogenously &#xD45C;&#xC2DC; TRPM7 Eyring &#xC18D;&#xB3C4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC11E;&#xC740; &#xC591;&#xC774;&#xC628;&#xACFC; &#xC5EC;&#xB7EC;&#xCC28;&#xB840; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xC678;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; mg(2+)&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBE44;&#xAD50;. Spermine &#xD4E8;, spermidine, PhTX-343 (&#xD30C;&#xC0DD; &#xC790;&#xC5F0;&#xC2A4;&#xB7FD; &#xAC8C; &#xBC1C;&#xC0DD; polyamine &#xB3C5; &#xC18C; philanthotoxin)&#xC640; Mg(2+) &#xAC01; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xBC0F; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC804;&#xAE30;&#xC7A5; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;. Spermine &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD80;&#xD53C;&#xAC00; &#xD070; PhTX-343 &#xC804;&#xC555; &#xC758;&#xC874; &#xC218; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xC694;&#xAE08;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xC0C1; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xAC00;&#xD30C;&#xB974;&#xAC8C; &#xC804;&#xC2DC;. Polyamines&#xC640; mg(2+)&#xB294; permeant &#xCC28;&#xB2E8;&#xAE30;&#xB3C4; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB9C9; &#xC804;&#xC704;&#xC5D0; &#xBE14;&#xB85D;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD310;&#xB2E8;. Spermine (300 microM)&#xC640; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD22C; &#xC11D;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xAE30; &#xACF5; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; spermine &#xBC0F; Mg(2+) flickery &#xBE14;&#xB85D; 40 pS &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;. I / V &#xD2B9;&#xC131;&#xACFC; polyamine &#xBE14;&#xB85D;&#xC740; &#xC720;&#xC0AC; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; TRPM7 &#xBC0F; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xC804;&#xB958;, &#xADF8; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xACB0;&#xB860;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xCC44;&#xB110; TRPM7 &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB098;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACC4;&#xC815; Eyring &#xC18D;&#xB3C4; &#xBAA8;&#xB378; &#xAC1C;&#xBC1C; / V &#xD2B9;&#xC131; &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xC758; &#xBE14;&#xB85D; &#xC678;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC11E;&#xC740; &#xC591;&#xC774;&#xC628;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC44;&#xB110;.

&#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xC640; trpm7&#xC758; permeant &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB85C; &#xC11E;&#xC740; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xC138;&#xACF5;.

Estudios recientes en c&#xE9;lulas Jurkat T y en c&#xE9;lulas de rata leuc&#xE9;micas bas&#xF3;filas revel&#xF3; un Mg (2 +)-inhibida cati&#xF3;n (MIC) de canal que tiene propiedades electrofisiol&#xF3;gicas similares a TRPM7 modelo de tasa de Eyring expresadas ex&#xF3;genamente en c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero. Aqu&#xED; se comparan las caracter&#xED;sticas de varios cationes polivalentes y Mg (2 +) para bloquear MIC monovalente corriente desde el exterior. Putrescina, espermidina, espermina, PhTX-343 (un derivado de la poliamina philanthotoxin toxina natural), y Mg (2 +) cada bloqueado en una dosis-dependiente de la tensi&#xF3;n y-forma, lo que indica un sitio de bloqueo dentro del campo el&#xE9;ctrico del ion canal. Espermina y la relativamente voluminoso PhTX 343-exhibieron dependencia de voltaje m&#xE1;s pronunciada que el esperado para el n&#xFA;mero de cargas en la mol&#xE9;cula. Las poliaminas y Mg (2 +) son permeables a los bloqueadores, a juzgar por el alivio del bloqueo en los potenciales de membrana fuertemente negativos. La di&#xE1;lisis intracelular con espermina (300 microM) no tuvo ning&#xFA;n efecto, lo que indica un poro asim&#xE9;trica. En el nivel de un solo canal, espermina y Mg (2 +) bloque flickery inducida de 40-pS canales individuales. Caracter&#xED;sticas I / V y el bloque de poliamina son similares en expresado TRPM7 y en corrientes de MIC nativas, consistente con la conclusi&#xF3;n de que los canales nativos MIC se componen de TRPM7 subunidades. Un modelo de tasa de Eyring se ha desarrollado para dar cuenta de las caracter&#xED;sticas I / V y el bloque de canales MIC de cationes polivalentes desde el exterior.

Cationes polivalentes como sondas permeables de MIC y poros TRPM7

TRPM7/ChaK1 &#x662F;&#x552F;&#x4E00;&#x901A;&#x9053;/&#x6FC0;&#x9176;&#x5177;&#x6709; 6 &#x8DE8;&#x819C;&#x6BB5;&#x878D;&#x5408;&#x5230;&#x5176; C &#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;-&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x57DF;&#x5305;&#x542B; TRPM &#x901A;&#x9053;&#x57DF;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x901A;&#x9053; TRPM7/ChaK1 &#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x6B8B;&#x7559;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4F53;&#x5916;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x5728; Ser(1511) &#x548C; Ser(1567)&#xFF0C;&#x5E76;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x78F7;&#x9178;&#x3002;TRPM7/ChaK1 &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x5C55;&#x54C1;&#x5F3A;&#x5916;&#x5411;&#x6574;&#x6D41;&#x548C;&#x5185;&#x90E8; [Mg(2+)] millimolar &#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x6216;&#x5E9F;&#x9664;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x50AC;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x6539;&#x53D8;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7531;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8BB0;&#x5F55;&#x6216;&#x7ECF;&#x6D8C;&#x5165;&#x5EA6;&#x91CF;&#x3002;&#x5185;&#x90E8; Mg(2+) &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x4EA6;&#x662F;&#x4E0D;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7F51;&#x7AD9;&#x6216;&quot;&#x6FC0;&#x9176;&#x6B7B;&quot;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x52A0;&#x5F3A;&#x4E86; Mg(2+)&#x3001; Zn(2+)&#xFF0C;&#x4E0B;&#x8DCC;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x53D7;&#x7ECF;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x88AB;&#x6291;&#x5236;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E8C;&#x4EF7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5F88;&#x591A; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x6FC0;&#x9176;&#x57DF;&#x7684;&#x5220;&#x9664;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x663E;&#x7136;&#x662F;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x65E2;&#x4E0D;&#x662F;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E5F;&#x4E0D;&#x662F;&#x7531;&#x5185;&#x90E8; Mg(2+) &#x8C03;&#x63A7;&#x53D7;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x6216;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x6FC0;&#x9176;&#x57DF;&#x53EF;&#x80FD;&#x8D77;&#x7ED3;&#x6784;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6E20;&#x9053;&#x5927;&#x4F1A;&#x6216;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x3002;

&#x901A;&#x9053;&#x529F;&#x80FD;&#x88AB;&#x8131;&#x79BB;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C; TRPM7/ChaK1 &#x7684;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;

TRPM7/ChaK1 is a unique channel/kinase that contains a TRPM channel domain with 6 transmembrane segments fused to a novel serine-threonine kinase domain at its C terminus. The goal of this study was to investigate a possible role of kinase activity and autophosphorylation in regulation of channel activity of TRPM7/ChaK1. Residues essential for kinase activity were identified by site-directed mutagenesis. Two major sites of autophosphorylation were identified in vitro by mass spectrometry at Ser(1511) and Ser(1567), and these sites were found to be phosphorylated in intact cells. TRPM7/ChaK1 is a cation-selective channel that exhibits strong outward rectification and inhibition by millimolar levels of internal [Mg(2+)]. Mutation of the two autophosphorylation sites or of a key catalytic site that abolished kinase activity did not alter channel activity measured by whole-cell recording or Ca(2+) influx. Inhibition by internal Mg(2+) was also unaffected in the autophosphorylation site or "kinase-dead" mutants. Moreover, kinase activity was enhanced by Mg(2+), was decreased by Zn(2+), and was unaffected by Ca(2+). In contrast, channel activity was inhibited by all three of these divalent cations. However, deletion of much of C-terminal kinase domain resulted in expression of an apparently inactive channel. We conclude that neither current activity nor regulation by internal Mg(2+) is affected by kinase activity or autophosphorylation but that the kinase domain may play a structural role in channel assembly or subcellular localization.

Channel function is dissociated from the intrinsic kinase activity and autophosphorylation of TRPM7/ChaK1.

TRPM7/ChaK1 est une cha&#xEE;ne unique / kinase qui contient un domaine de canal TRPM avec 6 segments transmembranaires fusionn&#xE9; &#xE0; un domaine kinase nouvelle s&#xE9;rine-thr&#xE9;onine &#xE0; son extr&#xE9;mit&#xE9; C-terminale. L&#x26;#39;objectif de cette &#xE9;tude &#xE9;tait d&#x26;#39;enqu&#xEA;ter sur un r&#xF4;le possible de l&#x26;#39;activit&#xE9; kinase et l&#x26;#39;autophosphorylation dans la r&#xE9;gulation de l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal de TRPM7/ChaK1. R&#xE9;sidus essentiels pour l&#x26;#39;activit&#xE9; de kinase ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s par mutagen&#xE8;se dirig&#xE9;e. Deux sites majeurs de l&#x26;#39;autophosphorylation ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s in vitro par spectrom&#xE9;trie de masse au niveau de Ser (1511) et Ser (1567), et ces sites ont &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;s &#xE0; &#xEA;tre phosphoryl&#xE9;e dans les cellules intactes. TRPM7/ChaK1 est une cha&#xEE;ne s&#xE9;lective de cations qui pr&#xE9;sente une forte de rectification vers l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur et l&#x26;#39;inhibition par les niveaux de millimolaires interne [Mg (2 +)]. Mutation des deux sites d&#x26;#39;autophosphorylation ou d&#x26;#39;un site catalytique cl&#xE9; qui a aboli l&#x26;#39;activit&#xE9; kinase n&#x26;#39;a pas modifi&#xE9; l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal mesur&#xE9; par la cellule enti&#xE8;re d&#x26;#39;enregistrement ou de Ca (2 +) afflux. L&#x26;#39;inhibition par Mg interne (2 +) a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; affect&#xE9;e dans le site autophosphorylation ou &#x26;quot;kinase-morts&#x26;quot; mutants. En outre, l&#x26;#39;activit&#xE9; kinase a &#xE9;t&#xE9; renforc&#xE9;e par Mg (2 +), a &#xE9;t&#xE9; diminu&#xE9; de Zn (2 +), et n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; affect&#xE9;e par le Ca (2 +). En revanche, l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal a &#xE9;t&#xE9; inhib&#xE9;e par tous les trois de ces cations divalents. Toutefois, la suppression d&#x26;#39;une grande partie du domaine C-terminal kinase conduit &#xE0; une expression d&#x26;#39;un canal apparemment inactif. Nous concluons que ni l&#x26;#39;activit&#xE9; en cours, ni la r&#xE9;gulation par Mg interne (2 +) est affect&#xE9;e par l&#x26;#39;activit&#xE9; kinase ou autophosphorylation, mais que le domaine kinase peuvent jouer un r&#xF4;le structurel dans l&#x26;#39;assemblage de canal ou la localisation subcellulaire.

Fonction Channel est dissoci&#xE9;e de l&#x26;#39;activit&#xE9; kinase intrins&#xE8;que et autophosphorylation de TRPM7/ChaK1

Channel-Funktion ist losgel&#xF6;st von der intrinsischen Kinase-Aktivit&#xE4;t und Autophosphorylierung TRPM7/ChaK1.

TRPM7/ChaK1 &egrave; un&#39;unica canale/chinasi che contiene un dominio di canale TRPM con 6 segmenti transmembrane fusi a un dominio di romanzo serina-treonina chinasi al suo capolinea C. L&#39;obiettivo di questo studio era di indagare su un possibile ruolo di attivit&agrave; della chinasi e autophosphorylation nella regolazione dell&#39;attivit&agrave; del canale di TRPM7/ChaK1. Residui essenziali per l&#39;attivit&agrave; della chinasi sono stati identificati da mutagenesi luogo-diretta. Due siti maggiore di autophosphorylation sono stati identificati in vitro di spettrometria di massa a Ser(1511) e Ser(1567), e questi siti sono stati trovati per essere fosforilato in cellule intatte. TRPM7/ChaK1 &egrave; un canale cationico selettivo che esibisce rettifica forte verso l&#39;esterno e l&#39;inibizione da millimolare livelli di interni [Mg(2+)]. Mutazione di due siti di autophosphorylation o di un sito catalitico chiave che abol&igrave; l&#39;attivit&agrave; della chinasi non alterava attivit&agrave; del canale misurata mediante registrazione di cellule intere o Ca(2+) afflusso. Inibizione di Mg(2+) interna era inalterato anche nel sito autophosphorylation o mutanti &quot;chinasi-morti&quot;. Inoltre, l&#39;attivit&agrave; della chinasi &egrave; stata migliorata da Mg(2+), &egrave; diminuita del Zn(2+) e fu influenzato da Ca(2+). Al contrario, attivit&agrave; del canale &egrave; stata inibita da tutti e tre questi cationi divalenti. Tuttavia, eliminazione di gran parte del dominio C-terminale chinasi risult&ograve; nell&#39;espressione di un canale apparentemente inattivo. Concludiamo che attivit&agrave; corrente n&eacute; regolamento di Mg(2+) interna &egrave; influenzata dalle attivit&agrave; della chinasi o autophosphorylation ma che il dominio della chinasi possa giocare un ruolo strutturale nel canale assembly o localizzazione subcellulare.

Funzione di canale &egrave; dissociato dall&#39;attivit&agrave; chinasica intrinseca e autophosphorylation di TRPM7/ChaK1.

TRPM7/ChaK1&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#xB7;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x3057;&#x305F;6&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x6301;&#x3064;TRPM&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;/&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;TRPM7/ChaK1&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x90E8;&#x4F4D;&#x304C;Ser&#xFF08;1511&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Ser&#xFF08;1567&#xFF09;&#x3067;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;in vitro&#x3067;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306F;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; TRPM7/ChaK1&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x30DF;&#x30EA;&#x30E2;&#x30EB;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x5F37;&#x304F;&#x5916;&#x5074;&#x306B;&#x6574;&#x6D41;&#x3057;&#x3001;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3014;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;]&#x3002; 2&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x304B;&#x3001;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3057;&#x305F;&#x30AD;&#x30FC;&#x89E6;&#x5A92;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x8A18;&#x9332;&#x307E;&#x305F;&#x306F;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D41;&#x5165;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#x307E;&#x305F;&#x306F; &#x26;quot;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30C7;&#x30C3;&#x30C9;&#x26;quot;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5897;&#x5F37;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x4E9C;&#x925B;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;2&#x4FA1;&#x306E;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;C-&#x672B;&#x7AEF;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x306F;&#x3001;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;Mg&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3082;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x3082;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x6027;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;TRPM7/ChaK1&#x306E;&#x56FA;&#x6709;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304B;&#x3089;&#x89E3;&#x96E2;

TRPM7/ChaK1 &#xACE0;&#xC720; &#xCC44;&#xB110;/&#xB2C8; 6 &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xB294; C &#xC885;&#xC810;&#xC5D0; &#xC18C;&#xC124; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xB2C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC735;&#xD569; TRPM &#xCC44;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; autophosphorylation TRPM7/Chak1&#xC758; &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; mutagenesis &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAC10;&#xB3C5;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; autophosphorylation&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC8FC;&#xC694; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; Ser(1511) &#xBC0F; Ser(1567), &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xC5EC; &#xCCB4; &#xC678; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC140;&#xC5D0; phosphorylated&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. TRPM7/Chak1&#xB294; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC678;&#xC801; &#xC815;&#xB958; &#xBC0F; &#xB0B4;&#xBD80; [Mg(2+)] millimolar &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xC804;&#xC2DC; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xCC44;&#xB110;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC8FC;&#xC694; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB610;&#xB294; &#xB450; autophosphorylation &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xB179;&#xC74C; &#xB610;&#xB294; Ca(2+) &#xC720;&#xC785;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCE21;&#xC815; &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xB0B4;&#xBD80; mg(2+)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB610;&#xD55C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; autophosphorylation &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB610;&#xB294; &quot;&#xB2C8; &#xC8FD;&#xC740;&quot; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;. &#xB610;&#xD55C;, &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; mg(2+)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; Zn(2+), &#xAC10;&#xC18C;&#xB294; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; ca(2+)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9; divalent &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC591;&#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; 3&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB9CE;&#xC740; &#xB2E8;&#xC790; &#xB2C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBD84;&#xBA85;&#xD788; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD604;&#xC7AC; &#xD65C;&#xB3D9;&#xB3C4; &#xB0B4;&#xBD80; mg(2+)&#xC5D0;&#xC758; &#xD55C; &#xADDC;&#xC81C;&#xB294; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xB610;&#xB294; autophosphorylation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xACB0;&#xB860; &#xC9C0;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xB2C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xCC44;&#xB110; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xB610;&#xB294; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; subcellular &#xAD6C;&#xC870; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218;&#xB294; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC;.

&#xCC44;&#xB110; &#xD568;&#xC218;&#xB294; &#xB0B4;&#xC7A5; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; TRPM7/Chak1&#xC758; autophosphorylation&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xB9AC;&#xB294;.

TRPM7/ChaK1 es un canal &#xFA;nico / quinasa que contiene un dominio de canal TRPM con 6 segmentos de transmembrana fusionadas a un nuevo dominio kinasa serina-treonina en su extremo C terminal. El objetivo de este estudio fue investigar el posible papel de la actividad quinasa y la autofosforilaci&#xF3;n en la regulaci&#xF3;n de la actividad del canal de TRPM7/ChaK1. Los residuos esenciales para la actividad quinasa se identificaron mediante mutag&#xE9;nesis dirigida al sitio. Dos sitios principales de autofosforilaci&#xF3;n se identificaron in vitro mediante espectrometr&#xED;a de masas en la Ser (1511) y Ser (1567), y estos sitios se encontr&#xF3; que ser fosforilada en c&#xE9;lulas intactas. TRPM7/ChaK1 es un cati&#xF3;n-selectiva canal que exhibe rectificaci&#xF3;n fuerte hacia el exterior y la inhibici&#xF3;n por los niveles de milimolares interior [Mg (2 +)]. La mutaci&#xF3;n de los dos sitios de autofosforilaci&#xF3;n o de un sitio clave catal&#xED;tico que aboli&#xF3; la actividad quinasa no alter&#xF3; la actividad del canal medido por c&#xE9;lulas enteras de grabaci&#xF3;n o Ca (2 +) afluencia. La inhibici&#xF3;n por internos Mg (2 +) tambi&#xE9;n fue afectado en el sitio de autofosforilaci&#xF3;n o &#x26;quot;quinasa-muerta&#x26;quot; mutantes. Adem&#xE1;s, la actividad quinasa se mejor&#xF3; por Mg (2 +), se redujo por Zn (2 +), y no se vio afectada por Ca (2 +). En contraste, la actividad del canal fue inhibida por los tres de estos cationes divalentes. Sin embargo, la eliminaci&#xF3;n de gran parte de dominio quinasa C-terminal como resultado la expresi&#xF3;n de un canal aparentemente inactivo. Llegamos a la conclusi&#xF3;n de que ni la actividad ni la actual regulaci&#xF3;n por parte interna de Mg (2 +) se ve afectada por la actividad quinasa o autofosforilaci&#xF3;n, sino que el dominio de la quinasa puede jugar un papel estructural en el montaje del canal o la localizaci&#xF3;n subcelular.

Funci&#xF3;n de canal es indisociable de la actividad de la quinasa intr&#xED;nseca y autofosforilaci&#xF3;n de TRPM7/ChaK1

&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425; Ca2 + (SOC) &#x6E20;&#x9053;&#x7BA1;&#x7406;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5206;&#x5B50;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x4E0D;&#x597D;&#x754C;&#x5B9A;&#x3002;&#x5229;&#x7528; RNA &#x5E72;&#x6270; (RNAi)-&#x57FA;&#x4E8E;&#x5C4F;&#x5E55;&#x6539;&#x53D8; thapsigargin (TG) &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;-&#x4F9D;&#x8D56; Ca2 + &#x6761;&#x76EE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4F34;&#x5728; SOC &#x6D8C;&#x5165;&#x9700;&#x8981;&#x548C;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;RNAi &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684;&#x679C;&#x8747; S2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4F34;&#x5927;&#x5927;&#x964D;&#x4F4E; TG &#x4F9D;&#x8D56; Ca2 + &#x7684;&#x6761;&#x76EE;&#x3002;&#x819C;&#x7247;&#x94B3;&#x8BB0;&#x5F55;&#x663E;&#x793A;&#x51E0;&#x4E4E;&#x5B8C;&#x5168;&#x6291;&#x5236;&#x679C;&#x8747; Ca2 + &#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca2 + (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x5F53;&#x524D;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x5177;&#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269; STIM1 &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053; Jurkat T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;RNAi &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684; STIM1 &#x6291;&#x5236; TG &#x6216;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x4F9D;&#x8D56; Ca2 + &#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x6216; SH SY5Y &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x6761;&#x76EE;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; STIM1 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5C0F;&#x5E45;&#x589E;&#x5F3A; TG &#x8BF1;&#x5BFC; Ca2 + &#x8FDB;&#x5165;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; STIM1&#xFF0C;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5230;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE;&#x679C;&#x8747;&#x5B88;&#x6052; SOC &#x6D8C;&#x5165;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x5E38;&#x89C1;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684; SOC &#x548C;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;

STIM1&#xFF0C;&#x57FA;&#x672C;&#x548C;&#x5B88;&#x6052;&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;

Store-operated Ca2+ (SOC) channels regulate many cellular processes, but the underlying molecular components are not well defined. Using an RNA interference (RNAi)-based screen to identify genes that alter thapsigargin (TG)-dependent Ca2+ entry, we discovered a required and conserved role of Stim in SOC influx. RNAi-mediated knockdown of Stim in Drosophila S2 cells significantly reduced TG-dependent Ca2+ entry. Patch-clamp recording revealed nearly complete suppression of the Drosophila Ca2+ release-activated Ca2+ (CRAC) current that has biophysical characteristics similar to CRAC current in human T cells. Similarly, knockdown of the human homologue STIM1 significantly reduced CRAC channel activity in Jurkat T cells. RNAi-mediated knockdown of STIM1 inhibited TG- or agonist-dependent Ca2+ entry in HEK293 or SH-SY5Y cells. Conversely, overexpression of STIM1 in HEK293 cells modestly enhanced TG-induced Ca2+ entry. We propose that STIM1, a ubiquitously expressed protein that is conserved from Drosophila to mammalian cells, plays an essential role in SOC influx and may be a common component of SOC and CRAC channels.

STIM1, an essential and conserved component of store-operated Ca2+ channel function.

Store-exploit&#xE9;s Ca2 + (SOC) canaux r&#xE9;guler de nombreux processus cellulaires, mais les composants mol&#xE9;culaires sous-jacents ne sont pas bien d&#xE9;finis. L&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;un ARN interf&#xE9;rence (ARNi) bas&#xE9; sur l&#x26;#39;&#xE9;cran pour identifier les g&#xE8;nes qui alter thapsigargine (TG)-d&#xE9;pendante entr&#xE9;e de Ca2 +, nous avons d&#xE9;couvert un r&#xF4;le n&#xE9;cessaire et conserv&#xE9;e de Stim dans afflux SOC. ARNi m&#xE9;di&#xE9;e par inactivation de Stim dans les cellules S2 de drosophile consid&#xE9;rablement r&#xE9;duit TG-d&#xE9;pendante entr&#xE9;e de Ca2 +. Patch-clamp a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; la suppression presque compl&#xE8;te de la Ca2 + Drosophila lib&#xE9;ration activ&#xE9; Ca2 + (CRAC) de courant qui a des caract&#xE9;ristiques biophysiques similaires &#xE0; CRAC actuelle dans les cellules T humaines. De m&#xEA;me, knockdown de l&#x26;#39;homologue humain STIM1 consid&#xE9;rablement r&#xE9;duit l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal CRAC dans les cellules T Jurkat. ARNi &#xE0; m&#xE9;diation knockdown de STIM1 inhib&#xE9;e Ca2 TG-ou d&#x26;#39;un agoniste-d&#xE9;pendante + entr&#xE9;e dans HEK293 ou SH-SY5Y. A l&#x26;#39;inverse, la surexpression de STIM1 dans les cellules HEK293 modestement am&#xE9;lior&#xE9;e TG-induite Ca2 + entr&#xE9;e. Nous proposons que STIM1, une prot&#xE9;ine exprim&#xE9;e de mani&#xE8;re ubiquitaire qui est conserv&#xE9;e de la drosophile aux cellules de mammif&#xE8;res, joue un r&#xF4;le essentiel dans l&#x26;#39;afflux SOC et peuvent &#xEA;tre une composante commune des canaux SOC et le CRAC.

STIM1, une composante essentielle et conserv&#xE9;e de magasin fonctionnant Ca2 + Fonction Manche

STIM1, ein wesentlicher Bestandteil des konservierten und Shop-Ca2 +-Kanal-Funktion.

Archivio-operati Ca2 + canali (SOC) regolano molti processi cellulari, ma i componenti molecolari sottostanti non sono ben definiti. Utilizzando un&#39;interferenza del RNA (RNAi) - basato su schermo per identificare i geni che alterano thapsigargin (TG) - voce di Ca2 + dipendenti, abbiamo scoperto un ruolo richiesto e conservato di Stim in afflusso SOC. RNAi-mediata atterramento di Stim in drosofila S2 cellule significativamente ridotta TG-dipendenti Ca2 + voce. Registrazione di patch-clamp ha rivelato quasi completa soppressione del drosofila Ca2 + attivato dal rilascio Ca2 + corrente (CRAC) che ha caratteristiche biofisiche simile al CRAC corrente nelle cellule T umane. Analogamente, atterramento dell&#39;omologo umano STIM1 significativamente ridotta attivit&agrave; del canale CRAC in cellule Jurkat T. RNAi-mediata atterramento di STIM1 inibito TG-agonista-dipendente Ca2 + entrata nelle cellule HEK293 o SH-SY5Y. Al contrario, sovraespressione di STIM1 nelle cellule HEK293 enhanced modestamente TG-induced Ca2 + voce. Proponiamo che STIM1, una proteina ubiquitously espressa che &egrave; conservata da Drosofila in cellule di mammifero, gioca un ruolo essenziale nell&#39;afflusso SOC e pu&ograve; essere un componente comune dei canali SOC e CRAC.

STIM1, un componente essenziale e conservato di archivio gestito di funzione canale Ca2 +.

&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;Ca2 +&#xFF08;SOC&#xFF09;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x6839;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x6210;&#x5206;&#x306F;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30BF;&#x30D7;&#x30B7;&#x30AC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30F3;&#xFF08;TG&#xFF09;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#xFF08;RNAi&#xFF09;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;SOC&#x6D41;&#x5165;&#x306B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;S2&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;RNAi&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;TG-&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x8A18;&#x9332;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;CRAC&#x306B;&#x4F3C;&#x305F;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;Ca2 +&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x307B;&#x307C;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x76F8;&#x540C;&#x4F53;STIM1&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x3001;Jurkat T&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002; STIM1&#x306E;RNAi&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;HEK293&#x307E;&#x305F;&#x306F;SH-SY5Y&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;TG-&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;HEK293&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;STIM1&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x63A7;&#x3048;&#x3081;&#x306B;TG-&#x8A98;&#x767A;&#x6027;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;STIM1&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x304B;&#x3089;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x666E;&#x904D;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;SOC&#x6D41;&#x5165;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;SOC&#x3068;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x69CB;&#x6210;&#x8981;&#x7D20;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x3066;&#x3082;&#x3088;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

STIM1&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x3068;&#x4FDD;&#x5B58;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;

&#xC2A4;&#xD1A0;&#xC5B4; &#xC6B4;&#xC601; Ca2 + (SOC) &#xCC44;&#xB110; &#xADDC;&#xC81C; &#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC798; &#xC815;&#xC758; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. RNA &#xAC04;&#xC12D; (RNAi) thapsigargin (TG)&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAE30;&#xBC18;&#xB41C; &#xD654;&#xBA74;&#xC744;-&#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC885;&#xC18D; Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9;, SOC &#xC720;&#xC785;&#xC5D0; Stim&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xBC0F; &#xBCF4;&#xC874; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Stim &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; S2 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; RNAi &#xC911;&#xC7AC; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xD06C;&#xAC8C; TG &#xC885;&#xC18D; Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9; &#xAC10;&#xC18C;. &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xB179;&#xC74C; &#xACF5;&#xAC1C;&#xB294; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; Ca2 + &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Ca2 +&#xC758; &#xAC70;&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C; (CRAC) &#xC804;&#xB958; &#xD2B9;&#xC131;&#xC774; biophysical CRAC &#xD604;&#xC7AC;&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; homologue stim1&#xC758; &#xCD5C;&#xC800; Jurkat T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC904;&#xC5B4;&#xB4ED;&#xB2C8;&#xB2E4;. Stim1&#xC758; RNAi &#xC911;&#xC7AC; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; TG &#xB610;&#xB294; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D; Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9; SH-SY5Y &#xB610;&#xB294; HEK293 &#xC138;&#xD3EC; &#xC800;&#xD574;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; HEK293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; stim1&#xC758; overexpression&#xB294; &#xACB8;&#xC190; &#xD558; &#xAC8C; TG &#xC720;&#xB3C4; Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; STIM1, &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874; &#xD3B8; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; SOC &#xC720;&#xC785;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4; &#xACE0; SOC &#xBC0F; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xACF5;&#xD1B5; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

STIM1, Ca2 + &#xCC44;&#xB110; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC6B4;&#xC601;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xC874; &#xAD6C;&#xC131;.

Operados por tienda-Ca2 + (SOC) de canales regulan muchos procesos celulares, pero los componentes moleculares subyacentes no est&#xE1;n bien definidos. El uso de un ARN de interferencia (RNAi), con sede en la pantalla para identificar los genes que alteran thapsigargin (TG) dependiente de la entrada de Ca2 +, descubrimos un papel necesario y conservada de Stim en influjo SOC. RNAi mediada desmontables de Stim en c&#xE9;lulas S2 de Drosophila redujo significativamente TG-dependiente de entrada de Ca2 +. Patch-clamp grabaci&#xF3;n revel&#xF3; la supresi&#xF3;n casi completa de la Ca2 + Drosophila versi&#xF3;n activada por Ca2 + (CRAC) de corriente que tiene caracter&#xED;sticas biof&#xED;sicas similares a CRAC actual en las c&#xE9;lulas T humanas. De manera similar, desmontables de la hom&#xF3;logo humano STIM1 redujo significativamente la actividad CRAC canal en c&#xE9;lulas Jurkat T. RNAi mediada desmontables de STIM1 inhibido Ca2 TG-o dependiente-agonista + entrada en HEK293 o c&#xE9;lulas SH-SY5Y. Por el contrario, la sobreexpresi&#xF3;n de STIM1 en c&#xE9;lulas HEK293 mejorado modestamente TG inducida por la entrada de Ca2 +. Proponemos que STIM1, una prote&#xED;na de expresi&#xF3;n ubicua que se conserva de Drosophila en c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros, juega un papel esencial en el influjo SOC y puede ser un componente com&#xFA;n de los canales del SOC y la CRAC.

STIM1, un componente esencial y conservada de la tienda que funciona con Ca2 + Funci&#xF3;n de canal

&#x4F5C;&#x4E3A;&#x552F;&#x4E00; Ca2 + &#x8FDB;&#x5165;&#x673A;&#x5236;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x975E;&#x53EF;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425;&#x9499; (SOC) &#x6D8C;&#x5165;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#x548C;&#x8BB8;&#x591A;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x9499;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x9499; (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x901A;&#x9053;&#x662F; best-characterized SOC &#x6D8C;&#x5165;&#x901A;&#x9053;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x6301;&#x7EED;&#x5F00;&#x5C55;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x53CA;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6E20;&#x9053;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x548C; SOC &#x548C;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6E20;&#x9053;&#x95E8;&#x63A7;&#x673A;&#x5236;&#x4ECD;&#x96BE;&#x4EE5;&#x6349;&#x6478;&#x3002;&#x5148;&#x524D;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4F34;&#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269; STIM1 &#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5728;&#x679C;&#x8747; S2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; EF &#x624B;&#x4F34;&#x6216; STIM1 &#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6E20;&#x9053;&#x4E00;&#x800C;&#x65E0;&#x9700;&#x66F4;&#x6539; Ca2 + &#x5B58;&#x50A8;&#x5185;&#x5BB9;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x6CD5;&#x3001; EM &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x548C;&#x8868;&#x9762;&#x751F;&#x7269;&#x7D20;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; STIM1 &#x4ECE;&#x5185;&#x8D28;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x6837;&#x7AD9;&#x70B9;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684; Ca2 + &#x8017;&#x7AED;&#x540E;&#x5B58;&#x50A8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7F3A;&#x5C11;&#x7684;&#x4E00;&#x73AF;&#x4E4B;&#x95F4; Ca2 + STIM1 &#x51FD;&#x6570;&#x5B58;&#x50A8;&#x6D88;&#x8017;&#x548C; SOC &#x6D8C;&#x5165;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A; translocates &#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x9891;&#x9053;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x540E;&#x7684; Ca2 + &#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x3002;

STIM1 &#x662F; Ca2 + &#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#xFF0C;&#x53EF;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C06;&#x4ECE; Ca2 + &#x5B58;&#x50A8;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x3002;

As the sole Ca2+ entry mechanism in a variety of non-excitable cells, store-operated calcium (SOC) influx is important in Ca2+ signalling and many other cellular processes. A calcium-release-activated calcium (CRAC) channel in T lymphocytes is the best-characterized SOC influx channel and is essential to the immune response, sustained activity of CRAC channels being required for gene expression and proliferation. The molecular identity and the gating mechanism of SOC and CRAC channels have remained elusive. Previously we identified Stim and the mammalian homologue STIM1 as essential components of CRAC channel activation in Drosophila S2 cells and human T lymphocytes. Here we show that the expression of EF-hand mutants of Stim or STIM1 activates CRAC channels constitutively without changing Ca2+ store content. By immunofluorescence, EM localization and surface biotinylation we show that STIM1 migrates from endoplasmic-reticulum-like sites to the plasma membrane upon depletion of the Ca2+ store. We propose that STIM1 functions as the missing link between Ca2+ store depletion and SOC influx, serving as a Ca2+ sensor that translocates upon store depletion to the plasma membrane to activate CRAC channels.

STIM1 is a Ca2+ sensor that activates CRAC channels and migrates from the Ca2+ store to the plasma membrane.

Comme le Ca2 + seul m&#xE9;canisme d&#x26;#39;entr&#xE9;e dans une vari&#xE9;t&#xE9; de cellules non excitables, les magasin exploit&#xE9; de calcium (SOC) est important afflux de Ca2 + de signalisation et beaucoup d&#x26;#39;autres processus cellulaires. Un de calcium-release-actif de calcium (CRAC) de canal dans les lymphocytes T est le canal le mieux caract&#xE9;ris&#xE9; afflux SOC et elle est essentielle &#xE0; la r&#xE9;ponse immunitaire, une activit&#xE9; soutenue des canaux CRAC est requis pour l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes et la prolif&#xE9;ration. L&#x26;#39;identit&#xE9; mol&#xE9;culaire et le m&#xE9;canisme de d&#xE9;clenchement de la SOC et les canaux CRAC sont rest&#xE9;s hors de port&#xE9;e. Auparavant, nous avons identifi&#xE9; Stim et le STIM1 homologue mammif&#xE8;re en tant que composants essentiels de l&#x26;#39;activation du canal CRAC de cellules S2 de drosophile et les lymphocytes T humains. Ici, nous montrons que l&#x26;#39;expression de EF-hand mutants de Stim ou STIM1 active les canaux CRAC constitutivement sans changer Ca2 + contenu magasin. Par immunofluorescence, EM localisation et biotinylation de surface, nous montrons que STIM1 migre de endoplasmique-r&#xE9;ticulum-comme les sites de la membrane plasmique lors de l&#x26;#39;&#xE9;puisement de la Ca2 + magasin. Nous proposons que STIM1 fonctions comme le cha&#xEE;non manquant entre l&#x26;#39;appauvrissement de Ca2 + magasin et l&#x26;#39;afflux SOC, servant de Ca2 + capteur qui se diffuse sur l&#x26;#39;appauvrissement de magasin &#xE0; la membrane plasmique pour activer les canaux CRAC.

STIM1 est un Ca2 + capteur qui active les canaux CRAC et migre &#xE0; partir du Ca2 + magasin &#xE0; la membrane plasmique

Als alleinige Ca2 + Eintrag Mechanismus in einer Vielzahl von nicht-excitable Zellen ist Shop-betrieben Kalzium (SOC) Zustrom in Ca2 + Signal- und viele andere zellulare Prozesse wichtig. Ein Kalzium-Freigabe-aktiviert Kalzium (CRAC) Kanal in T-Lymphozyten ist der best-characterized SOC-Zustrom-Kanal und ist wichtig, die Immunantwort, nachhaltige T&auml;tigkeit des CRAC-Kan&auml;le f&uuml;r die Genexpression und Vermehrung erforderlich. Die molekulare Identit&auml;t und der gating-Mechanismus SOC und CRAC Kan&auml;le sind schwer fassbaren geblieben. Zuvor haben wir Stim und der S&auml;ugetier-Homolog STIM1 als wesentliche Bestandteile des CRAC Kanal Aktivierung in Drosophila S2-Zellen und menschlichen T-Lymphozyten identifiziert. Hier zeigen wir, dass der Ausdruck der EF-Hand-Mutanten Stim oder STIM1 CRAC Kan&auml;le konstitutiv aktiviert ohne Ca2 +-Store-Inhalte. Speichern durch Immunfluoreszenz EM Lokalisierung und Oberfl&auml;che Biotinylierung, die wir zeigen, dass STIM1 von endoplasmic Reticulum-&auml;hnlicher Seiten an die Plasmamembran nach Ersch&ouml;pfung des Ca2 + migriert. Wir schlagen STIM1 Funktionen wie das fehlende Glied zwischen Ca2 + zu speichern, Ersch&ouml;pfung und SOC-Zustrom, als ein Ca2 +-Sensor, der auf Speicher Raubbau an der Plasmamembran, CRAC-Kan&auml;le zu aktivieren zeigten.

STIM1 ist ein Ca2 +-Sensor, der CRAC-Kan&auml;le aktiviert und migriert die Ca2 +-Store in der Plasmamembran.

Come il solo Ca2 + meccanismo di voce in una variet&agrave; di cellule non eccitabili, afflusso di calcio store-operato (SOC) &egrave; importante in Ca2 + segnalazione e molti altri processi cellulari. Un canale di calcio calcio-comunicato-attivato (CRAC) in linfociti T &egrave; il canale di afflusso SOC best-characterized ed &egrave; essenziale per la risposta immunitaria, sostenuta attivit&agrave; di canali CRAC essendo necessaria per la proliferazione e l&#39;espressione genica. L&#39;identit&agrave; molecolare e il meccanismo di controllo dei canali SOC e CRAC sono rimasti sfuggente. In precedenza abbiamo identificato Stim e l&#39;omologo mammifero STIM1 come componenti essenziali di attivazione canale CRAC in drosofila S2 cellule e linfociti T umani. Qui ci mostra che l&#39;espressione dei mutanti di EF-mano di Stim o STIM1 attiva i canali CRAC costitutivamente senza cambiare negozio contenuto di Ca2 +. Immunofluorescenza, localizzazione di EM e superficie biotinylation che mostriamo che STIM1 migra da endoplasmic-reticolo-come siti di membrana del plasma all&#39;esaurimento del Ca2 + store. Proponiamo che STIM1 funzioni come l&#39;anello mancante tra Ca2 + negozio deplezione e SOC afflusso, che serve come un sensore di Ca2 + che trasloca al negozio deplezione di membrana del plasma per attivare canali di CRAC.

STIM1 &egrave; un sensore di Ca2 + che attiva i canali CRAC e migra dal deposito di Ca2 + nella membrana del plasma.

&#x552F;&#x4E00;&#x306E;Ca2 +&#x975E;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#xB7;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;SOC&#xFF09;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6D41;&#x5165;&#x304C;Ca2 +&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3068;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;SOC&#x6D41;&#x5165;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3068;SOC&#x3068;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x958B;&#x9589;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x3001;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;S2&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D2;&#x30C8;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;&#x6210;&#x5206;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;STIM1&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Ca2 +&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x5185;&#x5BB9;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x305B;&#x305A;&#x306B;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;STIM1&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;EF-&#x30CF;&#x30F3;&#x30C9;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x86CD;&#x5149;&#x6CD5;&#x3001;EM&#x5C40;&#x5728;&#x3068;&#x8868;&#x9762;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;STIM1&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53; - &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;Ca2 +&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x6642;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;Ca2&#x9593;&#x306E;&#x30DF;&#x30C3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;STIM1 +&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3068;SOC&#x6D41;&#x5165;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x67AF;&#x6E07;&#x6642;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3057;&#x304C;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;Ca2 +&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

STIM1&#x306F;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3078;&#x306E;Ca 2 +&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x306E;Ca2 +&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xB2E8;&#xB3C5; Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC73C;&#xB85C; &#xACE0;&#xB974;&#xAE30;&#xAC00; &#xC544;&#xB2CC; &#xC140;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9E4;&#xC7A5; &#xC6B4;&#xC601; &#xCE7C;&#xC298; (SOC) &#xC720;&#xC785;&#xC740; Ca2 + &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE7C;&#xC298; &#xBC29;&#xCD9C; &#xD65C;&#xC131; &#xCE7C;&#xC298; (CRAC) &#xCC44;&#xB110; best-characterized SOC &#xC720;&#xC785; &#xCC44;&#xB110; &#xC774;&#xBA70;, &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;, CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xBC0F; &#xD655;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC790; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xACFC; SOC &#xBC0F; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC560;&#xB9E4; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; S2 &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB85C; Stim&#xC640; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; homologue STIM1 &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; Ca2 + &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; Stim &#xB610;&#xB294; stim1&#xC758; EF &#xC190;&#xC744; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC744; constitutively &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xC0AC;, EM &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC0F; &#xD45C;&#xBA74; biotinylation &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; STIM1 Ca2 +&#xC758; &#xACE0;&#xAC08;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; &#xAC19;&#xC740; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC800;&#xC7A5;&#xD560;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; STIM1 &#xAE30;&#xB2A5; Ca2 + &#xC0AC;&#xC774; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC120;&#xC744; &#xACE0;&#xAC08; &#xBC0F; SOC &#xC720;&#xC785; &#xC800;&#xC7A5; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xACE0;&#xAC08; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xB530;&#xB77C; translocates Ca2 + &#xC13C;&#xC11C;&#xB85C; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Stim1&#xC740; Ca2 + &#xC13C;&#xC11C;&#xB294; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9; Ca2 + &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

A medida que el Ca2 + &#xFA;nico mecanismo de entrada en una variedad de no excitables c&#xE9;lulas, tienda de accionamiento de calcio (SOC) de afluencia es importante en Ca2 + se&#xF1;alizaci&#xF3;n y muchos otros procesos celulares. Un comunicado de calcio activados por calcio (CRAC) de canal en los linfocitos T es la mejor caracterizada de canales SOC afluencia y es esencial para la respuesta inmune, la actividad sostenida de los canales CRAC se requiere para la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica y la proliferaci&#xF3;n. La identidad molecular y el mecanismo de apertura del SOC y de los canales CRAC han permanecido esquivo. Anteriormente hemos identificado Stim y el STIM1 hom&#xF3;logo de mam&#xED;feros como componentes esenciales de la activaci&#xF3;n de los canales CRAC en las c&#xE9;lulas S2 de Drosophila y los linfocitos T humanos. Aqu&#xED; nos muestran que la expresi&#xF3;n de mutantes EF-hand de Stim o activa los canales CRAC STIM1 constitutivamente sin cambiar el contenido de Ca2 + tienda. Por inmunofluorescencia, EM localizaci&#xF3;n y superficie de biotinilaci&#xF3;n se muestra que emigra de STIM1 endopl&#xE1;smico-ret&#xED;culo-como los sitios de la membrana plasm&#xE1;tica al agotamiento de la tienda de Ca2 +. Proponemos que STIM1 funciona como el eslab&#xF3;n perdido entre el agotamiento del almac&#xE9;n de Ca2 + y el influjo SOC, que act&#xFA;a como un sensor de Ca2 + que se transloca sobre el agotamiento de la tienda a la membrana plasm&#xE1;tica para activar los canales CRAC.

STIM1 es un Ca2 + sensor que activa los canales CRAC y migra desde el Ca2 + de la tienda a la membrana plasm&#xE1;tica

Mg2 +-&#x5728;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x80A5;&#x5927;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x5FC3;&#x810F;&#x548C;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x51E0;&#x79CD;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x6291;&#x5236;&#x7684;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50; (MIC) &#x5F53;&#x524D;&#xFF0C;&#x76F8;&#x4FE1;&#x4E3A;&#x4EE3;&#x8868; TRPM7 &#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;MIC &#x5F53;&#x524D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x671F;&#x95F4;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x900F;&#x6790;&#x6CBB;&#x7597;&#x65E0;&#x4E8C;&#x4EF7;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x3002;Millimolar &#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x80DE;&#x5185; Mg2 + &#xFF08;&#x6216;&#x5176;&#x4ED6;&#x4E8C;&#x4EF7;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#xFF09; &#x7535;&#x538B;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6291;&#x5236;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;&#x4E8C;&#x4EF7;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#x548C;&#x901A;&#x9053;&#x5B8C;&#x597D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x4ECD;&#x7136;&#x672A;&#x77E5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x591A;&#x80FA; &#xFF08;&#x7CBE;&#x80FA;&#x3001; &#x4E9A;&#x7CBE;&#x80FA;&#x548C;&#x8150;&#x80FA;&#xFF09; &#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x6536;&#x8D39;&#x6570;&#x76EE;&#x7684;&#x6548;&#x80FD;&#x4E0E;&#x6291;&#x5236;&#x7535;&#x6D41;&#x3001; &#x7535;&#x538B;&#x65E0;&#x5173;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x662F;&#x5728; MIC&#x3002;&#x65B0;&#x9709;&#x7D20;&#x548C;&#x591A;&#x805A;&#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x8FD8;&#x5148;&#x5929;&#x6291;&#x5236;&#x9EA6;&#x514B;&#x98CE;&#x5F53;&#x524D;&#x6CA1;&#x6709; Mg2 +&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x76F8;&#x540C;&#x6B63;&#x7535;&#x79BB;&#x5B50;&#x6291;&#x5236; IRK1 &#x5F53;&#x524D; MIC &#x5F53;&#x524D;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x53EF;&#x80FD;&#x91C7;&#x53D6;&#x7684;&#x7B5B;&#x9009;&#x4E0A; PIP2 &#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x819C;&#x78F7;&#x8102;&#x5934;&#x7EC4;&#x78F7;&#x9178;&#x76D0;&#x4E0E;&#x5E76;&#x884C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5185;&#x90E8;&#x7684;&#x8D28;&#x5B50;&#x4E5F;&#x6291;&#x5236;&#x9EA6;&#x514B;&#x98CE;&#x5F53;&#x524D;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x94F5;&#x3001; &#x4E59;&#x57FA;&#x3001; &#x548C;&#x516D;&#x4EA7;&#x751F;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x5757;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x514D;&#x9664;&#x5185;&#x90E8;&#x591A;&#x4EF7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x78B1;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x4F7F;&#x7528;&#x5916;&#x90E8;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x94F5;&#x6216;&#x589E;&#x52A0;&#x5185;&#x5916;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#x7684; ph &#x503C;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7A7F;&#x5B54;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x548C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x9644;&#x52A0;&#x5F55;&#x97F3;&#xFF0C;&#x5F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684; Mg2 + &#x4E0D;&#x662F;&#x8D2B;&#x5316;&#x7684;&#x3001; &#x5185;&#x751F; MIC &#x6216;&#x91CD;&#x7EC4; TRPM7 &#x7535;&#x6D41;&#x662F;&#x7531;&#x80DE;&#x6D46;&#x78B1;&#x5316;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x6291;&#x5236;&#x9178;&#x5316; &#xFF1B;&#x5E76;&#x4E14;&#x5B83;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7531; PIP2 &#x91CD;&#x65B0;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x5185;&#x5916;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#x7684;&#x65AD;&#x5F00;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; MIC (TRPM7) &#x6E20;&#x9053;&#x53D7;&#x7B5B;&#x9009;&#x673A;&#x5236;&#x6536;&#x8D39;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53EF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185; ph &#x503C;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x3002;

&#x5145;&#x7535;&#x7B5B;&#x9009;&#x5185;&#x90E8; ph &#x503C;&#x548C;&#x591A;&#x4EF7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#x7528;&#x4E8E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3001; &#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C; TRPM7/&#x9EA6;&#x514B;&#x98CE;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x7B80;&#x8981;&#x8BF4;&#x660E;&#x3002;

The Mg2+-inhibited cation (MIC) current, believed to represent activity of TRPM7 channels, is found in lymphocytes and mast cells, cardiac and smooth muscle, and several other eukaryotic cell types. MIC current is activated during whole-cell dialysis with divalent-free internal solutions. Millimolar concentrations of intracellular Mg2+ (or other divalent metal cations) inhibit the channels in a voltage-independent manner. The nature of divalent inhibition and the mechanism of channel activation in an intact cell remain unknown. We show that the polyamines (spermine, spermidine, and putrescine) inhibit the MIC current, also in a voltage-independent manner, with a potency that parallels the number of charges. Neomycin and poly-lysine also potently inhibited MIC current in the absence of Mg2+. These same positively charged ions inhibited IRK1 current in parallel with MIC current, suggesting that they probably act by screening the head group phosphates on PIP2 and other membrane phospholipids. In agreement with this hypothesis, internal protons also inhibited MIC current. By contrast, tetramethylammonium, tetraethylammonium, and hexamethonium produced voltage-dependent block but no inhibition. We show that inhibition by internal polyvalent cations can be relieved by alkalinizing the cytosol using externally applied ammonium or by increasing pH in inside-out patches. Furthermore, in perforated-patch and cell-attached recordings, when intracellular Mg2+ is not depleted, endogenous MIC or recombinant TRPM7 currents are activated by cytosolic alkalinization and inhibited by acidification; and they can be reactivated by PIP2 following rundown in inside-out patches. We propose that MIC (TRPM7) channels are regulated by a charge screening mechanism and may function as sensors of intracellular pH.

Charge screening by internal pH and polyvalent cations as a mechanism for activation, inhibition, and rundown of TRPM7/MIC channels.

Le Mg2 +-cation inhib&#xE9;e (MIC) en cours, cens&#xE9;s repr&#xE9;senter l&#x26;#39;activit&#xE9; des canaux TRPM7, se trouve dans les lymphocytes et les mastocytes, les muscles cardiaque et lisse, et plusieurs autres types de cellules eucaryotes. Actuelle MIC est activ&#xE9; pendant l&#x26;#39;ensemble de cellule de dialyse avec divalent-libres des solutions internes. Concentrations millimolaires de Mg2 + intracellulaire (ou d&#x26;#39;autres cations m&#xE9;talliques divalents) inhibent les canaux d&#x26;#39;une mani&#xE8;re ind&#xE9;pendante de tension. La nature de l&#x26;#39;inhibition divalent et le m&#xE9;canisme de l&#x26;#39;activation du canal dans une cellule intacte restent inconnus. Nous montrons que les polyamines (spermine, la spermidine, putrescine et) inhibent le courant MIC, &#xE9;galement d&#x26;#39;une mani&#xE8;re ind&#xE9;pendante de tension, avec une puissance qui est parall&#xE8;le le nombre d&#x26;#39;accusations. N&#xE9;omycine et le poly-lysine &#xE9;galement fortement inhib&#xE9;e MIC courant en l&#x26;#39;absence de Mg 2 +. Ces m&#xEA;mes ions charg&#xE9;s positivement inhib&#xE9;e IRK1 courant en parall&#xE8;le avec MIC actuelle, ce qui sugg&#xE8;re qu&#x26;#39;ils agissent probablement par criblage des phosphates du groupe de t&#xEA;te sur les phospholipides membranaires PIP2 et autres. En accord avec cette hypoth&#xE8;se, les protons internes ont aussi inhib&#xE9; MIC actuelle. En revanche, t&#xE9;tram&#xE9;thylammonium, t&#xE9;tra&#xE9;thylammonium, et hexam&#xE9;thonium d&#xE9;pendant de la tension produite bloc mais pas d&#x26;#39;inhibition. Nous montrons que l&#x26;#39;inhibition par des cations polyvalents internes peuvent &#xEA;tre soulag&#xE9;s par alcalinisant le cytosol en utilisant d&#x26;#39;ammonium appliqu&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur ou par une augmentation du pH dans l&#x26;#39;int&#xE9;rieur-des patchs. En outre, dans les enregistrements perfor&#xE9;e-patch et de la cellule-joint, quand Mg2 + intracellulaire n&#x26;#39;est pas &#xE9;puis&#xE9;, MIC endog&#xE8;ne ou recombinantes TRPM7 courants sont activ&#xE9;s par l&#x26;#39;alcalinisation cytosolique et inhib&#xE9;e par l&#x26;#39;acidification, et elles peuvent &#xEA;tre r&#xE9;activ&#xE9;es par PIP2 d&#xE9;labr&#xE9; suivante dans l&#x26;#39;int&#xE9;rieur des des patchs. Nous proposons que MIC (TRPM7) canaux sont r&#xE9;gies par un m&#xE9;canisme de v&#xE9;rification de l&#x26;#39;inculpation et peut fonctionner en tant que capteurs de pH intracellulaire.

Chargez d&#xE9;pistage par PH interne et des cations polyvalents Comme un m&#xE9;canisme pour l&#x26;#39;activation, l&#x26;#39;inhibition, et Rundown de canaux TRPM7/MIC

Das Mg2 +-gehemmter kation (MIC) aktuelle, geglaubt, um die Aktivit&auml;t von TRPM7 Kan&auml;len, vertreten in Lymphozyten und Mastzellen, Herz- und glatte Muskulatur und mehrere andere eukaryotic Zelle Arten gefunden wird. MIC Aktuelle wird w&auml;hrend der ganzen Zellen Dialyse bivalente-freie interne L&ouml;sungen aktiviert. Millimolar Konzentration von intrazellul&auml;ren Mg2 + (oder andere bivalente Metallkationen) hemmen die Kan&auml;le Spannung-unabh&auml;ngig. Die Art der bivalente Hemmung und der Mechanismus der Aktivierung der Kanal in einer intakten Zelle bleiben unbekannt. Wir zeigen, dass die Polyamine (Spermin Spermidine und Putrescin) hemmen das aktuelle, auch in gewissem Sinne Spannung unabh&auml;ngig, MIC mit einer Potenz, die die Anzahl der Geb&uuml;hren entspricht. Neomycin und Poly-Lysin auch stark gehemmt MIC Aktuelle ohne Mg2 +. Dieselben Zahlen positiv, dass Ionen gehemmt IRK1 aktuelle parallel mit MIC Strom, was darauf hindeutet, dass wahrscheinlich handeln, indem Sie die Kopf Gruppe Phosphate PIP2 und andere Membran-Phospholipiden screening. Im Einvernehmen mit dieser Hypothese gehemmt interne Protonen auch MIC Aktuelle. Im Gegensatz dazu produziert Tetramethylammonium Tetraethylammonium und Hexamethonium Spannung-abh&auml;ngigen Block aber keine Hemmung. Wir zeigen, dass die Hemmung durch interne polyvalente kationen von alkalinizing dem Zytosol mit extern angewandte Ammonium oder durch eine Erh&ouml;hung der pH-Wert Inside-Out-Patches gelindert werden kann. Dar&uuml;ber hinaus perforiert-Patch und Zelle verbundene Aufnahmen, sind wenn intrazellul&auml;ren Mg2 + nicht abgereichertes, endogene ist MIC oder rekombinante TRPM7 Str&ouml;me durch Zytosolische Alkalinization aktiviert und durch Versauerung gehemmt; und sie k&ouml;nnen von PIP2 reaktiviert werden folgende heruntergekommenen Inside-Out-Patches. Wir vorschlagen werden, MIC (TRPM7) Kan&auml;le durch eine Geb&uuml;hr screening-Mechanismus reguliert und als intrazellul&auml;rer pH-Sensoren funktioniert.

Berechnen Sie die siebt intern pH und polyvalente kationen als Mechanismus f&uuml;r die Aktivierung und Hemmung &Uuml;berblick &uuml;ber TRPM7/MIC-Kan&auml;le.

Il Mg2 +-inibito catione (MIC) corrente, ritiene che rappresentano l&#39;attivit&agrave; dei canali del TRPM7, &egrave; trovato in linfociti e mastociti, cardiaco e muscolo liscio e diversi altri tipi di cellule eucariote. MIC corrente viene attivato durante la dialisi cellule intere con soluzioni interne bivalente-libero. Millimolare concentrazioni di Mg2 + intracellulare (o altri cationi metallici bivalenti) inibiscono i canali in modo indipendente dalla tensione. La natura della inibizione bivalente e il meccanismo di attivazione del canale in una cella intatta rimangono sconosciute. Mostriamo che le poliammine (spermina, spermidina e putrescina) inibiscono il MIC corrente, anche in modo indipendente dalla tensione, con una potenza che il numero di cariche di parallels. Neomicina e poli-lisina anche potentemente inibiti corrente in assenza di Mg2 + MIC. Questi stessi caricato positivamente ioni inibiscono IRK1 corrente in parallelo con MIC attuale, suggerendo che essi probabilmente agire da screening i fosfati gruppo testa su PIP2 e altri fosfolipidi di membrana. D&#39;accordo con questa ipotesi, protoni interni inibiscono anche MIC corrente. Al contrario, tetrametilammonio, tetraetilammonio e hexamethonium prodotto blocco voltaggio-dipendenti ma senza inibizione. Mostriamo che inibizione di cationi polivalenti interni pu&ograve; essere alleviato da alcalinizzanti citosol utilizzando ammonio applicato esternamente o aumentando il pH in inside out patch. Inoltre, nelle registrazioni perforata-patch e cella collegata, quando Mg2 + intracellulare non &egrave; impoverito, endogeno MIC o ricombinante TRPM7 correnti sono attivate da alcalinizzazione citosolico e inibite dall&#39;acidificazione; e pu&ograve; essere riattivati da PIP2 seguito carrellata in patch inside-out. Noi proponiamo che canali microfonici (TRPM7) sono regolati da una meccanismo di screening di carica e possono funzionare come sensori di pH intracellulare.

Carica di pH interno e cationi polivalenti di screening come un meccanismo di attivazione, inibizione e carrellata di canali TRPM7/MIC.

MG2&#x306F;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#xFF08;MIC&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;+&#x7981;&#x6B62;&#x3001;TRPM7&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x80A5;&#x6E80;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x3001;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; MIC&#x96FB;&#x6D41;&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x4FA1;&#x306E;&#x925B;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x5185;&#x90E8;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x900F;&#x6790;&#x4E2D;&#x306B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;Mg2 +&#xFF08;&#x53C8;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x4E8C;&#x4FA1;&#x91D1;&#x5C5E;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#xFF09;&#x306E;&#x30DF;&#x30EA;&#x30E2;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F;&#x96FB;&#x5727;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x4FA1;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x3068;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x306F;&#xFF08;&#x30B9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x30B9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30DF;&#x30B8;&#x30F3;&#x53CA;&#x3073;&#x30D7;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF09;&#x96FB;&#x8377;&#x306E;&#x6570;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x52B9;&#x529B;&#x3067;&#x3001;&#x96FB;&#x5727;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3082;&#x3001;MIC&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30CD;&#x30AA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;-&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5F37;&#x529B;&#x306E;Mg2 +&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;MIC&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x540C;&#x3058;&#x6B63;&#x306B;&#x5E2F;&#x96FB;&#x3057;&#x305F;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x3001;PIP2&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x819C;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x982D;&#x90E8;&#x57FA;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5869;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x884C;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;MIC&#x3068;&#x4E26;&#x884C;&#x3057;&#x3066;IRK1&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x967D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;MIC&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x3001;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x3001;&#x53CA;&#x3073;&#x30D8;&#x30AD;&#x30B5;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x90E8;&#x591A;&#x4FA1;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x90E8;&#x304B;&#x3089;&#x5370;&#x52A0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30BE;&#x30EB;&#x3092;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x308A;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C9;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3067;pH&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7DE9;&#x548C;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x7A7F;&#x5B54;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3068;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EC;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;Mg2 +&#x304C;&#x67AF;&#x6E07;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;MIC&#x53C8;&#x306F;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;TRPM7&#x96FB;&#x6D41;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x9178;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C9;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3067;PIP2&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x8981;&#x7D04;&#x3067;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;MIC&#xFF08;TRPM7&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x8377;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;pH&#x306E;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x5185;&#x90E8;&#x306E;PH&#x3068;&#x591A;&#x4FA1;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3068;TRPM7/MIC&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3067;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5145;&#x96FB;

Mg2 +-&#xC800;&#xD574; &#xC591;&#xC774;&#xC628; (MIC) &#xD604;&#xC7AC;, TRPM7 &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC9C4; &#xD575; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xD615; &#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xADFC;&#xC721; &#xBC0F; &#xC2EC;&#xC7A5;, &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xD604;&#xC7AC; &#xB0B4;&#xBD80; divalent &#xBB34;&#xB8CC; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xD22C; &#xC11D; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Mg2 + (&#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; divalent &#xAE08;&#xC18D; &#xC591;&#xC774;&#xC628;)&#xC758; millimolar &#xB18D;&#xB3C4; &#xC804;&#xC555;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;. Divalent &#xC800;&#xD574; &#xC790;&#xC5F0;&#xACFC; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC140;&#xC5D0; &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; (spermine, spermidine, &#xBC0F; &#xD4E8;) polyamines &#xC694;&#xAE08; &#xC218; &#xB098;&#xB780;&#xD788; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xD798;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xB958;, &#xC804;&#xC555;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C;&#xC5D0; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB124;&#xC624; &#xB9C8;&#xC774; &#xC2E0; &#xBC0F; &#xD3F4; &#xB9AC; &#xB9AC; &#xC2E0; &#xB610;&#xD55C; potently &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; Mg2 +&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD604;&#xC7AC; &#xC800;&#xD574;. &#xC774; &#xAC19;&#xC740; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC628; &#xC800;&#xD574; IRK1 &#xD604;&#xC7AC;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC544;&#xB9C8; &#xB2E4;&#xB978; &#xB9C9; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; pip2&#xC5D0; &#xBA38;&#xB9AC; &#xADF8;&#xB8F9; &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC;&#xC744; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xD558; &#xC5EC; &#xD589;&#xB3D9; &#xC81C;&#xC548; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xC640; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xD604;&#xC7AC; &#xCDA9;&#xC804;. &#xC774; &#xAC00;&#xC124;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC591;&#xC790;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xD604;&#xC7AC; &#xC800;&#xD574;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC5D0;&#xD2F8;, tetraethylammonium, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB284; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; &#xBE14;&#xB85D; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC544;&#xBB34; &#xC800;&#xD574; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC678;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAC00; &#xB418; &#xC554;&#xBAA8;&#xB284;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; cytosol alkalinizing &#xB610;&#xB294; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC544;&#xC6C3; &#xD328;&#xCE58;&#xC5D0; Ph&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xCF1C; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC11E;&#xC740; &#xC591;&#xC774;&#xC628;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xC548;&#xC2EC;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xCC9C;&#xACF5; &#xD328;&#xCE58; &#xBC0F; &#xC140; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xB179;&#xC74C;/&#xB179;&#xD654;&#xC5D0; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Mg2 +&#xC740; &#xC5F4;&#xD654;, &#xB0B4; &#xC0DD; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xB610;&#xB294; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; TRPM7 &#xC804;&#xB958; cytosolic alkalinization&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418;&#xBA70; &#xC0B0;&#xC131;&#xD654;;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; PIP2 &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xC74C; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC544;&#xC6C3; &#xD328;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xCE60; &#xC218;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; (TRPM7) &#xCC44;&#xB110; &#xCDA9;&#xC804; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xD558; &#xC5EC; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; pH &#xC13C;&#xC11C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD65C;&#xC131;&#xD654;, &#xC5B5;&#xC81C;, &#xBC0F; TRPM7/&#xB9C8;&#xC774;&#xD06C; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC694;&#xC57D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0B4;&#xBD80; Ph&#xC640; &#xC11E;&#xC740; &#xC591;&#xC774;&#xC628;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xCCAD;&#xAD6C;.

El Mg 2 + inhibido de cationes (MIC) actual, cree que representa la actividad de los canales TRPM7, se encuentra en los linfocitos y mastocitos, el m&#xFA;sculo cardiaco y liso, y varios otros tipos de c&#xE9;lulas eucariotas. Actual MIC se activa durante toda la c&#xE9;lula de di&#xE1;lisis con divalente soluciones libres internos. Concentraciones milimolares de Mg2 intracelular + (u otros cationes met&#xE1;licos divalentes) inhiben los canales de una manera independiente del voltaje. La naturaleza de la inhibici&#xF3;n divalente y el mecanismo de activaci&#xF3;n del canal en una c&#xE9;lula intacta sigue siendo desconocido. Se demuestra que las poliaminas (espermina, espermidina, y putrescina) inhiben la corriente MIC, tambi&#xE9;n de manera independiente del voltaje, con una potencia que es paralela a la cantidad de cargas. Neomicina y poli-lisina tambi&#xE9;n inhibe potentemente MIC corriente en ausencia de Mg2 +. Estos mismos iones cargados positivamente inhibida IRK1 corriente en paralelo con el MIC corriente, lo que sugiere que probablemente act&#xFA;an ensayando los fosfatos de grupo de cabeza en los fosfol&#xED;pidos de membrana PIP2 y otros. De acuerdo con esta hip&#xF3;tesis, los protones internos tambi&#xE9;n se inhibi&#xF3; MIC actual. Por el contrario, tetrametilamonio, tetraetilamonio, y hexametonio producido dependiente de la tensi&#xF3;n de bloque, pero sin inhibici&#xF3;n. Se demuestra que la inhibici&#xF3;n por internos cationes polivalentes puede ser relevado por el citosol utilizando alcalinizante de amonio aplicado externamente o por el aumento del pH en el interior-los parches. Adem&#xE1;s, en grabaciones perforada-parches y c&#xE9;lulas vinculada, cuando Mg2 + intracelular no se agota, el MIC end&#xF3;geno o recombinantes corrientes TRPM7 son activados por alcalinizaci&#xF3;n citos&#xF3;lica e inhibida por la acidificaci&#xF3;n, y que puede ser reactivado por PIP2 resumen siguiente en el interior de los parches. Proponemos que el MIC (TRPM7) canales est&#xE1;n regulados por un mecanismo de selecci&#xF3;n de carga y pueden funcionar como sensores de pH intracelular.

Carga de apantallamiento por PH interno y cationes polivalentes como un mecanismo para la activaci&#xF3;n, inhibici&#xF3;n, y resumen de Canales TRPM7/MIC

&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x5047;&#x8BF4;&#x7684;&#x963F;&#x5C14;&#x8328;&#x6D77;&#x9ED8;&#x6C0F;&#x75C7;&#x6BD2;&#x6027;&#x5DF2;&#x6709;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x4E0D;&#x662F;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x800C;&#x4EA7;&#x751F;&#x6709;&#x5BB3;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x8F83;&#x5C0F;&#x5BE1;&#x805A;&#x7269;&#x79CD;&#x6B7B;&#x7070;&#x590D;&#x71C3;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x767D;&#x76AE;&#x4E66;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89E3;&#x51B3;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x53EA;&#x6709;&#x4F4E;&#x805A;&#x7269;&#x589E;&#x52A0;&#x7535;&#x5BFC;&#x7387;&#x7684;&#x8102;&#x53CC;&#x5C42;&#x548C;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5939;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x751F;&#x4EA7;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x5236;&#x5242;&#x4E2D;&#x51E0;&#x4E4E;&#x5B8C;&#x5168;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x7535;&#x6D41;&#x7535;&#x538B;&#x66F2;&#x7EBF;&#x3002;&#x4F4E;&#x805A;&#x7269;&#x589E;&#x52A0;&#x88F8;&#x9732;&#x7684;&#x53CC;&#x5C42;&#x7684;&#x7535;&#x5BFC;&#x3001; &#x8BF1;&#x5BFC; nonactin&#xFF0C;&#x4E0E;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x7535;&#x5BFC;&#x7387;&#x548C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x56DB;&#x82EF;&#x787C;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x7535;&#x5BFC;&#x3002;&#x8D1F;&#x7535;&#x8377;&#x964D;&#x4F4E;&#x4E86;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x7684;&#x819C;&#x6CD5;&#x5728;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x5F71;&#x54CD;&#x5F88;&#x5C0F;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x8840;&#x8102;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x5730;&#x533A;&#x53EF;&#x538B;&#x7F29;&#x6027;&#x6709;&#x5F88;&#x5927;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x5927;&#x9762;&#x79EF;&#x538B;&#x7F29;&#x6A21;&#x91CF;&#x819C;&#x51E0;&#x4E4E;&#x65E0;&#x52A8;&#x4E8E;&#x8877;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7684;&#x4F4E;&#x805A;&#x7269;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ECE;&#x8F6F;&#x3001; &#x9AD8;&#x5EA6;&#x53EF;&#x538B;&#x7F29;&#x8840;&#x8102;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x819C;&#x662F;&#x6700;&#x5BB9;&#x6613;&#x4EA7;&#x751F;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x4F4E;&#x805A;&#x7269;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7535;&#x5BFC;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x6EB6;&#x5242; &#xFF08;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x89D2;&#x9CA8;&#x70F7;&#xFF09; decane &#x5F62;&#x6210;&#x53CC;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x662F;&#x5B8C;&#x5168;&#x4E0D;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x4F4E;&#x805A;&#x7269;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x89E3;&#x91CA;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6548;&#x679C;&#x4E0A;&#x53CC;&#x5C42;&#x7535;&#x5BFC;&#x662F;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x9F50;&#x805A;&#x7269;&#x589E;&#x52A0;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x6210;&#x5F62;&#x8840;&#x8102;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x51CF;&#x8584;&#x7684;&#x819C;&#xFF0C;&#x964D;&#x4F4E;&#x4ECB;&#x8D28;&#x963B;&#x6321;&#xFF0C;&#x53CA;&#x63D0;&#x9AD8;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x4ECB;&#x8D28;&#x963B;&#x6321;&#x4EFB;&#x4F55;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7535;&#x5BFC;&#x7684;&#x9762;&#x79EF;&#x3002;

&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x9F50;&#x805A;&#x7269;&#x589E;&#x52A0;&#x53CC;&#x5C42;&#x7535;&#x5BFC;&#x901A;&#x8FC7;&#x6539;&#x53D8;&#x4ECB;&#x8D28;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

The amyloid hypothesis of Alzheimer's toxicity has undergone a resurgence with increasing evidence that it is not amyloid fibrils but a smaller oligomeric species that produces the deleterious results. In this paper we address the mechanism of this toxicity. Only oligomers increase the conductance of lipid bilayers and patch-clamped mammalian cells, producing almost identical current-voltage curves in both preparations. Oligomers increase the conductance of the bare bilayer, the cation conductance induced by nonactin, and the anion conductance induced by tetraphenyl borate. Negative charge reduces the sensitivity of the membrane to amyloid, but cholesterol has little effect. In contrast, the area compressibility of the lipid has a very large effect. Membranes with a large area compressibility modulus are almost insensitive to amyloid oligomers, but membranes formed from soft, highly compressible lipids are highly susceptible to amyloid oligomer-induced conductance changes. Furthermore, membranes formed using the solvent decane (instead of squalane) are completely insensitive to the presence of oligomers. One simple explanation for these effects on bilayer conductance is that amyloid oligomers increase the area per molecule of the membrane-forming lipids, thus thinning the membrane, lowering the dielectric barrier, and increasing the conductance of any mechanism sensitive to the dielectric barrier.

Soluble amyloid oligomers increase bilayer conductance by altering dielectric structure.

L&#x26;#39;hypoth&#xE8;se de la toxicit&#xE9; amylo&#xEF;de d&#x26;#39;Alzheimer a connu une r&#xE9;surgence avec une &#xE9;vidence croissante que ce n&#x26;#39;est pas fibrilles amylo&#xEF;des, mais quelques esp&#xE8;ces oligom&#xE9;riques plus petites, qui produit des r&#xE9;sultats n&#xE9;fastes. Dans cet article, nous abordons le m&#xE9;canisme de cette toxicit&#xE9;. Seuls les oligom&#xE8;res d&#x26;#39;augmenter la conductance de bicouches lipidiques et de patch serr&#xE9;es des cellules de mammif&#xE8;res, la production de presque identiques courbes courant-tension dans les deux pr&#xE9;parations. Oligom&#xE8;res augmenter la conductance de la bicouche nue, la conductance de cations induite par nonactine, et la conductance d&#x26;#39;anions induite par le borate de t&#xE9;traph&#xE9;nyle. Charge n&#xE9;gative r&#xE9;duit la sensibilit&#xE9; de la membrane &#xE0; l&#x26;#39;amylo&#xEF;de, mais le taux de cholest&#xE9;rol a peu d&#x26;#39;effet. En revanche, la compressibilit&#xE9; zone du lipide a un effet tr&#xE8;s important. Membranes avec un module de compressibilit&#xE9; de grandes zones sont presque insensibles &#xE0; des oligom&#xE8;res amylo&#xEF;des, mais membranes form&#xE9;es &#xE0; partir gazeuses, des lipides hautement compressibles sont tr&#xE8;s sensibles aux changements de conductance amylo&#xEF;des oligom&#xE8;re-induites. En outre, les membranes form&#xE9;es en utilisant la d&#xE9;cane solvant (au lieu de squalane) sont compl&#xE8;tement insensible &#xE0; la pr&#xE9;sence d&#x26;#39;oligom&#xE8;res. Une explication simple pour ces effets sur la conductance bicouche est que oligom&#xE8;res amylo&#xEF;des augmenter la surface par mol&#xE9;cule des lipides formant une membrane, la membrane ainsi amincissement, l&#x26;#39;abaissement de la barri&#xE8;re di&#xE9;lectrique, et augmenter la conductance d&#x26;#39;un m&#xE9;canisme sensible &#xE0; la barri&#xE8;re di&#xE9;lectrique.

Oligom&#xE8;res amylo&#xEF;des solubles augmenter la conductance bicouche en modifiant la structure di&#xE9;lectrique

Die Amyloid-Hypothese von Alzheimer Toxizit&auml;t durchlief ein Wiederaufleben mit zunehmender Beweis, dass es nicht Amyloid-Fibrillen aber eine kleinere Oligomere Spezies, die die sch&auml;dlichen Ergebnisse liefert. In diesem Papier wenden wir uns den Mechanismus der diese Toxizit&auml;t. Nur Oligomere erh&ouml;hen den Leitwert von Lipid-Doppelschichten und Patch-geklemmt S&auml;ugetier-Zellen, produzieren fast identische Strom-Spannungs-Kurven in beiden Pr&auml;paraten. Oligomere erh&ouml;hen den Leitwert von der blo&szlig;en Bilayer, den kation Leitwert von Nonactin induziert und das Anion Leitwert von Tetraphenyl-Borat induziert. Negative Ladung verringert die Empfindlichkeit der Membran zu Amyloid, aber Cholesterin hat wenig Auswirkung. Im Gegensatz dazu wirkt die Fl&auml;che Kompressibilit&auml;t von der Lipid sehr gro&szlig;. Membranen mit einem grossfl&auml;chigen Kompressibilit&auml;t Modul sind nahezu unempfindlich gegen Amyloid Oligomere Membranen gebildet aus weichen, hoch kompressible Lipide sind sehr anf&auml;llig f&uuml;r Amyloid Oligomer-induzierte Leitwert &Auml;nderungen Dar&uuml;ber hinaus sind Membranen, die mit dem L&ouml;sungsmittel Decan (statt Squalan) gebildet unempfindlich gegen die Anwesenheit von Oligomeren. Eine einfache Erkl&auml;rung f&uuml;r diese Effekte auf Bilayer Leitwert ist, dass Amyloid Oligomere Bereich pro Molek&uuml;l der Membran-bildenden Lipide, so Ausd&uuml;nnung der Membran, senken die dielektrische Barriere und erh&ouml;hen den Leitwert keinen Mechanismus f&uuml;r die dielektrische Barriere empfindlich erh&ouml;hen.

L&ouml;sliche Amyloid Oligomere erh&ouml;hen Bilayer Leitwert durch dielektrische Struktur &auml;ndern.

L&#39;ipotesi dell&#39;amiloide di tossicit&agrave; del morbo di Alzheimer ha subito una rinascita con crescente evidenza che non &egrave; fibrille amiloidi, ma una pi&ugrave; piccola specie oligomerici che produce i risultati deleteri. In questo articolo affrontiamo il meccanismo di questa tossicit&agrave;. Oligomeri solo aumentano la conduttanza di lipidici e cellule di mammifero clampate patch, producendo quasi identiche curve corrente-tensione in entrambi preparati. Oligomeri aumentano la conduttanza del doppio strato di bare, la conduttanza del catione indotta da Nonactina e la conduttanza anione indotta da borato di tetraphenyl. Carica negativa riduce la sensibilit&agrave; della membrana di amiloide, ma colesterolo ha poco effetto. Al contrario, la compressibilit&agrave; di zona dei lipidi ha un effetto molto grande. Membrane con un modulo di compressibilit&agrave; grande area sono quasi insensibili all&#39;amiloide oligomeri, ma formate da lipidi morbidi, altamente comprimibile le membrane sono altamente sensibili alle variazioni di conduttanza amiloide oligomero-indotta. Inoltre, le membrane formate utilizzando il solvente decano (invece di squalane) sono completamente insensibili alla presenza di oligomeri. Una semplice spiegazione per questi effetti sulla conduttanza doppio strato &egrave; che oligomeri amiloide aumentano l&#39;area per ogni molecola di lipidi membrana formando, cos&igrave; assottigliamento della membrana, abbassando la barriera dielettrica e aumenta la conduttanza di qualsiasi meccanismo sensibile alla barriera dielettrica.

Oligomeri amiloide solubili aumentano la conduttanza doppio strato modificando la struttura dielettrico.

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La hip&#xF3;tesis amiloide de la toxicidad de Alzheimer ha experimentado un resurgimiento con la creciente evidencia de que no es fibrillas amiloides sino una especie oligom&#xE9;ricos m&#xE1;s peque&#xF1;as que produce los resultados perjudiciales. En este trabajo se aborda el mecanismo de esta toxicidad. Olig&#xF3;meros s&#xF3;lo aumentan la conductividad de bicapas lip&#xED;dicas y el parche de c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros sujetos al suelo, produciendo casi id&#xE9;nticas curvas de corriente-voltaje en ambas preparaciones. Olig&#xF3;meros aumentar la conductancia de la bicapa de pelado, la conductancia de cationes inducida por nonactina, y la conductancia ani&#xF3;n borato inducida por tetrafenil. Carga negativa reduce la sensibilidad de la membrana para amiloide, pero el colesterol tiene poco efecto. En contraste, la compresibilidad &#xE1;rea del l&#xED;pido tiene un efecto muy grande. Las membranas con un m&#xF3;dulo de compresibilidad de gran superficie son casi insensibles a olig&#xF3;meros de amiloide, pero las membranas formadas a partir de l&#xED;pidos blandos, altamente comprimibles son altamente susceptibles a los cambios inducidos por el olig&#xF3;mero amiloides de conductancia. Adem&#xE1;s, las membranas se forman utilizando el decano disolvente (en lugar de escualano) son completamente insensibles a la presencia de olig&#xF3;meros. Una explicaci&#xF3;n simple para estos efectos sobre la conductancia bicapa es que los olig&#xF3;meros de amiloide aumentar el &#xE1;rea por mol&#xE9;cula de los l&#xED;pidos formadores de membrana, con lo que el adelgazamiento de la membrana, reduciendo la barrera diel&#xE9;ctrica, y aumentando la conductancia de cualquier mecanismo sensible a la barrera diel&#xE9;ctrica.

Olig&#xF3;meros solubles de amiloide Aumentar la conductancia bicapa mediante la alteraci&#xF3;n de la estructura diel&#xE9;ctrica

&#x9AD8;&#x6548;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9700;&#x8981;&#x957F;&#x6548;&#x9499;&#x6D8C;&#x5165;&#x9499;&#x91CA;&#x653E;&#x6D3B;&#x6027;&#x9499; (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x6E20;&#x9053;&#x548C; (IS) &#x4E0E;&#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE; (APC) &#x7A33;&#x5B9A;&#x514D;&#x75AB;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1; RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#x5DF2;&#x67E5;&#x660E;&#x4F34;&#x548C;&#x679C;&#x8747;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x548C;&#x5176;&#x76F8;&#x5E94;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x540C;&#x6E90; STIM1 &#x548C; Orai1 &#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; STIM1 &#x548C; Orai1 &#x88AB;&#x5F81;&#x8058;&#x5230;&#x4E3B;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x81EA;&#x4F53;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7A81;&#x89E6;&#x3002;&#x5728;&#x4F11;&#x606F;&#x6216; super-antigen &#xFF08;SEB&#xFF09; &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x65B9;&#x9762;&#x79EF;&#x7D2F;&#x4E86; STIM1 &#x548C; Orai1-&#x9884;&#x5904;&#x7406; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; SEB &#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5728;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x88AB; colocalized &#x5171;&#x523A;&#x6FC0;&#x5206;&#x5B50;&#x4E0E; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53; (TCR)&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728;&#x6EE1;&#x8F7D; EGTA T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x6210;&#x50CF;&#x5927;&#x5927;&#x900F;&#x9732;&#x9AD8; Ca2 + &#x6D53;&#x5EA6;&#x9644;&#x8FD1;&#x63A5;&#x53E3;&#xFF0C;Ca2 + &#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x503C;&#x6307;&#x793A;&#x5728; T &#x7EC6;&#x80DE;/&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63A5;&#x89E6;&#x9762;&#x79EF;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;Orai1 &#x663E;&#x6027;&#x8D1F;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x963B;&#x6B62; T &#x7EC6;&#x80DE; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5E72;&#x6D89;&#x7684; STIM1&#x3001; Orai1 &#x548C;&#x63A5;&#x89E6;&#x533A; CD3 &#x521D;&#x59CB;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x7206;&#x70B8;&#x9020;&#x6210;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; STIM1 &#x548C;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x79CD;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x4E0A;&#x8C03;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6; Ca2 + &#x901A;&#x8FC7;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6E20;&#x9053;&#x6D41;&#x5165;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x53CD;&#x9988;&#x56DE;&#x8DEF;&#x7684;&#x521D;&#x59CB; TCR &#x4FE1;&#x53F7;&#x770B;&#x597D; STIM1 &#x4E0A;&#x8C03;&#x548C;&#x53E3;&#x8BED;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4F1A;&#x589E;&#x52A0; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x968F;&#x540E;&#x6297;&#x539F;&#x671F;&#x95F4;&#x9047;&#x5230;&#x3002;

Orai1 &#x548C; STIM1 &#x79FB;&#x52A8;&#x5230;&#x514D;&#x75AB;&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#xFF0C;&#x4E0A;&#x8C03;&#x5728; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

For efficient development of an immune response, T lymphocytes require long-lasting calcium influx through calcium release-activated calcium (CRAC) channels and the formation of a stable immunological synapse (IS) with the antigen-presenting cell (APC). Recent RNAi screens have identified Stim and Orai in Drosophila cells, and their corresponding mammalian homologs STIM1 and Orai1 in T cells, as essential for CRAC channel activation. Here, we show that STIM1 and Orai1 are recruited to the immunological synapse between primary human T cells and autologous dendritic cells. Both STIM1 and Orai1 accumulated in the area of contact between either resting or super-antigen (SEB)-pretreated T cells and SEB-pulsed dendritic cells, where they were colocalized with T cell receptor (TCR) and costimulatory molecules. In addition, imaging of intracellular calcium signaling in T cells loaded with EGTA revealed significantly higher Ca2+ concentration near the interface, indicating Ca2+ influx localized at the T cell/dendritic cell contact area. Expression of a dominant-negative Orai1 mutant blocked T cell Ca2+ signaling but did not interfere with the initial accumulation of STIM1, Orai1, and CD3 in the contact zone. In activated T cell blasts, mRNA expression for endogenous STIM1 and all three human homologs of Orai was up-regulated, accompanied by a marked increase in Ca2+ influx through CRAC channels. These results imply a positive feedback loop in which an initial TCR signal favors up-regulation of STIM1 and Orai proteins that would augment Ca2+ signaling during subsequent antigen encounter.

Orai1 and STIM1 move to the immunological synapse and are up-regulated during T cell activation.

Pour un d&#xE9;veloppement efficace d&#x26;#39;une r&#xE9;ponse immunitaire, les lymphocytes T n&#xE9;cessite l&#x26;#39;influx de calcium de longue dur&#xE9;e par le biais de calcium lib&#xE9;ration de calcium activ&#xE9;s (CRAC) des canaux et la formation d&#x26;#39;une synapse immunologique stable (IS) avec la cellule pr&#xE9;sentatrice d&#x26;#39;antig&#xE8;ne (APC). Derni&#xE8;res &#xE9;crans ARNi ont identifi&#xE9; Stim et Orai dans les cellules de drosophile, et leurs correspondants homologues mammif&#xE8;res STIM1 et Orai1 dans les cellules T, comme essentiels pour l&#x26;#39;activation du canal CRAC. Ici, nous montrons que STIM1 et Orai1 sont recrut&#xE9;s &#xE0; la synapse immunologique entre les lymphocytes T primaires humains et des cellules dendritiques autologues. Les deux STIM1 et Orai1 accumul&#xE9;e dans la zone de contact entre deux repos ou super-antig&#xE8;ne (SEB) pr&#xE9;trait&#xE9;s cellules T et SEB-cellules dendritiques puls&#xE9;es, o&#xF9; ils ont &#xE9;t&#xE9; colocalis&#xE9;s avec le r&#xE9;cepteur des cellules T (TCR) et les mol&#xE9;cules co-stimulatrices. En outre, l&#x26;#39;imagerie du calcium intracellulaire de signalisation dans les cellules T charg&#xE9;s de l&#x26;#39;EGTA a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; significativement plus &#xE9;lev&#xE9; Ca2 + de concentration pr&#xE8;s de l&#x26;#39;interface, indiquant Ca2 + influx localis&#xE9;e &#xE0; la cellule T / dendritique zone de contact cellulaire. Expression d&#x26;#39;un mutant dominant n&#xE9;gatif Orai1 bloqu&#xE9; cellules T Ca2 + de signalisation, mais ne pas interf&#xE9;rer avec l&#x26;#39;accumulation initiale de STIM1, Orai1, et CD3 dans la zone de contact. En activ&#xE9;s explosions des cellules T, expression de l&#x26;#39;ARNm pour STIM1 endog&#xE8;ne et tous les trois homologues de l&#x26;#39;homme des Orai &#xE9;tait r&#xE9;gul&#xE9;e &#xE0; la hausse, accompagn&#xE9;e d&#x26;#39;une augmentation marqu&#xE9;e de Ca2 + influx par les canaux CRAC. Ces r&#xE9;sultats impliquent une boucle de r&#xE9;troaction positive dans laquelle un signal initial TCR favorise la r&#xE9;gulation positive des prot&#xE9;ines STIM1 et Orai qui renforceraient Ca2 + de signalisation lors de la rencontre antig&#xE8;ne ult&#xE9;rieure.

Orai1 et STIM1 D&#xE9;placer vers la synapse immunologique et sont r&#xE9;gul&#xE9;s &#xE0; la hausse lors de l&#x26;#39;activation des lymphocytes T

F&uuml;r die effiziente Entwicklung einer Immunantwort erfordern die T-Lymphozyten langlebige Kalzium Zustrom durch Kalzium aktivierte Version Kalzium (CRAC) Kan&auml;le und die Bildung einer stabilen immunologische Synapse (IS) mit der Antigen-pr&auml;sentierenden Zelle (APC). Den letzten RNAi-Bildschirme haben Stim und Orai in Drosophila-Zellen und ihre entsprechenden S&auml;ugetier-UCP1 STIM1 und Orai1 in T-Zellen, als wesentlich f&uuml;r die CRAC Kanal Aktivierung identifiziert. Hier zeigen wir, dass STIM1 und Orai1 f&uuml;r die immunologische Synapse zwischen prim&auml;ren menschlichen T-Zellen und autologen dendritischen Zellen angeworben werden. STIM1 und Orai1 gesammelt im Bereich der Kontakt zwischen Ruhe- oder Super-antigen (SEB)-T-Zellen und SEB-gepulsten dendritischen Zellen, wo sie mit T-Zell-Rezeptor (TCR) und kostimulatorischen Molek&uuml;len colocalized waren vorbehandelt. Dar&uuml;ber hinaus ergab Bildgebung von intrazellul&auml;ren Calcium signalisieren in T-Zellen geladen mit EGTA deutlich h&ouml;herer Ca2 + Konzentration in der N&auml;he der Schnittstelle angibt, Ca2 + Zustrom an die T-Zelle/Dendritische Zelle Kontaktfl&auml;che lokalisiert. Ausdruck der Dominant-negativen Orai1 Mutanten blockiert T-Zelle Ca2 + signalisieren jedoch die erste Ansammlung von STIM1, Orai1 und CD3 in der Kontaktzone nicht st&ouml;ren. Aktivierte T-Zelle Blasten war mRNA Ausdruck f&uuml;r endogene STIM1 und alle drei menschlichen UCP1 von Orai oben-geregelt, begleitet von einem deutlichen Anstieg der Ca2 + Zustrom durch CRAC-Kan&auml;le. Diese Ergebnisse bedeuten eine positive Feedback-Schleife, in der ein Ausgangssignal von TCR bevorzugt bis-Regelung der STIM1 und Orai Proteine, die Ca2 + Signalisierung w&auml;hrend nachfolgende Antigen erg&auml;nzen w&uuml;rde zu begegnen.

Orai1 und STIM1 in der immunologischen Synapse verschieben und w&auml;hrend der T-Zell-Aktivierung sind oben-geregelt.

Per uno sviluppo efficiente di una risposta immunitaria, i linfociti T richiedono duraturo afflusso di calcio attraverso i canali di calcio calcio attivato dal rilascio (CRAC) e la formazione di una sinapsi immunologica stabile (IS) con le cellule presentanti l&#39;antigene (APC). Schermi RNAi recenti hanno identificato Stim e Orai nelle cellule di Drosophila e loro corrispondenti omologhi dei mammiferi STIM1 e Orai1 in cellule T, come essenziale per l&#39;attivazione del canale CRAC. Qui, ci mostra che STIM1 e Orai1 sono reclutati per la sinapsi immunologica tra primarie umane delle cellule T e cellule dendritiche autologhe. STIM1 sia Orai1 accumulato nella zona di contatto tra riposo o super-antigen (SEB)-pretrattati cellule T e cellule dendritiche SEB-pulsato, dove essi erano colocalized con il recettore delle cellule T (TCR) e molecole di costimolazione. Inoltre, imaging del calcio intracellulare segnalazione in cellule T caricate con EGTA ha rivelato significativamente superiore Ca2 + concentrazione vicino l&#39;interfaccia, che indica Ca2 + afflusso localizzata presso l&#39;area di contatto delle cellule dendritiche/T cell. Espressione di un mutante Orai1 dominante-negativo bloccato T cell Ca2 + segnalazione ma non ha interferito con l&#39;accumulazione iniziale di STIM1, Orai1 e CD3 nella zona di Contatta. Nelle cellule T attivate blasti, espressione del mRNA per STIM1 endogeni e tutti i tre umani omologhi di Orai era up-regolato, accompagnato da un marcato aumento nell&#39;afflusso Ca2 + attraverso i canali CRAC. Questi risultati implicano un ciclo di feedback positivo, in cui un segnale iniziale TCR favorisce la up-regulation di STIM1 e Orai proteine che vuoi aumentare Ca2 + segnalazione durante successive antigene incontro.

Orai1 e STIM1 spostare la sinapsi immunologica e sono up-regolate durante l&#39;attivazione delle cellule T.

&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x304C;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;APC&#xFF09;&#x3068;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#xFF08;IS&#xFF09;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;RNAi&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306F;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;STIM1&#x3068;Orai1&#x3092;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;STIM1&#x3068;Orai1&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x30D2;&#x30C8;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x81EA;&#x5DF1;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x52D5;&#x54E1;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; STIM1&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4F11;&#x6B62;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x6297;&#x539F;&#xFF08;SEB&#xFF09;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304C;T&#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;TCR&#xFF09;&#x3068;&#x5171;&#x523A;&#x6FC0;&#x5206;&#x5B50;&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x305F;SEB-&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3068;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x9762;&#x7A4D;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;Orai1&#x4E21;&#x65B9;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;EGTA&#x3092;&#x642D;&#x8F09;&#x3057;&#x305F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;/&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x9762;&#x7A4D;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;Ca2 +&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;Ca2 +&#x306E;&#x754C;&#x9762;&#x8FD1;&#x508D;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;Orai1&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;Ca2 +&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x906E;&#x65AD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x63A5;&#x89E6;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;STIM1&#x3001;Orai1&#x3068;&#x3001;CD3&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;T&#x7D30;&#x80DE;&#x82BD;&#x7403;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;STIM1&#x306E;mRNA&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x76F8;&#x540C;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x306E;&#x8457;&#x3057;&#x3044;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x521D;&#x671F;&#x306E;TCR&#x4FE1;&#x53F7;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x3068;&#x306E;&#x906D;&#x9047;&#x306E;Ca2 +&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x3067;&#x3057;&#x3087;&#x3046;STIM1&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x652F;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x6B63;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Orai1&#x3068;STIM1 T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x79FB;&#x52D5;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;

&#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xCE7C;&#xC298; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131; &#xCE7C;&#xC298; (CRAC) &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC624;&#xB7AB;&#xB3D9;&#xC548; &#xCE7C;&#xC298; &#xC720;&#xC785; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC; (APC)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xBA74;&#xC5ED; &#xB0C5; (IS)&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; RNAi &#xD654;&#xBA74; Stim&#xC640; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD574;&#xB2F9; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; homologs STIM1 &#xBC0F; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; Orai1 CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; stim1&#xC640; orai1&#xB294; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xD5CC; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xB0C5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD734;&#xC2DD; &#xB610;&#xB294; super-antigen (SEB) &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC811;&#xCD09; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD95;&#xC801; &#xB41C; STIM1 &#xBC0F; Orai1-pretreated T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC149; &#xD384;&#xC2A4; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (TCR)&#xC640; costimulatory &#xBD84;&#xC790; colocalized &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; EGTA&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298;&#xC758; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCD09; &#xBA74;&#xC801;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; Ca2 + &#xB18D;&#xB3C4; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xADFC;&#xCC98; Ca2 + &#xC720;&#xC785; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; Orai1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; T &#xC140; Ca2 + &#xC2E0;&#xD638; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; STIM1, Orai1, CD3 &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD3ED;&#xBC1C; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC778;&#xAC04; homologs&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB0B4; STIM1 mRNA &#xC2DD;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4; &#xCD5C;&#xB300; &#xD1B5;&#xC81C; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Ca2 + &#xC720;&#xC785;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD568;&#xAED8;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xCD08;&#xAE30; TCR &#xC2E0;&#xD638; &#xD638;&#xC758; stim1&#xC758; &#xC5C5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; &#xBC0F; &#xD6C4;&#xC18D; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC911; Ca2 + &#xC2E0;&#xD638; &#xBCF4;&#xC644;&#xD560; &#xAC83; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xB8E8;&#xD504;&#xB97C; &#xC758;&#xBBF8;.

Orai1 &#xBC0F; STIM1 &#xBA74;&#xC5ED;&#xD559; &#xB0C5; &#xC774;&#xB3D9;&#xD55C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC704;&#xB85C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Para el desarrollo eficiente de una respuesta inmune, los linfocitos T de larga duraci&#xF3;n requieren la entrada de calcio a trav&#xE9;s de calcio activados por la liberaci&#xF3;n de calcio (CRAC) de canales y la formaci&#xF3;n de la sinapsis inmunol&#xF3;gica estable (IS) con la c&#xE9;lula presentadora de ant&#xED;geno (APC). Recientes pantallas de RNAi han identificado Stim y ORAI en las c&#xE9;lulas de Drosophila, y sus hom&#xF3;logos correspondientes de mam&#xED;feros y STIM1 Orai1 en las c&#xE9;lulas T, como esenciales para la activaci&#xF3;n de canales CRAC. Aqu&#xED;, mostramos que STIM1 y Orai1 son reclutados a la sinapsis inmunol&#xF3;gica entre las c&#xE9;lulas T humanas primarias y c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas aut&#xF3;logas. Tanto STIM1 y Orai1 acumulado en el &#xE1;rea de contacto entre cualquiera de reposo o super ant&#xED;geno-(SEB)-pretratados c&#xE9;lulas T y de SEB-pulsado c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas, donde fueron colocalized con receptor de c&#xE9;lulas T (TCR) y mol&#xE9;culas co-estimuladoras. Adem&#xE1;s, las im&#xE1;genes de calcio intracelular de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas T cargadas con EGTA revel&#xF3; Ca2 + significativamente mayor concentraci&#xF3;n cerca de la interfase, lo que indica Ca2 + afluencia localizada en la c&#xE9;lula T / &#xE1;rea dendr&#xED;tica contacto c&#xE9;lula. Expresi&#xF3;n de un mutante dominante negativo Orai1 bloqueado c&#xE9;lulas T Ca2 + se&#xF1;alizaci&#xF3;n, pero no interfieren con la acumulaci&#xF3;n inicial de STIM1, Orai1, y CD3 en la zona de contacto. En blastos de c&#xE9;lulas T activadas, la expresi&#xF3;n del mRNA de STIM1 end&#xF3;gena y los tres hom&#xF3;logos humanos de ORAI fue hasta reguladas, acompa&#xF1;ado por un marcado aumento en influjo de Ca2 + a trav&#xE9;s de los canales CRAC. Estos resultados implican un bucle de retroalimentaci&#xF3;n positiva en la que una primera se&#xF1;al de TCR favorece la regulaci&#xF3;n de prote&#xED;nas y STIM1 ORAI que aumentan Ca2 + de se&#xF1;alizaci&#xF3;n durante el encuentro de ant&#xED;geno posterior.

Orai1 y STIM1 Mover a la sinapsis inmunol&#xF3;gica y est&#xE1;n regulados durante la activaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T

&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7535;&#x6D41;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x4E0E; STIM1 &#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5F53; co-expressed &#x4E0E; STIM1&#xFF0C;Orai1 &#x611F;&#x5E94;&#x7535;&#x6D41;&#x5927;&#x5185;&#x5FC3;&#x6574;&#x6D41; Ca(2+) &#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x4E0E; Ca(2+) &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6162;&#x706D;&#x6D3B;&#x3002;Orai1 &#x70B9;&#x7A81;&#x53D8; &#xFF08;E106D&#xFF09; &#x6539;&#x53D8;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7ECF; (&#x7CFB;&#x7EDF;)-&#x50CF;&#x540C;&#x65F6;&#x4FDD;&#x7559;&#x5185;&#x5FC3;&#x7EA0;&#x6B63;&#x6211;&#x7684;&#x7535;&#x6D41;-V &#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; STIM1 &#x4E0E; Orai1 &#x7684; C &#x7AEF;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x5C31;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x751F;&#x6210;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5F53;&#x524D;&#x4E0D;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x3002;2 &#x5EFA;&#x4E1A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x76F8;&#x5BF9;&#x975E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5927;&#x7535;&#x6D41;&#x5728; STIM1 &#x548C; Orai3 &#x8F6C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;2 &#x5EFA;&#x4E1A;&#x4E5F;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x7ECF;&#x6D8C;&#x5165; Orai3 &#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x6216; STIM1 &#x7684;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;Orai3 &#x5F53;&#x524D;&#x8BF1;&#x5BFC; 2 &#x5EFA;&#x4E1A;&#x5C55;&#x51FA;&#x5916;&#x5411;&#x6574;&#x6D41;&#x548C;&#x4EE3;&#x8868;&#x6DF7;&#x5408;&#x7684;&#x9499;&#x548C;&#x5355;&#x4EF7;&#x5F53;&#x524D;&#x5916;&#x6765;&#x6210;&#x5206;&#x3002;Orai3 &#x5B54;&#x7A81;&#x53D8;&#x6291;&#x5236;&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425;&#x7ECF;&#x5165;&#x5883;&#x548C;&#x6CA1;&#x6709;&#x54CD;&#x5E94;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x6216;&#x589E;&#x52A0; 2 &#x5EFA;&#x4E1A;&#x643A;&#x5E26;&#x5927;&#x91CF;&#x7535;&#x6D41;&#x3002;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684; Orai1-3 &#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x8D1F;&#x8D23; 2-&#x5EFA;&#x4E1A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5F53;&#x524D;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x4ECE;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x5230;&#x7B2C;&#x4E09;&#x8DE8;&#x819C;&#x6BB5;&#x7684; Orai3 &#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x81F4; 2 &#x5EFA;&#x4E1A; Orai3 &#x5F53;&#x524D;&#x53EF;&#x80FD;&#x53CD;&#x6620;&#x6253;&#x5F00;&#x76F8;&#x5BF9;&#x975E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x5B54;&#x9699;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x5B58;&#x50A8;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

&#x5B58;&#x50A8;&#x4F9D;&#x8D56;&#x548C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x6A21;&#x5F0F;&#x8C03;&#x8282; Ca2 + &#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; Orai1 &#x548C; Orai3&#x3002;

We evaluated currents induced by expression of human homologs of Orai together with STIM1 in human embryonic kidney cells. When co-expressed with STIM1, Orai1 induced a large inwardly rectifying Ca(2+)-selective current with Ca(2+)-induced slow inactivation. A point mutation of Orai1 (E106D) altered the ion selectivity of the induced Ca(2+) release-activated Ca(2+) (CRAC)-like current while retaining an inwardly rectifying I-V characteristic. Expression of the C-terminal portion of STIM1 with Orai1 was sufficient to generate CRAC current without store depletion. 2-APB activated a large relatively nonselective current in STIM1 and Orai3 co-expressing cells. 2-APB also induced Ca(2+) influx in Orai3-expressing cells without store depletion or co-expression of STIM1. The Orai3 current induced by 2-APB exhibited outward rectification and an inward component representing a mixed calcium and monovalent current. A pore mutant of Orai3 inhibited store-operated Ca(2+) entry and did not carry significant current in response to either store depletion or addition of 2-APB. Analysis of a series of Orai1-3 chimeras revealed the structural determinant responsible for 2-APB-induced current within the sequence from the second to third transmembrane segment of Orai3. The Orai3 current induced by 2-APB may reflect a store-independent mode of CRAC channel activation that opens a relatively nonselective cation pore.

Store-dependent and -independent modes regulating Ca2+ release-activated Ca2+ channel activity of human Orai1 and Orai3.

On &#xE9;valu&#xE9;e courants induits par l&#x26;#39;expression d&#x26;#39;homologues humains de Orai avec STIM1 dans cellules r&#xE9;nales embryonnaires humaines. En cas de co-exprim&#xE9; avec STIM1, Orai1 induit une grande Ca vers l&#x26;#39;int&#xE9;rieur de redressement (2 +)-s&#xE9;lective courant avec Ca (2 +)-induite inactivation lente. Un mutation ponctuelle d&#x26;#39;Orai1 (E106D) modifi&#xE9; de la s&#xE9;lectivit&#xE9; ionique de l&#x26;#39;induit Ca (2 +) &#xE0; lib&#xE9;ration activ&#xE9; Ca (2 +) (CRAC) en forme de courant tout en conservant une caract&#xE9;ristique rectification entrante IV. Expression de la partie C-terminale de STIM1 avec Orai1 est suffisante pour g&#xE9;n&#xE9;rer du courant CRAC sans d&#xE9;pl&#xE9;tion magasin. 2-APB a activ&#xE9; un courant relativement important non s&#xE9;lectif dans STIM1 et Orai3 co-exprimant les cellules. 2-APB a &#xE9;galement induit Ca (2 +) dans l&#x26;#39;afflux Orai3 cellules exprimant sans &#xE9;puisement magasin ou co-expression de STIM1. Le courant induit par Orai3 2-APB expos&#xE9; de rectification vers l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur et une composante int&#xE9;rieure repr&#xE9;sentant un mixte de calcium et monovalent actuelle. Un mutant de pores de Orai3 inhib&#xE9;e magasin exploit&#xE9; Ca (2 +) d&#x26;#39;entr&#xE9;e et n&#x26;#39;a pas transporter le courant important dans la r&#xE9;ponse &#xE0; l&#x26;#39;appauvrissement de magasin ou l&#x26;#39;autre ou plus de 2-APB. Analyse d&#x26;#39;une s&#xE9;rie de Orai1-3 chim&#xE8;res r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; l&#x26;#39;d&#xE9;terminant structurel charg&#xE9; de 2-APB-courant induit au sein de la s&#xE9;quence de la deuxi&#xE8;me &#xE0; troisi&#xE8;me segment transmembranaire Orai3. Le courant induit par Orai3 2-APB refl&#xE8;te peut-&#xEA;tre un mode de magasin ind&#xE9;pendant de l&#x26;#39;activation du canal CRAC qui ouvre un pore cation relativement non s&#xE9;lectif.

Modes Store-d&#xE9;pendants et ind&#xE9;pendants de r&#xE9;gulation lib&#xE9;ration de Ca2 + activ&#xE9; par Ca 2 + canaliser l&#x26;#39;activit&#xE9; de l&#x26;#39;homme et Orai1 Orai3

Wir evaluieren Str&ouml;me induziert durch Ausdruck der menschlichen UCP1 von Orai zusammen mit STIM1 in menschlichen embryonalen Nierenzellen. Wenn co-expressed mit STIM1, Orai1 induziert einen gro&szlig;en einw&auml;rtsgleichrichtenden Ca(2+)-selektive Strom mit Ca(2+)-induzierten langsamen Inaktivierung. Der Punkt-Mutation des Orai1 (E106D) ver&auml;ndert die Ion-Selektivit&auml;t des induzierten Ca(2+) aktivierte Version V Ca(2+) (CRAC) - wie aktuell unter Beibehaltung einer Berichtigung ich innerlich - Merkmals. Ausdruck der C-terminalen Teil des STIM1 mit Orai1 war ausreichend, CRAC aktuelle ohne Speicher Ersch&ouml;pfung zu generieren. 2-APB aktiviert einen gro&szlig;en relativ unselektiv Strom in STIM1 und Orai3 co-expressing Zellen. 2-APB auch induzierte Ca(2+) Zustrom in Zellen ohne Speicher Ersch&ouml;pfung oder Koexpression von STIM1 Orai3 zum Ausdruck bringen. Der Orai3 Strom induziert durch 2-APB ausgestellt nach au&szlig;en Berichtigung und eine nach innen-Komponente, eine gemischte Kalzium und monovalenten Strom darstellt. Eine Pore-Mutante der Orai3 gehemmt Speicher zu bet&auml;tigende Ca(2+) Eintrag und nicht mit erheblichen Strom als Reaktion auf Speicher Ersch&ouml;pfung oder Zusatz von 2-APB. Analyse einer Reihe von Orai1-3 Chim&auml;ren offenbart strukturelle Determinanten f&uuml;r 2-APB-induzierte Strom innerhalb der Sequenz aus dem zweiten bis dritten Transmembran-Segment des Orai3 verantwortlich. Der Orai3 Strom induziert durch 2-APB kann einen Shop-unabh&auml;ngigen Modus des CRAC Kanal Aktivierung wider, die eine relativ unselektiv kation Pore &ouml;ffnet.

Shop-abh&auml;ngige und -unabh&auml;ngige-Modi, die Regulierung von Ca2 + Freigabe aktiviert Ca2 + Kanal Aktivit&auml;t des menschlichen Orai1 und Orai3.

Abbiamo valutato le correnti indotte dall&#39;espressione di umane omologhi di Orai insieme STIM1 in cellule renali embrionali umane. Quando co-expressed con STIM1, Orai1 indotta da una grande corrente interiormente rettifica Ca(2+)-selettiva con inattivazione lenta Ca(2+)-indotta. Una mutazione puntiforme del Orai1 (E106D) alterato la selettivit&agrave; dello ione di indotta Ca(2+) attivato dal rilascio caratteristica di Ca(2+) (CRAC) - come corrente mantenendo un interiormente che rettifica I - V. Espressione della porzione C-terminale del STIM1 con Orai1 era sufficiente per generare corrente senza negozio deplezione CRAC. 2-APB attivato una grande corrente relativamente selettivo nelle cellule co-expressing STIM1 e Orai3. 2-APB Ca(2+) afflusso anche indotta in cellule che esprimono Orai3 senza negozio deplezione o co-expression di STIM1. La corrente di Orai3 indotta da 2-APB esposto rettifica verso l&#39;esterno e una componente interiore che rappresenta un misto di calcio e monovalente corrente. Un mutante del poro di Orai3 inibito operati dal negozio Ca(2+) voce e non ha fatto trasportare corrente significativo in risposta a negozio di esaurimento o aggiunta di 2-APB. Analisi di una serie di Orai1-3 chimere rivelato determinante strutturale responsabile della corrente 2-APB-indotta all&#39;interno della sequenza dal secondo al terzo segmento transmembrana di Orai3. La corrente di Orai3 indotta da 2-APB potrebbe riflettere una modalit&agrave; indipendente dal negozio di attivazione canale CRAC che apre un poro cazione relativamente non selettivi.

Modalit&agrave; store-dipendente e - indipendenti che regolano Ca2 + attivato dal rilascio Ca2 + canale attivit&agrave; di Orai1 umano e Orai3.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x80CE;&#x5150;&#x814E;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;STIM1&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x76F8;&#x540C;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002; STIM1&#x3068;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;Orai1&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x9045;&#x3044;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3067;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;&#x6027;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;&#x6027;&#x306E;IV&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;Orai1&#xFF08;E106D&#xFF09;&#x306E;&#x70B9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x304C;&#x8A98;&#x767A;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002; Orai1&#x3068;STIM1&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x90E8;&#x5206;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x67AF;&#x6E07;&#x305B;&#x305A;&#x306B;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; 2-APB&#x306F;&#x3001;STIM1&#x3068;Orai3&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x975E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x96FB;&#x6D41;&#x304C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 2-APB&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x307E;&#x305F;&#x306F;STIM1&#x306E;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;Orai3&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 2-APB&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;Orai3&#x96FB;&#x6D41;&#x306F;&#x5916;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6DF7;&#x5408;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3068;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x4E00;&#x4FA1;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x5185;&#x90E8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Orai3&#x306E;&#x7D30;&#x5B54;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x307E;&#x305F;&#x306F;2-APB&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x904B;&#x3070;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; Orai1-3&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x200B;&#x200B;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;Orai3&#x306E;&#x7B2C;&#x4E09;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;2&#x756A;&#x76EE;&#x304B;&#x3089;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x5185;&#x306E;2-APB-&#x8A98;&#x5C0E;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 2-APB&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;Orai3&#x96FB;&#x6D41;&#x304C;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306B;&#x975E;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x7A7A;&#x5B54;&#x3092;&#x958B;&#x304D;&#x3001;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;Orai1&#x3068;Orai3&#x306E;Ca2 +&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; STIM1 &#xD568;&#xAED8; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xC778;&#xAC04; homologs&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB54C; stim1&#xC640; co-expressed, Orai1 Ca(2+) &#xC720;&#xB3C4; &#xB290;&#xB9B0; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD070; &#xC18D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; Ca(2+) &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xC720;&#xBC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Orai1&#xC758; &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (E106D) &#xBCC0;&#xACBD; &#xC720;&#xB3C4; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131; Ca(2+) (CRAC)-&#xAC19;&#xC740; &#xD55C; &#xB098;&#xB97C; &#xC815;&#xB958; &#xC548;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xC804;&#xB958;-V &#xD2B9;&#xC131;&#xC758; &#xC774;&#xC628; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4;. Orai1&#xC640; stim1&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; CRAC &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xACE0;&#xAC08; &#xC5C6;&#xC774; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD588;&#xB2E4;. 2 &#xC9C0;&#xBA85; STIM1 Orai3 co-expressing &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD070; &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xBE44;&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xD604;&#xC7AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. 2 &#xC9C0;&#xBA85; &#xB610;&#xD55C; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC18C;&#xBAA8; &#xB610;&#xB294; stim1&#xC758; co-expression &#xC5C6;&#xC774; orai3&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xC140;&#xC5D0; Ca(2+) &#xC720;&#xC785;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C;&#xB2E4;. 2 &#xC9C0;&#xBA85;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; Orai3 &#xD604;&#xC7AC; &#xC804;&#xC2DC; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; &#xBC0F; &#xD63C;&#xD569;&#xB41C; &#xCE7C;&#xC298;&#xACFC; &#xC5EC;&#xB7EC;&#xCC28;&#xB840; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC548;&#xCABD; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;. Orai3&#xC758; &#xAE30; &#xACF5; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Ca(2+) &#xD56D;&#xBAA9; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC6B4;&#xC601;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC18C;&#xBAA8; &#xB610;&#xB294; 2 &#xC9C0;&#xBA85;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xD734;&#xB300; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. Orai1 3 &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C;&#xC758; &#xC77C;&#xB828;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xAD6C;&#xC870; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; orai3&#xC758; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC81C; 3 &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; 2 &#xC9C0;&#xBA85; &#xC720;&#xB3C4; &#xC804;&#xB958;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC744; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. 2 &#xC9C0;&#xBA85;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; Orai3 &#xC804;&#xB958;&#xB294; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBE44;&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xAE30; &#xACF5; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xB3C5;&#xB9BD; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xBC18;&#xC601; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC800;&#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F;-&#xB3C5;&#xB9BD; &#xBAA8;&#xB4DC; &#xC870;&#xC808; Ca2 + &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Ca2 + &#xCC44;&#xB110; &#xC778;&#xAC04; Orai1 &#xBC0F; orai3&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;.

Se evaluaron las corrientes inducidas por la expresi&#xF3;n de hom&#xF3;logos humanos de ORAI junto con STIM1 en c&#xE9;lulas renales embrionarias humanas. Cuando se co-expresada con STIM1, Orai1 indujo una gran Ca interiormente rectificar (2 +)-selectiva actual con Ca (2 +) inducida por inactivaci&#xF3;n lenta. Una mutaci&#xF3;n puntual de Orai1 (E106D) modific&#xF3; la selectividad i&#xF3;nica del Ca inducida (2 +) de liberaci&#xF3;n activados por Ca (2 +) (CRAC)-como la actual, mientras que la retenci&#xF3;n de un interior rectificar caracter&#xED;stica IV. Expresi&#xF3;n de la porci&#xF3;n C-terminal de STIM1 con Orai1 era suficiente para generar corriente CRAC sin agotamiento tienda. 2-APB activa una corriente relativamente grande y no selectivo en STIM1 Orai3 compa&#xF1;eros de las c&#xE9;lulas que expresan. 2-APB tambi&#xE9;n indujo Ca (2 +) en el flujo Orai3 c&#xE9;lulas que expresan el agotamiento de la tienda o sin co-expresi&#xF3;n de la STIM1. La corriente Orai3 inducido por 2-APB exhibi&#xF3; rectificaci&#xF3;n hacia afuera y hacia adentro un componente que representa una mixta de calcio y monovalente actual. Un mutante de poro de Orai3 inhibe la tienda que funciona con Ca (2 +) de entrada y no llevan corriente significativa en respuesta al agotamiento del almac&#xE9;n de uno o adici&#xF3;n de 2-APB. El an&#xE1;lisis de una serie de Orai1-3 quimeras revel&#xF3; el determinante estructural responsable de 2-APB-corriente inducida dentro de la secuencia de la segunda a tercera segmento transmembrana de Orai3. La corriente inducida por Orai3 2-APB puede reflejar un modo de tienda independiente de la activaci&#xF3;n de los canales CRAC que se abre un poro de cationes relativamente selectivo.

Modos dependientes de almacenamiento y regulaci&#xF3;n independiente de Ca2 + Lanzamiento activado por Ca2 + actividad en el canal de los Derechos Humanos y Orai1 Orai3

TRPM7 channel kinase is a protein highly expressed in cells of hematopoietic lineage, such as lymphocytes. Studies performed in native and heterologous expression systems have shown that TRPM7 forms nonselective cation channels functional in the plasma membrane and activated on depletion of cellular Mg(2+). In addition to internal Mg(2+), cytosolic pH and the phospholipid phosphatidylinositol-(4,5)-bisphosphate [PI(4,5)P(2)] are potent physiological regulators of this channel: protons inhibit, while PI(4,5)P(2) is required for TRPM7 channel activity. These channels are also inhibited from inside by other metal cations and polyamines. While the regulation of TRPM7 channels by internal metal ions, acidic pH, and PI(4,5)P(2) is voltage independent, extracellular metal cations and polyamines block voltage dependently at micromolar concentrations and appear to occupy a distinct blocking site. In the present study we investigated intracellular Mg(2+) and pH dependence of native TRPM7 currents using whole cell patch-clamp electrophysiology in human Jurkat T lymphocytes and HEK293 cells. Our main findings are 1) Mg(2+) inhibition involves not one but two separate sites of high (∼10 μM) and low (∼165 μM) affinity; and 2) while sharing certain characteristics with Mg(2+) inhibition, protons most likely inhibit through one inhibitory site, corresponding to the low-affinity Mg(2+) site, with an estimated IC(50) of pH 6.3. Additionally, we present data on amplitude distribution of preactivated TRPM7 currents in Jurkat T lymphocytes in the absence of prior Mg(2+) or proton depletion.

Detailed examination of Mg2+ and pH sensitivity of human TRPM7 channels.

Transient receptor potential melastatin 7 (TRPM7) channels were originally identified electrophysiologically when depletion of cytosolic Mg(2+) resulted in the gradual development of an outwardly rectifying cation current. Conversely, inclusion of millimolar Mg(2+) in internal solutions prevented activation of these channels in whole cell patch clamp. We recently demonstrated that the Jurkat T-cell whole cell TRPM7 channels are inhibited by internal Mg(2+) in a biphasic manner, displaying high [IC(50(1)) ≈ 10 μM] and low [IC(50(2)) ≈ 165 μM] affinity inhibitor sites. In that study, we had characterized the dependence of the maximum cell current density on intracellular Mg(2+) concentration. To characterize Mg(2+) inhibition in Jurkat T cells in more detail and compare it to whole cell results, we recorded single TRPM7 channels in cell-free membrane patches and investigated the dependence of their activity on Mg(2+) added on the cytoplasmic side. We systematically varied free Mg(2+) from 265 nM to 407 μM and evaluated the extent of channel inhibition in inside-out patch for 58 patches. We found that the TRPM7 channel shows two conductance levels of 39.0 pS (γ(1)) and 18.6 pS (γ(2)) and that both are reversibly inhibited by internal Mg(2+). The 39.0-pS conductance is the dominant state of the channel, observed most frequently in this recording configuration. The dose-response relation in inside-out patches shows a steeper Mg(2+) dependence than in whole cell, yielding IC(50(1)) of 25.1 μM and IC(50(2)) of 91.2 μM.. Single-channel analysis shows that the primary effect of Mg(2+) in multichannel patches is a reversible reduction of the number of conducting channels (N(o)). Additionally, at high Mg(2+) concentrations, we observed a saturating 20% reduction in unitary conductance (γ(1)). Thus Mg(2+) inhibition in whole cell can be explained by a drop in individual participating channels and a modest reduction in conductance. We also found that TRPM7 channels in some patches were not sensitive to this ion at submaximal Mg(2+) concentrations. Interestingly, Mg(2+) inhibition showed the property of use dependence: with repeated applications, Mg(2+) effect became gradually more potent, which suggests that Mg(2+) sensitivity of the channel is a dynamic characteristic that depends on other membrane factors.

Sensitivity of TRPM7 channels to Mg2+ characterized in cell-free patches of Jurkat T lymphocytes.

The impact of synthetic amyloid β (1-42) (Aβ(1-42)) oligomers on biophysical properties of voltage-gated potassium channels Kv 1.3 and lipid bilayer membranes (BLMs) was quantified for protocols using hexafluoroisopropanol (HFIP) or sodium hydroxide (NaOH) as solvents prior to initiating the oligomer formation. Regardless of the solvent used Aβ(1-42) samples contained oligomers that reacted with the conformation-specific antibodies A11 and OC and had similar size distributions as determined by dynamic light scattering. Patch-clamp recordings of the potassium currents showed that synthetic Aβ(1-42) oligomers accelerate the activation and inactivation kinetics of Kv 1.3 current with no significant effect on current amplitude. In contrast to oligomeric samples, freshly prepared, presumably monomeric, Aβ(1-42) solutions had no effect on Kv 1.3 channel properties. Aβ(1-42) oligomers had no effect on the steady-state current (at -80 mV) recorded from Kv 1.3-expressing cells but increased the conductance of artificial BLMs in a dose-dependent fashion. Formation of amyloid channels, however, was not observed due to conditions of the experiments. To exclude the effects of HFIP (used to dissolve lyophilized Aβ(1-42) peptide), and trifluoroacetic acid (TFA) (used during Aβ(1-42) synthesis), we determined concentrations of these fluorinated compounds in the stock Aβ(1-42) solutions by (19)F NMR. After extensive evaporation, the concentration of HFIP in the 100× stock Aβ(1-42) solutions was ∼1.7 μM. The concentration of residual TFA in the 70× stock Aβ(1-42) solutions was ∼20 μM. Even at the stock concentrations neither HFIP nor TFA alone had any effect on potassium currents or BLMs. The Aβ(1-42) oligomers prepared with HFIP as solvent, however, were more potent in the electrophysiological tests, suggesting that fluorinated compounds, such as HFIP or structurally-related inhalational anesthetics, may affect Aβ(1-42) aggregation and potentially enhance ability of oligomers to modulate voltage-gated ion channels and biological membrane properties.

Effect of synthetic aβ peptide oligomers and fluorinated solvents on Kv1.3 channel properties and membrane conductance.

2-APB is a widely used compound in ion channel research. It affects numerous channels including inositol 1,4,5-trisphosphate receptors, store-operated calcium channels and TRP channels, TRPV3 and TRPM7 among them. A characteristic property of TRPM7 channels is their sensitivity to intracellular Mg ( 2+) and pH. Using patch clamp electrophysiology we find that in Jurkat T lymphocytes, 100-300 µM extracellular 2-APB reversibly inhibits TRPM7 channels when internal HEPES concentration is low (1 mM). Increasing the concentration to 140 mM abolishes the 2-APB effect. Using single-cell fluorescence pH video imaging, we show that at concentrations of 100 µM and higher, 2-APB potently acidifies the cytoplasm. We conclude that TRPM7 sensitivity to 2-APB is not direct but rather, can be explained by cytoplasmic acidification and a resulting channel inhibition.

2-aminoethyl diphenyl borinate (2-APB) inhibits TRPM7 channels through an intracellular acidification mechanism.

Transient receptor potential (TRP) family channels are involved in sensory pathways and respond to various environmental stimuli. Among the members of this family, TRPM7 is a unique fusion of an ion channel and a C-terminus kinase domain that is highly expressed in immune cells. TRPM7 serves as a key molecule governing cellular Mg(2+) homeostasis in mammals since its channel pore is permeable to Mg(2+) ions and can act as a Mg(2+) influx pathway. However, mechanistic links between its kinase activity and channel function have remained uncertain. In this study, we generated kinase inactive knock-in mutant mice by mutagenesis of a key lysine residue involved in Mg(2+)-ATP binding. These mutant mice were normal in development and general locomotor activity. In peritoneal macrophages isolated from adult animals the basal activity of TRPM7 channels prior to cytoplasmic Mg(2+) depletion was significantly potentiated, while maximal current densities measured after Mg(2+) depletion were unchanged in the absence of detectable kinase function. Serum total Ca(2+) and Mg(2+) levels were not significantly altered in kinase-inactive mutant mice. Our findings suggest that abolishing TRPM7 kinase activity does not impair its channel activity and kinase activity is not essential for regulation of mammalian Mg(2+) homeostasis.

Article	Year
Distinct properties of CRAC and MIC channels in RBL cells. The Journal of general physiology\| PubMed ID: 12149283	2002
A transient receptor potential channel expressed in taste receptor cells. Nature neuroscience\| PubMed ID: 12368808	2002
MIC channels are inhibited by internal divalent cations but not ATP. Biophysical journal\| PubMed ID: 12547774	2003
Polyvalent cations as permeant probes of MIC and TRPM7 pores. Biophysical journal\| PubMed ID: 12668438	2003
Channel function is dissociated from the intrinsic kinase activity and autophosphorylation of TRPM7/ChaK1. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 15781465	2005
STIM1, an essential and conserved component of store-operated Ca2+ channel function. The Journal of cell biology\| PubMed ID: 15866891	2005
STIM1 is a Ca2+ sensor that activates CRAC channels and migrates from the Ca2+ store to the plasma membrane. Nature\| PubMed ID: 16208375	2005
Charge screening by internal pH and polyvalent cations as a mechanism for activation, inhibition, and rundown of TRPM7/MIC channels. The Journal of general physiology\| PubMed ID: 16260839	2005
Soluble amyloid oligomers increase bilayer conductance by altering dielectric structure. The Journal of general physiology\| PubMed ID: 17101816	2006
Orai1 and STIM1 move to the immunological synapse and are up-regulated during T cell activation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 18250319	2008
Store-dependent and -independent modes regulating Ca2+ release-activated Ca2+ channel activity of human Orai1 and Orai3. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 18420579	2008
Detailed examination of Mg2+ and pH sensitivity of human TRPM7 channels. American journal of physiology. Cell physiology\| PubMed ID: 22301056	2012
Sensitivity of TRPM7 channels to Mg2+ characterized in cell-free patches of Jurkat T lymphocytes. American journal of physiology. Cell physiology\| PubMed ID: 22460708	2012
Effect of synthetic aβ peptide oligomers and fluorinated solvents on Kv1.3 channel properties and membrane conductance. PloS one\| PubMed ID: 22563377	2012
2-aminoethyl diphenyl borinate (2-APB) inhibits TRPM7 channels through an intracellular acidification mechanism. Channels (Austin, Tex.)\| PubMed ID: 22922232	2012
Inactivation of TRPM7 kinase activity does not impair its channel function in mice. Scientific reports\| PubMed ID: 25030553	2014

J. Ashot Kozak

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